Apoptogenic effect of the lipophilic o-naphthoquinone CG 10-248 on rat hepatocytes: light and electron microscopy studies

CG 10-248 (3,4-dihydro-2,2-dimethyl-9-chloro-2H-naphtho[1,2b]pyran-5,6-dione; CG-NQ), a beta-lapachone analogue, modified the ultrastructure of rat hepatocytes, as demonstrated by light and electron microscopy. After 4 h incubation with 100 microM CG-NQ, the following effects were observed: (a) nuclear chromatin condensation; (b) chromatin fragmentation; (c) displacement of mitochondria, concentrated around the nucleus; (d) disruption or expansion of mitochondrial outer or inner membranes, respectively; (e) displacement and alteration of endoplasmic reticulum (rough and smooth); (f) decrease of microvilli; (g) blebbing of plasma membrane and production of apoptotic bodies formed by folding of plasma membrane fragments around mitochondria or peroxysomes; and (h) production of hydrogen peroxide. Expression of such effects varied according to hepatocyte samples and taken together strongly support an apoptotic action of CG-NQ dependent on reactive oxygen species.

The release of catecholamines by an endogenous factor that inhibits neuronal Na+, K(+)-ATPase

Se ha demostrado que la inhibición de la Na+, K+-ATPasa produce liberación de neurotransmisor en distintos modelos experimentales. En este laboratorio se observó previamente que una fracción soluble separada mediante Sephadex G-50 (pico II) es capaz de inhibir la actividad de Na+, K+-ATPasa pero no de otras enzimas asociadas a membranas. El objetivo del presente trabajo fue probar el efecto de la fracción pico II de cerebro sobre el contenido de neurotransmisor de las vesículas sinápticas de los nervios pineales. Se usaron ratas no inyectadas y ratas inyectadas 30 min antes con 5-hidroxidopamina (30 mg per Kg, i.p.). La 5-hidroxidopamina produce un falso neurotransmisor cuya presencia en las vesículas sinápticas se visualiza luego de la fijación con glutaraldehído-osmio como un material electrón denso que llena total o parcialmente las vesículas. En ratas no inyectadas se estudió la osmiofilia y la reacción cromafín del nucleoide electron denso. Las glándulas pineales se incubaron en solución Tyrode sin calcio en presencia y ausencia de pico II a temperatura ambiente y se estudiaron al microscopio electrónico. Cuando las glándulas de las ratas pretratadas con 5-hidroxidopamina se incubaron con pico II se observó una disminución siginificativa en el número de vesículas totalmente llenas de material electrón denso. Esto indica una reducción en el contenido de falso neurotransmisor contenido en la matriz de las vesículas sinápticas. Este efecto sobre las vesículas sinápticas no se observó en presencia de pico II invejecido, que no inhibe la Na+, K+-ATPasa. Cuando las gládulas de ratas no inyectadas se incubaron con pico II no se observaron cambios ni en la osmiofilia ni en la reacción cromafin de las vesículas sinápticas. La osmiofilia y la reacción cromafin del nucleoide electrón denso marca el sitio de acumulación de monoaminas (catecol e indolaminas en los nervios pineales). Estos resultados son coherentes con la idea de una relación entre la inhibición de la actividad de Na+, K+-ATPasa y la liberación de una fracción de neurotransmisor acumulado en los terminales nerviosos

Immunocytochemical localization of sorotonin in the pineal gland

Se estudió la localización de serotonina (5HT) en la glándula pineal de ratas en condiciones de luz diurna por medio de microscopía óptica y electrónica. Se usó un anticuerpo policlonal para 5 HT y el método inmunocitoquímico de peroxidasa antiperoxidas (PAP). La glándula mostró fibras varicosas inmunomarcadas distribuidas por toda su extensión. Las observaciones ultraestructurales revelaron la presencia de depósitos electrodensos de diaminobencidina (DAB) en terminales localizados principalmente en los espacios perivasculares

Calcium binding sites in the Discopyge tschudii electrocyte: physiological implications

Se investigó la presencia de sitios fijadores decalcio en la electroplaca del pez eléctrico Discopyge tschudii mediante el uso de fijadores, con alto contenido de calcio. Se encontraron sitios fijadores de calcio en el terminal sináptico y en el electrocito. En las vesículas sinápticas se observó la presencia de una partícula electrón densa de 25 nm de diámetro aproximadamente, calcio dependiente, en contacto con la membrana vesicular. En el electrocito se encontraron sitios fijadores de calcio de forma redondeada, de 50-60 nm de diámetro promedio, dispersos en el citplasma o unidos a las membranas celulares, especialmente la membrana plasmática ventral y las membranas del sistema canalicular dorsal. A nivel de la membrana plasmática ventral esos sitios estaban aislados o fusionaods formando una banda festoneada. En fijaciones sin calcio se observó la presencia de formaciones vesiculares y perfilkes omega, electrónicamente transparentes, en la misma localización. También se encontrron formaciones vesiculares en el citoplasma del electrocito. La frecuencia y densidad electrónica de los sitios fijadores de calcio del electrocito presentaban una gran variabilidad, sugerindo una correlación funcional. Se postula que esos sitios fijadores de calcio corresponden a vesículas endocitóticas, probablemente relacionadas con la internalización de complejos ligando receptor involucrados en el metabolismo del receptor o en la activación de alguna estructura funcional del electrocito, como el sistema canalicular dorsal. Un resumen de este trabajo fue presentado en la primera reunión de la Asociación Neuroquímica Argentina, realizada en Cóordoba, República Argentina, en noviembre 1986

Estudio histoquimico y ultraestructural de la celula de Merkel utilizando un modelo tumoral. / Histochemical and ultrastructural study of Merkel's cell using a tumoral model

Se realiza el estudio histoquimico y ultraestructural de un tumor de celulas de Merkel. El material fue dividido en tres partes que se sometieron a las siguientes fijaciones: 1) glutaraldehido-OsO4; 2) glutaraldehido-dicromato (GD);3) formaldehido-glutaraldehido-dicromato (FGD). GD y FGD fueron hechas de acuerdo a la tecnica histoquimica de Wood. GD para la deteccion de catecolaminas (CA) y serotonina (5HT) y FGD para la deteccion especifica de 5HT.En los tres casos el material fue procesado para microscopia electronica. Morfologicamente se observo en 1) que las celulas tumorales contenian en su citoplasma las vesiculas granuladas caracteristicas de las celulas de Merkel. Con GD y FGD se observo una reaccion positiva a nivel de los granulos, mas intensa con GD que con FGD. Los resultados expuestos indican, por la positividad de FGD, que las vesiculas granuladas de las celulas estudiadas contienen 5HT y sugieren la presencia simultanea de CA por ser GD notablemente mas intensa que FGD