Immunoblot analysis using antigen from taenia crassiceps cysticerci in the diagnosis of swine cysticercosis

Se utilizó la técnica del inmunoblot para el diagnóstico de la cisticercosis porcina usando un antígeno total de cisticercos de taenia crassiceps. Fueron analizados 13 sueros del cerdo con cisticercosis, 30 sueros controles negativos y ocho sueron del cerdo con hidatidosis, así como nueve del suino con macracantorincosis, 10 con ascaridiosis y ocho con pulmonía. El uso de este antígeno en el inmunoblot con suero de cerdos no se había publicado previamente. El inmunoblot fue padronizado por análisis de titulación en bloque mostrando 100,0 por ciento de sensibilidad y 96,7 por ciento de especificidad. Los péptidos específicos para la cisticercosis en orden de frecuencia fueron: 72-68 kD (100 por ciento), 16-15 kD (77 por ciento), 39-36 kD (62 por ciento), 18-17 kD (54 por ciento, 21 kD (31 por ciento), 14 kD (23 por ciento), 25-23 kD (8 por ciento), y 20-19 kD (8 por ciento). Reacción cruzada (72-68 y 18-17 kD) sólo se descubrió en una muestra (12,5 por ciento) de cerdo con hidatidosis. Debido a sus altas tasas de desempeño, el inmunoblot debe ser útil para confirmar el diagnóstico de cisticercosis porcina y es más eficaz que otras pruebas empleadas para este propósito, como examen de la lengua, examen anatomopatológico y ELISA

ELISA test for the diagnosis of cysticercosis in pigs using antigens of Taenia solium and Taenia crassiceps cysticerci

In the present study ELISA was standardized for the diagnosis of swine cysticercosis based on necropsy parameters and confirmed positive and negative control sera. Serum samples from pigs with other infections were also assayed to determine possible cross-reactions. Four antigens were assayed: from Taenia crassiceps vesicular fluid (VF-Tcra) and crude larvae extract (T-Tcra), and from Taenia solium extracts of scolex (S-Ts) and of larvae (T-Ts). A checkerboard evaluation of antigen, serum and conjugate dilutions, as well as the use of Tween-20 and skim cow milk in wash and blocking solution had a marked effect on improving ELISA performance. All the antigens showed a good performance, but VF-Tcra was the best, with 96.0 per cent and 80.0 per cent sensitivities for cut-offs respectively at 2sd and 3sd, and corresponding specificities of 97.5 per cent and 100.0 per cent. Cross-reactivity was observed only with hydatidosis and ascaridiosis. In view of the high performance observed, the ELISA test should be recommended for the diagnosis of cysticercosis in suspected swine in slaughterhouses and for the screening of cysticercosis in swine production. These results will support integrated measures of cysticercosis control throughout the chain of swine production, effectively contributing to public health.

Seroprevalence of Trypanosoma cruzi infection in students at the seven-fourteen age range, Londrina, PR, Brazil, in 1995

Seropositivity for Chagas disease was evaluated in 834 children aged between 7 and 14 from the Municipal Teaching System in the District of Londrina, State of Paraná. A seroprevalence rate of 0.1 per cent was found through the use of an indirect immunofluorescent test and an enzyne-linked immunosorbent assay. This low rate of seroprevalence provides evidence that the vectorial transmission of Chagas disease has been eliminated in Londrina. The main reason for the elimination of vectorial transmission of Trypanosoma cruzi infection, as evaluated by serological tests, may be a remarkable change in the economic structure of the northern region of Paraná in the 1960's. At that time coffee production was almost completely replaced by soy beans, wheat and grazing in the rural areas. This change deeply affected the rural ecology and caused an exodus of the population from rural to urban areas as well as a decrease in the total number of the population of that region. The measures introduced for controlling the disease through the Program of Chagas Disease Control established by the Fundaçäo Nacional de Saúde of the Brazilian Ministry of Health, certainly, had a positive impact on the reduction of American trypanosomiasis prevalence in the area under study. However, it does not seem that this was the most relevant factor responsable for the elimination of vectorial transmission of Chagas disease in Londrina.

Aplicaçao do teste Elisa anti-PGL-1 em localidade com alta edemicidade de hanseniase, na Regiao Norte do Estado de Sao Paulo / Use of anti-PGL-1 Elisa in highly endemic leprosy locations in the North of the State of Sao Paulo

Testes sorologicos de hanseniase utilizando o antigeno glicolipideo fenolico-1 (PGL-1) abriram varias possibilidades para o estudo do comportamento epidemiologico dessa doença. O objetivo do trabalho foi avaliar os resultados da aplicaçao do teste de Elisa anti-PGL-1 em uma comunidade urbana com alta endemicidade de hanseniase no estado de Sao Paulo. Nela se conseguiu, na epoca do estudo, coeficientes de detecçao e prevalencia de 27,1 e 167,2 casos por 10.000 habitantes, respectivamente. Foram recenseados 8.491 residentes na area urbana e destes 6.666 foram avaliados com o teste Elisa IgM anti-PGL-1. A sorologia se revelou positiva em 9,0 por cento da populaçao geral, sendo que, para as mulheres, a taxa de positividade encontrada foi de 10,1 por cento e para os homens de 7,6 por cento...

Estudo da sensibilidade e especificidade do teste Elisa anti PGL-1 no Estado de Säo Paulo / Sensibility study and specificity of ELISA test anti PGL-1 at Säo Paulo State

Os testes sorológicos para diagnóstico de hanseníase, usando o glicolipídeo-fenólico, considerado antígeno específico do M. leprae têm aberto algumas possibilidades de estudo do comportamento epidemiológico desta doença. Foi realisado um estudo para medir a sensibilidade e especificidade de um teste de ELISA anti PGL-1, usando material e técnica proveniente de Cuba (UMELISA). Foram testados 84 doentes e 112 controles sadios. A sensibilidade do teste foi maior para o grupo de doentes multibacilares, sendo mais alto entre os casos classificados como virchovianos (V), seguido dos dimorfos (D). No grupo de multibacilares, considerando o limiar de reatividade de 0,200, observou-se que apenas 75,0(por cento) de pacientes V e 50,0(por cento) de D foram positivos ao teste e, no limiar de 0,300, apenas 64,3(por cento) dos V e 40,0(por cento) dos D ainda mostravam positividade. Os doentes indeterminados apresentaram maior proporçäo de soropositivos do que os tuberculóides e isto talvez traduza a polarizaçäo de alguns casos para formas multibacilares. A especificidade do teste foi de 87,5(por cento) no limiar de 0,200 e de 99,1(por cento) no de 0,300. Este teste, à semelhança de outros, apresentou alta especificidade e baixa sensibilidade, resultando em grande percentual de falso-negativos. Para uma doença em que os testes sorológicos säo escassos, apesar de näo se recomendar o uso indiscriminado do teste para triagem de casos na populaçäo geral, a comunidade de seu aprimoramento tecnológico deve ser estimulada. Conseguir-se-ia, assim, avançar na pesquisa de instrumentos cada vez mais sensíveis e específicos para melhorar o diagnóstico precoce e, desse modo intervir mais oportunamente na cadeia de transmissäo

Human neurocysticercosis: IgE in cerebrospinal fluid

The detection of IgE is technically difficult because of its reduced concentrations in serum, and even lower concentrations in cerebrospinal fluid (CSF). In the present investigation we studied 86 CSF samples using animmunoenzymatic method with an anti-IgE-alkaline phosphatase conjugate and a fluorigenic substrate. The samples were from three groups: A) 29 patients with neurocysticercosis (NC), B) 36 patients with different neurologic disorders (neurosyphilis, neurotuberculosis, meningitis, tumors, hemorrhage) and C) 21 discharged individuals who had been hospitalized for bacterial meningitis. The results obtained were: A) 0.05 to 3.00 IU/ml (0.76 + 0.79), B) 0.00 to 1.50 IU/ml (0.23 + 0.34) and C) 0.05 to 1.25 IU/ml (0.34 + 0.34). The present results suggest that IgE appears to play a role in the pathogeny of NC and that efforts should be made to standardize a test for the detection of specific IgE antibodies.

DOT-Elisa for the detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in cerebrospinal fluid using a new solid phase (resin-treated polyester fabric) and Cysticercus longicollis antigens

Foi desenvolvido o teste dot-Elisa para deteccao de anticorpos em liquido cefalorraquiano (LCR) no diagnostico imunologico da neurocisticercose humana, utilizando antigenos de membrana e escolex de Cysticercus cellulose (M+E-Cc) e, alternativamente, membrana (M) e liquido vesicular (LV) de Cysticercus longicollis (Cl) covalentemente ligados a um novo suporte constituido de tecido de poliester-resina de N-metilolacrilamida (dot-TR). O teste foi realizado a temperatura ambiente, com tempos de incubacao reduzidos e sem necessidade de cuidados na manipulacao do suporte...

Immunoperoxidase for the detection of antibodies in cerebrospinal fluid in neurocysticercosis: use of Cysticercus cellulosae and Cysticercus longicollis particles fixed on microscopy slides

A cepa ORF de Cysticercus longicollis (Cl) representa importante modelo para estudo de antigenos heterologos no imunodiagnostico da neurocisticercose (NC). Foi padronizada a tecnica de imunoperoxidase (IP) empregando suspensao antigenica particulada. Amostras de liquido cefalorraquiano (LCR) foram incubadas sobre o antigeno fixado em laminas de microscopia, o conjugado empregado foi anti-IgG-Peroxidase, a reacao enzimatica iniciou-se ao cobrirem-se as laminas com solucao cromogena (Diaminobenzidina/H2O2). Apos lavagens em agua destilada, a lamina foi corada com verde malaquita a 2 por cento em agua. De 21 LCR de pacientes com NC, 19 (90,5 por cento) foram reativos e 8 (100 por cento) LCR do grupo controle foram nao reativos. Os resultados do teste IP-Cl ensaiando 127 LCR de pacientes com suspeita de NC mostrou 89,7 por cento de concordancia com o teste ELISA empregando extrato salino de Cysticercus cellulosae (Cc) e 94,2 por cento de concordancia com o teste IP-Cc

Sorodiagnóstico da Doença de Chagas: novo reagente para o teste de hemaglutinaçäo indireta (THAIIAL) / Chagas' disease serological diagnosis: a new reagent to the indirect hemagglutination test (IHATIAL)

A new reagent was designed to the indirect hemagglutination test (IHATIAL), utilizing goose red blood cells as inert matrix and standardized for the field diagnosis of American trypanosomiasis. The objective was to substitute the lyophilized or frozen reagent of IHAT produced routinely using human erythrocytes in the Adolfo Lutz Institute (Säo Paulo/Brazil). The standardized reagent presented a long stability in liquid suspension, and was evaluated in 137 serum samples from patient with and without Chagas' disease, by IHATIAL. The diagnostic performance of this test was similar to the IHAT utilizing human erythrocytes and to that of a commercial IHAT kit. The sensitivity was 1.00, specificity 0.98, predictive value of positive 0.96 and of negative 1.00. Different batches of reagent successively produced proved to be reproducible in a quality control method. The new reagent is more economic than the former reagent, it can be produced easily and may be applicable to the seroepidemiologic studies.

DOT-ELISA-IgM in saliva for the diagnosis of human leptospirosis using polyester fabric-resin as support: preliminary report

Com a finalidade de melhorar o diagnostico da leptospirose humana, padronizou-se o teste dot-ELISA para a pesquisa de anticorpos especificos da classe IgM na saliva. Empregaram-se amostras de saliva e soro coletadas simultaneamente de 20 pacientes com a forma icterohemorragica da doenca, de 10 pacientes com outras patologias e 5 controles negativos. Culturas de Leptospira em meio EMJH, dos sorovares: icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis e cynopteri, foram utilizadas como antigeno, na concentracao proteica individual de 0,2 ug/ul, misturadas em volumes iguais. Na fase solida do teste empregou-se tecido de poliester impregnado com resina de N-metilol-acrilamida....

Standardization of dot-ELISA for the serological diagnosis of toxocariasis and comparison of the assay with ELISA

The dot-enzyme-linked immunosorbent assay (dot-ELISA) was standardized using somatic (S) and excretory-secretory (ES) antigens of Toxocara-canis for the detection of specific antibodies in 22 serum samples from children aged 1 to 15 years, with clinical signs of toxocariasis. Fourteen serum samples from apparently normal individuals and 28 sera from patients with other pathologies were used as controls. All samples were used before and after absorption with Ascaris suum extract. When the results were evaluated in comparison with ELISA, the two tests were found to have similar sensitivity, but dot-ELISA was found to be more specific in the presence of two antigens studied. Dot-ELISA proved to be effective for the diagnosis of human toxocariasis, presenting advantages in terms of yield, stability, time and ease of execution and low cost.

Dot-elisa for detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in human cerebrospinal fluid using a new solid-phase (resin-treated polyester fabrics): preliminary report

Foi desenvolvido o teste DOT-ELISA em tecido de poliéster tratado com resina polimerizada(NMA) para o imunodiagnóstico da neurocisticercose (NC) humana pesquisando anticorpos específicos em líquido cefalorraquiano (LCR). O teste pode ser empregado em levantamentos epidemiológicos e em laboratórios de média e baixa complexidade, já que todas as etapas säo realizadas a temperatura ambiente, o antígeno é covalentemente ligado ao suporte permitindo obter um reagente estável, e o suporte sensibilizado näo requer cuidados especiais no seu manuseio. Foram ensaidas 30 amostras de LCR; todas as 15 amostras do grupo controle foram negativas e 14 (93,3%) das 15 amostras de LCR do grupo de pacientes com NC foram positivas (títulos de 1 a 128). Os estudos de sensibilidade, especificidade, reprodutibilidade, establidade e padronizaçäo do uso de soro como amostra estäo em andamento

Toxoplasmose aguda: avaliaçäo da técnica de imunoensaio em camada delgada para detecçäo de anticorpos IgM, anti-toxoplasma gondii / Acute toxoplasmosis: evaluation of thin-layer immunoassay technic for detection of IgM antibodies, anti-Toxoplasma gondii

Um método de reaçäo antígeno-anticorpo denominado Imunoensaio em Camada Delgada (ICD) foi padronizado e avaliado para o imunodiagnóstico da toxoplasmose aguda, através da detecçäo de anticorpos IgM, anti-Toxoplasma gondii (ICD-IgM). Um total de 300 amostras de soros, tendo ou näo o perfil sorológico da toxoplasmose aguda, foi estudado pelo ICD-IgM e os resultados analisados quanto aos aspectos qualitativos e quantitativos em relaçäo aos testes convencionais de imunofluorescência indireta para a detecçäo de IgM, (IFI-IgM) e de hemaglutinaçäo pré e após tratamento com 2-mercaptoctanol (HA-2ME). Foram calculados os coceficientes de correlaçäo entre os resultados fornecidos pelo ICD-IgM e as técnicas convencionais, de acordo com as concentraçöes do antígeno, assim como, foi verificada a influência dessas concentraçöes antigênicas nos índices relativos de sensibilidade e de especificidade. O estudo estatístico mostrou reprodutibilidades significativas dos resultados inter e intra testes, assim como no reaproveitamento do antígeno por 10 vezes. Os resultados de ICD-IgM mostraram que as concentraçöes antigênicas ideais foram de 70 a 100 microng/ml, para o ensaio em questäo, para se obter máximas sensibilidade e especificidade. Portanto, ICD-IgM, por fornecer resultados täo sensíveis e específicos quanto aqueles dos testes convencionais referidos, poderá ser empregado para fins diagnósticos

Estudo comparativo de testes sorológicos no diagnóstico imunológico da neurocisticercose / Comparative study of serological tests in the immunological diagnosis of neurocysticercosis

Estudamos comparativamente quatro técnicas imunológicas para o diagnóstico da neurocisticercose (NC), utilizando líquido cefalorraquiano (LCR) como espécime clínico: as reaçöes de fixaçäo de complemento (RFC), hemaglutinaçäo passiva (RHA), imunofluorescência indireta (RIF) e teste imunoenzimático ELISA. Foram ensaiadas 125 amostras de LCR de pacientes com NC comprovada e 94 amostras de LCR do grupo controle (60 de pacientes com quadros clínicos neurológicos diversos e 34 de pacientes supostamente normais). Os índices de sensibilidade e especificidade obtidos para os testes foram, respectivamente, de 48,0% e 90,4% para a RFC; 88,8% e 96,8% para a RHA; 87,2% para a RIF E 97,6% para o teste ELISA. A diferenca significativa (p < 0,05) observada entre os testes permite concluir que o melhor teste para o diagnóstico de NC foi o teste ELISA seguido das reaçöes de HA e IF