ABSTRACT
Objetivo: Analizar genéticamente la resistencia a Isoniacida en cepas de Mycobacterium tuberculosis mediante PCR-RFLP de la región S315T del gen katG. Materiales y métodos: El estudio se realizó a partir de cultivos positivos de Mycobacterium tuberculosis receptados en el Centro de Referencia Nacional de Micobacterias, durante el período 2013 2014. El ADN extraído fue cuantificado y evaluada su pureza, por espectrofotometría. Para determinar el polimorfismo en la región 315 del gen katG a partir de un producto de amplificación de 630 pb se realizó digestiones con las enzimas de restricción MspI y SatI. Resultados: Del total de 498 cepas analizadas, 215 cepas presentaron características fenotípicas de resistencia a isoniacida (32,6 % monorresistencia, 19,5 % MDR y 47,9 % polirresistencia), 283 cepas eran sensibles. 251 cepas correspondieron a pacientes vírgenes al tratamiento (VT); 174 fueron pacientes antes tratados (AT) y 73 fueron pacientes se encontraban con tratamiento (CT). La mayoría de los casos provenía de la provincia del Guayas (77,2 %). La PCR-RFLP-SatI presentó alto porcentaje de sensibilidad (98,6 %) y especificidad (98,2 %), mientras que con la enzima MspI el porcentaje de sensibilidad fue 88,8 % y 7,4 % de especificidad. Conclusión: La PCR-RFLP-SatI demostró ser específica y económica para la detección de resistencia a isoniacida, proporcionando resultados de forma rápida, la aplicación de esta técnica como apoyo para el diagnóstico permitiría al paciente acceder a un tratamiento más oportuno.
Objective: Genetically analyze the Isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis cultures by PCR-RFLP of the S315T region of the atG. Materials and methods: The study was carried out in positive cultures of Mycobacterium tuberculosis, received at the National Reference Center of Mycobacteria, during the period 2013-2014. The DNA extracted was quantified and its purity was evaluated by spectrophotometry. To determine the polymorphism in the 315 region of the at G gene, digestions were made with the restriction enzymes MspI and SatI from a 630 bp amplification product. Results: Of 498 culture strains analyzed, 215 strains showed phenotypic characteristics of resistance to Isoniazid (32,6 % monoresistance, 19,5 % MDR and 47,9 % polyresistance) and 283 strains were sensitive. 251 strains corresponded to virgin patients to treatment (VT); 174 were patients before treated (AT) and 73 were patients treated (CT). The majority of cases came from the province of Guayas (77,2 %). The PCR-RFLP- SatI presented a high percentage of sensitivity (98,6 %) and specificity (98,2 %), while with the MspI enzyme the sensitivity percentage was 88,8 % and 7,4 % specificity. Conclusion: The PCR-RFLP SatI proved to be specific and economical for the detection of resistance to isoniazid, providing results quickly, the application of this technique as a support for the diagnosis would allow the patient to access a more timely treatment.
Subject(s)
Humans , Tuberculosis , Catalase , Digestion , Isoniazid , EcuadorABSTRACT
Objetivo: Determinar el perfil de sensibilidad de Mycobacterium tuberculosis a drogas de primera línea en cepas que llegan de diferentes unidades de salud de la provincia del Guayas. Materiales y métodos. Se trabajó con 614 cepas de Mycobacterium tuberculosis, las cuales se le realizó las pruebas de sensibilidad a drogas de primera (rifampicina, isoniacida, estreptomicina y etambutol) por el por el método de proporciones (Rist, Canetti, Grosset) y pirazinamida evaluada por el método Wayne. Resultado: Se realizó perfil de sensibilidad a 614 cepas, de las cuales el 70 % (n=427) es sensible a todas las drogas, 20 % (n=124) presentó resistencia al menos a una droga, el restante corresponden a cepas MDR. TB-Monorresistente tiene mayor incidencia (n=83) que la MDR (n=12) en pacientes sin tratamiento previo. Por otro lado en pacientes antes tratado la TB-Monorresistente es menor a la MDR (n=41 y n=51 respectivamente). Conclusiones: el método de proporciones sigue siendo la técnica de referencia. Se observa mayor sensibilidad a drogas de primera línea en pacientes sin tratamiento previo. Es de importancia clínica llevar un correcto seguimiento a pacientes que presenten algún tipo de resistencia, pero es prioridad preventiva la no conversión de los pacientes sensibles a fin de evitar la diseminación de cepas resistentes.
Objective: Difine first line susceptibility drug profile of Mycobacterium tuberculosis, to diferent strain from Province Guayas health establishments. Material and Methods.614 Mycobacterium tuberculosis strain were analized by first line susceptibility drug test (rifampicin, isoniazid, streptomycin, ethambutol) used proportions method (Rist, Canetti, Grosset) and pyrazinamide Wayne´s methods. Results: 614 strain were studied, 70 % strains (n=427) result sensible, 20 % (n=124) have at least resistence one drug; the residue responds to MDR strains. The TB-Monoresistence haved more incidence (n=83) than MDR (n=12) in virgin treatments patients. Nevertheless; in previous treatment patients, the TB-Monoresistence is smaller than MDR (n=41 y n=51 respectively). Conclutions: The proportion method is the reference technique. The analize shown biggest sensibility in virgin treatment patients for first line drugs. Is very important have a correct control of resistant pactients, but is preventive priority the non conversion of sensibility patients to avoid dissemination resistance strain.