ABSTRACT
El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad de desarrollo in vitro de ovocitos bovinos de vacas mestizas B. taurus y B. indicus. Los ovocitos fueron recuperados de ovarios de hembras bovinas provenientes de un matadero comercial. Para la obtención de los complejos cumulus-ovocitos (CCO) se realizó la técnica de slicing, seleccionando los ovocitos que tenían al menos una capa de células del cumulus y un citoplasma homogéneo. Los ovocitos seleccionados fueron madurados y fecundados in vitro (MIV-FIV). Se utilizó semen de un toro Brahman puro (B. indicus). Para la evaluación de la MIV y FIV todos los ovocitos se fijaron por al menos 24 h a 4°C en solución metanol-ácido acético (3:1) y teñidos con aceto-orceína al 1,1%. La tasa de maduración de ovocitos de vacas con predominancia fenotípica B. indicus fue del 66,17% mientras que las vacas con predominancia fenotípica B. taurus alcanzaron un 50,94% (P>0,05). En cuanto a la tasa de fecundación se obtuvo un 14,28 y 35,72% de ovocitos penetrados normalmente y anormales, respectivamente, para el grupo de ovocitos con predominancia fenotípica B. indicus. Mientras que para vacas con predominancia fenotípica B. taurus, un 10,22% correspondió a ovocitos penetrados normales y 19,31% de ovocitos penetrados anormales, sin encontrar diferencias estadísticamente significativas en ambos grupos. Los presentes resultados, tanto para la progresión meiótica como para las tasas de fecundación, indican que los ovocitos de vacas mestizas con predominancia fenotípica B. indicus son más competentes en las primeras etapas de desarrollo in vitro que los ovocitos de vacas mestizas con predominancia fenotípica B. taurus.
The aim of this study was to evaluate the in vitro development capacity of bovine oocytes from crossbred B. taurus and B. indicus cows. Oocytes from bovine cows were collected from commercial slaughterhouse. The cumulus-oocyte complex (COC) ovaries were obtained by Slicing technique, selecting those oocytes that had 2 to 3 layers of cumulus cells and homogeneous cytoplasm. After selection oocytes proceed with maturation (IVM) and fertilization in vitro (IVF). It used semen from a pure Brahman bull (B. indicus). For the assessment of IVM as for IVF oocytes were fixed for about 24 hours at 4°C in methanol-acetic acid (3:1) solution and stained with 1.1% aceto-orcein. The maturation rate of oocytes from cows with B. indicus phenotypic predominance was 66.17%, whereas cows with B. taurus phenotypic predominance 50.94% (P>0.05). Fertilization rate obtained in B. indicus phenotypic predominance group was 14.28% of oocytes normal penetrated and abnormal penetrated 35.72%, for cows with a phenotypic predominance B. taurus oocytes normal penetrated were 10.22% and 19.31% of abnormal oocytes penetrated. In conclusion, the present results indicate that oocytes from cows with phenotypic predominance B. indicus are more competent in the early stages of development in vitro than oocytes from cows with phenotypic predominance B. taurus.
ABSTRACT
utilizada como herramienta para el estudio de diversos aspectos relacionados con la maduración de ovocitos, la fecundación y el desarrollo temprano del embrión en condiciones in vitro. La L-cisteína es un sustrato externo requerido para la síntesis del glutation en la maduración de ovocitos bovinos. Con el objetivo de evaluar el efecto de la suplementación con L-cisteína sobre la maduración in vitro de ovocitos bovinos, se llevó a cabo un experimento con ovarios obtenidos de vacas mestizas beneficiadas en una sala de matanza local. Se utilizaron tres tratamientos con diferentes concentraciones T1: 0 mM; T2: 0,1 mM y T3: 1,0 mM. Aproximadamente 400 Complejos Cumulus Ovocito (COCs) por tratamiento se maduraron en pozos de 500 µL del medio de maduración (TCM-199), distribuyéndose 50 COC por pozo en una incubadora a 5% de CO2, a 38,5°C y con humedad saturada. Los datos se analizaron por medio de un análisis de varianza (ANAVAR). No se observaron diferencias significativas entre los tratamientos en el porcentaje de ovocitos que llegaron a Metafase II (MII, T1: 72,77%, T2: 67,47% y T3: 70,43%). Los resultados indican que la suplementación con L-cisteína durante la maduración no ejerció un efecto sobre el porcentaje de ovocitos bovinos que alcanzaron el estado de MII, sin embargo se deben realizar otras investigaciones para determinar el efecto ulterior que tiene la L-cisteína adicionada en la maduración sobre la fecundación y el desarrollo embrionario in vitro.
In vitro fertilization (IVF) is now a routine technique in a number of biotechnology research laboratories worldwide. IVF is used as a tool for the study of various aspects related to oocytes maturation, fertilization and early embryo development. L-cysteine constitutes an external substrate required for synthesis of glutathione in the maturation of cattle oocytes. In order to study the effect of L-cysteine supplementation on in vitro maturation of cattle oocytes, ovaries were obtained from crossbred cows culled at a local slaughterhouse. Three different in vitro maturation treatments were utilized. Each treatment had a different concentrations of L-cysteine: T1: 0 mM, T2: 0.1 mM and T3: 1.0 mM. Approximately 400 Cumulus Oocyte Complexes (COCs) were matured in wells of 500 ìL of maturation medium (TCM-199), with 5% CO2 at 38.5°C and saturated relative humidity. Data were analyzed using analysis of variance (ANOVA). There were no significant differences between treatments in term of oocytes that arrived to Metafase II (MII, T1: 72.77%, T2: 67.47% and T3: 70.43%). Results indicate that supplementation with L-cysteine during maturation did not possitively affect the percentage of bovine oocytes that reached the M II state. Nonetheless further research should be carried out to determine the effect of L-cysteine supplementation during maturation, on fertilization and on embryonic development in vitro.
ABSTRACT
The objective of this study was to improve sexed bovine embryo production with sorted sperm in chemically defined conditions by supplementing the IVF medium with db-cAMP. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were matured for 18 h in supplemented TCM-199 and fertilized with X- or Y-bearing sperm in the presence of heparin (10 µg/ml), db-cAMP (1 µM) or no treatment (control). Presumptive zygotes were cultured 54 h in g-SOF. From 72 to 144 h post- insemination (hpi) embryos were cultured in c-SOF+NEA and from 144 to 192 hpi embryos were placed in maturation medium without hormones. No significant differences were found among treatments for Y-sperm when compared to controls. A significant (P<0.01) improvement in the proportion of cleaved oocytes was found for X-sperm treated with db-cAMP (70.83%) compared to the Y-sperm inseminated oocytes treated wit db-cAMP (46.37%). Treatment with db-cAMP enabled a better (P<0.05) blastocyst formation rate (19.29%) compared to control (8.47%) and heparin (10.44%). Treatment of db-cAMP significantly increased the rate of blastocysts in X-sperm inseminated oocytes (30.77%) compared to Y-sperm inseminated oocytes treated the same (9.68%) and compared to X- and Y-sperm treated with heparin (5.88% and 15.15%, respectively) and not treated (9.68% and 7.14%, respectively, P<0.05). These results suggest that db-cAMP may prove to be an effective treatment of sorted sperm for in vitro production of female bovine embryos under chemically defined conditions.
El objetivo de este estudio fue mejorar la producción de embriones bovinos con semen sexado bajo condiciones químicamente definidas mediante la suplementación del medio de fecundación con db-cAMP. Los complejos ovocitos cumulus (COCs) fueron madurados por 18 horas en TCM-199 suplementado y fueron fecundados con espermatozoides X o Y en presencia de heparina (10 g/ml), db-cAMP (1 µM) o sin tratamiento alguno (control). Los presuntivos cigotos fueron cultivados por 54 horas en g-SOF. Desde las 72 a las 144 horas post-inseminación (hpi) los embriones se cultivaron en c-SOF+NEA y desde 144 a 192 hpi fueron colocados en medio de maduración pero sin hormonas. No se observaron diferencias entre tratamientos para los oocitos fecundados con espermatozoides Y cuando se compararon a los controles. Se observó una mejora significativa (P<0,01) en la proporción de ovocitos que se dividieron cuando fueron fecundados con espermatozoides X tratados con db-cAMP (70,83%) en comparación con los fecundados con espermatozoides Y tratados con db-cAMP (46,37%). El tratamiento con db-cAMP fue capaz de inducir una mayor (P<0,05) tasa de formación de blastocistos (19.29%) en comparación a los tratamientos control (8,47%) y heparina (10,44%). El tratamiento con db-cAMP incrementó (P<0,05) la tasa de embriones de cuatro células alcanzando el estadio de blastocisto cuando los oocitos fueron fecundados con espermatozoides X (30,77%) en comparación a cuando la fecundación se realizó con espermatozoides Y (9,68%) y en comparación a cuando se llevó a cabo con espermatozoides X o Y en presencia de heparina (5,88% y 15,15%, respectivamente) o en el tratamiento control (9,68% y 7,14%, respectivamente). Estos resultados sugieren, que el db-cAMP puede ser un tratamiento efectivo para el semen sexado, a fin de incrementar la producción in vitro de embriones bovinos hembra bajo condiciones químicamente definidas.
ABSTRACT
En el presente estudio se comparó el desempeño de 56 novillas doble propósito que resultaron preñadas luego de la transferencia directa de embriones producidos in vitro cultivados en un medio suplementado con suero o en uno químicamente definido. No se observaron diferencias en las tasas de aborto (30,43% vs 24,24%), distocias (52,17% vs 51,52%) y parto normal (17,39% vs 24,24%) entre las novillas que recibieron embriones cultivados en el medio suplemento con suero y las que recibieron embriones cultivados en el medio químicamente definido. El sexo de la cría afectó significativamente el porcentaje de distocias, 83,33% para machos y 50% para hembras, (P<0,05). El peso al nacimiento de los becerros tampoco se vio afectado (p>0,05) por la suplementación sérica durante el cultivo (46,86 ± 2,04 kg, para los becerros derivados de los embriones cultivados en el medio suplementado con suero y 46,28 ± 1,42 kg, para los derivados de los embriones cultivados en el medio químicamente definido) ni por el sexo de la cría (machos 47,20 ± 1,50 kg y hembras, 45,45 ± 1,84 kg). El peso de los becerros que nacieron muertos o que murieron luego del nacimiento fue significativamente (P< 0,05) mayor (51,92 ± 1,76 kg) al de los becerros que sobrevivieron (43,88 ± 1,22 kg). La sobrevivencia perinatal no se vió afectada ni la suplementación sérica durante el cultivo embrionario, ni por el sexo de los becerros o el nacimiento de un parto distócico. En conclusión, la presencia de suero en el medio de cultivo no afectó el desempeño de las novillas doble propósito que resultaron preñadas luego de la transferencia de embriones producidos in vitro. En este estudio se observó la presencia de becerros con síndrome del recién nacido gigante evidenciado por un alto peso al nacimiento y una alta tasa de abortos y distocias.
Subject(s)
Animals , Cattle , Embryonic Structures , In Vitro Techniques , Serum , Bernard-Soulier Syndrome/embryology , Bernard-Soulier Syndrome/veterinary , Venezuela , Veterinary MedicineABSTRACT
El objetivo de este experimento fue investigar el efecto del Factor de Crecimiento Epidermal (EGF), durante la maduración in vitro (MIV) de oocitos bovinos, sobre el desarrollo embrionario in vitro. Los oocitos fueron obtenidos por aspiración de ovarios provenientes de vacas de matadero. Se seleccionaron 163 complejos oocitos-cumulus (COC's) con tres o más capas de células de la granulosa y fueron incubados durante 24 horas en medios de maduración ovocitaria (OMN) químicamente definidos, con los siguientes tratamientos: 1) OMM modificado (T1); 2) OMM modificado suplementado con 10 ng/ml de EGF (T2); 3) OMM modificado suplementado con suero fetal bovino al 10 por ciento (T3). Luego de la MIV, en cada medio, los oocitos fueron incubados con espermatozoides (2 x 10 elevado a la 6/ml), durante 18 horas. Los oocitos fecundados fueron denudados y cultivados in vitro hasta el estadio de blastocitos. Los oocitos madurados en T2 y T3, presentaron una tasa de división similar, pero significativamente mayor que los madurados en T1 (P<0,05). La tasa de desarrollo hasta el estadio de blastocisto fue similar en los oocitos madurados en T2 y T3. Los oocistos madurados en T3 mostraron una mayor tasa de desarrollo hasta blastocisto en comparación con T1 (P<0,01). EGF en medios químicamente definidos induce una tasa de división y desarrollo hasta blastocisto similar a la obtenida con suero fetal bovino al 10 por ciento, representando una alternativa en la maduración de oocitos para la producción in vitro de embriones bovinos