ABSTRACT
In order to analyze the temporal relationship between cortisol levels and glucocorticoid receptors (GR) in placenta and the possible influence in noninfectious abortion in goats, changes in GR in livers of the foetuses and mothers livers and in placenta together with foetal and maternal cortisol levels under stress conditions in non-pregnant (n = 5) and pregnant goats (n = 24) were recorded. The pregnant goats were five on days 40-50 of gestation (40-50 d), six on days 51-75, four on days 76-100, three on days 101-125, and six in more than 125 days of gestation. GR values in the placenta and maternal serum cortisol levels, measured by competitive binding methods, decreased from 10.4 ± 2.7 and 174.3 ± 59.1, in the group 40-50 d to 6.1 ± 2.3 fmol/mg of protein and 79.1 ± 66.1 nmol/l in the 76-100 d group, respectively. Values then increased, reaching the highest values (P ≤ 0.05) detected in this study (18.3 ± 2.7 and 659.6 ± 76.3) in the 101-125 d group followed by a decrease of 11.6 ± 2.1 fmol/mg protein and 231.6 ± 54.0 nmol/l in the +125 d group. Progesterone was bound competitively to placental GR. However, its binding values decreased in the 101-125 d group. Reciprocal profiles were found in maternal and fetal liver GR. These data suggest that goats have innate mechanisms for abortion that occurs in case of life-threatening conditions saving mother's life and giving opportunity for new pregnancies, allowing thus the survival of this species.
Para analizar la relación temporal entre los niveles de cortisol y los receptores a glucocorticoides (GR) en la placenta y su posible influencia en el aborto no infeccioso de las cabras, se registraron los cambios en el cortisol sanguíneo y en los GR del hígado de cabras adultas no gestantes (n = 5) y, además de los anteriores, en el hígado fetal y la placenta junto con los niveles de cortisol fetal de cabras gestantes (n = 24) bajo condiciones de estrés. Las cabras gestantes fueron: cinco de 40 a 50 días de gestación, seis de 51 a 75, cuatro de 76 a 100, tres de 101 a 125 y seis con más de 125 días de gestación. Los valores de GR en la placenta y los niveles de cortisol materno medidos por unión competitiva, decrecieron desde 10.4 ± 2.7 y 174.3 ± 59.1 en el grupo 40-50 d a 6.1 ± 2.3 fmol/mg proteína y 79.1 ± 66.1 nmol/l en el grupo 76-100 d, respectivamente. Ambos valores se incrementaron en el grupo 101-125 d, hasta alcanzar los más altos (P ≤ 0.05) detectados en este estudio (18.3 ± 2.7 y 659.6 ± 76.3) seguidos por una disminución a 11.6 ± 2.1 fmol/mg proteína y 231.6 ± 54.0 nmol/l en el grupo +125 d. Además, la progesterona se unió competitivamente a los GR placentarios; sin embargo, su unión disminuyó en el grupo 101-125 d. Los GR de los hígados materno y fetal presentaron un perfil inverso. Estos resultados permiten sugerir que las cabras cuando se encuentran en situaciones que amenazan su vida y la del feto tienen mecanismos innatos para abortar, salvando la vida de la madre y dando la oportunidad de una nueva gestación que permita la sobrevivencia de la especie.
ABSTRACT
The first reproductive cycle of 50 females of the shortfin silverside, Chirostoma humboldtianum (Valenciennes) in culture conditions was analyzed. Ovarian developmental stages, gonadosomatic (GI) and hepatosomatic (HI) indexes were described. Histo-logical description of the ovaries and quantification of estradiol serum levels (E2) and 17α-hydroxy-4-pregnen-3-one (17-P4) by radioinmune assay were performed. Results showed a first reproductive season longer than six months. Females initiated spawning at the age of one year. Four ovarian maturation stages (I to IV) were determined during the spawning season and one (V) during the non-spawning season, the last one showed a non-defined pattern of development. The GI and HI indexes values indicate a positive lineal relation to body-weight only during the reproductive season (r² = 0.74 and r² = 0.86, P < 0.05, respectively). Histological analysis of the ovaries indicated that the species correspond to the pattern described as group-synchronous with multiple spawnings. The follicular population showed reproductive activity during the first stages of maturation with a predominant population of pre-vitellogenic follicles. As the ovarian maturation increased, the presence of all the follicular developmental stages was observed, with a tendency of an increase of vitellogenic and mature follicles. The concentration of circulating sexual steroid hormones of estradiol (E2) and 17α-hydroxy-4-pregnen-3-one (17-P4) were high during stage I (2.5 ± 0.7 ng/m L and 2.4 ± 0.3 ng/mLfor E2 and 17-P4, respectively); a decrease was observed during stage II, and the highest values were observed in stage IV (7.6 ± 2.1 ng/mL for E2 and 1.8 ± 0.9 ng/mL for 17-P4). The same pattern was observed during non-spawning season (ANOVA P < 0.05), these results are the first findings on the reproductive physiology of the shortfin silverside fish, suggesting an early steroidogenic activity in immature females. Furthermore, the species maintains its hormonal capacity during the post-spawning season, as it is supported by their follicular composition. The aforementioned will allow to have a better understanding of the mechanisms involved in their reproductive processes and to improve the mechanisms utilized to control their reproduction and for the production of eggs and larvae in culture conditions.
Se analizó el primer ciclo reproductivo de 50 hembras de pez blanco, Chirostoma humboldtianum (Valenciennes), en condiciones de cultivo. Se describieron los estadios de desarrollo ovárico y los índices gonadosomático (IG) y hepatosomático (IH). Se realizó una descripción histológica de los ovarios y se midieron los niveles séricos del estradiol (E2) y de la 17α-hidroxi -4-pregnen-3-ona (17-P4) por radioinmunoanálisis. Los resultados mostraron una primera época reproductiva de más de seis meses. Las hembras iniciaron sus desoves a la edad de un año. Se identificaron cuatro estadios de maduración ovárica (estadios I al IV) en la época de desoves y uno más (V) en la época no reproductiva, este último no tuvo un patrón de desarrollo definido. Los valores de los índices IG e IH mostraron una relación lineal positiva con el peso corporal únicamente en la época reproductiva (r² = 0.74 y r² = 0.86, P < 0.05, respectivamente). El análisis histológico de los ovarios indicó que la especie se clasifica como sincrónica por grupos múltiples. Los primeros estadios de maduración gonadal fueron caracterizados por ovarios cuyas poblaciones foliculares estuvieron compuestas predominantemente por folículos previtelinos. Conforme avanzó el proceso de maduración, se observaron todos los estadios de desarrollo folicular, con tendencia al incremento de folículos vitelinos y maduros. Durante el estadio I, las concentraciones de las hormonas esteroides sexuales circulantes de estradiol (E2) y de la 17α-hidroxi-4-pregnen-3-ona (17-P4) fueron altas (2.5 ± 0.7 ng/mL de E2 y 2.4 ± 0.3 ng/mL de 17-P4), se observó un decremento durante el estadio II y los valores más altos se registraron en el estadio IV (7.6± 2.1 ng/mL de E2 y 1.8 ± 0.9 ng/mL de 17-P4). Este mismo patrón fue observado durante la época de no desoves (ANDEVA P < 0.05); estos resultados son los primeros hallazgos en la fisiología reproductiva del pez blanco, los cuales sugieren una temprana actividad esteroidogénica en hembras inmaduras, además de que esta especie conserva su capacidad hormonal en la época posdesove, sustentada en su composición folicular. Lo anterior ayudará para comprender mejor los mecanismos involucrados en los procesos reproductivos y servirá de base para lograr su reproducción controlada y la obtención de huevos y larvas en condiciones de cultivo.
ABSTRACT
Para obtener anticuerpos específicos contra progesterona (P4) y 17ß-estradiol (E2) y la estandarización de sus radioinmunoensayos (RIAs) correspondientes, se inmunizaron conejos Nueva Zelanda y California con 100 o 160 µg de Progesterona-CMO:BSA o 17ß-Estradiol-GMO:BSA respectivamente. Las reinoculaciones se realizaron con intervalo de una semana en seis ocasiones, titulándose en cada una el suero cosechado. Con base en el mejor título, se seleccionaron los antisueros, a los que se les determinó la especificidad mediante reacciones cruzadas con varios esteroides. La reacción cruzada de los antisueros obtenidos contra P4 fue de 4.4 y 4.4 por ciento para pregnenolona, de 4.0 y 13.3 por ciento para epipregnenolona y menos del 1.0 por ciento para alopregnenolona, testosterona, E2 y cortisol para AcQKP5 y AcQKP6 respectivamente. La reacción cruzada del antisuero obtenido contra E2 fue de 3.6 por ciento para estrona y menos de 0.01 por ciento para estriol, andreostendiona, 17Ó-estradiol, P4 y testosterona. La sensibilidad de los ensayos permite destacar desde 6.25 pg/tubo de P4 y 0.5 pg/tubo de E2. Los coeficientes de variación intra e interensayo en el RIA fueron para P4 de 10.9 por ciento y 12.8 por ciento y para E2 de 5.0 y 10.0 por ciento respectivamente. Para vaslidar los RIAs se determinó la concentración de P4 y E2 en cabras y vacas en diferentes estados reproductivos. Así la concentración de p4 en cabras durante el último tercio de gestación fue de 8.3 ñ 0.4 ng/ml y durante el periodo preparto disminuyó a 5.4 ñ 0.8 ng/ml; en esta última etapa el E2 mostró valores de 55.1 ñ 8.1 pg/ml. En la vaca, los valores de P4 y E2 fueron en el estro de 0.9 ñ 0.08 ng/ml y 10.6 ñ 2.4 pg/ml, en la fase lútea de 8.6 ñ 2.7 ng/ml y 3.3 ñ 0.6 pg/ml y en la gestación de 6.4 ñ 0.6 ng/ml y 17.3 ñ 1.6 pg/ml respectivamente. La sensibilidad de los RIAs con los anticuerpos obtenidos, en capaz de identificar y diferenciar los valores característicos de P4 y E2 de los diferentes estados reproductivos en rumiantes domésticos