ABSTRACT
El virus de influenza ha sido reconocido como un importante patógeno en poblaciones humanas y animales, ya que es el principal causante de enfermedades respiratorias. Muchas vacunas y aislamientos de virus de influenza humana y animal son realizadas actualmente en huevos embrionados, siendo este el método usado tradicionalmente por décadas. Sin embargo, se han encontrado inconvenientes en la elaboración de vacunas ya que el proceso de fabricación es de capacidad limitada (se requiere aproximadamente un huevo para generar una dosis vacunal) y alta demanda tiempo, disminuyendo su habilidad para generar biológicos rápidamente en el caso de una pandemia. El empleo de líneas celulares continuas para la producción de vacunas virales nace como alternativa que ofrece diversas ventajas: (i) oportunidad de emplear células completamente caracterizadas y estandarizadas, (ii) producción y planeación permanente de vacunas y (iii) los biológicos pueden ser producidos de forma más rápida. El objetivo de esta revisión es analizar las diferentes alternativas empleadas en el cultivo y/o aislamiento de virus de influenza, enfatizando en el uso de cultivos celulares como sustrato para el aislamiento y la producciónc de biológicos destinados a la salud humana y animal.
Subject(s)
Virus Cultivation , Orthomyxoviridae , Orthomyxoviridae/growth & development , Influenza VaccinesABSTRACT
En el presente artículo se describe la normalización de la prueba de RT-PCR para ser empleada como herramienta en la detección del Virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB). Los iniciadores utilizados amplificaron un sector de 280 pb que se encuentra dentro del extremo 5 UTR del genoma viral. Para el proceso de normalización, se usó como control positivo, cepas de referencia de VDVB (NADL, Osloss). Para evaluar reacción cruzada se usó una cepa de virus de Enfermedad de las Fronteras (BD). La obtención del cDNA se realizó por el método de ®random primers¼ (iniciadores aleatorios). La prueba detectó tanto cepas citopáticas, como no citopáticas del VDVB. El protocolo establecido demostró un buen funcionamiento in vitro y es la base para posteriores pruebas de validación y evaluación de la prueba diagnóstica.
Subject(s)
Cattle , Diagnosis , Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction , Bovine Virus Diarrhea-Mucosal DiseaseABSTRACT
El pestisvirus que produce la diarrea viral bovina (V.D.V.B), ocasiona porblemas reproductivos en el ganado vacuno y se encuentra ampliamente difundido en el país. La presencia de cepas no citopatogénicas del mismo, las cuales normalmente no se evidencian en los cultivos celulares contaminados con éste virus, han constituido un limitante para el establecimiento y mantenimiento de cultivos primarios y líneas celulares libres del V.D.V.B., para uso rutinario en actividades diagnósticas o investigativas. El suero fetal bovino (SFB) es la fuente usual de contaminación para los cultivos de tejidos animales, dadas las escasas previsiones para el control de su calidad, ya que la recolección y mercadeo del SFB se realiza con criterios artesanales y sin los debidos controles de calidad. Específicamente en el caso del V.D.V.B., se pueden presentar dos situaciones con el SFB: que contenga partículas virales o que posea niveles de anticuerpos contra el virus; en ambos casos se darán problemas en los procedimientos realizados con dichos sueros. Con el fin de controlar las contaminaciones de los cultivos celulares con el VDVB, en el Postgrado de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional, se ha empleado la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) para detectarlas tanto, en el SFB como en diferentes cultivos celulares, obteniéndose para el SFB el 25.8 por ciento de postivos de un total de 32 muestras de diferentes orígenes y para cultivos celulares el 42.8 por ciento de positivos de 28 lotes, procedentes de diferente origen animal y centros de investigación, resultados que son comparables con los obtenidos por otros laboratorios internacionales como el National Animal Diseases Laboratory (NADL) del Departamento de Agricultura de USA. Dentro de las recomendaciones para la prevención y control del problema en laboratorios de diagnóstico e investigación médica y veterinaria, que empleen tecnologías relacionadas con manejo y mantenimiento de cultivos celulares, están las de implementar técnicas para la detección del virus como la IFI, la peroxidasa o la inmunoprecipitación al igual que el manejo de un bajo número de fetos en la conformación de lotes de SFB