Relación entre el polimorfismo C677T de la metilentetrahidrofolato reductasa y la aterosclerosis / Relation between polymorphism C677T of the methylenetetrahydrofolate reductase and atherosclerosis

La hiperhomocisteinemia ha sido considerada un importante factor de riesgo para varias enfermedades vasculares, así como la mutación C677T de la metilentetrahidrofolato reductasa (MTHFR), que causa la formación de una enzima termolábil y con actividad disminuida. El objetivo de este trabajo fue detectar la prevalencia de este polimorfismo en una población de pacientes que padecían enfermedad arterial coronaria (EAC) precoz y correlacionar los genotipos encontrados con el perfil clínico de los mismos individuos. Para ello, fueron citados 112 pacientes sometidos a cateterismo en una clínica particular de Florianópolis (SC Brasil) y a examen clínico y extracción sanguínea por punción venosa. Se aisló el ADN y se determinó el genotipo para el polimorfismo C677T a través del método de polimorfismo de fragmentos de restricción (RFLP). La frecuencia del alelo alterado T fue del 23% en la población portadora de EAC precoz y del 25% en el grupo control. No se observaron diferencias significativas entre los grupos con respecto a la presencia de ninguno de los factores de riesgo analizados. Entre los pacientes con resultado de cateterismo alterado, la historia familiar previa de eventos vasculares estuvo presente en el 91,9% de los pacientes heterocigotos, contra un 72,2% en los homocigotos normales. Los resultados obtenidos permiten concluir que, en la población estudiada, el polimorfismo C677T parece no representar factor de riesgo aislado para la aterosclerosis, mientras que, en presencia de historia familiar, contribuye al desarrollo de enfermedades vasculares.

Hyperhomocysteinemia has been considered an important risk factor for some vascular diseases, as well as a C677T mutation of the methylenete-trahydrofolate reductase (MTHFR), that causes formation of a thermolabile enzyme with reduced activity. The objective of this work was to detect the prevalence of this polymorphism in a population of early coronan/ artery disease patients and to correlate the genotypes found with the el i nica I profile of the same individuáis. To this aim, 112 patients that had undergone cardiac catheterization in a prívate hospital in Florianópolis (SC Brazil) were recruited and submitted to clinical examination and blood test. DNA was isolated and the genotype for polymorphism C677T determined by the RFLP (restriction fragment length polymorphism) method. The frequeney of T-alleles was 23% in the carrier population and 25% in the control group. No significant differences between thegroups regarding the presence of any of the analyzed risk factors were observed. In the group of patients with resulting modified catheterization, previous family history of vascular disease was present in 91.9% of the heterozygote patients, against 72.2% in the normal homozygote ones. It can be concluded then that, in this population, polymorphism C677T does not seem to be an isolated risk factor for atherosclerosis, while, in presence of family history, it contributes to the development of vascular diseases.

Análise molecular de estirpes de Escherichia coli isoladas a partir de amostras de urina de pacientes ambulatoriais por RFLP da região intergência 16s-23s' / Molecular analysis based on intergenic 16s-23s RFLP of Escherichia coli strains obtained from urine samples of ambulatorial pacients

A análise de RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism) da região intergênica 16S-23S rDNA tem sido utilizada na diferenciação de estirpes de vários microrganismos. A digestão do produto de amplificação da região intergênica em isolados uropatogênicosde Escherichia coli com a enzima RsaI gerou dois padrões distintos, separando as estirpes em dois grupos: alfa e beta. Este trabalho teve como objetivo enquadrar dentro destes grupos 60 estirpes de E. coli isoladas a partir de urina de pacientes ambulatoriais no Laboratório Médico Santa Luzia (Florianópolis). Os produtos de amplificação foram digeridos com a enzima RsaI. Os fragmentos resultantes foram submetidos a análise eletroforética em gel de agarose 2% e as estirpes com padrões de restrição condizentes foram agrupadas. Através destas análises foi possível estabelecer correlações entre o perfil molecular e outros dados de análise bioquímicae de resistência a antibióticos.

RFLP analysis of 16S-23S rDNA intergenic region have been used in differentiation of many microorganisms strains. The digestion of the product of intergenic region amplification in uropathogenic strains of Escherichia coli with RsaI generated two distintpatterns: alpha and beta. This project had the aim of classify 60 Escherichia coli strains obtained from ambulatorial patients urine of the Laboratório Médico Santa Luzia (Florianópolis). The amplification products were digested with RsaI enzyme. The fragments weresubmitted to eletrophoretic analysis in 2% agarosis gel. Strains with the same restriction pattern were identified. This analysis allowed the correlation between molecular profile and biochemical and antibiotical resistence data.

Otimização da detecção do polimorfismo Ala 677 - Val do gene que codifica a metilenotetrahidrofolato resutase (MTHFR) / Optimization of methylenetetrahydrofolate reductase C677T polimosphism detection

A mutação (C677T)no gene que codifica a enzima metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) tem sido associada à hiperhomocisteínemia e, possivelmnte, ao risco elevado para doenças vasculares. O objetivo deste trabalho foi otimizar sua detecção por PCR para facilitar estudos populacionais. Foram testadas metodologias alternativas de purificação de DNA genômico humano e os resultados obtidos permitiram padronizar uma técnica com redução de reagentes para extração do DNA por precipitação com NaCl. Foram realizdos experimentos variando a concentração dos componentes da reação de PCR que permitiram definir que reações contendo metado do volume inicial de deoxinucleotídeos e iniciadores (primers), assim como 0,5U de Taq DNA polimerase produzem essencialmente a mesma quantidade de amplificado que a reação anteriormente utilizada. Testou-se ainda, a redução do volume da reação de PCR com objetivo de utilizar o produto de amplificação diretamente para digestão com a enzima HinfI, evitando assim, etapas de pipetagem que acarrtam em risco de contaminação. Obteve-se sucesso com 15mL de volume final, o que permitiu a utilização do sistema de PCR completo para digestão do produto amplificado. A importância deste estudo pode ser justificada pela significância que as doenças vasculares apresentam em termos populacionais e por este polimorfismo estar potencialmente relacionado com o risco de DAC (doença artério-coronariana) precoce.