Coexpressão da proteína p53 e proteínas relacionadas a resistência a múltiplas drogas em diferentes tipos de leucemias: associação predominante nos estágios avançados da doença / Coexpression of p53 protein and multidrug resistance proteins in diferents types of leukemias: the predominant association in advanced status of disease

Um dos mais bem caracterizados mecanismos de resistência às drogas (MDR) nas leucemias são os mediados pela glicoproteína P (PGP) e proteína relacionada a múltiplas drogas (MRP). Diversos relatos têm demonstrado que a superexpressão dessas proteínas podem ser medianas pela superexpressão da proteína p53 inativada. O objetivo deste estudo foi investigar a co-expressão da p53, PGP e MRP em diferentes tipos de leucemias pela citometria de fluxo. Analisou-se amostras de 223 pacientes leucêmicos: 64 leucemia linfocítica crônica (LLC), 43 leucemia mielóide aguda (LMA), 44 leucemia linfoblástica aguda (LLA), e 72 leucemia mielóide crônica (LMC). A p53 foi observada em 23,6% na LMC, 21,8% na LLC, 44,2% na LMA e 29,4% na LLA. A Pgp em 46,4% na LMC, 47,5% LLC, 62,8% LMA e 20% LLA e a MRP em 31,9% na LMC, 40,6% na LLC, 44,2% na LMA e 40,1% na LLA. Observou-s co-expressão estatisticamente significativa entre p53 e Pgp na LMC (p=0,0066) e na LMA (p=0,0013) e p53 e MRP na LMC (p=0,000066), na LLC (p=0,0079) e LMA (0,00044), sendo observado predomínio dessas associações nos estágios avançados dessas doenças. Estes resultados demonstraram que as pesquisas desses marcadores possam servir como indicadores de evolução clínica e prognóstico para estas leucemias.

Uso simultâneo do método do polimorfismo conformacional de fita simples e da citometria de fluxo no aumento da eficácia da detecção de anormalidades do gene e da proteína p53 na leucemia mielóide crônica / Simultaneous use of the single strand conformation polymorphism method and flow cytometry for increasing the detection efficacy of abnormalities in the gene and p53 protein in chronic myeloid leukemia

A proteína p53 desempenha um importante papel no controle do ciclo de celular e reparo no DNA danificado. Em pacientes com leucemia de mielóide crônica (LMC) as mutações neste gene são encontradas em até 30% dos casos, especialmente na crise blástica (LMC-CB), sendo a detecção de alterações nesse gene ou proteína importantes na avaliação da evolução clínica da LMC. O sequenciamento de DNA é descrito como o método capaz de identificar as mutações do gene TP53, sendo, no entanto uma técnica complexa e dispendiosa, o que dificulta seu emprego em larga escala, sendo, atualmente, proposto a pesquisa da proteína p53 por métodos imunológicos e a técnica da reação em cadeia da polimerase seguida pelo estudo do polimorfismo conformacional de fita simples (PCR/SSCP). Métodos: Analisaram-se amostras de 72 pacientes com LMC: 54 de LMC em fase crônica (33 fase inicial ou LMC-FCi e 21 em fase crônica tardia ou LMC-FCtd), 7 em fase acelerada ou LMC-Ac e 11 em crise de blástica (LMC-CB). Foram realizados PCR para os exons 5-9 para posterior estudo pelo SSCP e a expressão de proteína de p53 foi feita por citometria de fluxo. Resultados: Na análise do PCR-SSCP, alterações de mobilidade eletroforética indicativa de mutação do gene de TP53 foi observado em 11/72 pacientes e a expressão da proteína p53 em 17/72 pacientes. O SSCP anormal foi visto em dois casos de LMC-FCi (exon 7), quatro LMC-FCt (um exon 7, um exon 8 e dois exons 8-9), um na LMC-FAc (exon 8) e quatro na LMC-CB (dois no exon 5, um no exon 6 e um no exon 8-9). Neste grupo, a proteína de p53 estava expressa sete casos (todas LMC-CB e AC e 2 LMC-FCtd), havendo correlação estatisticamente significativa entre os resultados dos dois métodos. Conclusões: Estes resultados sugerem que os dois métodos conjuntamente empregados podem aumentar a sensibilidade na detecção de anormalidades do gene e proteína p53 nos pacientes com LMC. A presença de SSCP anormal associado à expressão da proteína de p53 nas fases avançadas desta doença na maioria de casos, sugere que estes exames possam se empregados como indicadores de progressão para a LMC.

The p53 protein play an important role in the control of the cell cycle and DNA repair. In patients with chronic myeloid leukemia (CML) mutation in this gene were found in up to 30%, especially among those in blast crisis. At present, the only widely available technology that reliable detects and defines all mutations is DNA sequencing. However, the routine sequencing of the entire TP53 gene in all cases suggestive of mutation in the laboratorial routine is prohibitively costly, complex, and time consuming. To screen for TP53 abnormalities in CML patients, both p53 protein expression bay immunologic methods and single strand conformation polymorphism of polymerase chain reaction products (SSCP-PCR) is proposed. Methods: We report the results of an analysis of 72 samples from CML patients:54 in chronic phase :33 in initial phase (ICP-CML) and 21 in late phase (LCP-CML), 7 in accelerated phase (AP-CML) and 11in blast crisis (BC-CML). DNA structure for 5-9 exons of the TP53 gene were analyzed by PCR-SSCP and p53 protein expression by flow cytometry (CF). Results: By PCR-SSCP analysis, shifts in eletrophoretic mobility of the TP53 gene were detected in 11 out of CML patients and p53 protein expression in 17 out of 72 CML patients. The abnormal SSCP pattern were showed in two cases of ICP-CML (exon 7), four LCP-CML (one exon 7 and exon 8 and two exons 8-9), one in AP-CML (exon 8) and four in BC-CML (two in exon 5, one in exon 6 and one in exon 8-9). In this group, the p53 protein were express in 17 cases (all CB and AC of CML patients and 2 out of 5 LCP samples of CML patients) and the statistical analysis by qui-square test showed correlation between this two tests. Conclusions: These results suggest that the two methods together can increase the sensibility of screening for p53 abnormalities in CML patients. The presence of abnormal SSCP associated to the p53 protein expression in advanced phases of this disease in the most of cases, suggesting that these tests can be used as an indicator of progression of CML.

Detecção da proteína p53 em células leucêmicas por citometria de fluxo e imunocitoquímica / Detection of p53 protein in leukemic cells by flow cytometry and immunocytochemistry

Introdução: A proteína p53 desempenha uma função crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e na indução de apoptose em células geneticamente instáveis. A imunocitoquímica (ICQ) é um dos métodos preconizados para detecção e visualização dessa proteína no núcleo das células, sendo, no entanto um método demorado e trabalhoso o que dificulta a sua aplicação na rotina laboratorial. Atualmente, a citometria de fluxo (CF) também tem sido empregada na detecção da proteína p53 mutada ou estabilizada tendo a vantagem da praticidade e rapidez de execução. Objetivos e Metodologia: Comparar os resultados obtidos pela CF e ICQ na detecção da proteína p53 em células leucêmicas. Empregamos amostras de 10 pacientes com leucemia linfóide aguda (LLA) 10 com leucemia linfóide crônica (LLC), tendo sido também empregadas, células de linhagens leucêmicas humanas que serviram como controle de expressão positiva e negativa para ambos os métodos além de linfócitos de 40 doadores de sangue. A CF e ICQ foram realizadas após a marcação com anticorpo monoclonal anti-p53 por técnicas convencionais. Resultados: Observamos concordância nos resultados da maioria das amostras dos pacientes e em todas as amostras das linhagens elulares tendo sido, no entanto constatados níveis de expressão mais elevados nas análises obtidos pela CF quando comparados com a ICQ, refletindo em uma maior sensibilidade desse método. Conclusão: Apesar da ICQ ser considerada uma técnica adequada para a detecção da p53, nossos resultados indicam que a CF pode ser empregada satisfatoriamente na detecção dessa proteína em amostras de células leucêmicas.

Introduction: The p53 protein plays a crucial role in the cell cycle control, DNA damage repair and induction of apoptosis in genetically unstable cells. The immunocytochemistry (ICQ) is one of the most common methodology for detection and visualization of this protein in the nucleus of the cells, but this technique is time-consuming and difficult to apply in the clinical setting. Nowadays the assessment of p53 protein expression by flow cytometry (FC) assays are easier to perform and provide reliable estimates of the prolonged half-life of mutant or inactivated wild-type p53 protein. Objectives and Methodology: Compare the results of p53 detection by FC and ICQ in leukemic cells. We used samples from 10 patients with acute lymphoid leukemia (ALL), 10 with chronic lymphoid leukemia (CLL). To positive and negative controls of p53 expression in both methods we also employed leukemic cells from human leukemic cell lines an lymphocytes from 40 healthy donors were also used as control for negative labeling in FC. The FC and ICQ were performed after labeling with p53 monoclonal antibody by the usual protocol. Results: We verified an agreement in the results in the majority of the leukemic cells from patients and in all human leukemic cell line samples. Conclusion: Despite of ICQ is considered a good methodology for p53 detection in leukemic cells; our results show that FC can be satisfactorily used for detection of this protein in leukemic cells.

Detecção da proteína p53 em células leucêmicas por citometria de fluxo e Western blot / Detection of p53 protein in leukemic cells by flow cytometry and Western blot

Introdução: A proteína p53 desempenha uma função crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e naindução de apoptose em células geneticamente instáveis. O Western blot (WB) é o método preconizado paradetecção dessa proteína, no entanto é técnica demorada e trabalhosa. Atualmente, a citometria de fluxo (CF)também tem sido empregada na detecção da proteína p53 tendo a vantagem da praticidade. Objetivos e Metodologia:Comparar os resultados obtidos pela CF e WB na detecção da proteína p53 em células leucêmicas. Empregamosamostras de 3 pacientes com leucemia linfóide aguda (LLA), 5 com leucemia mielóide aguda (LMA), 6 comleucemia mielóide crônica (LMC) e 8 com leucemia linfóide crônica (LLC). Os controles positivos (5) e negativos(4), para os dois métodos, foram linhagens de células leucêmicas. Juntamente com o controle de marcação negativa,na técnica de CF, utilizamos linfócitos de 40 doadores de sangue. A análise pela CF foi realizada após a marcaçãocom anticorpo monoclonal anti-p53 e o WB por técnica convencional. Resultados e Conclusões: Observamosconcordância nos resultados em 82 por cento das amostras leucêmicas e em 100 por cento nas linhagens celulares. CF+/WB+foram observados em pacientes com evolução desfavorável tais como na LLC / Síndrome de Richter, LMC emcrise blástica e na maioria das LMA. Apesar do WB ser considerado um método padrão para a detecção da p53,nossos resultados indicam que a CF pode ser empregada satisfatoriamente na detecção dessa proteína em amostrasleucêmicas.

Efeito anti-tumoral dos bisfosfonatos: uma nova perspectiva terapêutica / Anti-tumor effect of bisphosphonates: a new therapeutic perpective

Os bisfosfonatos (BFs) são potentes inibidores da reabsorção óssea mediada por osteoclastos. Essas drogas sãoefetivas na redução do cálcio sérico em pacientes com hipercalcemia maligna, assim como também no tratamentoda dor óssea, osteoporose e metástases ósseas.Diversos estudos demonstram que os BFs possuem efeito em outras células além dos osteoclastos. Em célulastumorais podem agir induzindo a apoptose, inibindo a proliferação celular, inibindo a adesão e a invasividadecelular ou as metástases ósseas. O mecanismo molecular subjacente a estes efeitos parece ser a inibição de enzimasda via do mevalonato, o que leva a um impedimento da prenilação de GTPases como Ras e Rho, importantes paraa manutenção da integridade do citoesqueleto e tráfego de vesículas nas células.As evidências dos recentes estudos laboratoriais e clínicos sugerem que os BFs têm um papel importante comotratamento suplementar e possivelmente complementar na terapia do câncer. Um entendimento mais profundo e completo sobre o efeito anti-tumoral destas drogas pode sugerir possibilidades terapêuticas novas e seletivas.

Bisphosphonates are potent osteoclast-mediated bone reabsorption inhibitors. These drugs are effective in reducingserum calcium levels in patients with malignant hypercalcaemia, as well as in bone pain, osteoporosis and bonemetastasis treatment. Several studies have demonstrated that bisphosphonates are effective in other cell types than osteoclasts. In tumourcells they can act inducing apoptosis, inhibiting cell proliferation, inhibiting cell adhesion and invasion or bonemetastasis. The underlying molecular mechanism to these effects seems to be the inhibition of mevalonate pathwayenzymes, which leads to a prenilation impairment of GTPases like Ras and Rho, important in maintaining celularcytoskeleton integrity and vesicles trafficking. Evidences from recent laboratorial and clinical studies suggest that bisphosphonates have an important role as a supplemental, and possibly as complementary treatment in cancer therapy. A more complete understanding concerning the anti-tumor effect of these drugs may suggest new and selective therapeutical possibilities.

Ciclosporina A e seus análogos como reversores da resistência a múltiplas drogas em células tumorais / Cyclosporin A and analogues as multidrug resistance modulating agents in tumour cell

A resistência a múltiplas drogas (MDR) é um dos principais obstáculos no tratamento quimioterápico de pacientes com câncer. O processo de resistência é multifatorial, mas o mecanismo mais bem caracterizado é a superexpressão da glicoproteína P (Pgp), uma proteína de membrana plasmática que funciona como uma bomba de efluxo levando a uma diminuição da concentração intracelular do quimioterápico. A circunvenção da resistência pode ser obtida utilizando-se agentes reversores capazes de inibir a atividade funcional da Pgp e de outras bombas de efluxorelacionadas. Nesta revisão, discutimos o uso do imunossupressor Ciclosporina A (CSA) e de seus análogos como agentes reversores da MDR. Aspectos como sua combinação com ciclofilinas, sua capacidade de inibir a atividade funcional da Pgp e seu uso clínico, especialmente em leucemias, são discutidos baseados tanto na literatura quanto em resultados dos próprios autores.

Citometria de fluxo, imunocitoquimica e western blot na detecção da expressão da proteína p53 em células tumorais: uma análise comparativa / Flow cytometry, immunocytochemistry and western blot in measurement of p53 protein expression in tumor cells: a comparative analysis

Introdução e objetivos: p53 é a proteína cuja função é crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e indução de apoptose de células geneticamente instáveis. O Western Blot (WB) e a imunocitoquímica (ICQ) são atualmente os métodos de detecção mais empregados da proteína p53, se tratando, porém de técnicas de execução demorada e trabalhosa. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia rápida para detecção e quantificação da proteína p53 em células tumorais através da citometria de fluxo (CF). Material e métodos:Empregou-se 14 linhagens de células tumorais humanas: Namalva, Raji e Daudi (linfoma de Burkitt), C91 e MT-2 (leucemia de células T do adulto), Jurkat (leucemia linfoblástica de células T), HL-60 (leucemia promielocítica), HT-29 (adenocarcinoma de colon), GLC-4 (carcinoma de pulmão), MCF-7 (carcinoma de mama), H460 e H460/bcl-2 (carcinoma de células não pequenas de pulmão), k562 e lucena (leucemia mielóide crônica em crise blástica) e C6 (astrocitoma originária de rato). Paralelamente, linfócitos provenientes de 36 indivíduos sadios serviram como controle da reação negativa. A iCQ foi realizada pelo método da imunoperoxidase indireta, a CF por marcação direta com anticorpo monoclonal anti-p53 diretamente conjugado ao isotiocianato de fluoresceína após permeabilização celular e o WB através do método padrão. A quantificação antigênica foi realizada através da média de intensidade de fluorescência na CF e densitometria no WB. Resultados: Observou-se uma correlação direta entre os resultados da CF, WB e ICQ, com expressão positiva nas linhagens Namalva, Raji, HT-29, GLC-4, MT-2, C91pl, MCF-7, H460 e H460/bcl-2 e negativa nas demais linhagens e em todas as células do grupo controle. A ICQ foi eficaz na demonstração da presença da p53 no núcleo da célula e a CF e WB permitiram também a quantificação antigênica, evidenciando células com variados níveis de expressão antigênica. A CF quando comparada ao WB apresentou maior sensibilidade. Conclusões: Nossos resultados mostraram que a proteína p53 pode ser detectada em células tumorais através da CF. Esta metodologia é eficaz, sensível e prática, podendo ser empregada rotineiramente em estudos de expressão da proteína p53 em células tumorais.

p53 e as hemopatias malignas / p53 and hematological malignancies

p53 é um gene supressor tumoral, que codifica uma fosfoproteína nuclear que desempenha um papel importante no controle do ciclo celular, no reparo do DNA e na indução da apoptose. Em condições de stress, particularmente por indução de dano no DNA, a proteína p53 bloqueia o ciclo celular, permitindo dessa forma o reparo do DNA ou promovendo a apoptose. Estas funções são efetuadas pela capacidade transcricional da proteína p53 que ativa uma série de genes envolvidos na regulação do ciclo celular. A forma mutada da p53 é incapaz de controlar a proliferação celular, resultando em reparo ineficiente do DNA e na emergência de célulasgeneticamente instáveis. As alterações mais comuns nas neoplasias são mutações pontuais dentro das seqüências codificantes deste gene. Nas hemopatias malignas, estas mutações, freqüentemente do tipo pontuais, têm sido observadas com menor ocorrência do que em tumores sólidos. Nas neoplasias hematológicas estas alterações são mais observadas na crise blástica da leucemia mielóide crônica, progressão da síndrome mielodisplásica para leucemia mielóide aguda, na transformação do linfoma folicular para linfoma de alto grau, na evolução da leucemia linfóide crônica para síndrome de Richter e recorrência de leucemias agudas. Esta revisão tem como objetivo avaliar as alterações do gene p53 nas hemopatias malignas e discutir o significado clínico destas alterações genéticas na patogenia e prognóstico nessasneoplasias.

Multidrug resistance in tumour cells: characterization of the multidrug resistant cell line K562-Lucena 1

Multidrug resistance to chemotherapy is a major obstacle in the treatment of cancer patients. The best characterised mechanism responsible for multidrug resistance involves the expression of the MDR-1 gene product, P-glycoprotein. However, the resistance process is multifactorial. Studies of multidrug resistance mechanisms have relied on the analysis of cancer cell lines that have been selected and present cross-reactivity to a broad range of anticancer agents. This work characterises a multidrug resistant cell line, originally selected for resistance to the Vinca alkaloid vincristine and derived from the human erythroleukaemia cell K562. This cell line, named Lucena 1, overexpresses P-glycoprotein and have its resistance reversed by the chemosensitisers verapamil, trifluoperazine and cyclosporins A, D and G. Furthermore, we demonstrated that methylene blue was capable of partially reversing the resistance in this cell line. On the contrary, the use of 5-fluorouracil increased the resistance of Lucena 1. In addition to chemotherapics, Lucena 1 cells were resistant to ultraviolet A radiation and hydrogen peroxide and failed to mobilise intracellular calcium when thapsigargin was used. Changes in the cytoskeleton of this cell line were also observed

Quimioterapia neoadjuvante em câncer de mama localmente avançado: análise imunohistoquímica é preditiva da resposta à quimioterapia / Neoadjuvant chemotherapy for locally advanced breast cancer: imunohistochemical analysis is predictive of response to chemotherapy

A quimioterapia é o tratamento padrão inicial para câncer de mama localmente avançado. A correlação entre a resposta à quimioterapia neoadjuvante e fatores prognósticos pode ser útil nesta doença. De setembro de 1996 a dezembro de 1997, 25 pacientes portadoras de câncer de mama localmente avançado (UICC - estádio IIIA, IIIB e inflamatório (1), foram submetidas a 4 ciclos de quimioterapia neoadjuvante com doxorrubucina 60mg/m² e ciclofosfamida 600mg/m² a cada 21 dias, mastectomia à Patey e tratamento adjuvante. A resposta clínica e patológica foi correlacionada com marcadores obtidos através de análise imunohistoquímica da biópsia do tumor. Os marcadores analisados foram: receptores hormonais, p53, HER/neu (cerb-B2), MIB, grau nuclear, PCNA. A resposta clínica objetiva foi de 74 porcento. Vinte e um de 23 pacientes (91 porcento) analisadas foram submetidas à cirurgia. Quatro pacientes não apresentavam doença microscópica na mama (19 porcento). Destas pacientes, 2 também não apresentavam doença em linfonodos axilares, enquanto 4 apresentavam doença residual na mama de até 2 cm (19 porcento). Todos os marcadores apresentaram positividade em percentuais elevados...

Resistência a múltiplas drogas nas leucemias agudas / Multidrug resistance in acute leukemia

Resistência aos quimioterápicos é a principal limitação ao sucesso do tratamento das leucemias agudas podendo estar presente na ocasião do diagnóstico (resistência intrínseca), no curso do tratamento ou na recaída (resistência adquirida). Nesta últimasituação, o fenótipo de resistência resulta da exposição subletal aosquimioterápicos cujos clones residuais resultantes emergem como células resistentes. No relato vários aspectos dos mecanismos envolvidos na resistência a múltiplas drogas é apresentado e discutido a luz dos conhecimentos atuais.

Chemotherapy resistance is the main limitation to the success of treatment for acute leukemia and can bepresent at diagnosis (inherent resistance), during the coune of treatment or after relapse(acquired resistance). In this last case, the resistant phenotfie results from the subletal exposure to chemotherapy from which the resulting residual clones emerge as resistant cells. In this reportseveral aspects of the mechanisms inuolued in multiple resistance are presented and discussed in the light of existing knowledge.

Quimioterapia neo-adjuvante e câncer de mama localmente avançado: a análise imuno-histoquímica é preditiva da resposta à quimioterapia / Neoadjuvant chemotherapy for locally advanced breast cancer imunohistochemical analysis is predictive of response to chemotherapy

A quimioterapia é o tratamento-padräo inicial para câncer de mama localmente avançado. A correlaçäo entre a resposta à quimioterapia neo-adjuvante e fatores prognósticos pode ser útil na abordagem desta doença. De setembro de 1996 a dezembro de 1997, 25 pacientes portadoras de câncer de mama localmente avançado (estágios IIIA, IIIB e inflamatório) foram submetidas a quatro ciclos de quimioterapia neo-adjuvante com doxorrubicina 60mg/m2 e ciclofosfamida 600mg/m2 a cada 21 dias, mastectomia à Patey e ao tratamento adjuvante. A resposta clínica e a patológica foram correlacionadas com marcadores obtidos por meio de análise imuno-histoquímica da biópsia do tumor. Os marcadores analisados foram:receptores hormonais, p53, HER/neu (cert-B2), MIB-!, grau nuclear e PCNA. A resposta clínica objetiva foi de 74 por cento. Vinte e uma de 23 pacientes (91 por cento) analisados foram submetidas à cirurgia. Quatro pacientes näo apresentavam doença linfonodal, enquanto quatro apresentavam doença residual na mama de até 2 cm (19 por cento). Todos os marcadores apresentaram positividade em percentuais elevados. A positividade do p53 e do MIB apresentou correlaçäo com a resposta ao tratamento quimioterápico neo-adjuvante, porém näo alcançou significância estatística. Os resultados iniciais sugerem uma relaçäo entre a positividade do p53 com a resposta clínica e com a resposta patológica, relaçäo essa que näo é demonstrada em estudos anteriores. Apresença do MIB positivo também esteve associada com uma resposta patológica favorável

Multidrug resistance in leukemias: the problem and some approaches to its circumvention

The phenomenon of multidrug resistance (MDR), representing cross-resistance among a number of unrelated chemotherapeutic drugs, is the major cause of chemotherapy failure in many tumors. It has been also detected in leukemias and in these cancers, as well as in many others, resistance can be reversed by a number of substances known as modulators or reversing agents. The capacity of identifying tumors resistant to chemotherapy could orientate the treatment employed. In leukemias, tumor cells are easily obtainable and many techniques have been used to evaluate resistance in these cells. Studying 42 leukemia patients we found a correlation of nearly 60 per cent among surface expression of P-glycoprotein, in vitro resistance reversal by cyclosporin A (CS-A) and extrusion of the rhodamine 123 dye. This latter assay has the advantage of measuring a functional aspect related to resistance (intracellular drug accumulation), being reproducible and affordable by most laboratories. The data generated by this assay were in accordance with those reported by other authors using different methods. To allow for an experimental approach in the study of MDR in leukemias, an in vitro model of a vincristine-induced erythroleukemia resistant cell line was established by us, and was shown to display MDR characteristics: resistance to unrelated drugs, surface expression of P-glycoprotein, extrusion of rhodamine 123 and resistance reversal by trifluoperazine, a reversing agent. Furthermore, this vincristine-resistant line was as sensitive to cell mediated lysis by natural killer (NK) cells as the parental line. Models like this one allow for the in vitro testing of new reversing agents, and when combined to in vitro tests for NK and LAK activity, may select for substances capable of modulating resistance without affecting a potentially useful cell mediated immunotherapy.