Detección de Apo B en lipoproteínas peroxidadas con un anticuerpo monoclonal / Detection of Apo B in peroxidated lipoproteins with a monoclonal antibody

Se desarrolló un sistema ELISA para Apo B empleando el AcM IA/CB-VLDVL.1 como anticuerpo de captura y anticuerpos policlonales de cabra anti Apo B, conjugados con HRP. Este sistema detecta valores superiores de Apo B luego de tratar las muestras con malondialdehído o sulfato cúprico, o luego de la incubación del LDL con células humanas endoteliales en cultivo. El IA/CB-VLDL.1 también reconoce niveles incrementados de Apo B en muestras de suero que han sido incubadas alta temperatura y en presencia de sustancias oxidativas, tales como ázida sódica. Las sustancias antioxidantes como EDTA disminuyen el reconocimiento del determinante antigénico identificado por el AcM IA/CB-VLDL.1. tanto la anbímina humana oxidada, las HDL como la LDL licosiladas no son reconocidas por este AcM. Los niveles de Apo B detectados por el IA/CB-VLDL.1 se correlacionan con los lipoperóxidos en LDL y VLDL alterados con lipoxigenasa en presencia de acidos grasos libres. Este sistema ELISA detectó niveles de Apo B incrementados en muestras de suero de pacientes con aterosclerosis periférica, angiopatía diabética y cardipatía isquémica, con respecto a los sueros de los individuos de distribución de edad y sexo similares, sin manifestaciones clínicas o antecedentes de enfermedad aterosclerótica

Cuantificación de interferón alfa 2b humano recombinante mediante anticuerpos monoclonales / Quantitation of recombinant human alpha 2b interferon with monoclonal antibodies

Se obtuvieron hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales (AcM) contra el IFN alfa-2 humano recombinante (rh*IFN) mediante la hibridación de linfocitos esplénicos de ratones inmunizados y el mieloma P3/x63.Ag8.653. En el tamizaje de las células secretoras de anticuerpos específicos se emplearon sistemas microELISA, con el antígeno unido directamente a la fase sólida, o mediante otro AcM anti rh*IFN. Se seleccionaron nueve clones de hibridomas específicos para rh*IFN, de los cuales se escogió el secretor de AcM denominado CB-IFNA2.4 para los experimentos de desarrollo de un sistema ELISA tipo sandwich. Empleando el AcM CB-IFNA2.3 como anticuerpo de captura y el CB-IFNA2.4 conjugado con peroxidasa, se construyó un sistema ELISA sandwich capaz de detectar 1 ng de antígeno por milimetro. Se realizó un estudio de optimización de los diferentes pasos del ELISA y del reconocimiento del antígeno, cuando este es sometido a distintos tratamientos desnaturalizantes. Este sistema se ha empleado exitosamente en el seguimiento del proceso de producción y purificación del rh*IFN. En experimentos preliminares con ratas inoculadas con esta molecula, se denostró que este ELISA puede detectar su presencia en suero

Tropical treatment of cutaneous T-cell lymphoma skin lesions with the mouse anti-CD6 monoclonal antibody IOR-T1 / Tratamiento tópico de lesiones de piel en linfomas cutáneos de células T con el anticuerpo monoclonal murino anti-Cd6 IOR-T1

Los linfomas cutáneos a células T (CTCL) constituyen un grupo de enfermedades neoplásicas caracterizadas por infiltrados de células T malignas en piel, con una pobre respuesta a la terapia convencional. La aplicación intravenosa de anticuerpos monoclonales (AcM) contra antígenos de diferenciación de células T ha sido experimentalmente evaluada como modalidad terapéutica en estas enfermedades, con respuestas antitumorales limitadas. El IOR-T1 es un Acm de ratón del isotipo IgG2a dirigido contra el antígeno CD6. Este anticuerpo monoclonal identifica una alta proporción de células T malignas en pacientes con CTCL y no induce la modulación edel antígeno. En el presente artículo reportamos la regresión de placas cutáneas limitadas en ytraes pacientes de CTCL que fueron tratados con una crema neutra hidrofilica que contenía 3 mg/g de IOR-T1. La crema fue aplicada tres veces al día durante un mes. En lesiones similares de estos pacientes, tratadas con un AcM anti antigeno carcinoembrionario, o placebo (solo crema), no se observó efecto alguno sobre las características de las lesiones. El diseño de este estudio y sus resultados indican que el IOR-T1 es absorbido a través de la piel y produce importantes cambios en las lesiones, compatibles con una respuesta antitumoral objetiva. Nuestros resultados sugieren la posibilidad de que la aplicación tópica de AcM pueda convertirse en una nueva modalidad terapéutica adyuvante en CTCL

Obtención y empleo de anticuerpos monoclonales contra el activador tisular del plasminógeno / Obtention and application of monoclonal antibodies againts the tissue plasminogen activator

Se obtuvieron los anticuerpos monoclonales (AcM) CB-tPA.1, CB-tPA.2 y CB-tPA.3, de la clase IgG1, secretados por hibridomas generados mediante la fusión del P3/x63.Ag8.653 con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con activador tisular del plasminógeno (t-PA) natural, purificado a partir de sobrenadante de cultivos de la línea de melanoma humano BOWES. Estos AcM reconocen en inmunodot el t-PA natural de simple y doble cadena, y t-PA recombinante de doble cadena (In Vitron). Se desarrollaron sistemas ELISA tipo sandwich, que emplean los AcM como anticuerpos de captura y anticuerpos policlonales de conejo anti t-PA, conjugados con peroxidasa, en el revelado de la reacción. La sensibilidad de estos sistemas fue de 3 ng/ml y pueden ser empleados para la cuantificación de t-PA natural y recombinante, así como para la medida de t-PA en muestras de sangre

Ensayo diagnóstico para TSH humana por ultramicroELISA empleando anticuerpos monoclonales / Diagnostic assay for human TSH by ultramicroELISA using monoclonal antibodies

La cuantificación de las concentraciones séricas de la hormona estimulante del tiroides (TSH) en neonatos tiene gran importancia diagnóstica en el hipotiroidismo primario congénito, enfermedad que, de no ser tratada precozmente, evoluciona con complicaciones de retraso mental. En Cuba existe desde 1987 un programa nacional de diagnóstico de esta entidad, que emplea como elemento tecnológico fundamental un sistema ultramicroELISA (UME), con dos anticuerpos policlonales, anti ß-TSH como anticuerpo de captura, y anti subunidad * conjugado con ß-galactosidasa, para el revelado de la reacción. La introducción de anticuerpos monoclonales (AcM) en estos procedimientos puede proporcionar ventajas adicionales, especialmente en lo que se refiere a especificidad y producción del reactivo. Nosotros hemos obtenido hibridomas secretores de AcM contra ß-TSH mediante la fusión del mieloma P3/x63.Ag8.653, con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con TSH. El AcM CB-TSH,1 (IgG1) se estudió a mayor profundidad como anticuerpo de captura en UME. Se demostró que este AcM puede sustituir efectivamente el anticuerpo policlonal de referencia; el UME, que combina el AcM en la fase sólida, y el anticuerpo policlonal para el revelado fue evaluado con muestras de pacientes, ofreciendo 100% de coincidencia diagnóstica con el UME policlonal y buenas repetibilidad y reproducibilidad

Ensayo diagnóstico para IgE humana por ultramicroELISA empleando anticuerpos monoclonales / Diagnostic assay for human IgE by ultramicroELISA using monoclonal antibodies

La cuantificación de las concentraciones séricas de la inmunoglobulina E (IgE), tiene gran importancia diagnóstica en las enfermedades alérgicas. En Cuba existe, desde 1987, un programa nacional de diagnóstico de esta entidad, que emplea como elemento tecnológico fundamental un sistema ultramicroELISA (UME), tipo sandwich con anticuerpos policlonales, anti IgE. La introducción de anticuerpos monoclonales (AcM) en estos procedimientos puede proporcionar ventajas, especialmente lo que se refiere a especificidad, y producción de los reactivos. Nosotros hemos obtenido hibridomas secretores de AcM contra IgE, mediante la fusión del mieloma P3/x63.Ag8.653, con linfocitos esplénicos de ratones inmunizados con una preparación purificada de IgE humana monoclonal. Los 10 AcM obtenidos, parecen reconocer determinantes antigénicos alotípicos de la cadena * humana. El CP-IgE.1 (IgG2a) se estudió a mayor profundidad con anticuerpo de captura y revelado, en UME. Se demostró que este AcM puede sustituir efectivamente al anticuerpo policlonal de recubrimiento y puede ser empleado también como segundo anticuerpo en esta técnica. Se evaluó el funcionamiento de un UME con el CB-IgE. En la fase sólida y un anticuerpo policlonal de revelado en la cuantificación de IgE a partir de muestras de pacientes, obteniéndose 100 % de coincidencia diagnóstica con el UME policlonal, y repetibilidad y reproducibilidad adecuadas

Anticuerpos monoclonales que reconocen los factores de crecimiento epidérmico humano y murino / Monoclonal antibodies that recognize human and murine epidermal growth factor

La utilidad potencial del factor de crecimiento epidérmico humano (EGFh) como medicamento para la cicatrización de heridas, posible agente antitumoral y para otras aplicaciones, ha conducido a que su estudio, producción y aplicación se hayan incrementado notablemente en los últimos años. Nosotros generamos ocho hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales (AcM) contra el EGFh, e igualmente desarrollamos un radioinmunoensayo en fase sólida (RIA-FS) y un enzima-inmunoensayo (ELISA) para la cuantificación del EGFh en muestras de diverso origen, empleando en estos, dos de los AcM obtenidos (CB-EGF.1 y CB-EGF.2). La sensibilidad de estos ensayos fue de 2 ng/ml y 6 ng/ml, respectivamente. En este trabajo, además, se presentan resultados acerca del reconocimiento del EGF de ratón por dichos AcM, así como la obtención de fragmentos F(ab)'2 activos a partir de uno de ellos