Mecanismos de ação da solução salina hipertônica na pancreatite aguda experimental / Mechanisms of action of hypertonic saline solution in experimental acute pancreatitis

A pancreatite aguda (PA) grave é um processo inflamatório do pâncreas caracterizado por alterações hemodinâmicas e resposta inflamatória sistêmica com altos níveis de mortalidade. A ativação inapropriada intrapancreática das enzimas pancreáticas desempenha papel importante no desencadeamento dos mecanismos inflamatórios responsáveis pelas manifestações locais e sistêmicas da doença. Em trabalho anterior observamos redução significativa da mortalidade após administração de solução salina hipertônica em ratos, através de redução das alterações hemodinâmicas e da resposta inflamatória sistêmica, mas os efeitos da solução salina hipertônica na ativação das enzimas pancreáticas e na própria lesão pancreática não foram estudados. O objetivo deste estudo foi avaliar se o mecanismo de ação da solução salina hipertônica, reduzindo a gravidade da pancreatite aguda em ratos, ocorre devido à redução da intensidade da lesão pancreática e/ou à redução da resposta inflamatória sistêmica e seus efeitos. Métodos: Foi utilizado um modelo experimental de pancreatite aguda grave através da injeção intraductal de taurocolato de sódio a 2,5%. Cento e quarenta e dois ratos Wistar machos foram divididos em quatro grupos: Controle (animais que não foram submetidos à indução da PA), Grupo ST (animais que não receberam tratamento após a indução da PA), Grupo SSF (animais que receberam 34ml/Kg de solução salina fisiológica de NaCl 0,9% por via endovenosa, 1 hora após a indução da PA) e grupo SSH (animais que receberam 4ml/Kg de solução salina hipertônica de NaCl 7,5% por via endovenosa, 1 hora após a indução da PA). Após 2, 12 e 24 horas da indução da PA os animais foram sacrificados e os materiais foram coletados para análise. Foram efetuadas a quantificação do volume de líquido ascítico e as determinações no líquido ascítico e no soro dos peptídeos liberados na ativação do tripsinogênio (TAP) e da atividade da amilase. No tecido pancreático foram realizadas as análises...

Severe acute pancreatitis (AP) is characterized by hemodynamic alterations and systemic inflammatory response leading to a high mortality rate. In AP the inappropriate activation of pancreatic enzymes plays an important role in pancreas autodigestion and in the inflammatory mechanisms responsible for the systemic response of the disease. In a previous study, we have demonstrated that hypertonic saline solution infusion significantly reduced mortality in experimental AP through an improvement in the hemodynamic conditions and by an antiinflammatory response, but its effects on the pancreatic lesions were not evaluated. The aim of the present study was to evaluate if the hypertonic saline solution reduces mortality in AP through a local effect attenuating the pancreatic lesion and/or by reducing the systemic inflammatory response syndrome (SIRS). Methods: An experimental model of severe AP by injection of 0.5ml of 2.5% sodium taurocholate into the pancreatic duct was utilized. A hundred and forty two male Wistar rats were divided into 4 groups: C (control, without AP), ST (no treated AP), SSF (animals received 34ml/kg of normal saline solution of NaCl 0.9% IV, 1 hour after AP), and SSH (animals received 4ml/Kg of hypertonic saline solution of NaCl 7.5% IV, 1 hour after AP). After 2, 12 and 24 hours of induction of AP volume of ascitic fluid, trypsinogen activation peptides (TAP) levels and amylase activity in ascitic fluid and serum were determined. Pancreatic lipid peroxidation (MDA), myeloperoxidase (MPO) activity, and pancreatic histology were analysed 2 and 24 hours after AP. TNF-, IL-6, and IL-10 levels in ascitic fluid, serum, and pancreatic tissue were also analyzed. Results: There were no significant differences in TAP levels and amylase activity in the ascitic fluid and serum in animals of groups ST, SSF and SSH. No differences in pancreatic MPO, MDA and histological score were observed among these three groups with AP...

Detection of codon 12 mutation in the K-ras oncogene in pancreatic tumors

Muitos dos oncogenes detectados em neoplasias malignas humanas pertencem a familia do gene ras. Mutacoes nos codons 12, 13 ou 61 em um dos tres genes ras; H-ras, K-ras e N-ras, convertem esses genes em oncogenes ativos. Ensaios rapidos para deteccao dessas mutacoes pontuais, tais como a reacao em cadeia de polimertizacao tem sido desenvolvidos nas ultimas decadas e usados para investigar o papel dos genes ras mutados na patogenese de tumores humanos...

Efeito do antioxidante N2-mercaptopropionilglicina (N2-MPG) na pancreatite aguda experimental / N2-Mercaptopropionylglycine (N2 MPG) in experimental acute pancreatitis

O N2-Mercaptopropionilglicina (MPG) e um potente antioxidante na inibicao da producao de xantina-oxidase. O objetivo deste trabalho foi analisar se este efeito antioxidante poderia propiciar menor agressao do tecido pancreatico na Pancreatite Aguda (PA) induzida por dois processos: dose supramaxima de ceruleina e injecao de taurocolato de sodio a 2,5 por cento no ducto biliopancreatico do rato. Trinta e seis ratos machos Wistar (220-270 g) foram divididos em 2 grupos (G): GI-animais previamente tratados com antioxidante (MPG: 100 mg/kg) 10 minutos antes da inducao da PA e GII-animais sem tratamento previo. Os animais destes dois grupos foram submetidos a PA com dose supramaxima de ceruleina (2 doses de 20ug/kg) e PA com taurocolato onde vinte e seis ratos foram divididos em dois grupos (G): GIII-ratos tratados com MPG 10 minutos antes da PA e GIV-animais sem tratamento previo...

Lesäo hepatica na pancreatite aguda experimental: influencia da reduçäo da reserva enzimatica do pancreas / Evaluation of hepatic lesion of experimental acute pancreatitis: influence of pancreatic enzyme reduction

A pancreatite aguda (PA) produz alteracoes morfologicas e funcionais no figado. A administraçäo de doses baixas de ceruleina diminui o conteudo enzimatico do pancreas. O objetivo do presente estudo foi estudar o efeito da reduçäo do conteudo enzimatico do pancreas na funçäo mitocondrial hepatica. Ratos machos Wistar foram submetidos a PA atraves de injeçäo retrograda intraductal de taurocolato de sodio a 5 por cento com e sem infusäo de ceruleina (0,133 ug/Kg/h) durante tres horas : Grupo I (GI): sem reducao enzimatica do pancreas, com induçäo de PA, GRUPO II (GII): com reduçäo enzimática do pancreas, com induçäo de PA, GRUPO III (GIII): com reduçäo enzimatica do pancreas, sem induçäo de PA, GRUPO IV (GIV): sem reduçäo enzimatica do pancreas, sem induçäo de PA (Controle). Após duas horas da inducao da PA os animais foram sacrificados e os figados retirados para avaliaçäo da funçäo mitocondrial hepatica, determinada polarograficamente com eletrodo de Clark, medindo-se o consumo de oxigenio na ausência de ADP (S4-Basal) e na presença de ADP (S-3 Ativado), utilizando-se succinato de potassio como substrato. Os conteudos de tripsina, amilase e proteinas totais no liquido ascitico foram determinados. Após duas horas da induçäo da PA observamos aumento significativo no estado 4 da respiraçäo (41 por cento) e diminuiçäo do RCR e da relaçäo ADP/O nos animais do GI (PA sem ceruleina) quando comparados com os animais do GII (PA com ceruleina) (p<0,05). O conteudo de amilase (A) e tripsina (T) no liquido ascitico mostraram-se diminuidos nos animais do GII (A=80 +- 10 U/ml, T= 9,75 +- 1,25 U/ml), quando comparados com os animais do GI que nao receberam ceruleina ( A= 231 +- 24 U/ml, T = 40,32 +- 5,19 U/ml) (p<0,001). Infusäo somente de ceruleina (GIII) näo alterou a funçäo mitocondrial hepatica. Estes achados sugerem que a reduçäo do conteudo enzimatico do pancreas através de infusäo de ceruleina atenua a disfunçäo mitocondrial hepatica na PA experimental evidenciada por desacoplamento da oxigenaçäo fosforilativa

Lesäo hepatica na insuficiência renal mioglobinurica (rabdomiolise): estudo experimental em ratos / Hepatic dysfunction in myoglobinuric acute renal failure: experimental study in rats

A possivel relaçäo causal entre insuficiência renal mioglobinurica (rabdomiolise) e lesäo hepatica ainda nao esta bem definida e foi objeto deste estudo. Ratos machos (220-270 g) foram privados de agua por 24 horas e divididos em dois grupos: GI-animais experimentais em que a rabdomiolise foi induzida mediante injeçäo intramuscular de glicerol a 50 por cento na dose de 10 ml/kg. GII-animais controles que receberam injecao intramuscular de solucao salina. Vinte e quatro horas apos a injecao todos os animais foram sacrificados. No sangue colhido foram dosados AST, ALT, CK, ureia e creatinina. Os figados foram removidos para estudo histologico e para avaliacao da funcao mitocondrial, determinada polarograficamente com eletrodo de Clark, medindo-se o consumo de oxigenio na ausencia de ADP (S4-Basal) e na presenca de ADP (S3-Ativado). A razao do controle respiratorio (RCR) e relacao ADP/O foram calculadas...

Fisiopatologia da lesao pulmonar na pancreatite aguda / Physiopathology of pancreatitis lung injury

Sinais clinicos de lesao pulmonar desenvolvem-se em ate 50 a 70 por cento dos pacientes com pancreatite aguda. A despeito disto, a fisiopatologia da lesao pulmonar na pancreatite aguda nao esta totalmente compreendida ate o momento. O edema pulmonar e a principal complicacao respiratoria da pancreatite aguda. A permeabilidade aumentada das membranas endotelial pulmonar e epitelial alveolar sao as causas do edema pulmonar. Varios fatores tem sido apontados como causadores do edema pulmonar: liberacao de enzimas pancreaticas proteoliticas, radicais livres de oxigenio, fosfolipase A, acidos graxos livres, fator de necrose tumoral, fator ativador lactario, metabolitos do acido aracdonico e microembolizacao pulmonar. A compreensao da fisiopatologia da lesao pulmonar faculta ao medico uma melhor abordagem terapeutica dos pacientes com pancreatite aguda. O objetivo deste trabalho e expor as teorias que explicam a lesao pulmonar da pancreatite aguda

Lesao pulmonar na pancreatite aguda / Lung injury in acute pancreatitis

Lesao pulmonar surge em ate 70 por cento dos pacientes com pancreatite aguda. O objetivo deste trabalho e de estudar a lesao pulmonar na pancreatite aguda experimental. Assim, pancreatite grave foi induzida em 63 ratos atraves da injecao de taurocolato de sodio a 5 por cento no ducto bilio-pancreatico. Apos 2, 4, 6, 12, 24 e 48 horas da inducao, foram realizadas as investigacoes. A lesao pulmonar foi maxima apos 12 horas de pancreatite, as enzimas pancreaticas (amilase e tripsina) no liquido ascitico estavam mais elevadas precocemente (2-4h) e os niveis sericos foram maiores no tempo de quatro horas. Conclue-se que na pancreatite aguda experimental ocorre lesao pulmonar com aumento da permeabilidade vascular pulmonar. Esta lesao e maxima no tempo de 12 h e tem relacao com os niveis das enzimas pancreaticas no liquido peritonial e no soro.

Lesäo hepática na pancreatite aguda: estudo experimental em ratos / Hepatic lesion in acute pancreatitis: experimental study in rats

O objetivo deste trabalho foi analisar a lesäo hepática desenvolvida durante a PA através do estudo da funçäo mitocondrial hepática. Para tanto, 54 ratos machos Wistar foram distribuídos em seis grupos: GI (controle n=6), GII (PA duas horas n=12), GIII (PA quatro horas n=6), GIV (PA 12 horas n=8), GV (PA 24 horas n=7) e GVI (PA 48 horas n=7). A PA foi induzida por injeçäo retrógrada de taurocolato de sódio a 5 por cento. A avaliaçäo da funçäo mitocondrial hepática foi determinada polarograficamente com eletrodo de Clark, medindo-se o consumo de O2 na ausência de ADP (S4-basal) e na presença de ADP (S3 ativado), utilizando-se succinato de potássio como sunstrato. A razäo do controle respiratório (RCR) e a relaçäo ADP/O foram calculadas. Na fase precoce da PA (duas e quatro horas), existe desacoplamento das mitocôndrias evidenciado por aumento do S4 e diminuiçäo do RCR e da relaçäo ADP/O, No período de 12 e 24 horas após a PA, o RCR apresenta valores iguais aos do controle. Conclui-se que as alteraçöes mitocondriais na PA säo bifásicas: as alteraçöes precoces säo caracterizadas por desacoplamento da oxigenaçäo fosforilativa e talvez resulte da açäo à distância de enzimas de produtos da açäo enzimática, enquanto as alteraçöes tardias säo decorrentes de lesöes estruturais e graves, resultantes de isquemia tecidual. Estudos hemodinâmicos devem ser efetuados para esclarecer estas alteraçöes

Modelo simplificado de inducao de pancreatite aguda experimental com uso de dose supramaxima de ceruleina / Simplified model of produced experimental acute pancreatitis with use of supra-maximal dosis of cerulein

A administracao de ceruleina tanto por via endovenosa como intraperitonial, tem sido extensivamente utilizada para inducao de pancreatite aguda experimental. Com objetivo de se testar uma nova metodologia de inducao de pancreatite aguda, que fosse de facil e rapida execucao, assim como de boa reprodutibilidade , 40 ratos Wistar foram distribuidos em quatro grupos: GRUPO I - animais que receberam infusao continua de ceruleina (15µ/Kg) GRUPO II - animais que receberam infusao continua e salina GRUPO III - animais submetidos a duas injecoes (SC+CV) de ceruleina (40µ/Kg) GRUPO IV - animais submetidos a duas injecoes (SC+CV) de salina. Apos a realizacao de dosagens bioquimicas, nao houve diferenca estatisticamente significativa entre os grupos I e II nas concentracoes teciduaias de tripsionogenio, quimiotripsinogenio, proelastase , catepsina e tambem amilase serica; ocorrendo diferenca somente entre os valores de porcentagem de agua no tecido pancreatico...

Efeito protetor da depelecao de enzimas pancreaticas na evolucao da pancreatite aguda: estudo experimental em ratos / Protective effect of the reduction of pancreatic enzymes in the acute pancreatitis evolution: experimental study in rats

A reducao da concentracao de enzimas no parenquima pancreatico pode reduzir a gravidade da pancreatite aguda. Para testar esta possibilidade foram estudados 116 ratos da raca Wistar distribuidos em 4 grupos: Grupo I - ratos em jejum que recebiam doses supramaximas de ceruleina (8µg/Kg). Grupo II - ratos controles em jejum. Grupo III - ratos com alimentacao normal que recebiam doses fisiologicas de ceruleina (0,4 µg/Kg). Grupo IV - ratos controles com alimentacao normal. Observou-se reducao de 60 por cento do conteudo enzimatico do pancreas nos ratos do grupo I e tambem de 60 por cento nos ratos do grupo III, porem observou-se elevacao de catepsina B no grupo I. A mortalidade, apos inducao de pancreatite aguda pela injecao intraductal de acido taurocolico, foi de 60 por cento no grupo I, 56 por cento no grupo II, 23 por cento no grupo III e 34 por cento no grupo IV. Estes resultados sugerem que a gravidade da pancreatite aguda depende de um lado do conteudo de enzimas do pancreas e de outro da ativacao de catepsina.

Influência do regime alimentar na evoluçäo tardia da pancreatite aguda. Estudo experimental em ratos / Influence of diet composition on the evolution of acute pancreatitis. Experimental study in rats

Com a finalidade de estudar o efeito de regimes dietéticos diversos sobre a recuperaçäo das funçöes do pâncreas exócrino pós pancreatite aguda (PA), dois lotes de ratos submetidos, durante três semanas, a dietas isoprotéicas, diferindo apenas no teor de gordura (normo e hiperlipídica), foram distribuídos em grupos controles e com pancreatite aguda moderada, induzida com taurocolato de sódio a 1%. Amostras de sangue para dosagem de amilase sérica e fragmentos de tecido pancreático, para determinaçäo de enzimas triptolíticos, amilase, proenzimas e nucleotídeos foram colhidos nos grupos controles e nos com pancreatite após um, quatro, sete e 15 dias da induçäo da doença. Os resultados foram comparados estatisticamente por ANOVA, entre grupoos sob o mesmo regime alimentar e pelo teste "t" de Student, entre grupos correspondentes, sob regimes alimentares diversos (p <0.05). Os autores verificaram que, nas condiçöes experimentais utilizadas, a pancreatite agravou-se progressivamente até o quarto dia pós-PA, independentemente do regime alimentar prévio. A recuperaçäo funcional no órgäo manifestou-se a partir do sétimo dia pelo aumento de RNA/DNA, mas foi incompleta durante o período deste estudo. No décimo quinto dia pós-PA, ocorreu a normalizaçäo de parâmetros histopatológicos e bioquímicos, para os grupos com ambas as dietas. Os autores concluíram que, nas condiçöes experimentais deste estudo, o agravamento da doença, traduzido pela capacidade de síntese do pâncreas exócrino, foi progressivo até o quarto dia e independeu do teor de gordura na dieta

Dieta hiperlipídica e pancreatite aguda: estudo experimental em ratos / Hyperlipidic diet and acute pancreatitis: experimental study in rats

O presente trabalho visa verificar a existência de correlaçäo entre o conteúdo residual de enzimas no tecido pancreático e a gravidade das lesöes precoces do órgäo, geradas na vigência de pancreatite aguda moderada (PA), experimentalmente induzida em ratos submetidos a regimes alimentares de composiçäo diversa. Para tanto, dois lotes de animais foram alimentados, separadamente, por período prolongado, com dietas isoprotéicas e de composiçäo lipídica diferente: 1 - hiperlipídica; 2 - balanceada. Determinaçöes de tripsinogénio, quimiotripsinogênio, proteína e nucleotídeos em tecido pancreático exócrino e medidas da atividade da amilase no soro e no tecido pancreático foram efetuados nos ratos dos dois lotes redistribuídos em grupos distintos, nas seguintes condiçöes: 1 - alimentados "ad libitum" (grupos CB e CL); 2 - deixados 30 horas em jejum (grupos JB e JL) e 3 - submetidos a PA moderada induzida há 24 horas (grupos B e L). Os resultados obtidos foram comparados estatisticamente, entre grupos com o mesmo tipo de dieta, por análise de variância e teste de Tukey. Parámetros iguais entre grupos semelhantes com dietas diferentes foram comparados pelo teste "t" de Student (p < 0,05). Os autores varificaram, comparando os grupos com o mesmo tipo de dieta, que o conteúdo enzimático do pâncreas näo se alterou com o jejum, mas significativamente com a PA. Verificaram, ainda entre os achado no pâncreas dos ratos com dieta hiperlipídica - comparados com os dos grupos com dieta balanceada - que: os enzimas triptolíticos estavam aumentados em todos os grupos; RNA/DNA estava diminuindo e proteína total aumentada nos ratos do grupo com PA. Os autores concluíram que a ingestäo de gordura aumenta a probabilidade de gravidade da PA por favorecer a síntese de enzimas de secreçäo pancreática de natureza proteolítica