Optimización de la técnica de PCR reversa para la detección del VIH en plasma de pacientes infectados / Optimization of the reverse PCR technique for HIV detection in plasma of infected patients

Aunque la técnica convencional para el diagnóstico del VIH es la PCR a partir de ADN proviral, la técnica RT-PCR cualitativa podría constituir una herramienta de apoyo en el diagnóstico del VIH en pacientes infectados, ya que una de sus principales ventajas es el uso de muestras de plasma, en lugar de sangre total, lo cual facilitaría su transporte entre las distintas regiones del país. En este estudio se planteó como objetivo evaluar las condiciones óptimas, en cuanto al uso de cebadores y enzima transcriptasa reversa, para síntesis de ADN complementario (RT-PCR) de la región de envoltura del VIH, a partir de muestras de plasma de pacientes VIH positivos. Los resultados obtenidos en este trabajo sugieren que la utilización de cebadores azarosos, en una mezcla de reacción con la enzima RT “SuperScript” TM (200 U/mL), permite maximizar la eficiencia de amplificación del gen de la envoltura de VIH-1, en comparación con cebadores específicos. Esto permite ofrecer una alternativa metodológica a partir de muestras de plasma, para la detección del VIH en aquellas personas que por diversas razones no pueden trasladarse a la institución de referencia.

Even though PCR is the conventional technique for HIV diagnosis in proviral DNA, the qualitative RT-PCR technique could constitute a support tool for HIV diagnosis in infected patients since one of its main advantages is the use of plasma samples instead of whole blood, which facilitates its transportation from the various regions of the country. The main objective of this study was the evaluation of the optimal conditions regarding use of primers and reverse transcriptase enzyme, for the synthesis of complementary DNA (RT-PCR) of the HIV sheath in plasma samples of HIV positive patients. The results obtained in this study suggest that the use of random primers, in a reactive mixture with the RT “SuperScript” enzyme TM (200 U/mL), allows maximizing the amplifying efficiency of the HIV-1 sheath gene, as compared with specific primers. This offers a methodological alternative using plasma samples for HIV detection in those persons who due to various reasons cannot travel to the reference institution.

Virus de la hepatitis E: Características biológicas y epidemiológicas / Hepatitis E virus: Biological and epidemiological characteristics

El virus de la hepatitis E (VHE) es un virus ARN de transmisión entérica, asociado a zoonosis y a una alta tasa de hepatitis fulminante en mujeres embarazadas. En este trabajo se describen las principales características moleculares y epidemiológicas del VHE. Ha sido clasificado recientemente como el único miembro del género Hepevirus de la nueva familia Hepeviridae. Actualmente, todas las cepas que infectan al hombre se agrupan en 4 de los 5 genotipos identificados para el VHE. Se ha descrito una alta tasa de infección por VHE entre adultos jóvenes y en edad productiva. En el curso de la infección, los anticuerpos IgM anti-VHE evidencian infección aguda, mientras que los anticuerpos IgG anti-VHE constituyen el marcador epidemiológico de infección pasada por el virus. A pesar de su amplia distribución mundial y su predominio en países en desarrollo, el VHE ha sido uno de los virus de hepatitis menos estudiados a nivel global. Se desconoce el verdadero impacto de esta infección en Latinoamérica dada la escasez de estuches de inmunodiagnóstico comercialmente disponibles para su detección, limitando el uso de estas metodologías a investigaciones epidemiológicas aisladas. Se requieren estudios futuros para optimizar los inmunoensayos serológicos existentes, facilitando su incorporación a la rutina del laboratorio clínico.

Hepatitis E virus (HEV) is an RNA virus enterically-transmitted, associated to zoonosis, and a high rate of fulminating hepatitis en pregnant women. This paper describes the main molecular and epidemiological characteristics of HEV. It has been recently classified as the only member of the Hepevirus genus of the new Hepeviridae family. At present, all strains which infect humans are grouped in 4 of the 5 genotypes identified for HEV. A high rate of HEV infection has been described among young adults in productive ages. During the course of the infection anti-HEV IgM antibodies signify an acute infection, while anti-HEV IgG antibodies constitute an epidemiological marker of the virus transmitted infection. In spite of its worldwide distribution and its predominance in developing countries, HEV has been one of the least studies hepatitis viruses at a global level. The true impact of this disease in Latin America is unknown due to the scarcity of immunodiagnostic diagnostic kits commercially available for its detection, limiting the use of these methodologies to isolated epidemiological investigations. Future studies are required for optimizing the existing serologic immunoassays, facilitating their incorporation to routine clinical laboratory tests.

Biología molecular del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) / Molecular biology of the human immunodeficiency virus (HIV)

Veinte años después de su descubrimiento, el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) se ha convertido en la pandemia más importante de las £ltimas décadas. El SIDA es causado por diferentes virus de inmunodeficiencia humanos, VIH-1 y VIH-2, pertenecientes a la familia Retroviridae. La particula viral consiste de una envoltura viral, denominadas gp 120 y gp41. La envoltura rodea a la nucleocápside, estructura constituida por una cubierta intermedia o matriz y una cápside interna que está en estrecha interacci¢n con el genoma viral representado por una molécula de ARN de doble cadena y polaridad positiva de longitud aproximada de 9.800 nucle¢tidos. Los genes del VIH se localizan en la regi¢n central del genoma integrado o provirus y codifica al menos nueve prote¡nas (estructurales, reguladoras y accesorias). El conocimiento del ciclo de vida del VIH provee las bases biol¢gicas para el control de la epidemia. Una de las caracter¡sticas principales del VIH es su rápida evolución, lo cual resulta en una diversidad genética considerable entre diferentes aislados del mundo entero. Existen 3 grupos principales, 9 subditos y formas recombinantes descritas para el VIH-1. La variabilidad genética de este agente viral y en consecuencia, cualquier variaci¢n fenotípica influye sobre la patogénesis de la infecci¢n y el control de la enfermedad. Finalmente, se discuten las implicaciones de la diversidad génetica observada en el VIH sobre el desarrollo de vacunas y terapias antiretrovirales eficaces contra este gente viral

Infección oculta por el virus de la hepatitis B (VHB) / Occult infection by the hepatitis B virus (HBV)

La infeción oculta por el virus de hepatitis B (VHB) se caracteriza por la presencia de actividad de replicación viral en ausencia de marcadores serológicos usuales: las infecciones residuales se producen en ausencia de superficie VHB (Ags HB) y en presencia de anticuepos anti-HBc y las infecciones "silentes" se caracterizan por la ausencia de marcadores serológicos de la hepatitis B. La presencia de variantes virales del VHB pudieran ser la causa de la baja actividad de replicación viral y por ende el desarrollo de estas infecciones ocultas. Es diagnóstico de hepatitis en tales individuos se hace difícil, dado que los marcadores virales tanto en suero como en hígado, con frecuencia se encuentran por debajo del límite de detección de los inmunoensayos corrientemente utilizados. Se ha sugerido que el uso de técnicas altamente sensibles de amplificación de los ácidos nucleicos (NAT) pudiera ser útil en la determinación de estas infecciones. El estudio sobre los mecanismos de generación de las infecciones ocultas contribuye a una mejor comprensíón sobre la realidad epidemiológica de la hepatitis B