Ontogenia y algunas propiedades de la enzima &-Aminolevulico Dehidrasa de embriones de pollo: modelo para el estudio de la actividad porfirinogenica de drogas / Ontogenic and some property of the &-aminolevulinic dehydratase ezyme in the chick embryo: study model of the porphyrinoigenic of drugs activity

Con el objeto de desarrollar un modelo en embriones de aves para el estudio de la acción porfirinogénica de drogas, se realizaron estudios ontogénicos y físico-químicos en l saco vitelono (SV) e hígados de embriones de pollos, en función de los días de desarrollo embrionario. Se determinaron los niveles de la enzima &-Aminolevúlico dehidrasa (ALA-D) en ambos tejidos, encontrando en los dos un máximo de actividad específica a los 12 días de incubación, siendo en SV siempre mayor que en hígado. En el hígado, la actividad enzimática total, así como el contenido de proteínas totales y el peso del órgano, están de acuerdo con la tasa crecimiento y los cambios en su metabolismo general, durante el desarrollo embrionario. La actividad enzimática total SV presenta un máximo entre los 12 y 13 días de incubación, declinando durante la última semana. El contenido de proteínas totales, no varía durante la incubación. El peso seco aumente hasta el día 17 registrando luego una disminución, debido a la retracción del saco hacia el interior del embrión, Este cambvio puede apreciarse considerando el peso húmedo, debido a que el aumento de materiales adherentes en la yema dificulta su remoción. El pH óptimo resultó igual a 6,8 para ambos tejidos. Mostraron diferencias en cuanto a la termoestabilidad, que resulto mayor para la enzima de SV, copmo puede verse a través de sus energías de activación (Ea). La estabilidad térmica de la enzima SV se incrementó por protección del sitio activo o por el mantenimiento de sus grupos sulfhidrílicos reducidos. Estudios cinéticos revelan mayor afinidad por el sustrato porb la enzima de SV (Kmh= 0,29 mM y Kmsv= o,026 mM). El SV resulta una fuente atrayente para la caracterización de las enzimas cisólicas del camino biosintético del hemo, en vistas de proponber un modelo experimental útil para el ensayo de drogas porfirinogénicas y poder establecer así su modo de acción(AB)

Efectos de la intoxicación con haxaclorobenceno sobre la descarboxilación enzimatica de porfirinogenos hexa y penta-carboxilicos / Efects of the hexachlorobenzene intoxication over the enzimatic decarboxylation of the porphyrinogen hexa and penta carboxilase

La uroporfirinógeno decarboxilasa (URO-D) (porfinógeno carboxilasa E.C. 4.1.1.37) cataliza la descarboxilación del uroporfirinógeno lll a coproporfirinógeno lll. Este proceso tiene lugar a través de un camino preferencial en el senmtido de las agujas del reloj sobre la estructura del uroporfirinógeno lll (tanto en condiciones normales como patológicos). En mamíferos, la porfiria inducida por hexaclorobenceno (HCB), semejante a la porfiria cutánea tarda humana, esta asociada con daño hepático. Estos animales presentan disminución de URO-D hepática que coincide con la acumulación de porfirinas. Se utilizó como fuente de URO-D hígados de ratas de URO-D hígados de ratas Wistar hembras (150-180g) que recibieron diariamente HCB (1g/kg peso) por sonda gástrica (HCB) o no (N). Se estudió la descarboxilación de los porfirinógenos, ácidos carboxílicos libres, de las porfirinas sintetizadas en nuestro laboratorio, 1,3,8 trimetil-2,4,6,7- tetra-(2-metoxicarboniletil)-5-metoxi-carbonilmetil porfirina (pentageno abd) la 1,8-dimetil-2,4,6,7- tetra-(2-metoxicarboniletil)- porfirina (hexageno ad) por URO-D de hígados N y HCB en función de la concentración de ambos sustratos. El hexageno ad resultó el mejor sustrato por el criterio de Vmax/Km (Vmax/Km x 10 al cubo; hexageno ad (N): 560; (HCB): 37.5 y pentageno adb (N): 44.9; (HCB): 2.3). Experimentos con mezclas de hexageno ad y pentageno abd (a concentraciones totales finales de 1 a 2.5 uM y relaciones de hexageno ad: pentageno abd de 1:1 a 4:1 con URO-D (N) y (HCB) presentaron iguales proporciones de transformación de ambos porfirinógenos. Ni la concentración inicial ni las relaciones molares de ambos porfirinógenos en las mezclas, mostraron tener importancia en estos resultados, pese a los diferentes parámetros cinéticos encontrados cuando los porfirinógenos fueron sustratos únicos. Estos resultados indican que la presencia de ambos sustratos inducirían un reordenamiento conformacional en la URO-D que conduciría a iguales proporciones de descarboxilación de ambos porfirinógenos. El pentageno proveniente de la descarboxilación del hexageno permacería preferentemente unido a la estructura enzimática para mayor descarboxilación antes que ser liberado al medio