Interaction of an opportunistic fungus Purpureocillium lilacinum with human macrophages and dendritic cells

Introduction Purpureocillium lilacinum is emerging as a causal agent of hyalohyphomycosis that is refractory to antifungal drugs; however, the pathogenic mechanisms underlying P. lilacinum infection are not understood. In this study, we investigated the interaction of P. lilacinum conidia with human macrophages and dendritic cells in vitro. Methods Spores of a P. lilacinum clinical isolate were obtained by chill-heat shock. Mononuclear cells were isolated from eight healthy individuals. Monocytes were separated by cold aggregation and differentiated into macrophages by incubation for 7 to 10 days at 37°C or into dendritic cells by the addition of the cytokines human granulocyte-macrophage colony stimulating factor and interleukin-4. Conidial suspension was added to the human cells at 1:1, 2:1, and 5:1 (conidia:cells) ratios for 1h, 6h, and 24h, and the infection was evaluated by Giemsa staining and light microscopy. Results After 1h interaction, P. lilacinum conidia were internalized by human cells and after 6h contact, some conidia became inflated. After 24h interaction, the conidia produced germ tubes and hyphae, leading to the disruption of macrophage and dendritic cell membranes. The infection rate analyzed after 6h incubation of P. lilacinum conidia with cells at 2:1 and 1:1 ratios was 76.5% and 25.5%, respectively, for macrophages and 54.3% and 19.5%, respectively, for cultured dendritic cells. Conclusions P. lilacinum conidia are capable of infecting and destroying both macrophages and dendritic cells, clearly demonstrating the ability of this pathogenic fungus to invade human phagocytic cells. .

Interação in vivo do fungo paecilomyces lilacinus, agente causal da hialohifomicose, com o modelo murino c57bl/6 / In vivo interaction of the fungus Paecilomyces lilacinus, causal agent of hyalohyphomycosis with the murine model C57BL / 6

Paecilomyces lilacinus é um fungo filamentoso, hialino, assexuado e agente causal da hialohifomicose. Esse fungo é considerado um patógeno emergente e oportunista capaz de infectar crianças, adultos imunossuprimidos, como também imunocompetentes. O presente trabalho objetivou estudar a resposta à infecção, in vivo, de camundongos C57BL/6, imunocompetentes e imunossuprimidos, frente a P. lilacinus. Dois isolados de origem humana do fungo foram avaliados quanto à virulência, tendo como critérios, sinais clínicos, sobrevivência, índice esplênico, lesões histológicas nos animais e reisolamento de células fúngicas viáveis do baço. Além disso, o perfil imunológico dos animais foi feito através da quantificação de células T CD4+ e CD8+ esplênicas, seus perfis de marcadores de ativação e memória em linfócitos T (CD25, CD69 e CD62L), e da avaliação de anticorpos no plasma contra epítopos de P. lilacinus...

Os resultados demonstraram que ambos os isolados fúngicos apresentaram características morfológicas compatíveis com a espécie e foram capazes de infectar os animais do grupo dos imunocompetentes e provocar a doença, com manifestações clínicas, no modelo imunossuprimido. Um dos isolados, proveniente de lesão cutânea, foi considerado mais virulento, pelos critérios avaliados, que o isolado proveniente de lesão subcutânea na região da tíbia. A avaliação imunológica mostrou diferenças na cinética de expressão de moléculas de ativação pelos linfócitos CD4+ e CD8+ dos animais inoculados com os dois isolados, sendo mais recente para o isolado da região tibial, e tardia para o isolado de pele. Foi possível também verificar que esse padrão se mantinha nos animais imunossuprimidos, mas com um grau de ativação aparentemente mais elevado do que nas células obtidas dos animais imunocompetentes. Com relação a avaliação da produção de anticorpos específicos contra o fungo, nossos dados sugerem que a imunossupressão não exerceu influência na resposta humoral, visto que ambos os grupos de animais, imunocompetentes e imunossuprimidos, inoculados com o fungo foram capazes de produzir anticorpos IgG específicos anti-P. lilacinus...