Phenotypic and genotypic detection of Candida albicans and Candida dubliniensis strains isolated from oral mucosa of AIDS pediatric patients

ABSTRACT The aim of this study was to assess a collection of yeasts to verify the presence of Candida dubliniensis among strains isolated from the oral mucosa of AIDS pediatric patients which were initially characterized as Candida albicans by the traditional phenotypic method, as well as to evaluate the main phenotypic methods used in the discrimination between the two species and confirm the identification through genotypic techniques, i.e., DNA sequencing. Twenty-nine samples of C. albicans isolated from this population and kept in a fungi collection were evaluated and re-characterized. In order to differentiate the two species, phenotypic tests (Thermotolerance tests, Chromogenic medium, Staib agar, Tobacco agar, Hypertonic medium) were performed and genotypic techniques using DNA sequencing were employed for confirmation of isolated species. Susceptibility and specificity were calculated for each test. No phenotypic test alone was sufficient to provide definitive identification of C. dubliniensis or C. albicans, as opposed to results of molecular tests. After amplification and sequencing of specific regions of the 29 studied strains, 93.1% of the isolates were identified as C. albicans and 6.9% as C. dubliniensis. The Staib agar assay showed a higher susceptibility (96.3%) in comparison with other phenotypic techniques. Therefore, genotypic methods are indispensable for the conclusive identification and differentiation between these species.

Immunological assays employed for the elucidation of an histoplasmosis outbreak in São Paulo, SP

Several reports showed outbreaks of histoplasmosis acquired while bat-inhabited caves were visited by tourists, miners or researchers. We evaluated the performance of double immunodifusion (DI) and immunoblotting (IB) assays, employed for the histoplasmosis outbreak elucidation occurred in Vale do Paraíba, São Paulo. The existence of epidemiologic link, four patients with clinical signs suggestive of histoplasmosis and mycological confirmation has made that all 35 individuals involved to the cave visit were subjected to serological evaluation. By DI, we observed reactivity against H. capsulatum antigen in a single serum examined nearly 20 days after exposure to fungal propagules. On the other hand, IB showed reactivity against H and M fractions in 50% of samples evaluated. The analysis of the second sample batch, collected two months after the exposure showed that 96.7% were reactive by DI with antibodies titers ranging from 1 to 16 and 100% of reactivity against H and M fractions, by IB, suggesting an acute infection. The analysis of the overall agreement between the methods showed to be reasonable (κ = 0.37). This study confirms the importance and efficacy of more sensitive methodologies, such as IB assay, to early elucidation of disease, especially in cases of patients without mycological information.

Importance of the association of molecular and immunological diagnosis in immunocompetent patient with Histoplasma capsulatum and Cryptoccocus neoformans infection: a case report

This case reports an immunocompetent 29-year-old woman with suspected pneumonia, suggestive of fungal infection. Immunoblotting analysis reactivity againstHistoplasma capsulatum and Paracoccidioides brasiliensis were observed. Nested-PCR in blood employing species-specific primers was positive for H. capsulatum andCryptococcus neoformans. The evaluation of paucisymptomatic patients with positive results for H. capsulatum and C. neoformans could be relevant for the prevention as well as the possible evaluation of the reactivated quiescent foci. In conclusion, the associated methodology may have contributed to the monitoring endogenous reactivation of these diseases.(AU)

Importance of the association of molecular and immunological diagnosis in immunocompetent patient with Histoplasma capsulatum and Cryptoccocus neoformans infection: a case report

This case reports an immunocompetent 29-year-old woman with suspected pneumonia, suggestive of fungal infection. Immunoblotting analysis reactivity against Histoplasma capsulatum and Paracoccidioides brasiliensis were observed. Nested-PCR in blood employing species-specific primers was positive for H. capsulatum and Cryptococcus neoformans. The evaluation of paucisymptomatic patients with positive results for H. capsulatum and C. neoformans could be relevant for the prevention as well as the possible evaluation of the reactivated quiescent foci. In conclusion, the associated methodology may have contributed to the monitoring endogenous reactivation of these diseases.

Histoplasmose: um risco ocupacional entre pesquisadores que realizam trabalho de campo? / Is the histoplasmosis an occupational hazard between the investigators who perform field work?

A histoplasmose é micose sistêmica causada por Histoplasma capsulatum. A infecção humana ocorre pela inalação de microconídios encontrados em solo contendo excretas de aves e/ou morcegos. Neste estudo foi enfatizado o potencial das atividades profissionais praticadas em cavernas em possibilitar risco de infecção por Histoplasma. Utilizando-se questionário semi estruturado, foram obtidas informações sobre o trabalho de campo executado por um grupo de 15 biólogos. A presença de anticorpos séricos anti-H.capsulatum foi avaliada em amostras de sangue coletadas desses profissionais. Na entrevista, 87 por cento dos indivíduos relataram frequentes visitas a cavernas, 53 acampamento no interior das grutas; 33 por cento captura de morcegos e 53 por cento de coleta de amostras de solo. A maioria das cavernas situa-se nas regiões sudeste e centro-oeste do Brasil. A detecção de anticorpos por imunodifusão dupla demonstrou que 20 por cento dos soros reagiram com o antígeno de H. capsulatum. Por immunoblotting, houve 94,1 por cento de reconhecimento específico da fração de 94 kDa, sugerindo-se que os indivíduos entraram em contato com H. capsulatum. Este estudo sugere fortemente que a prática da espeleologia propicia a exposição dos indivíduos a espécies fúngicas que habitam saprofiticamente o meio ambiente, especialmente H. capsulatum, configurando-se como potencial fator de risco para infecções.

Caracterização fenotípica e padronização de antígenos de H. capsulatum var. capsulatum para o diagnóstico da histoplasmose

Doze amostras de H. capsulatum foram avaliadas quanto aos aspectos fenotípicos e cinética de crescimento em ágar batata e ágar Sabouraud-dextrose, a 27o C, durante 45 e 90 dias respectivamente. Trinta e três porcento apresentaram textura velutínea e cotonosa, saliência e/ou elevação central, sulcos radiais, faixas concêntricas e pigmentos centrais e difusos. A microscopia óptica verificou-se hifas hialinas, delgadas, septadas, micro e macro aleuroconídios tuberculados; apresentando média de 47 dias para a fase estacionária. 67% eram cotonosas com tendência a ser plana, sendo 75% cotonosa e branca, com hifas delgadas e septadas. Antígenos de H. capsulatum foram obtidos segundo Kaufman e Standard (1978), a partir das amostras cultivadas em ágar Sabouraud-dextrose a 27o C durante 15 e 33 dias. A extração dos determinantes antigênicos foi realizada, cobrindo-se as culturas com solução de mertiolato-borato 1:5000 por 24 h, a temperatura ambiente. A imunoreatividade dos antígenos foi avaliada por imunodifusão dupla (ID) e immunoblotting (IB) frente a soros homólogos e heterólogos e anticorpos policlonais espécie específicos e heterólogos. Verificamos aumento na sensibilidade da técnica de ID quando empregamos antígeno obtido das amostras 200 e 406, em ambos os tempos de cultivos e 20 vezes concentrado,observando ainda que todos os antígenos avaliados apresentaram 100% de especificidade. Por IB, observamos intensa reatividade dos soros de pacientes com HP doença e infecção frente às frações de 74 e 120 kDa. Concluímos que para a obtenção de antígenos com boa especificidade e sensibilidade, a escolha da amostra fúngica bem comoo meio de cultura assume grande importância. Além disto, a metodologia adotada para a obtenção dos mesmos mostrou-se uma alternativa de baixo custo operacional, de fácil exeqüibilidade, consumindo menor tempo para sua produção

Caracterização fenotípica e padronização de antígenos de H. capsulatum var. capsulatum para o diagnóstico da histoplasmose / Phenotipic characterization of Histoplasma capsulatum var. capsulatum standardization of H. capsulatum exoantigen for histoplasmosis diagnosis

Doze amostras de H. capsulatum foram avaliadas quanto aos aspectos fenotípicos e cinética de crescimento em ágar batata e ágar Sabouraud-dextrose, a 27o C, durante 45 e 90 dias respectivamente. Trinta e três porcento apresentaram textura velutínea e cotonosa, saliência e/ou elevação central, sulcos radiais, faixas concêntricas e pigmentos centrais e difusos. A microscopia óptica verificou-se hifas hialinas, delgadas, septadas, micro e macro aleuroconídios tuberculados; apresentando média de 47 dias para a fase estacionária. 67% eram cotonosas com tendência a ser plana, sendo 75% cotonosa e branca, com hifas delgadas e septadas. Antígenos de H. capsulatum foram obtidos segundo Kaufman e Standard (1978), a partir das amostras cultivadas em ágar Sabouraud-dextrose a 27o C durante 15 e 33 dias. A extração dos determinantes antigênicos foi realizada, cobrindo-se as culturas com solução de mertiolato-borato 1:5000 por 24 h, a temperatura ambiente. A imunoreatividade dos antígenos foi avaliada por imunodifusão dupla (ID) e immunoblotting (IB) frente a soros homólogos e heterólogos e anticorpos policlonais espécie específicos e heterólogos. Verificamos aumento na sensibilidade da técnica de ID quando empregamos antígeno obtido das amostras 200 e 406, em ambos os tempos de cultivos e 20 vezes concentrado,observando ainda que todos os antígenos avaliados apresentaram 100% de especificidade. Por IB, observamos intensa reatividade dos soros de pacientes com HP doença e infecção frente às frações de 74 e 120 kDa. Concluímos que para a obtenção de antígenos com boa especificidade e sensibilidade, a escolha da amostra fúngica bem comoo meio de cultura assume grande importância. Além disto, a metodologia adotada para a obtenção dos mesmos mostrou-se uma alternativa de baixo custo operacional, de fácil exeqüibilidade, consumindo menor tempo para sua produção

Eumicetoma podal por Acremonium kiliense: registro de um caso / Podalic eumycotic mycetoma caused by Acremonium kiliense: report of one case

Os autores registram um caso de eumicetoma de gräos branco-amarelados, em paciente do sexo masculino, procedente da Bahia, com lesöes no pé esquerdo, provocadas por Acremonium kiliense (Grütz, 1925). O exame histopatológico näo demonstrou a presença de gräos, revelados, todavia, ao exame "a fresco", todos eles com estrutura de eumicetos. Discreta regressäo do quadro inflamatório com o uso de itraconazol, após tratamento prolongado

Subcutaneous phaeohyphomycosis caused by Phoma cava: report of a case and review of the literature

O presente trabalho registra um caso de feo-hifomicose subcutanea em paciente do sexo masculino com o diagnostico de sarcoidose pulmonar, submetido a terapeutica por corticosteroides quando apresentou no dorso da mao direita lesoes cutaneas nodulares, eritemato-violaceas, de aspecto infiltrado, exigindo biopsia para o diagnostico. O exame histopatologico revelou processo granulomatoso, com a presenca de hifas e celulas arredondadas demacias...