Comparative study of egg contamination with SalmonellaHeidelberg and Salmonella Typhimurium / Estudo comparativo da contaminação de ovos com SalmonellaHeidelberg e Salmonella Typhimurium

Cases of salmonellosis in humans have been associated with consumption of eggs contaminated with this bacterial pathogen due to insufficient heat treatment. The most prevalent serotypes of Salmonella in Brazil include serotypes Enteritidis, Typhimurium, and Heidelberg. The first two serotypes are major causes for eggs to be withheld from sale and for recalls over Salmonella contamination concerns in both domestic and foreign markets. Eggs may be contaminated through transovarian infection (transovarial transmission) due to the presence of the microorganism in the hen's oviduct and bacterial penetration of the eggshell. There is little data in the literature on the susceptibility of egg contamination and eggshell penetration by Brazilian serotypes of Salmonella. The present study aimed to evaluate the ability of S. Heidelberg and S. Typhimurium serotypes to penetrate through the eggshell and detect these bacteria in the albumen and yolk according to the thickness of the eggshell. SPF (specific-pathogen-free) eggs were artificially contaminated by contact with moist cotton containing Salmonella (15 x 108 CFU/ml). Eggs were divided into the following groups: negative control (not contaminated), S. Heidelberg, and S. Typhimurium. Subsequently, these eggs were incubated at 37°C, and their contents analyzed after 4 h and 24 h of incubation. The evaluation (assessment) of the contamination was performed by traditional bacteriology and confirmed by biochemical and serological tests. Treatments were compared with Fisher's test using a SAS statistical software. For S. Heidelberg, the percentage of positivity (positive cases) was lower in both albumen and yolk at 4 h and 24 h intervals (33.33% and 3.7%, and 3.7% and 3.7%, respectively) compared to S. Typhimurium (26.63% and 7.41%, and 33.33% and 33.33%, respectively). These findings suggest that the former strain (S. Heidelberg) was unable to survive in the hostile environment of the albumen. In contrast, eggshell thickness had no significant correlation with the number of positive samples. In conclusion, the results obtained in the egg infection model show that the Salmonella strains tested were able to penetrate the eggshell and multiply in both the albumen and yolk and that S. Typhimurium proved to be the most efficient to grow within these portions of the egg.(AU)

Salmonelose em humanos é frequentemente associada ao consumo de ovos contaminados sem o devido processamento térmico. No Brasil, os sorotipos mais prevalentes são: Enteritidis, Typhimurium e Heidelberg, alvo de barreiras sanitárias na comercialização de ovos. O ovo pode ser contaminado por via transovariana, pela presença da bactéria no oviduto da ave e também por penetração da bactéria através da casca do ovo. Existem poucas informações acerca da capacidade de contaminação no ovo por sorotipos isolados no Brasil. Este estudo teve como objetivo avaliar a capacidade dos sorotipos S. Heidelberg e S. Typhimurium penetrar através da casca do ovo e colonizar a albumina e gema, relacionando à espessura da casca. Os ovos SPF (livres de patógenos específicos) foram contaminados artificialmente pelo contato com algodão umedecido (15 x 108 CF/mL). Os ovos foram divididos nos seguintes grupos: controle negativo (sem contaminação), S. Heidelberg e S. Typhimurium. Posteriormente foram incubadas a 37°C e seu conteúdo foi analisado após 4 e 24 h. A avaliação da contaminação foi realizada por bacteriologia tradicional e confirmada por testes bioquímicos e sorológicos. Os tratamentos foram comparados com o teste de Fisher usando o software estatístico SAS. Para S. Heidelberg, a percentagem de positividade foi menor no albúmen e gema às 4 e 24 h (33,33% e 3,7%, 3,7% e 3,7%, respectivamente) em comparação com S. Typhimurium (26,63% e 7,41%, 33,33% e 33,33%, respectivamente), sugerindo que a primeira estirpe foi mais vulnerável as condições hostis da albumina. Por outro lado, a espessura da casca do ovo não teve relação significativa com a positividade das amostras. Em conclusão, o modelo de infecção do ovo mostrou que as cepas foram capazes de penetrar a casca do ovo e sobreviver na albumina e gema, sendo que o sorotipo S. Typhimurium foi mais eficiente.(AU)

Cattle tick differentiates between the odors of Holstein Friesian and Nelore cattle / Carrapato de bovinos diferencia o odor de bovinos da raça Holandesa e Nelore

Although Rhipicephalus microplusmainly parasitizes bovines, different breeds can have variable parasite burdens, with indian breeds being less susceptible to tick infestation than european breeds. These ticks use pasture questing to seek out their hosts in the open spaces of their grassland habitats. Using an olfactometer bioassay, where the larva could express questing, the authors aimed to answer whether R. microplusexhibit different behaviors depending on the bovine breed. Sixteen larvae were individually exposed to the odors of five holstein friesian cattle, five nelore cattle, hexane (negative control) and 2-nitrophenol (positive control). The highest questing responses were observed to 2-nitrophenol and holstein odors. The lowest response was observed to the solvent and was statistically similar to nelore odors. It is possible to conclude that R. microplusexpress different questing behaviors depending on the odor of the breed perceived. This behavior can help R. microplusto avoid parasitizing nelore bovines and is biologically advantageous for the tick because it is known that ticks that feed on this host have impaired development.

Embora Rhipicephalus microplusparasite principalmente bovinos, diferentes raças podem ter cargas parasitárias variáveis, sendo os bovinos indianos menos suscetíveis a esse carrapato que os bovinos europeus. Este carrapato usa um comportamento de procura conhecido como questing para encontrar seu hospedeiro nas pastagens. Utilizando um teste em olfatômetro, onde a larva podia expressar o questing, objetivou-se responder se a larva podia expressar diferentes comportamentos dependendo da raça de bovino envolvida. Dezesseis larvas foram expostas para os odores de cinco bovinos holandeses, cinco nelores, hexano (controle negativo) e 2-nitrofenol (controle positivo). As mais altas respostas foram observadas para o 2-nitrofenol e odor de holandês. A mais baixa resposta foi observada para o solvente e foi estatisticamente similar ao odor de nelore. É possível concluir que R. microplusexpressa de forma diferente o comportamento de questing dependendo do odor da raça de bovinos percebido. Esse comportamento pode ajudar R. microplusa evitar parasitar bovinos nelore, o que é biologicamente vantajoso para o carrapato, uma vez que se sabe que carrapatos alimentados neste hospedeiro têm seu desenvolvimento comprometido.

Diagnóstico molecular de Ehrlichia canis em cães de Goiânia, Brasil / Molecular diagnostics of Ehrlichia canis in dogs from Goiânia state of Goiás, Brazil

Ehrlichia canis é um parasito bacteriano intracelular obrigatório, agente da Erliquiose Monocítica Canina. O método de diagnóstico laboratorial de rotina é realizado pela demonstração microscópica direta das inclusões intraleucocitárias. Mais recentemente a reação em cadeia da polimerase (PCR)foi introduzida como um método para aumentar a sensibilidade e a especificidade do diagnóstico. O objetivo deste trabalho foi pesquisar a presença de Ehrlichia em cães na cidade de Goiânia, Goiás, por métodos de diagnóstico molecular. Para o estudo, foram obtidas 40 amostras de sanguede cães sintomáticos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Goiás. Todas as amostras, após a extração de DNA, foram testadas pela PCR empregando-se oligonucleotídeos gênero-específicos e, posteriormente, espécie-específicos para o gene 16S rRNA. Em seguida, foirealizada a purificação do produto de PCR espécie-específico para a realização de sequenciamento. Destas, 17 mostraram-se PCR positivas tanto nas reações para gênero quanto para a espécie E. canis. Os produtos de PCR foram sequenciados e as sequências com melhor qualidade (n igual a 5)foram escolhidas para estudos subsequentes. A análise de similaridade pelo BLASTn demonstroucorrespondência com a espécie Ehrlichia canis. Graças à utilização do programa Mega4 foi possível verificar que as amostras de E. canis provenientes de cães da cidade de Goiânia apresentam elevado grau de similaridade molecular com os isolados de referência para a mesma subespécie de outras regiões do Brasil e do mundo. Amostras de E. canis de cães avaliados neste estudo formam grupo filogenético bem definido, juntamente com amostras de referência de E. canis de diferentes regiõesgeográficas. As sequências obtidas foram depositadas no GenBank como sequências parciais do gene 16S rRNA de E. canis, procedentes de Goiânia.

Design of primer pairs for species-specific diagnosis of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi using PCR / Construção de pares de primers para a detecção espécie-específica de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi por PCR

The objective of this study was to design and evaluate new primers for species-specific detection of L. infantum chagasi using PCR. Two combinations of primer pairs were established with the aim of obtaining specific amplification products from the L. infantum chagasi 18S rRNA gene. The combinations of the primer pairs and the respective sizes of the PCR products, based on the U422465 GenBank reference sequence of L. infantum chagasi, were: LCS1/LCS3 (259 bp) and LCS2/LCS3 (820 bp). It was concluded that the new PCR assays optimized using the primer pairs LCS1/LCS3 and LCS2/LCS3 were effective for specific detection of L. infantum chagasi, with analytical sensitivity to detect 1 pg/µL of DNA.

Objetivou-se com este trabalho construir e avaliar novos primers para a detecção espécie-específicos de L. infantum chagasi por PCR. Foram estabelecidas duas combinações de pares de primers com a finalidade de obter produtos de amplificação específicos para o gene 18S rRNA de L. infantum chagasi. As combinações dos pares de primers e os respectivos tamanhos dos produtos de PCR, previstos conforme a sequência de referência utilizada (GenBank U422465) foram: LCS1/LCS3 (259 pb); LCS2/LCS3 (820 pb). Pôde-se concluir que os novos ensaios de PCR otimizados neste estudo, empregando os pares de primers LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3, foram efetivos para a detecção específica de L. infantum chagasi, com sensibilidade analítica para detectar 1 pg/µL de DNA.

Phylogenetic characterization of Babesia canis vogeli in dogs in the state of Goiás, Brazil / Caracterização filogenética de Babesia canis vogeli em cães do estado de Goiás, Brasil

The genus Babesia comprises protozoa that cause diseases known as babesiosis. Dogs are commonly affected by Babesia canis or Babesia gibsoni. Babesia canis is divided into the subspecies Babesia canis canis, Babesia canis vogeli and Babesia canis rossi. Among these, Babesia canis vogeli predominates in Brazil. The objective of this study was to conduct a phylogenetic analysis on Babesia isolates from dogs in Goiânia, Goiás. Blood samples were obtained from 890 dogs presenting clinical signs suggestive of canine babesiosis that were attended at a veterinary hospital of Goiás. Only samples presenting typical intraerythrocytic parasites were used in the study. These were subjected to DNA extraction and amplification of a fragment of the 18S rRNA, by means of PCR. The PCR products were purified and sequenced. Sequences were obtained from 35 samples but only 17 of these were kept after quality assessment. Similarity analysis using BLASTn demonstrated that all 17 sequences corresponded to B. canis vogeli. Analysis using the Mega4 software showed that the isolates of B. canis vogeli from dogs in Goiânia present a high degree of molecular similarity (99.2 to 100 percent) in comparison with other reference isolates from other regions of Brazil and worldwide, deposited in GenBank.

O gênero Babesia compreende protozoários causadores de enfermidades denominadas babesioses. Cães geralmente são acometidos por Babesia canis ou Babesia gibsoni, sendo a primeira classificada em subespécies Babesia canis canis, Babesia canis vogeli e Babesia canis rossi. Entre essas, Babesia canis vogeli predomina no Brasil. O objetivo desse trabalho foi realizar estudo filogenético de amostras de Babesia em cães, em Goiânia, Goiás. Amostras de sangue foram obtidas de 890 cães atendidos no Hospital Veterinário de Goiás, apresentando sinais clínicos de babesiose. Somente amostras com presença de parasitos intraeritrocitários típicos foram utilizadas. Estas foram submetidas a extração de DNA e amplificação de fragmento do gene 18S rRNA pela PCR. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados. Foram sequenciadas 35 amostras, das quais apenas 17 foram mantidas após avaliação de qualidade. A análise de similaridade fornecida pelo BLASTn demonstrou que as 17 sequências deste estudo eram correspondentes a Babesia canis vogeli. Pela utilização do programa Mega4, foi possível verificar que as amostras de Babesia canis vogeli, provenientes de cães da cidade de Goiânia, apresentam, alto grau de similaridade molecular (99,2 a 100 por cento) com isolados de referência de outras regiões do Brasil e do mundo, depositados em GenBank.

Estudo da leishmaniose visceral canina no município de Goiânia, Goiás, Brasil / Studies on canine visceral leishmaniasis in the municipality of Goiânia, Goiás, Brazil

A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose causada por Leishmania infantum chagasi. Canídeos desempenham importante papel epidemiológico por atuarem como reservatórios naturais. Este trabalho teve como objetivo conduzir uma investigação sobre leishmaniose visceral canina (LVC) em cães na cidade de Goiânia-GO. Para o estudo, foram utilizados 214 animais sintomáticos e assintomáticos e colhidas amostras de sangue, biópsias de pele e aspirados de linfonodo. Nos testes sorológicos pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), 20 animais apresentaram resultados positivos. No exame parasitológico direto, foram detectadas amastigotas em seis amostras. Os testes pela reação em cadeia da polimerase (PCR), realizados apenas nos animais sintomáticos ou com resultado positivo em pelo menos um dos exames anteriores (n igual 81), foram positivos para sete cães. As amostras positivas no exame parasitológico foram também submetidas à PCR. Das 20 amostraspositivas nos testes pela RIFI, apenas sete foram confirmadas pela PCR. Os resultados positivos pela PCR espécie-específica, nas sete amostras, confirmaram a identidade molecular de L. i. chagasi nestes animais. Os resultados registraram os primeiros casos autóctones em Caldas Novas-GO e Novo Brasil-GO e evidenciaram a necessidade urgente de intensificação das estratégias de controle da LVC nestes municípios. O estudo revelou a existência de casos de LVC em cães que buscam atendimento clínico na cidade de Goiânia.

Diagnóstico parasitológico e molecular da babesiose canina na cidade de Goiânia-GO / Parasitologic and molecular diagnosis of canine babesiosis in Goiânia, Brazil

A babesiose canina é uma enfermidade causada por hematozoários intraeritrocitários obrigatórios do gênero Babesia. As espécies Babesia canis e Babesia gibsoni apresentam ampla distribuição geográfica. Mundialmente são reconhecidas três subespécies de B. canis: B. canis canis, B. canis vogeli e B. canis rossi. A caracterização morfológica observada no exame direto de esfregaços sanguíneos permite a diferenciação entre B. canis e B. gibsoni, mas não entre as subespécies de B. canis B. gibsoni é um parasito pequeno, normalmente encontrado em formas isoladas no interior das hemácias. B. canis é um parasito do grupo das grandes babesias, que geralmente se apresenta aos pares. O Objetivo deste trabalho foi identificar, por meio de estudos morfológicos e moleculares, as espécies e subespécies de Babesia envolvidas nos casos clínicos de babesiose canina na cidade de Goiânia. Amostras de sangue foram colhidas para a preparação de esfregaços sanguíneos e apenas as amostras positivas foram encaminhadas para a extração de DNA, totalizando 30 amostras. A avaliação microscópica dos esfregaços revelou formas intra-eritrocitárias variadas de trofozoítos e merozoítos e, em algumas amostras, prevaleceram formas com valores próximos a B. gibsoni; em outras, formas equivalentes a B. canis. O diagnóstico subespécie-específico por PCR confirmou a identidade molecular de B. c. vogeli nas 30 amostras avaliadas. Dessa forma foi possível concluir que, apesar das diferenças morfométricas verificadas entre as amostras procedentes da cidade de Goiânia, todas foram identificadas como subespécie B. c. vogeli.

Obtenção de isolados puros de Babesia bovis e Babesia bigemina a partir de larvas e ninfas de Boophilus microplus em bezerros neonatos privados de colostro / Pure isolates of Babesia bigemina and Babesia bovis obtained from Boophilus microplus larvae and nymphs in colostrum- deprived newborn calves

O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo principal de obter isolados puros autóctones de B. bovis e de B. bigemina a partir do carrapato Boophilus microplus, naturalmente infectado, assegurando, dessa forma, amostras de referência regional para futuros estudos sobre o tema. Os isolados puros de B. bovis e B. bigemina foram obtidos, respectivamente, através da infestação de bezerros neonatos privados de colostro com larvas e ninfas de B. microplus, naturalmente infectadas. A condição de isolados puros foi comprovada pela soroconversão específica pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), assim como pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e subinoculação. Os resultados confirmaram a eficácia da estratégia, anteriormente reportada, para isolamento puro de B. bovis e B. bigemina a partir de larvas e ninfas de carrapatos com infecções naturais. Concluiu-se ainda que o uso de bezerros neonatos privados de colostro, como animais suscetíveis, pode ser considerado um modelo prático, eficaz e relativamente econômico para o isolamento de hemoparasitos em regiões endêmicas.

Relato de um caso clínico de Leishmaniose visceral em um cão na cidade de Goiânia / Case report: visceral leishmaniosis in a dog in the city of Goiania, Brazil

O presente trabalho tem como objetivo relatar um caso de leishmaniose visceral em cão residente há um ano e meio na cidade de Goiânia, procedente de Fortaleza, onde a doença tem caráter endêmico. O atendimento foi realizado no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Goiás, ocasião em que o animal apresentava necrose na extremidade das orelhas, ulceração no focinho, emagrecimento e áreas de alopecia. Como método laboratorial, foi feita biópsia de pele da orelha, utilizada para o preparo de lâminas por aposição coradas pelo método de Giemsa. A microscopia revelou grande quantidade de formas amastigostas de Leishmania no citoplasma de macrófagos. O soro do animal foi reagente àreação de imunofluorescência indireta na diluição de 1:80. Com base nos dados epidemiológicos e nos exames clínicos e laboratoriais, concluiu-se pelo diagnóstico de calazar.