Gastroenterite aguda associada a variantes do Norovírus GII. 4 / Acute gastroenteritis associated with norovirus gii. 4 variants

ABSTRACT BACKGROUND: Norovirus (NoV) is an important etiologic agent of acute gastroenteritis and infects individuals of all ages, especially children in Brazil and worldwide. NoV GII.4 was the most prevalent genotype worldwide because of your extensive genetic diversity. In Brazil, especially in the Northeast, few studies have been developed for identify and molecularly characterize NoV. OBJECTIVE: The present study aimed to detect and describe the molecular epidemiology of NoV associated with acute gastroenteritis. METHODS: The viral RNA extracted from stool samples were subjected to Nested RT-PCR and the genotypes were determined by nucleotide sequences analysis. In total, 278 stool samples assisted at Aliança Hospital in the city of Salvador, with acute gastroenteritis were examined, between March 2009 and July 2012. RESULTS: A high NoV rate (54.2%) was identified in children under 5 years of age. We detected the circulation of different NoV GII.4 variants in Salvador, during the study period as Den Haag 2006b, New Orleans 2009 and Sydney 2012. CONCLUSION: These findings reinforce the need to study the molecular epidemiology of NoV infections in acute gastroenteritis.

RESUMO CONTEXTO: Norovírus (NoV) é o agente etiológico mais importante nas gastroenterites agudas e infecta indivíduos de todas as idades, especialmente crianças no Brasil e no mundo. O NoV GII.4 é o genótipo mais prevalente em todo o mundo devido a sua elevada diversidade genética. No Brasil, principalmente no Nordeste, poucos estudos têm sido desenvolvidos a fim de identificar e caracterizar molecularmente o NoV. OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo detectar e descrever a epidemiologia molecular do NoV associado com gastroenterite aguda. MÉTODOS: RNA viral extraído a de amostras de fezes foi submetido a amplificação por Nested-RT-PCR e o genótipo determinado por analise da sequência de nucleotídeos. Um total de 278 amostras de pacientes atendidos no Hospital Aliança, na cidade de Salvador, com gastroenterite aguda foram examinados, entre março de 2009 a julho de 2012. RESULTADOS: Uma alta taxa de NoV (54,2%) foi identificado em crianças de até 5 anos de idade. Detectou-se a circulação de diferentes variantes de NoV GII.4 em Salvador, durante o período do estudo, tais como Den Haag 2006b, New Orleans 2009 e Sydney 2012. CONCLUSÃO: Estes achados reforçam a necessidade de maiores estudos para esclarecer a epidemiologia molecular das infecções por NoV em casos de gastroenterite aguda.

Isolamento e identificação do vírus da Artrite encefalite caprina, a partir do co-cultivo de células mononucleares do sangue com células de membrana sinovial de cabra / Isolation and identification of the caprine arthritis-encephalitis virus from the co-cultivation of peripheral blood mononuclear cells with goat membrane sinovial cells

O vírus da Artrite encefalite caprina é o agente causal de uma doença progressiva e debilitante em caprinos, em que as células da linhagem monócito/macrófago são as principais hospedeiras do vírus in vivo. Essas células estão presentes no colostro, no leite ou no sangue. Estudos demonstram que a replicação viral é dependente do nível de maturação ou diferenciação da célula monocítica, influenciando na sensibilidade de detecção do vírus. Neste estudo, utilizamos o cocultivo de monócitos/macrófagos com células de membrana sinovial de cabras, para o isolamento do vírus circulante no campo; a técnica de double nested PCR (dn PCR) dos co-cultivos e sangue, viabilizou a confirmação do isolamento viral, e a detecção direta do vírus no sangue. Através dessa técnica, detectou-se a presença do DNA proviral em animais soronegativos por Imunodifusão em Gel de Agarose (IDGA); esses achados confirmam que o tempo entre o inicio da infecção e o aparecimento de anticorpos no sangue é variável, facilitando a permanência de animais falsos-negativos no rebanho. Nas amostras processadas, tivemos uma divergência de resultados entre amostras sorologicamente positivas, entretanto, negativas por dn PCR, quando se utilizou a amplificação direta do sangue. Quanto ao cultivo de monócitos/ macrófagos in vitro e posterior co-cultivo com células de MSC obteve-se êxito pelo isolamento do vírus em quatro animais, havendo sido um deles soronegativo. O presente estudo demonstra o primeiro isolamento do vírus nos rebanhos do estado da Bahia, além da implementação da técnica de dn PCR, em co-cultivo de células.