Participation of NO in the vasodilatory action of isoespintanol / Participación de NO en la acción vasodilatadora del isoespintanol

Background: accumulating evidence suggests that natural compounds and specifically monoterpenes exert a vasodilator action. Objetive: to investigate the vascular effects of isoespintanol (2-isopropil-3,6-dimetoxi-5-metilfenol, ISO) monoterpene isolated from the leaves of Oxandra cf xylopioides. Methods: thoracic aortic rings isolated from Wistar rats were contracted with KCl 80 mM and then relaxed by exposure to Ca2+-free solution in absence and in presence of ISO 0.6 mg/mL. The force/tissue ratio (F/W) and the time to obtain 50% of relaxation (T-50) were used to assess the maximal contractile response and the relaxation, respectively. To examine the participation of NO additional experiments were performed under inhibition of nitric oxide synthase with L-NAME (L-NG-Nitroarginine methyl ester). Results: ISO significantly decreased the F/W ratio (257 ± 19 vs. 360 ± 18) and did not change T-50. In presence of L-NAME the effects of ISO on contractile response was abolished. Conclusions: these results demonstrate that ISO exerts a vasodilator effect through NO-dependent pathways and suggest that an inhibition of calcium influx could be the involved mechanism

Antecedentes: la evidencia acumulada sugiere que los compuestos naturales, especialmente monoterpenos, ejercen una acción vasodilatadora. Objetivo: investigar los efectos vasculares del monoterpeno isoespintanol (2-isopropil-3,6-dimetoxi-5-metilfenol, ISO) aislado de hojas de Oxandra cf xylopioides. Métodos: anillos de aorta torácica aislados de ratas Wistar fueron contraídas con cloruro de potasio 80 mM y luego relajadas por exposición a una solución libre de Ca2+ en ausencia y presencia de isoespintanol 0,6 µg/mL. El radio fuerza/tejido (F/T) y el tiempo para obtener 50% de relajación (T50) se usaron para lograr la máxima respuesta contráctil y de relajación, respectivamente. Para evaluar la participación del óxido nítrico, se realizaron experimentos adicionales bajo la inhibición de la óxido nítrico sintetasa con L-NAME (L-NG-éster metílico de nitroarginina). Resultados: Isoespintanol disminuyó el radio F/W significativamente (257 ± 19 vs. 360 ± 18) y no cambió T-50. En presencia de L-NAME, los efectos del isoespintanol en la respuesta contráctil fueron suprimidos. Conclusiones: Estos resultados demuestran que el isoespintanol ejerce un efecto vasodilatador a través de vías NO dependientes y sugiere que la inhibición de la entrada de calcio puede ser el mecanismo involucrado.

Comparative effects of natural products on ischemia-reperfusion injury: relation to their "in vitro" antioxidant capacity / Efectos comparativos de productos naturales sobre la injuria por isquemia-reperfusión: relación con la capacidad antioxidante ¨in vitro¨

Our aim was to compare the effects of a non-alcoholic Cabernet-Sauvignon (CS), Malbec (M), Merlot blend (BW) red wine extracts, Ilex paraguariensis (Ip) or Ilex brasiliensis (Ib) aqueous extracts, Vaccinium meridionale Swartz (mortiño) fermented extract (FE), berry juice (BJ) and polyphenols-riched fractions of cocoa(PFC) against reperfusion injury. Isolated rat hearts were submitted to 20 min of global ischemia (GI) and 30 min of reperfusion (R). Other hearts were treated 10 min before GI and first 10 min of R with the extracts. CS, M, Ip, Ib and FE attenuated the myocardial dysfunction and oxidative damage whereas BW, BJ and PFC were ineffective. Paradoxically, PFC had the highest and BW similar scavenging activity than protective extracts. The beneficial actions were lost when nitric oxide synthase (NOS) was inhibited. These data indicate that in vitro antioxidant capacity of natural products is not primarily responsible for the cardioprotection being involved NO-dependent pathways.

Nuestro objetivo fue comparar los efectos de extractos no alcohólicos de los vinos tinto Cabernet-Sauvignon (CS), Malbec (M) y Merlot (BW), de extractos acuosos de Ilex paraguariensis (Ip) e Ilex brasiliensis (Ib), de un extracto fermentado (FE) de Vaccinium meridionale Swartz (mortiño), del jugo del mortiño (BJ) y de fracciones enriquecidas en polifenoles de cacao (PFC) sobre las alteraciones miocárdicas producidas por isquemia-reperfusión. Para ello, corazones aislados de rata fueron sometidos a 20 min de isquemia global (GI) y 30 min de reperfusión (R). Otros corazones fueron tratados 10 minutos antes de GI y durante los primeros 10 minutos de la R con los extractos. CS, M, Ip, Ib y FE atenuaron la disfunción contráctil postisquémica y el daño oxidativo mientras que BW, BJ y PFC fueron ineficaces. Paradójicamente, PFC mostró la más alta y BW similar actividad antioxidante que los extractos protectores. Las acciones beneficiosas fueron abolidas cuando la óxido nítrico sintasa (NOS) fue inhibida. Estos datos indican que la capacidad antioxidante in vitro de los productos naturales no es el principal responsable de la cardioprotección estando involucradas vías dependientes del NO.

Apoptotic activity of isoespintanol derivatives in human polymorphonuclear cells / Actividad apoptótica de derivados semisintéticos del isopentanol en células polimorfonucleares humanas

Background: Inflammation is a complex physiopathologic response to different stimuli. Recently, some pharmacological strategies have been proposed that could be used for resolution of inflammation by enhancing apoptosis of inflammatory cells. Objectives: To study in vitro apoptotic activity of isoespintanol [ISO] and of two semi-synthetic derivatives, bromide isoespintanol [BrI] and demethylated isoespintanol [DMI], in human polymorphonuclear (PMN) cells. Methods: PMN were exposed to the different concentrations of ISO, BrI and DMI for 30 min in phosphate-buffered saline pH 7.4 containing 1 mg/mL glucose, 0.4 mM Mg2+, and 1.20 mM Ca2+. Viability was assessed by dimethylthiazol diphenyl tetrazolium bromide (MTT). To distinguish between the two modes of cell death, apoptosis and necrosis, we examined differences in morphological and biochemical changes of cells stained with annexin V- FITC (An) and/or propidium iodide (PI) using two different assays based on flow cytometry Results: The MTT assay revealed the ability of cells to reduce MTT salt to formazan. In the presence of BrI and DMI a significant concentration-dependent decrease of cell viability was observed. The annexin V- FITC binding assay showed a high proportion of apoptotic cells for those treated with BrI (An+/ PI- : 62.3 ± 8.2% vs. 2.1 ± 0.5% of control, P<0.05). The population of PMN treated with DMI produced the highest percentage (An+/IP+: 43.4 ± 5.2 % vs. 0.4 ± 0.3 % of control, P<0.05) of necrotic cells. Apoptotic nuclei were analyzed by PI staining. The cell population in the sub G0/G1 region represents cells with hypodiploidal DNA, an indicator of apoptosis. When cells were incubated with 50 and 100 µM of BrI, the cell population in the sub G0/G1 region increased, suggesting a dose-dependent increase in the population of apoptotic cells. The presence of the pan-inhibitor of caspases (Z-VAD-fmk) showed a significant reduction in cell population in the sub G0/G1 region, indicating less degradation of DNA. Conclusions: Bromide isoespintanol [BrI] induces an apoptotic process in PMN, mediated ­at least in part­ by activation of caspases, although this compound may probably act through other caspase-independent mechanisms as well.

Antecedentes: La inflamación es una respuesta fisiopatológica compleja generada por diferentes estímulos. Recientemente, se han propuesto nuevas estrategias farmacológicas que podrían ser utilizadas para conducir a la resolución de la inflamación mediante el aumento de la apoptosis de células inflamatorias. Objetivo: Estudiar la actividad apoptótica in vitro del isopentanol [ISO] y dos derivados semisintéticos ­bromuro de isoespintanol [BrI] e isoespintanol desmetilado [DMI] ­ en células polimorfonucleares humanas (PMN). Métodos: Las PMN fueron expuestas a diferentes concentraciones de los compuestos durante 30 min en una disolución salina tamponada con fosfato (pH 7,4). La viabilidad celular se evaluó utilizando el ensayo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difenil tetrazolio (MTT). Para distinguir entre los dos modos de muerte celular, la apoptosis y la necrosis, se examinaron las diferencias en los cambios morfológicos y bioquímicos de las células teñidas con anexina V (An) y/o yoduro de propidio (PI) usando dos técnicas de citometría de flujo. Resultados: Mediante el ensayo con MTT, se demostró que los compuestos BrI y DMI disminuyeron significativamente y de manera concentración-dependiente la viabilidad celular. El ensayo de unión con la anexina V-FITC mostró una alta proporción de células apoptóticas en las células tratadas con BrI (An+/PI- : 62,3 ± 8,2% versus 2,1 ± 0,5% del control, P<0,05). El análisis de núcleos apoptóticos se llevó a cabo a través de tinción con PI. La población de células en la región sub G0/G1 representa células con ADN hipodiploidal, que es un indicador de apoptosis. Cuando las células se incubaron con BrI, la población de células en la región sub G0/G1 aumentó, confirmando su mecanismo citotóxico. En presencia de un inhibidor de caspasas (Z-VAD-FMK), se observó una reducción significativa en la población celular en la región sub G0/G1, indicando una menor degradación del ADN. Conclusiones: El bromuro de isoespintanol [BrI], induce un proceso apoptótico en PMN que está mediado ­al menos en parte­ por la activación de las caspasas, aunque este compuesto probablemente podría actuar también a través de otros mecanismos independientes de las caspasas.

Actividad antioxidante del isoespintanol en diferentes medios / Antioxidant activity of Isoespintanol in different media

Se midió la actividad antioxidante del isoespintanol (2-Isopropil-3,6-dimetoxi-5-metilfenol), aislado de las hojas Oxandra cf xylopiodes, en diferentes modelos. Los resultados indican que el isoespintanol es un mejor reductor que el BHT en el ensayo FRAP. En los sistemas emulsificados decoloacion de B-caroteno y peroxidación lipídica inducida por Fe/ascorbato y en el ensayo cinético de DPPH, el isoespintanol y BHT tienen comportamientos antioxidantes similares. El BHT es un mejor atrapador de los radicales libres DPHH y ABTS. Isoespintanoly BHT no atrapan el radical superóxido y no inhiben significativamente la xantina oxidasa

Efecto de la suplementación dietética con ácido gama-linolénico sobre el crecimiento de un carcinoma de pulmón humano implantado en ratones atímicos / Effect of dietary supplementation with gamma-linolenic acid on the growth of a human lung carcinoma implanted in nude mice

Se estudió el efecto de una dieta suplementada con ácido gama-linolénico (18:3 n-6, GLA) sobre el crecimiento de un tumor mucoepidermoide de pulmón humano (HLMC) implantado en ratones atímicos y sobre la captación por el mismo de lipoproteínas de baja densidad humana marcadas con 99mTc (99mTc-LDL). Los ratones portadores de HLMC se dividieron en dos grupos experimentales, uno que recibió dieta control (dieta C) y el otro, dieta suplementada con GLA (dieta GLA), durante tres semanas. Se observó una marcada inhibición del crecimiento tumoral al finalizar el tratamiento. La dieta enriquecida en GLA indujo cambios en la composición en ácidos grasos totales del tumor y del plasma e hígado de los ratones huéspedes. Los tumores de los animales alimentados con ambas dietas captaron radiactividad de las 99mTc-LDL y no se observaron diferencias significativas en la relación entre la captación por el tumor y por el hígado y riñón de los animales huéspedes. Los resultados obtenidos utilizando este modelo experimental sugieren que el efecto inhibitorio del GLA sobre el crecimiento tumoral es independiente de la captación de LDL por parte del tumor.