Características de las células primordiales germinales murinas y su relación con la hemopoyesis / Characteristics of murine primordial germ cells and their relation with hemopoiesis

Las células germinales primordiales (PGC) son una población de células positivas a la fosfatasa al- calina, que se suelen observar en embriones de 7.5 dias post coitum (dpc) y que migran luego por varios tejidos hasta alojarse en las gonadas. La hematopoyesis es un complejo sistema en el cual las células estaminales hemopoyéticas (HSC) se desarrollan a partir de una simple célula multipotente. Las PGC y HSC están reguladas por un conjunto de factores de crecimiento que controlan la proliferación y diferenciación de los mismos. El factor inhibidor leucémico (LIF) es una citoquina que regula la diferenciación y el fenotipo totipotencial de las PGC como también la capacidad proliferativa de las HSC. Recientemente otros factores de crecimiento: factor de células estaminales (SCF), factor macrofágico (MGF) y forskolin (FRSK) han sido propuestos como posibles reguladores de estos progenitores in vivo e in vitro La inducción a la hemopoyesis de células germinales embrionarias primitivas indica que las células germinales poseen la potencialidad de diferenciarse en el sistema hemopoyético. La coincidente presencia en la región donde la hemopoyesis temprana se establece, para PGC y HSC y el requerimiento de los mismos factores de crecimiento, apoyan la hipótesis que las PGC pueden ser consideradas como células iniciadoras de la hemopoyesis

Análisis de progenitores hemopoyéticos en muestras de medula ósea y de sangre periférica en periodos variables de criopreservación / Analysis of hemopoietic progenitor cells in bone marrow and peripheral blood samples which have undergone different periods of cryopreservation

Con el objetivo de evaluar, en función del tiempo, los efectos de la criopreservación sobre los progenitores hematopoyéticos, se estudiaron muestras de médula ósea (MO) y células progenitoras de sangre periférica (SCP) de pacientes a transplante autólogo. Se midió la viabilidad celular y utilizando cultivos de progenitores CFU-GM y BFU-E, el poder clonogénico de las mismas y para evaluar si el estroma medular estaba afectado, se utilizó el cultivo a largo térmico (CALT). De los 23 pacientes estudiados, 5 tenían LMA, 7 MM, 6 LNH, 3 LLA y 2 LH. De estos recibieron transplante de MO autóloga 9 y 14 de SCP. El tiempo de congelación, previo al transplante, varió entre 24 y 33 días, mientras que los cultivos fueron efectuados entre 16 y 40 meses posteriores a la congelación. El desarrollo in vitro de colonias fue positivo en el 40 por ciento de las muestras de LMA y MM, en cambio, en el resto de las muestras, tal desarrollo se observó en casi el 100 por ciento. En las enfermedades linfoides hubo buena correlación entre las células CD33+ y el número de colonias desarrolladas in vitro, no así en LMA y MM. Esto hizo suponer que la enfermedad previa fuese la causante del bajo desarrollo in vitro. En los CALT la capa adherente tuvo su mejor desarrollo con células provenientes de MO, en cambio con las de SPC solamente se observaron macrófagos y fibroblastos. Por lo tanto se desprende que la eficiencia de la criopreservación puede ser medida empleando cultivos de progenitores CFU-GM y BFU-E y que el período que las muestras permanecen congeladas no afecta la potencialidad clonogénica de las mismas.

Estudio in vitro de progenitores hemopoyeticos de sangre de cordon umbilical humano frente a diferentes citoquinas y suero autologo / In vitro study of hemopoietic progenitors in human umbilical cord blood treated with different cytokines and autologous serum

Con el fin de lograr la expanción celular de SCUH se realizaron cultivos de 19 muestras, determinándose número y tipo de progenitores hemopoyéticos, la capacidad de estos progenitores proliferar por largos períodos y el poder estimulante del suero de cada muestra. En cada caso se efectuaron los seguientes ensayos: a) CD de CFU-GM, CFU-GEMM y BFU-E en MS de SCUH y MO enfrentados a CSF, suero de MO y suero de SCUH b) CLT de 35 días de duración en medio líquido, en presencia de (IL-3+CSF-GM+SCF) o SA. Cada 7 días se recogió la mitad del medio de cultivo y se agregó medio fresco y citoquinas. Las células cosechadas se cultivaron en MS evaluándose las colonias a los 10 días. Resultados: el promedio de CFU-GM de SCUH no difirió significativamente del de MO observándose un máximo de colonias al día 7 tanto con citoquinas como con SA, aunque con este último se mantuvieron niveles altos hasta el día 21. En 8 muestras se observó el desarrollo de colonias hasta el día 35; estos casos mostraron en CD valores superiores a los de MO. El suero de SCUH posee un elevado poder estimulante sobre la MO respecto de un estimulante no específico y también sobre SCUH, sólo que ésta presentó gran dispersión entre las muestras. Conclusión: 1) SCUH posee elevado número de progenitores hemopoyéticos existiendo gran dispersión entre las muestras, 2) los sueros poseen alto poder estimulante sin diferencias significativas entre ellos, 3) es posible inducir la expansión de estos progenitores por largos períodos con citoquinas o SA sin perder su potencialidad.

Regulación de la hematopoyesis / Hematopoyesis regulation

Las señales positivas y negativas juegan un papel trascendental en la regulación del sistema hematopoyético. En los últimos 30 años se purificaron más de 20 moléculas (glicoproteínas) con actividad biológica sobre las células progenitoras del sistema hematopoyético y sobre las células maduras circulantes. Los factores de crecimiento hematopoyéticos son las más conocidas de estas biomoléculas (citocinas como los factores estimulantes de colonias y las interleucinas), las cuales son capaces de estimular a las células de la médula ósea para producir descendencia madura. Hasta el presente se ha podido determianr no sólo la secuencia de la mayoría de estas glicoproteínas y los gene que las codifican, sino también caracterizar a las células blanco de cada uno de los factores y a sus receptores celulares. Los estudios de la interacción entre las células progenitoras hematopoyéticas y los factores que estimulan y/o inhiben su proliferación, han demostrado ser muy útiles en el desarrollo de terapias clínicas y podrían ser herramientas importantes en el análisis de la patogenia de muchas enfermedades hematológicas. Sin embargo, los mecanismos subyacentes en la producción de factores estimulantes o inhibidores y la proliferación de las células progenitoras hematopoyéticas continúan siendo escasamente conocidos