Use of elisa employing homologous and heterologous antigens for the detection of IgG and subclasses (IgG1 and IgG2) in the diagnosis of Canine visceral leishmaniasis / A utilização do ELISA empregando antígenos homólogos e heterólogos para a detecção de IgG e subclasses (IgG1 e IgG2) no diagnóstico de Leishmaniose visceral canina

Indirect immunofluorescence is the method recommended for the diagnosis of visceral leishmanisis in dogs, however, the accuracy of this technique is low and its use on a large scale is limited. Since ELISA does not present these limitations, this technique might be an option for the detection of IgG or specific IgG1 and IgG2 subclasses. Canine ehrlichiosis is an important differential diagnosis of American Visceral Leishmaniasis (AVL). The present study compared ELISA using Leishmania chagasi and Leishmania braziliensis antigen for the detection of anti-Leishmania IgG and subclasses in serum samples from 37 dogs naturally infected with L. chagasi (AVL) and in samples from four dogs co-infected with L. braziliensis and L. chagasi (CI). The occurrence of cross-reactivity was investigated in control serum samples of 17 healthy dogs (HC) and 35 infected with Ehrlichia canis (EC). The mean optical density obtained for the detection of IgG was significantly higher when L. chagasi antigen was used, and was also higher in subgroup VLs (symptomatic) compared to subgroup Vla (asymptomatic). The correlation between IgG and IgG1 was low. The present results suggest that IgG ELISA using homologous antigen yields the best results, permitting the diagnosis of asymptomatic L. chagasi infection and the discrimination between cases of AVL and ehrlichiosis in dogs.

A imunofluorescência indireta é o método recomendado para o diagnóstico de leishmaniose visceral em cães, entretanto, a acurácia dessa técnica é baixa e seu uso em grande escala é limitado. Uma vez que o ELISA não apresenta essas limitações, essa técnica poderia ser uma opção para a detecção de IgG ou subclasses IgG1 e IgG2 específicas. A ehrlichiose canina é um importante diagnóstico diferencial de Leishmaniose Visceral Americana (LVA). O presente estudo comparou o ELISA usando antígenos de Leishmania chagasi e Leishmania braziliensis para a detecção de IgG e subclasses anti-Leishmania em amostras de soro de 37 cães naturalmente infectados com L. chagasi (LVA) e em amostras de quatro cães co-infectados (CI). A ocorrência de reatividade cruzada foi investigada em amostras de soro controle de 17 animais saudáveis (HC) e 35 de infectados por Ehrlichia canis (EC). A média de densidade óptica obtida para a detecção de IgG foi significantemente maior quando o antígeno de L. chagasi foi usado e também mais elevada no subgrupo LVs (sintomático) quando comparado ao subgrupo LVa (assintomático). A correlação entre IgG e IgG1 foi baixa. O presente resultado sugere que ELISA IgG empregando antígeno homólogo, produz os melhores resultados, permitindo o diagnóstico de infecção assintomática por L. chagasi e a discriminação entre casos de LVA e ehrlichiose em cães.

First encounter of subclinical human Leishmania (Viannia) infection in State of Rio Grande do Sul, Brazil

The objective of the present study was to evaluate the specificity of the Montenegro skin test (MST) in an area in Brazil, state of Grande do Sul State (RS), which was considered to be non-endemic for leishmaniasis. Sixty subjects presented a positive MST and were reevaluated by clinical examination, serology and polymerase chain reaction (PCR) of peripheral blood for the detection of subclinical Leishmania infection. None of the subjects presented clinical signs or symptoms of current leishmaniasis or a history of the disease.Leishmania (Viannia) DNA was detected in blood by PCR and hybridization in one subject. The PCR skin test-positive individual remained asymptomatic throughout the study. Clinical examination showed no scars suggestive of past cutaneous leishmaniasis. Human subclinical infection with Leishmania (Viannia) in RS was confirmed by PCR. This is the first report of subclinical infection with this parasite in the human population of this area.

Sobre a origem e dispersão das leishmanioses cutânea e mucosa com base em fontes históricas pré e pós-colombianas / On the origin and spread of cutaneous and mucosal leishmaniasis, based on pre-and post- Colombian historical sources

Concentra-se sobre a origem, difusão e história das leishmanioses tegumentares americanas (LTA), com especial enfoque sobre a leishmaniose mucosa (LM) no continente sul-americano, cuja análise foi feita através de fontes históricas.

Parasite genotypically related to a monoxenous trypanosomatid of dog's flea causing opportunistic infection in an HIV positive patient

An HIV positive patient presenting a clinical picture of visceral leishmaniasis co-infection was submitted to a bone marrow aspiration after admission to hospital. Amastigotes forms were seen in the bone marrow aspirate and the parasite grew in culture as promastigotes. Molecular analyses showed that the flagellates isolated did not belong to the genera Leishmania, Trypanosoma or Sauroleishmania. It was not possible to establish infection in laboratory animals. In vitro culture of mouse peritoneal macrophages revealed the invasion of the host cells by the flagellates and their killing 48 hr after infection. Opportunistic infection with an insect trypanosomatid was suspected. Further hybridization analyses against a pannel of different monoxenous and heteroxenous trypanosomatids showed kDNA cross-homology with Leptomonas pulexsimulants a trypanosomatid found in the dog's flea.

Phase 1 study of an inactivated vaccine against American tegumentary leishmaniasis in normal volunteers in Brazil

A phase 1 double-blind placebo-controlled study was performed to evaluate a vaccine against American tegumentary leishmaniasis in 61 healthy male volunteers. Side effects and the immune response to the vaccine were evaluated, with 1- and 2- dose schemes, with intervals of 7 or 21 days, each dose containing 1440 mg of protein N antigen of a single strain of Leishmania amazonensis (PH 8) diluted in merthiolated saline (1:10,000). Merthiolated saline and an inert substance were used as placebos. No significant clinical alterations were found following the respective injections in the vaccinated individuals as compared to the placebos, except for local pain, which was associated significantly with injection of the vaccine. The laboratory alterations we observed bore no association with the clinical findings and were unimportant. We observed no differences between the groups with regard to seroconversion or the Montenegro skin test. However, the group that received a single dose of the vaccine and the one that received two doses with a 21-day interval displayed cutaneous induration significantly larger than in the control group, with 100 per cent and 66 per cent conversion in the skin test, respectively. We concluded that the vaccine does not present any major side effect that would contraindicate its use in healthly individuals.

Estudo histopatológico do sistema nervoso periférico na doença de Chagas experimental / Histopathological study of the peripheral nervous system in experimental Chagas' Disease

Com a finalidade de estudar o comprometimento do sistema nervoso periférico na doença de Chagas experimental, foram inoculados grupos de camundongos machos adultos com 10 elevado a quinta potência tripomastigotas sangüíneos da cepa Colombiana e uma cepa de Tripanosoma cruzi proveniente de triatomíneos do Município de Säo Rauimundo Nonato, Piauí - Brasil, por via intraperitoneal. A necrópsia destes animais ocorreu entre o 21§ dia e 8§ mês de infecçäo, quando foram retirados o nervo ciático, músculo esquelético da coxa e coraçäo. Em seguida, os fragmentos foram fixados em formol a 10 por cento para exame histopatológico de rotina e imuno-histoquímico. Além desses tecidos, examinamos o corçäo para confirmaçäo da infecçäo. O exame microscópico do nervo ciático corado pela hematoxilina-eosina de todos os animais atresentou infiltrado inflamatório formado de linfócitos e plasmócitos localizados no endoneuro, e com maior prevalência no perineuro dos nervos ciáticos, originando um processo de neurite intersticial ou perineurite na fase aguda ou crônica de ambas as cepas. Constatou-se, também um intenso processo de vascularite no nervo ciático e músculo esquelético da coxa na fase crônica e, ocasionalmente, necrose das paredes vasculares com a cepa Colombiana. Alguns camundongos crônicos, infectados com a cepa Colombiana, exibiram sinais de paresia ou paralisia dos menbros posteriores e a presença de amastigotas nos nervos dos animais paralíticos. Nestes animais, encontramos lesöes do nervo ciático associado ao comprometimento do músculo esquelético da coxa onde é evidente a miosite, surgirndo, esporadicamente, a miosite calcificante em alguns camundongos crônicos. Os camundongos apresentaram miocardite, pericardite e endocardite. No entanto, a presença de amastigotas foram observadas freqüentemente na fase aguda. Os resultados da imunoperoxidase apresentaram amastigotas ou antígenos parasitários nos cortes histológicos do coraçäo, nervo ciático e músculo esquelético da coxa, os quais foram semelhantes ao observado pelos tecidos corados pela HE

Indirect immunofluorescence test in new world Leishmaniasis: serological and clinical relation-ship

O teste de imunofluorescência indireta (IF) para a detecçäo de anticorpos anti-Leismania nas classes IgG e IgM foi realizado em soros de indivíduos dos seguintes grupos: 214 pacientes com leismaniose cutânea, quatro pacientes com leismaniose mucocutânea, 28 indivíduos sadios com intradermorreaçäo de Montenegro (IDRM) positiva, 29 indivíduos sadios com IDRM negativa e 16 pacientes com leishmaniose visceral. Os indivíduos dos quatro primeiros grupos eram provenientes de uma área da periferia da cidade do Rio de Janeiro (Jacarepaguá) onde a leishmaniose tegumentar causada por Leishmania braziliensis brasiliensis é endêmica. Entre os pacientes com leishmaniose cutânea foi observado que os títulos de IF-IgM foram significantemente mais altos nos casos com menos de quatro meses de evoluçäo do que em pacientes com períodos mais longos de evoluçäo da doença e que os títulos de IF-IgG foram significantemente mais altos em pacientes com lesöes múltiplas do que nos portadores de lesäo única. Os pacientes com leishmaniose visceral tiveram títulos de IF-IgG significantemente superiores aos dos pacientes com leishamiose cutânea. zum grupo de 28 indivíduos selecionados entre os 214 pacientes com leishmaniose cutânea tiveram seus títulos de IF (IgG e IgM) comparados aos de dois grupos controles constituídos de indivíduos sadio, moradores na área endêmica com IDRM respectivamente positiva e negativa. Títulos de IF-IgG e IF-IgM significantemente superiores foram encontrados no grupo com doença ativa. O mesmo grupo de pacientes apresentou título de IF-IgG significantemente mais baixos após a terapêutica antimonial do que durante a mesma

Experimental canine mucocutaneous leishmaniasis (Leishmania braziliensis braziliensis)

Quatro cäes foram inoculados por via intredérmica com 3 x 10**6 promastigotos de Leishmania brasiliensis braziliensis. Três deles desenvolveram lesöes no sítio do inóculo, mas uma úlcera mucosa foi detectada 16 meses após o inóculo. Os achados foram similares áqueles verificados na infecçäo canina natural, bem como na doença humana. Estes resultados sugerem que o cäo pode representar um modelo experimental para a infecçäo causada pela L. b. brasiliensis