Avaliação comparativa ?in vivo? da eficácia do óleo de melaleuca, clorexidina e listerine sobre streptococcus mutans e microrganismos totais na saliva / ?In Vivo? Comparative Evaluation of the Efficacy of Melaleuca Oil, Chlorhexidine and Listerine against Streptococcus mutans and Total Microorganisms in Saliva

Objetivo: Comparar a eficácia dos enxaguatórios bucais: clorexidina 0,12%, Listerine e óleo de Melaleuca Alternifolia 0,5% e 2% sobre os níveis salivares de Streptococcus mutans e microrganismos totais. Métodos: O estudo foi um ensaio clínico, controlado, duplo cego e emparelhado. Para tanto foram selecionados 26 voluntários com idade entre 21 - 35 anos. Foi coletada de cada participante, no baseline, a quantidade de 1 mL de saliva não estimulada, 1 e 15 min após os bochechos com as seguintes soluções: água destilada estéril, digluconato de clorexidina 0,12%, Listerine (©Johnson & Johnson do Brasil), Melaleuca Alternifolia (Sigma-Aldrich St Louis, MO, USA) nas concentrações de 0,5% e 2%. Os participantes fizeram uso de todos os enxaguatórios bucais pesquisados, com intervalo de 15 dias entre cada solução. Imediatamente após o bochecho, foi coletada a saliva e realizadas as diluições seriadas, seguidas de plaqueamento em meio de cultura Agar sangue para o crescimento de microrganismos totais e SB-20 (Agar Sacarose Bacitracina) para S. mutans, mantidos por 48h a 37°C em microaerofilia. Após o período de incubação, as colônias foram contadas e transformadas em unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Resultados: A clorexidina mostrou ação antimicrobiana na redução dos microrganismos totais e S. mutans, enquanto a ação do óleo Melaleuca Alternifolia 0.5% foi semelhante à água destilada. O listerine e o óleoMelaleuca Alternifolia 2% apresentaram redução microbiana, respectivamente, de 11% e 9% para microrganismos totais, entretanto para S. mutans o listerine reduziu os níveis em 20% e o óleo Melaleuca Alternifolia 2% em 11%. Conclusão: O bochecho único com clorexidina 0,12% é eficaz na redução de níveis de microrganismos totais e S. mutans presentes na saliva. Ao comparar a clorexidina com o listerine e óleo Melaleuca Alternifolia 0,5% e 2% nas mesmas condições a eficácia da ação destas soluções é diminuída.

Objective: To compare the efficacy of the mouthwashes 0.12% chlorhexidine, Listerine, and 0.5% and 2% Melaleuca Alternifolia oil against the salivary levels of Streptococcus mutans and total microorganisms.Methods: This study was double-blind controlled and paired clinical assay. Twenty-six volunteers aged 21 to 35 years old were enrolled. At baseline, 1 mL of unstimulated saliva was collected from each subject, 1 and 15 min after mouthrinsing with the following solutions: sterile distilled water, 0.12% chlorhexidine digluconate, Listerine (©Johnson & Johnson do Brasil), 0.5% and 2% concentrations of Melaleuca Alternifolia (Sigma-Aldrich). The volunteers used all the evaluated mouthrinses with a 15-day interval between the solutions. Immediately after rinsing, saliva was collected and serial dilutions were performed, followed by plating in blood agar culture medium for growth of total microorganisms and SB-20 (Sucrose-Bacitracin agar) for growth of S. mutans, and incubation at 37 °C for 48 h in microaerophilia. After incubation, the number of colonies was counted and expressed as colony forming units (UFC/mL).Results: Chlorhexidine showed antimicrobial action by reducing total microorganisms and S. mutans, while the action of 0.5% Melaleuca Alternifolia was similar to that of distilled water. Listerine and 2%Melaleuca Alternifolia oil reduced total microbial counts by 11% and 9% respectively, and S. mutans by 20% and 11%.Conclusion: A single rinse with 0.12% chlorhexidine is effective in reducing the levels of total microorganisms and S. mutans present in saliva. Under the same testing conditions, Listerine and 0.5% and 2%Melaleuca Alternifolia oil presented lower efficacy than chlorhexidine.

Eficácia do óleo de Melaleuca alternifolia sobre bactérias cariogênicas e sua citoxicidade sobre cultura de queratinócitos / Efficacy of Melaleuca alternifólia oil against cariogenic bacteria and cytotoxicity on keratinocytes culture

Objetivo: O objetivo geral deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar in vitro o efeito do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) sobre as bactérias Streptococcus mutans (S.mutans) e Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) e seu possível efeito citotóxico sobre cultura de queratinócitos (HaCat). Materiais e Métodos: No estudo 1, a análise antimicrobiana foi avaliada em 3 fases: 1. Identificação da CIM e CBM do TTO nas concentrações de 0.25% a 2% sobre os microrganismos na forma planctônica, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo; 2. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em SSB (biofilme monoespécie) e DSB (biofilme multiespécie), formados em placa de cultura celular, tratados com diferentes concentrações de TTO, por meio de ensaio de XTT; 3. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em DSB formado sobre blocos de esmalte e dentina e submetidos às seguintes soluções: TTO 2%, clorexidina 0.12% (controle positivo) ou PBS (controle negativo) pelo tempo de 60 s, por meio de ensaio de XTT e análise das imagens obtidas por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). No estudo 2, a análise citotóxica de diferentes concentrações de TTO foi realizada sobre células HaCat usando diferentes tempos de contato (60 s, 2 h e 60 s, com recuperação de 24 h), por meio do ensaio de MTT para avaliação da atividade metabólica. Os dados obtidos apresentaram distribuição não normal e, portanto, foram utilizados os testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis e de Mann-Whitney. Todos os testes estatisticos foram considerados em nível de significância de 5%. Resultados: Na análise antimicrobiana, para ambos, S.mutans e L.acidophillus, os valores de CIM e CBM foram 0.5% e 1 %, respectivamente. Os valores de densidade óptica (DO) referentes ao metabolismo bacteriano, obtidos pelo ensaio de XTT, apresentaram diferença estatisticamente significante para S. mutans SSB, em concentrações de TTO de 0.25 a 2%, e para L. acidophillus SSB, na concentração de 2% (p<0.05). Entretanto não houve diferença estatisticamente significante para DSB (p>0.05). Quando DSB sob blocos de esmalte e dentina foram expostos a diferentes soluções, os valores de DO apresentaram diferença estatíticamente significante para o TTO 2% (p<0.05), porém com menor efeito de diminuição de metabolismo que a CHX 0.12% (p<0.05). As imagens obtidas por meio da MCVL concordam com os dados do ensaio de XTT, indicando que o TTO aumentou o número de bactérias mortas sobre a superfície dos blocos. Na análise da citotóxicidade, os valores de DO referente ao metabolismo celular, obtidos pelo teste de MTT, apresentaram diferença estatistica (p<0.05) entre os grupos controle negativo e todas as concentrações de TTO para exposição de 2 h e a partir da concentração de TTO 0.5% para as exposições de 60 s e 60 s com recuperação de 24 h. Ambos, controle positivo e CHX 0.12%, não apresentaram diferença estatistica (p>0.05). Conclusão: Apesar de apresentar baixo efeito antimicrobiano comparado a CHX 0.12%, o TTO mostrou ser capaz de reduzir o metabolismo de bactérias cariogênicas e não apresentar toxicidade em baixas concentrações e em curto tempo de exposição

Objective: The aim of this research, divided in two studies was to evaluate in vitro the effect of oil of Melaleuca alternifolia (TTO) against bacteria Streptococcus mutans (S. mutans) and Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) and its cytotoxic effect on keratinocyte cells (HaCat). Materials and Methods: In study 1, the antibacterial analysis was evaluated in 3 phases: 1. Identification of MIC and MBC of TTO (0.25% to 2%) on the microorganisms in the planktonic form using the broth microdilution technique; 2. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in SSB (monospecie biofilm) and DSB (multispecies biofilm) formed in cell culture plate and treated with different concentrations of TTO, using XTT assay; 3. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in DSB formed on blocks of enamel and dentin and submitted to the following solutions: 2% TTO, 0.12% chlorhexidine (positive control) or PBS (negative control) for 60 s, using XTT assay. Images obtained by confocal laser scanning microscopy (CLSM) were analyzed, too.. In study 2, the cytotoxic analysis of different concentrations of TTO was performed on HaCat cells at different contact times (60 s, 2 h, 60 s, with recovery of 24 h) was using the MTT assay to evaluate metabolic activity. The data showed non-normal distribution and therefore were used the nonparametric tests Kruskal-Wallis and Mann-Whitney. All statistical tests were considered at a significance level of 5%. Results: In the antibacterial analysis, for both S. mutans and L. acidophillus, the values of MIC and MBC were 0.5% and 1% respectively. The values of optical density (OD) for the bacterial metabolism, obtained by the XTT assay showed statistically significant for S. mutans SSB, at concentrations of TTO 0.25 to 2%, and for L. acidophillus SSB, at concentration of TTO 2% (p <0.05). However, there was no statistically significant difference in DSB (p> 0.05). When DSB on blocks of enamel and dentin were exposed to different solutions, the OD values showed statistically significant difference for the TTO 2% (p <0.05), but with less reduction of the metabolism than with CHX 0.12% (p <0.05). The images obtained by CLSM agree with the data from the XTT assay, indicating that the TTO has increased the number of dead bacteria on the surface of the blocks. In the analysis, of cytotoxity OD values or the cell metabolism, obtained by MTT test, showed significant differences (p <0.05) between the control and all concentrations of TTO for exposure of 2 h and for the concentrations between of 0.5% and 2% for TTO exposures of 60 s and 60 s to recovering 24 h. Both positive control and 0.12% CHX showed no statistical difference (p> 0.05). Conclusion: Although TTO results were not so good as the results with 0.12% CHX, TTO reduced the metabolism of cariogenic bacteria and presented low toxicity at low concentrations and in short exposition times

In Vitro effect of low-level laser therapy on typical oral microbial biofilms

The aim of this study was to evaluate the effect of specific parameters of low-level laser therapy (LLLT) on biofilms formed by Streptococcus mutans, Candida albicans or an association of both species. Single and dual-species biofilms - SSB and DSB - were exposed to laser doses of 5, 10 or 20 J/cm2 from a near infrared InGaAsP diode laser prototype (LASERTable; 780 ± 3 nm, 0.04 W). After irradiation, the analysis of biobilm viability (MTT assay), biofilm growth (cfu/mL) and cell morphology (SEM) showed that LLLT reduced cell viability as well as the growth of biofilms. The response of S. mutans (SSB) to irradiation was similar for all laser doses and the biofilm growth was dose dependent. However, when associated with C. albicans (DSB), S. mutans was resistant to LLLT. For C. albicans, the association with S. mutans (DSB) caused a significant decrease in biofilm growth in a dose-dependent fashion. The morphology of the microorganisms in the SSB was not altered by LLLT, while the association of microbial species (DSB) promoted a reduction in the formation of C. albicans hyphae. LLLT had an inhibitory effect on the microorganisms, and this capacity can be altered according to the interactions between different microbial species.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de parâmetros específicos de irradiação com laser de baixa intensidade sobre biofilmes formados por Streptococcus mutans (S. mutans), Candida albicans (C. albicans) ou associação de ambas as espécies. Biofilmes isolados ou associados destes microrganismos foram irradiados com um dispositivo laser infra-vermelho próximo de diodos InGaAsP (LaserTABLE 780 ±3 nm, 0,04W), utilizando-se para isto o dispositivo LASERTable. Quinze horas após a irradiação, foi demonstrado, por meio da avaliação da viabilidade celular (Teste de MTT), da morfologia das células (MEV) e do crescimento do biofilme (UFC/mL), que esta terapia foi capaz de reduzir o metabolismo celular, número de microrganismos presentes no biofilme, bem como seu crescimento no local. Quanto à viabilidade celular, a resposta à irradiação do biofilme de S. mutans (SSB) foi semelhante para todas as doses de energia, sendo que o crescimento do biofilme foi dose dependente. Porém, quando associado à C. albicans, este microrganismo apresentou resistência à fototerapia. Já a C. albicans associada ao S. mutans apresentou redução de crescimento significativa, sendo este resultado também foi dose dependente. A morfologia dos microrganismos não foi alterada pelas irradiações realizadas quando em biofilmes isolados. A associação entre os microrganismos promoveu redução na formação de hifas pela C. albicans. A laserterapia de baixa intensidade apresentou efeito inibitório sobre microrganismos, sendo que esta capacidade pode ser alterada de acordo com a interação entre diferentes microrganismos.