Caracterización de cepas cubanas de VIH-1 por ensayos biológicos y métodos bioinformáticos / Characterization of Cuban strains of HIV-1 by bioassays and bio-information methods

Mediante ensayos biológicos clásicos se ha podido determinar el uso del correceptor por las cepas de VIH-1, las cuales se han clasificado en R5, X4 o R5/X4, características que guardan relación con el fenotipo NIS o IS y con la evolución clínica. Por métodos bioinformáticos se han relacionado cambios aminoacídicos en la región del lazo V3 del env con el uso del correceptor. En este trabajo se presentan los resultados del estudio de caracterización de once cepas provenientes de individuos infectados con VIH-1, cinco de ellos seropositivos asintomáticos y seis progresores rápidos al SIDA. Se compararon los resultados del estudio fenotípico realizado por dos ensayos biológicos clásicos, uso de correceptores y capacidad de inducir sincicios en MT2 y tres métodos bioinformáticos, regla 11/25, matrices de puntos en posiciones específicas (PSSM) y el programa geno2pheno. Las cinco cepas de seropositivos asintomáticos coincidieron por todos los métodos como R5/NIS. Cinco de las seis cepas de progresores rápidos se clasificaron R5/X4 e IS por los ensayos biológicos; mientras dos clasificaron R5/X4 por Geno 2 Pheno, una por PSSM y todas fueron X4 puras por la regla 11/25. Los ensayos utilizados en el estudio permitieron caracterizar las cepas aisladas y relacionar el fenotipo con la evolución de la infección, por lo que valoramos que por ensayos biológicos o métodos bioinformáticas se pueden hacer estudios de caracterización, su utilidad está en dependencia del objetivo que se persiga

By the classic biological assays it has been possible to determine the use of HIV-1 strains co-receptor, which have been classified in R5, X4 or R5/X4, characteristic related to the NIS or IS phenotype and to the clinical course. By bio-information methods the amino acid changes in the region of V3 loop of the env using the co-receptor. In present paper are showed the results of a characterization study of eleven strains from HIV-1 infected subjects, five seropositive and six with a fast progression to AIDS. Authors compared the results of phenotype study conducted by two classic assays, use of co-receptors and ability to induce syncytia in MT2 and three bio-information methods, rule 11/25, point matrices in specific locations (PSSM) and the geno2pheno program. The five strains from asymptomatic seropositive patients coincided according all methods used as R5/NIS. Five of the six strains from fast progression patients were classified as R5/X4 and IS by biological assays; whereas two were classified as R5/X4 by Geno 2 Pheno, one by PSSM and all were pure X4 by the rule 11/25. The assays used in the study allowed us to characterize the isolated strains and to relate the phenotype to the infection course, thus, we considered that using biological assays or bio-information methods it is possible to conduct characterization studies, its usefulness depends on the pursued objectives

Empleo del AMPLICOR HIV-1 DNA test v 1.5 en el diagnóstico de la infección perinatal por el VIH-1 en Cuba / Use of Amplicor HIV-1 DNA test v.1.5 in diagnosis of perinatal infection from HIV-1 in Cuba

INTRODUCCIÓN: la amplificación del ADN proviral del VIH-1, constituye un método preferencial para el diagnóstico perinatal, empleado en Cuba desde 1992. El estuche AMPLICOR HIV-1 DNA es un ensayo cualitativo in vitro para la detección del ADN proviral de VIH-1 en sangre total. OBJETIVO: en el presente trabajo se reportan los resultados del empleo de este estuche por primera vez en Cuba para el diagnóstico perinatal de VIH-1. MÉTODOS: entre 2005 y 2007 se trabajaron mediante el estuche AMPLICOR HIV-1 DNA, 346 muestras de sangre total de niños nacidos de madres seropositivas al VIH-1. RESULTADOS: del total de muestras trabajadas, 6 resultaron positivas y 340 fueron negativas. CONCLUSIONES: el estuche fue reproducible en las condiciones cubanas y los resultados obtenidos permitieron realizar el diagnóstico y seguimiento de niños nacidos de madres seropositivas.

INTRODUCTION: HIV-1 proviral DNA amplification is the preferential method for HIV diagnosis infection in infants and it has been used in Cuba since 1992. AMPLICOR HIV-1 DNA kit is an in vitro qualitative assay for the detection of HIV-1 proviral DNA in the whole blood. OBJECTIVE: this paper showed the results of the use of this kit for the first time in Cuba for the perinatal diagnosis of HIV-1 infection. METHODS: three hundred forty six whole blood samples from children of HIV seropositive women were analyzed by the AMPLICOR HIV-1 DNA kit in the period 2005-2007. RESULTS: among the tested samples, six were positive, and 340 negative. CONCLUSIONS: the assay was reproducible under the Cuban conditions and the achieved results made the diagnosis and follow up of children of HIV-1 seropositive mothers possible.

Infección por el HTLV-I en pacientes con síndromes linfoproliferativos en dos sitios centinela de Cuba / Human T-cell lymphotropic virus type I infection in patients with lymphoproliferative disorders at two sentinel sites in Cuba

OBJETIVO: Determinar la frecuencia de la infección por el HTLV-I en pacientes con síndromes linfoproliferativos, así como en sus familiares y contactos sexuales, en dos sitios de vigilancia centinela en Cuba. MÉTODOS: Se analizaron todos los pacientes que tenían un diagnóstico presuntivo de neoplasias hematológicas entre enero de 1996 y enero de 2007 atendidos en los servicios de hematología del Hospital Hermanos Ameijeiras (HHA), de Ciudad de La Habana, y el Hospital Provincial Comandante Faustino Pérez (HPCFP), de Matanzas, Cuba. Se determinó la seropositividad al HTLV-I por ELISA y western blot y se confirmó la infección mediante la reacción en cadena de la polimerasa. Se estudiaron también los familiares y los contactos sexuales de los pacientes positivos. Se utilizó la prueba de la Z para la comparación de proporciones. RESULTADOS: La seroprevalencia de la infección por el HTLV-I en pacientes con síndromes linfoproliferativos fue de 0,4 por ciento, mayor en el HPCFP que en el HHA (6,1 por ciento frente a 0,2 por ciento; P < 0,001). No se encontraron diferencias significativas en la frecuencia de la infección según la edad, el sexo y el color de la piel. De los 53 familiares y contactos sexuales estudiados, 8 (15,1 por ciento) tuvieron diagnóstico positivo de infección por el HTLV-I. CONCLUSIÓN: La frecuencia de la infección por el HTLV-I en el grupo estudiado fue superior a la encontrada con anterioridad en Cuba. Se confirmó la utilidad de la vigilancia seroepidemiológica mediante centros centinela.

OBJECTIVE: To determine the prevalence of human T-cell lymphotropic virus type I (HTLV-I) infection among patients with lymphoproliferative disorders, as well as among their family members and sexual contacts, at two sentinel sites in Cuba. METHODS: An analysis was conducted of all the patients with a presumptive diagnosis of hematological malignancies seen by the hematology departments of the Hospital Hermanos Ameijeiras (HHA), City of Havana, and the Hospital Provincial Comandante Faustino Pérez (HPCFP), Matanza, Cuba, in January 1996-January 1997. HTLV-I seropositivity was determined by ELISA and Western Blot, and infection was confirmed by polymerase chain reaction. The positive patients' family members and sexual contacts were also assessed. The Z-test was used to compare proportions. RESULTS: Seroprevalence of HTLV-I infection in patients with lymphoproliferative disorders was 0.4 percent higher at the HPCFP than at the HHA (6.1 percent versus 0.2 percent, P < 0.001). There were no significant differences in prevalence by age, sex, or skin color. Of the 53 family members and sexual contacts studied, 8 (15.1 percent) were positive for HTLV-I infection. CONCLUSION: The prevalence of HTLV-I in the study group was higher than previously found in Cuba. The value of seroepidemiological surveillance through sentinel sites was confirmed.

Seguimiento seroepidemiológico de contactos sexuales de individuos seropositivos al HTLV-I en Cuba / Seroepidemiological follow-up of sexual partners of HTLV-I seropositive individuals in Cuba

INTRODUCCIÓN: el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I) es endémico en el Caribe, con tasas de seroprevalencia de 3 a 6 %. Se transmite por las vías sexual, vertical y parenteral. Aunque con seroprevalencia mucho menor, en Cuba también circula el HTLV-I y la transmisión heterosexual es una forma de contagio frecuentemente reportada. OBJETIVO: determinar la seroprevalencia del HTLV-I en los contactos sexuales de individuos con infección conocida por HTLV-I y valorar factores de interés epidemiológico con posible influencia en la transmisión. MÉTODOS: se realizó un estudio prospectivo de seguimiento seroepidemiológico de los contactos sexuales de los individuos con infección por HTLV-I, identificados por el Programa Nacional de Control de las ITS/VIH/sida. Previa consejería y obtención de consentimiento informado se confeccionó una encuesta epidemiológica, con datos sobre los contactos sexuales y su seguimiento serológico. El diagnóstico se realizó con los sistemas de ELISA y Western blot DAVIH HTLV-I y DAVIH BLOT HTLV-I, respectivamente, y el procesamiento estadístico mediante el programa EPIDAT. RESULTADOS: la seropositividad de los contactos sexuales de los hombres resultó significativamente mayor en comparación con los de las mujeres (53,3 % vs. 9,09 %, p< 0,05). El tiempo promedio de exposición de los contactos positivos y negativos de hombres y mujeres no mostró diferencia significativa. CONCLUSIONES: los resultados indican mayor eficiencia en la transmisión del HTLV-I del sexo masculino al femenino y evidencian su presencia en Cuba como una infección de transmisión sexual. Los autores consideran que esta información debe ser utilizada durante el servicio de consejería.

INTRODUCTION: the Human T Cell Lymphotropic Virus type I (HTLV-I) is considered to be endemic in the Caribbean area, with rates of seroprevalence from 3 to 6 %. Its routes of transmission are sexual, vertical and parenteral. It also circulates in Cuba, though seroprevalence is much lower. Heterosexual transmission is a frequently reported way of contagion. OBJECTIVES: to determine HTLV-I seroprevalence in the sexual partners of HTLV-I infected individuals and also to assess important epidemiological factors that could have an impact on the transmission. METHODS: a prospective sero epidemiological follow-up study was conducted with the sexual partners of the HTLV-I infected individuals who were identified by the National Program of STD/HIV/aids. After counseling sessions and well-informed consent, an epidemiological survey was designed using data from the sexual partners and their serological follow up. Diagnosis was based on the ELISA and Western Blot DAVIH HTLV-I and DAVIH BLOT HTLV-I systems, and the statistical processing used EPIDAT program. RESULTS: seropositivity of the sexual partners was significantly higher in men than in women (53.3% vs. 9.09%, p< 0.05). The average time of exposure of the positive and negative partners of men and women did not show significant difference. CONCLUSION: the results revealed greater efficiency in the transmission of HTLV-I from men to women and also evinced its presence in Cuba as sexually-transmitted disease. The authors believe that this information should be used during the counseling service.

Resultados preliminares del perfeccionamiento del DAVIH-AgP24 con el empleo del sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa / Preliminary results of DAVIH-AgP24 with the biotin-tiramyne/streptavidine-peroxidase amplification system

Se modificó el ELISA DAVIH-Ag P24 con la introducción de la disociación por calor de las muestras de plasma y el empleo de un sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa, para incrementar su sensibilidad. Se determinó la repetibilidad interensayo en el DAVIH-Ag P24 amplificado. Se evaluaron 32 muestras de plasma de individuos infectados por el VIH-1 en 3 categorías clínicas (caso SIDA, asintomßticos y con infecciones oportunistas menores). En la determinación de la repetibilidad interensayo se obtuvo un coeficiente de variación entre 4 y 10,3 por ciento. Con el DAVIH-Ag P24 amplificado se incrementó el nivel de detección de P 24 hasta 0,5 pg/mL. El DAVIH-Ag P24 amplificado alcanzó 66 por ciento de sensibilidad, mientras que el DAVIH-Ag P24 obtuvo 31 por ciento. Este estudio preliminar permitió demostrar que la incorporación de las nuevas modificaciones al sistema DAVIH-Ag P24 amplificado logró aumentar los niveles de detección de P24 y ganar en sensibilidad.

ELISA DAVIH-Ag p24 was modified by introducing heat dissociation of plasma samples and a tyramine/streptavidine-peroxidase amplification system, with the objective of increasing sensitivity. Between-assay repeatability was determined in amplified DAVIH-Ag p24. Thirty two plasma samples from HIV-1-infected individuals classified in three clinical categories (AIDS case, asymptomatic and minor opportunistic infections) were evaluated. The variation coefficient ranged 4-10.3 percent in between-assay repeatability. With the amplified DAVIH-p24 Ag, the p24 antigen detection level increased to 0.5 pg/mL. Amplified DAVIH-p24 Ag reached 66 percent sensitivity whereas standard DAVIH-p24 Ag sensitivity rate was 31 percent. This preliminary study proved that the introduction of new modifications in amplified DAVIH-p24 Ag managed to increase the p24 antigen detection levels and to gain sensitivity.

Paraparesia espástica tropical y sinovitis proliferativa asociadas al HTLV / Tropical spastic paraparesis and HTLV-I-associated proliferative synovitis

Introducción: el virus linfotrópico de las células T humanas tipo I (HTLV-I) es endémico en la cuenca del Caribe, donde se reconoce como agente etiológico de la paraparesia espástica tropical. En Cuba se ha reportado una seroprevalencia de 0,037 por ciento. Objetivos: demostrar la asociación de la infección por HTLV-I en una paciente con paraparesia espástica tropical y sinovitis proliferativa de rodilla. Métodos: se estableció el diagnóstico clínico de paraparesia espástica y sinovitis proliferativa crónica de rodilla. Se realizaron estudios humorales e imagenológicos para sustentar los diagnósticos positivo y diferencial; se emplearon sistemas de ELISA y western blot para la detección de anticuerpos contra HTLV-I. Resultados: los estudios serológicos confirmaron la infección por HTLV-I. Los síntomas y signos resultaron compatibles con la guía para el diagnóstico establecida por la Organización Mundial de la Salud y se hizo el reporte número 33 de la relación de individuos con infección por HTLV-I diagnosticados en Cuba. Conclusiones: se presentó, por primera vez en una paciente cubana infectada por HTLV-I, la asociación de paraparesia espástica tropical con manifestaciones articulares.

Background: the Human T Cell Lymphotropic Virus type I (HTLV-I) is considered to be endemic in the Caribbean area, where it is recognized as the etiologic agent of the tropical spastic paraparesis (TSP). In Cuba, 0.037 percent seroprevalence has been reported. Objectives: to demonstrate the association of the HTLV-I infection in a patient showing tropical spastic paraparesis and chronic proliferative knee synovitis. Methods: the clinical diagnosis of spastic paraparesis and chronic proliferative knee synovitis was made. Humoral and diagnostic imaging studies were performed to support the differential and positive diagnoses. ELISA´s and Western Blot techniques were used for the detection of HTLV-I antibodies. Results: the HTLV-I infection was confirmed by serologic studies. The symptoms and signs were compatible with those established in the WHO guidelines for the diagnosis of this disease. The case no. 33 with diagnosis of HTLV-I infection in Cuba was reported. Conclusions: it was the first time that the association of TSP and joint manifestations was found in a Cuban HTLV-I infected patient.

Diseño y evaluación del sistema DAVIH VIH-2 / Design and evaluation of DAVIH VIH-2

Se expusieron los resultados del diseño y la evaluación del diagnosticador DAVIH VIH-2, sistema ELISA indirecto diseñado para el pesquisaje de anticuerpos al VIH-2, que utiliza en su fase sólida un péptido sintético de la proteína de envoltura gp36 del VIH-2. La evaluación del desempeño del sistema se realizó utilizando paneles de referencia de la OMS y se determinó que la sensibilidad fue 100 por ciento, la especificidad 99,81 por ciento, la eficacia 99,81 por ciento y la concordancia muy buena (índice kappa= 0,978). Las muestras de suero de 959 personas con resultados indeterminados o negativos a la confirmación de anticuerpos al VIH-1 (DAVIH-Blot) se evaluaron en el sistema DAVIH VIH-2. Resultaron reactivas al sistema 24 muestras, confirmßndose la presencia de anticuerpos al VIH-2 en 6 de ellas. Estos resultados permitieron sugerir la introducción de este diagnosticador en el algoritmo de diagnóstico de la infección por VIH en Cuba.

The results of the design and evaluation of DAVIH VIH-2 diagnosing system, an indirect Elisa for screening of HIV-2 antibodies, which uses a HIV-2 glycoprotein gp36 synthetic peptide in its solid phase, were exposed. In the system evaluation using WHO reference panels, 100 percent sensitivity, 99,81 percent specificity, 99,81percent efficacy and very good concordance level (kappa = 0.978) were attained. Serum samples of 959 individuals with undetermined or negative results to the HIV-1 antibodies confirmation (DAVIH blot) were evaluated by the DAVIH VIH-2 system. Twenty four samples were reactive, six of which had confirmed HIV-2 antibodies. These results allowed recommending the introduction of this diagnostic kit in the HIV infection diagnosing algorithm in Cuba.

Leucemia / linfoma T del adulto. Primer caso en Cuba / Adult's T-cell leukemia/lymphoma. First case in Cuba

Se presentó el caso de una paciente con diagnóstico de linfoma no Hodgkin de histología agresiva, en el año 1990, que por los hallazgos clínicos y resultados de los exámenes complementarios realizados se sospechó la posibilidad de una leucemia / linfoma tipo T del adulto (LLTA) relacionada con la infección por el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (conocido como HTLV-I), lo cual fue confirmado por los resultados de los estudios virológicos. Se observó comportamiento evolutivo y respuesta terapéutica tórpidos. Falleció en los primeros 4 meses de efectuado el diagnóstico, lo que corroboró lo publicado en la literatura médica sobre este tema. Este es el primer caso diagnosticado en Cuba de una leucemia / linfoma tipo T del adulto (LLTA) relacionada con la infección por el virus linfotrópico de células T humanas tipo I (HTLV-I).

Caracterización biológica de aislamientos de VIH-1 en pacientes con una evolución clínica rápida

Se estudiaron las características biológicas de 11 cepas de VIH-1 aisladas de pacientes con rápida evolución clínica al sida. Los aislados virales se clasificaron según su cinética de replicación y tropimo celular, con estos criterios se observó que 8 de las cepas aisladas (72,7 %) resultaron de crecimiento rápido alto o lento bajo 3 y con tropismo preferencial a la estirpe linfocítica, como corresponde a los pacientes con sida, mientras 3 (27,3 %) tuvieron características de lenta baja 1. La citopatogenicidad de las cepas se estudió en la línea celular MT4 y se observó que la mayoría (72,7 %) resultó inductora de sincicios (IS), por lo que se comprobó relación in vivo e in vitro de las propiedades biológicas, no ocurrió así en 3 de los cultivos (27,3 %) que se comportaron como no inductores de sincicios.

The biological characteristics of 11 HIV-1 strains isolated from patients with a fast clinical evolution to AIDS were studied. The viral isolates were classified according to their replication kinetics and cell tropism. Taking into account these criteria, it was observed that 8 of the isolated strains (72,7 %) were of rapid high growth (RH) or slow low 3 (SL3) with preferential tropism to the lymphocytic stock, as it corresponds to AIDS patients. 3 (27,3 %) had characteristics of slow low 1 (SL1). The cytopatogenecity of the strains was studied in the MT4 celular line, and it was observed that most of them (72,7 %) were syncytium-inducing strains (SI), which allowed to prove the in vivo and in vitro relation of the biological properties. It was not so in 3 of the cultures (27,3 %) that behaved as non-syncytium inducers.