ABSTRACT
Se compararon dos técnicas para valorar la viabilidad de levaduras por medio de citometría de flujo aplicada a microbiología. En una se usó el colorante yoduro de propidio (YP), el cual al haber un daño de membrana pasa al citoplasma para unirse al DNA o RNA, lo que permite excluir microorganismos dañados de los íntegros, y en la otra se usó el colorante verde claro (VC), ampliamente utilizado en tinciones histológicas, histoquímicas e inmunoquímicas. El modelo de levadura utilizado fue el de muerte por calor en Candida guilliermondii. El análisis de citometría de flujo por diagramas de puntos, en ambos colorantes mostró una separación muy clara de las poblaciónes muertas hacia verde-naranja (350-600 nm) para el VC y rojo (550-725 nm) para el YP, en los canales de fluorescencia correspondientes. Todos los experimentos mostraron entre las poblaciones de levadura vivas y muertas por calor, una prueba de Kolmogorov-Smirnov (K-S) mayor de 99 por ciento de probabilidad de diferencia entre los histogramas de los organismos vivos de los muertos, con una D= con valores de 0.50-0.64 para VC y de 0.91-0.98 para YP. Dado el costo y riesgo de carcinogénesis por el YP, el VC puede ser utilizado en el análisis de viabilidad en levaduras por citofluorometría
Subject(s)
Candida/cytology , Cell Survival , Flow Cytometry , Yeasts/cytologyABSTRACT
Los dermatofitos son muy comunes en la edad pediátrica en una variedad de manifestaciones clínicas denominadas tiñas o empeines. Las especies causantes más frecuentes en México son: Trychophyton rubrum, T. mentagrophytes, T. tonsurans, Microsporum canis y Epidemophyton floccosum. Estos hongos fueron valorados por un método en cultivo líquido con una laminilla siliconada dentro y comparado con la clásica técnica de Ridell. La principal ventaja del método presentado en este trabajo es que el hongo se adhiere a la superficie hidrofóbica de la laminilla con silicona, permitiendo que los microcultivos así obtenidos se manejen con una mayor seguridad. Consideramos que esta técnica sería de gran utilidad en la identificación de hongos de alto riesgo