"Disfibrinogenemia Jujuy", alteración asociada a trastornos hemorrágicos / "Dysfibrinogenemia Jujuy", associated to bleeding disorders / "Disfibrinogenemia Jujuy", alteração associada a distúrbios hemorrágicos

El objetivo del presente trabajo fue estudiar a una joven paciente con manifestaciones hemorrágicas, caracterizar su fibrina plasmática e identificar la posible alteración molecular del fibrinógeno de la paciente y sus familiares directos. Se diagnosticó una disfibrinogenemia en la paciente, su madre y el medio-hermano, ambos asintomáticos. En estos individuos, la formación y lisis de la fibrina plasmática difirieron de los controles. La fase lag prolongada indicó la liberación lenta y defectuosa de los fibrinopéptidos; la pendiente menor que la del control sugirió una polimerización dificultada. La DOMax inferior mostró una fibrina compuesta por fibras delgadas. La fibrinolisis inducida por estreptoquinasa resultó más rápida que la correspondiente control. La secuenciación del ADN reveló una deleción homocigota que condujo a la ausencia de la glicina 14 de la cadena Aa del fibrinógeno (AaGly14del según nomenclatura de http://www.geht.org/databaseang/fibrinogen). La madre y el medio hermano resultaron heterocigotas para la misma mutación. Esta alteración no descripta previamente, que se ha denominado fibrinógeno Jujuy, podría no interaccionar correctamente con el sitio activo de la trombina, provocando que los fibrinopéptidos se hidrolicen y liberen lentamente, originando fibras de fibrina más delgadas y degradables que las del control. Este mecanismo explicaría el sangrado moderado de la paciente.

The aim of this work was to study a young female with moderate bleeding symptoms, to characterize the plasma fibrin and to identify the possible molecular alteration in the fibrinogen of the patient and her family. A dysfibrinogenemia was diagnosed in the patient, the mother and the half-brother, both the latter asymptomatic. Kinetic parameters obtained from fibrin formation and lysis assays of the patient’s plasma samples were significantly different compared to the ones obtained with control plasma. A prolonged lag phase indicated slow and defective fibrinopeptide releases, whereas a minor slope suggested an impaired fibrin assembly. A lower ODMax revealed a fibrin network composed of thinner fibers. Fibrinolysis induced by streptokinase resulted faster than control. DNA sequencing showed a homozygous deletion leading to AaGly14del (according to http://www.geht.org/databaseang/fibrinogen). The mother and the half-brother resulted heterozygous for the same mutation. This previously undescribed alteration was named fibrinogen Jujuy. The mutate fibrinogen might not be correctly fixed to the active site of thrombin resulting in slow cleavage and release of fibrinopeptides, rendering thinner fibers, more susceptible to lysis than control. This mechanism may explain the moderate bleeding symptoms of the patient.

O objetivo do presente trabalho foi estudar uma jovem paciente com manifestações hemorrágicas, caracterizar sua fibrina plasmática e identificar a possível alteração molecular do fibrinogênio da paciente e seus familiares diretos. Foi diagnosticada uma disfibrinogenemia na paciente, sua mãe e o meio-irmão, ambos assintomáticos. Nestes indivíduos, a formação e lise da fibrina plasmática diferiram dos controles. A fase lag prolongada indicou a liberação lenta e defeituosa dos fibrinopeptídeos; a pendente menor que a do controle sugeriu uma polimerização dificultada. A DOMax inferior mostrou uma fibrina composta por fibras delgadas. A fibrinólise induzida por estreptoquinase resultou mais rápida que a correspondente controle. A sequenciação do DNA revelou uma deleção homozigótica que conduziu à ausência da glicina 14 da cadeia Aa do fibrinogênio (AaGly14del conforme nomenclatura de http://www.geht.org/databaseang/fibrinogen). A mãe e o meio irmão resultaram heterozigotos para a mesma mutação. Esta alteração não descrita previamente, que denominamos fibrinogênio Jujuy, poderia não interagir corretamente com o sítio ativo da trombina, provocando que os fibrinopeptídeos se hidrolisem e liberem lentamente, originando fibras de fibrina mais finas e degradáveis que as do controle. Este mecanismo explicaria o sangramento moderado da paciente.

Influencia de las variables preanalíticas en la determinación de proteína S / Influence of preanalytical variables in S protein determination

La proteína S (PS) regula el sistema de coagulación mostrando actividad de cofactor de la Proteína C activada (PCa) con la cual forma un complejo equimolecular. En presencia de iones calcio este complejo inactiva por proteólisis los factores V y VIII activados por trombina. La proteína S plasmática circula 40% libre (fracción que presenta actividad de cofactor de la PCa) y 60% unida al C4-BP (proteína ligante de la fracción C4 del complemento). El objetivo fue comparar el dosaje de PS realizado por método coagulable e inmunoturbidimétrico e investigar cómo las variables preanalíticas afectan los niveles de PS determinados. Se obtuvieron los siguientes resultados: método coagulable: CV intra ensayo: (n=20): 4%, CV interensayo (n=20, 3 días): 3,4%. Método inmunoturbidimétrico: CV intraensayo (n=20): 3,7%.CV Inter. ensayo (n=20,3 días): 4,5%. Existe buena correlación (R2=0,94) entre ambos métodos, cuando la calibración por el método coagulable se realiza en la misma corrida analítica que las muestras. Cuando se realizó el estudio de Bland y Altman los dos métodos mostraron ser comparables en todos los niveles de PS estudiados. No se observaron diferencias significativas entre las muestras determinadas frescas y conservadas a -20 y -80 °C descongeladas solo una vez.

Protein S has an essential anticoagulant function acting as activated Protein C cofactor and forming an equimolecular complex with it. In the presence of calcium this complex regulates the coagulation process inactivating thrombin activated factors V and VIII by proteolysis. In plasma there are two different forms: a) free Protein S which acts as the cofactor of activated protein C (representing about 40% of total Protein S) and b) C4-BP(C4 binding protein) bound protein S which exhibits no activity as cofactor of activated Protein C (representing about 60% of total PS). The objetive was to compare the PS dosage determination by two methods: immunoturbidimetric and clotting, and to investigate how pre-analytical variables affect the results. The following results were obtained: Clotting method: CV intra assay: (n=20): 4%, CV interassay (n=20, 3 days): 3.4%; immunoturbidimetric method CV intra assay (n=20): 3.7%: CV inter assay (n=20.3 days): 4.5%. There is a good correlation (R2 = 0.94) between both methods; when the clotting method is calibrated in batch with the samples. There is significant difference between fresh and frozen ( -20 °C and -80 °C) samples when the latter have been desfrozen only once.

Comparación de parámetros de actividad antitrombótica entre dos productos de enoxaparina / Antithrombotic activity between two products of enoxaparine. Comparison of parameters

Aún después de más de 20 años del empleo de heparinas de bajo peso molecular (HBPM), existe considerable controversia acerca de si estos productos son intercambiables. Nuestras condiciones económicas suelen colocar al profesional encargado de la indicación en la incertidumbre entre su particular preferencia -avalada primariamente por documentación bibliográfica y la disponibilidad del producto donde se desempeña. Por las características del mercado farmacéutico de la Argentina, puede darse la situación de no contar con ninguna HBPM, tener la opción entre varias HBPM o inclusive entre dos fuentes diferentes de una misma HBPM, con ambas ya aprobadas por el organismo fiscalizador competente. Con respecto a esta última situación, dado el distinto origen del medicamento, la escasez de estudios clínicos con el producto de más reciente introducción en nuestro país y la imposibilidad de afrontar un estudio comparativo de efectividad con puntos finales clínicos por el elevado número de individuos necesarios, creímos de utilidad comparar entre ambos algunos parámetros del efecto antitrombótico. Para ello, en 40 voluntarios se determinó la acción sobre la heparinemia, el aPTT y el Tiempo de Trombina, a las dos horas de una dosis subcutánea de 40 mg de enoxaparina de dos orígenes diferentes. Hubo una semana de intervalo entre ambas aplicaciones. Con los dos productos se obtuvo similar prolongación de las pruebas realizadas, si bien para demostrar igual efecto antitrombótico, sería conveniente una comparación directa con puntos finales clínicos relevantes

Es confiable determinar el fibrinógeno como derivado del tiempo de protrombina? / Is fibrinogen determination by prothrombine time derived method confidant?

Los niveles elevados de fibrógeno (Fbg) plasmático son considerados como un factor de riesgo para eventos trombóticos y enfermedad cardiovascular. El Fbg se cuantifica habitualmente utilizando el método coagulable de Clauss y el de Fbg derivado del tiempo de protrombina. A pesar de ser éste último, simple y económico, ha sido cuestionado en distintos estudios porque sobrestimaría los valores de Fbg. Para evaluar la confiabilidad de éste método, se lo comparó respecto al valor obtenido por el método de Clauss. Se evaluó, además, el efecto de la heparina (0,2 y 0,6 UI/ml) sobre las determinaciones por el método de Fbg derivado. La equivalencia entre ambos métodos se estableció por el test de Bland y Altman y el test de la Mediana. El efecto de la heparina se evaluó por regresión lineal y correlación de Pearson. Se puede concluir que los valores de Fbg por el método de Fbg derivado dentro de los rangos normales correlacionan con los obtenidos con el método de Clauss. Cuando éstos valores superan los 400 mg/dl debería determinarse el Fbg por el método de Clauss u otra metodología. Los valores obtenidos mediante el método de Fbg derivado no se modifican en muestras que contienen heparina en el rango terapéutico

Homocisteinemia de la población de Buenos Aires: una realidad alejada de la idealidad / Homocysteinemia in Buenos Aires: the reallity outweigh the ideal refernce value

Numerosas evidencias científicas indican que una concentración elevada de homocisteína plasmática (hiperhomocisteinemia) sería un factor de riesgo independiente para las enfermedades vasculares oclusivas, tanto o más importante que el colesterol, el tabaquismo o la hipertensión. Surge entonces la necesidad de conocer y determinar los niveles normales de homocisteinemia. En nuestro estudio se analizaron las muestras de 151 individuos (3 a 59 años) aparentemente sanos, obteniéndose un valor de homocisteina total = 12.1 +- 3.6 umol/l (media +- DE). Además se evaluaron los datos registrados para dos grupos etáreos extremos, obteniéndose 6.4 +- 2.6 umol (neonatos) y 13.6 +- 5.9 umol/l (> 60 años). Se encontró que la homocisteinemia se incrementa con la edad, aún en el grupo de 3 a 59 años, y el valor medio es significativamente mayor en los hombres que en las mu

The C677T thermolabile variant of methylene tetrahydrofolate reductase on homocysteine, folate and vitamin B12 in a hemodialysis center

Homocysteine is a risk factor for cardiovascular disease. Mutations in a key enzyme in homocysteine metabolism, methylenetetrahydrofolate reductase, may contribute to hyperhomocysteinemia and alter folate and cobalamin levels. After starting hemodialysis, 10 mg oral folate daily and 500 micrograms intravenous methylcobalamin once weekly were prescribed to 27 hemodialysis patients (time on hemodialysis > or = 12 months) and two groups were defined: Group A normal; Group B heterozygous. Initial, third and twelfth month measurements of homocysteine, serum folate and vitamin B12 levels were collected and analyzed. Heterozygous state of methylenetetrahydrofolate reductase prevalence was 48

. Hyperhomocysteinemia was present in both groups. Cobalamin final levels were significantly lower in Group B compared to Group A. Homocysteine, serum folate and cobalamin levels at third and twelfth month were significantly different from baseline levels but non-different between them in both groups. In Group B, vitamin B12 at third month was significantly higher than initial, but final measurements were not different from baseline determinations. In conclusion, the heterozygous prevalence of the enzyme in hemodialysis patients is similar to that reported in the general population; hyperhomocysteinemia is frequent in hemodialysis patients and final levels in heterozygous patients are significantly higher than in normal patients. Cobalamin levels are lower in the heterozygous group. After one year of treatment, homocysteine tends to increase, suggesting a secondary resistance phenomenon to vitamin supplementation in heterozygous patients.

Cofactor II de la heparina (HCII), un inhibidor de trombina cuyo rol fisiologico no esta completamente esclarecido / Heparin cofactor II, a thrombin inhibitor with a still unclarified physiologic role

El Cofactor II de la Heparina (HCII) es una proteína perteneciente al sistema de coagulación que inhibe específicamente trombina, processo que es potenciado por acción de los glicosaminoglicanos dermatán sulfato y heparina. Hasta el momento las deficiencias congénitas de HCII encontradas en forma aislada no están asociadas con eventos trombóticos, sí desarollan eventos trombóticos cuando están asociadas a otros factores predisponentes. Se observó disminución en los niveles de HCII en hepatopatías, coagulación intravascular diseminada, en anemia drepanocítica, encontrándose niveles elevados en embarazo a término y por el uso de contraceptivos orales. En el laboratorio realizamos el dosaje del HCII en la población normal de la ciudad de Buenos Aires, en diversas patologías como sepsis, quemados , anticoagulados con dicumarínicos y con heparina, diabéticos, hiperhomocisteinemia, observándose valores disminuidos principalmente en sepsis y pacientes diabéticos. El HCII es una glicoproteína que participa en la inhibición de trombina pero cuyo rol fisiológico no está completamente esclarecido. Es probable que el HCII inhiba trombina en el espacio extravascular, y está relacionado con la regulación de procesos inflamatorios y de reparación tisular.

Cofactor II de la heparina, valores de referencia, consumo en presencia de distintos glicosamoniaglicanos / Cofactor II, reference values consumption in the presence of different glycosaminoglycans

El Cofactor II de la Heparina (HCII) es una glicoproteína plasmática que inhibe rápidamente Trombina, en presencia de Glicosaminoaglicanos (GAGS) como Dermatán Sulfato (DS), Dextrán Sulfato (DX) y altas concentraciones de heparina. El nivel de actividad de HCII está marcadamente disminuido en pacientes con daño hepático severo, coagulación intravascular diseminada y en complicaciones obstétricas, siendo normales en la mayoría de pacientes con trombosis venosa. En este trabajo, se determinaron los valores de referencia para la actividad y antigenicidad de HCII para la población normal de Buenos Aires (Argentina). Los valores obtenidos: 70-130 por ciento actividad y 75-11- por ciento antigenicidad. Se midió la actividad de HCII en suero, siendo ésta entre un 20 a 40 por ciento menor que la del plasma. Se estudió también el consumo (CON) de HCII cuando se dejó coagular in vitro, sangre de individuos normales, en ausencia y presencia de distintas concentraciones de DS, DX y Heparina. El CON de HCII aumenta significativamente (p < 10-4) en presencia de DS, este incremento es aún mayor en presencia de DX, mientras que Heparina en las concentraciones utilizadas no modifica significativamente el CON de HCII. De lo cual se puede concluir, que si bien el DX es el mejor potenciador in vitro, su acción fisiológica sería escasa porque presenta una síntesis muy localizada, mientras que el DS desempeñaría un importante rol fisiológico como potenciador de HCII a nivel extravascular, ya que se sintetiza en los fibroblastos de la capa media de los vasos

Alfa-manosidasa: su acción sobre antitrombina III, fibrinógeno y plasminógeno / Alfa-manosidase: its action on antithrombin III, fibrinogen and plasminogen

La alfa-manosiadasa (alfa m) es una hidrolasa ácida que se encuentra en los gránulos azurófilos de los leucocitos polimorfonucleares y en menor concentración en los linfocitos. En leucemias agudas no linfoides sus niveles se hallan muy aumentados respecto de los controles normales (p < 0,001). En estos pacientes, se encuentran alteraciones funcionales e inmunológicas de algunas glicoproteínas del sistema plasmático de coagulación y de fibrinólisis, tales como la antitrombina III (AT III), el fibrinógeno o factor I de coagulación (I) y el plasminógeno (Plg). Debido a esto, investigamos la acción de alfa m sobre estas proteínas purificadas, a partir de plasma humano normal, utilizando métodos inmunoelectroforéticos y electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS. Se hallan modificaciones importantes en AT III y I y menores en Plg, similares a las obtenidas en los plasmas de los pacientes. Luego, parece que la acción de hidrolasas ácidas es posible in vivo bajo ciertas condiciones patológicas

Coagulación y fibrinólisis en neonatos normales / Coagulation and fibrinolysis in normal newborn infants

El objetivo de este trabajo es establecer el rango de normalidad de los parámetros de coagulación y fibrinólisis en el recién nacido normal, en nuestro país. Para ello se estudiaron 26 neonatos normales dentro de las 24 horas de vida y previo al tratamiento con vitamina K. El tiempo de protrombina y el tiempo de tromboplastina parcial con caolín estaban alterados en concordancia con los niveles de los factores XII, XI, X, IX, VII y II, el resto de los factores se hallaron dentro de los rangos de adultos normales. El tiempo de trombina estaba prolongado en todos los neonatos estudiados. Los productos de degradación de la fibrina y/o fibrinógeno eran elevados en el 42% de los casos. No hubo correlación entre estos dos parámetros (r = 0,178). Los niveles funcionales de antitrombina III y plasminógeno estaban disminuidos en todos los casos, mientras que el de alfa2-antiplasmina se halló ligeramente menor que el límite inferior normal. Niveles inmunológicos: el factor II, antitrombina III, plasminógeno y proteína C se hallaron disminuidos, mientras que el factor VIII relacionado al antígeno, la alfa1-antitripsina, la alfa2-macroglobulina y la fibronectina fueron normales. La inmunoelectroforesis cruzada del fibrinógeno y del factor II (éste con iones Ca++), se encontraron alteradas cuando se las comparó con los perfiles obtenidos con los plasmas de adultos normales. La alteración en la primera podría ser debida a variaciones en la proporción relativa de las tres fracciones normales del fibrinógeno plasmático