Infección in vitro por diferentes cepas de Paracoccidioides brasiliensis / In vitro infection by different strains of Paracoccidioides brasiliensis

We analyzed the in vitro infection process by P. brasiliensis and the effect of extracellular factor(s) produced on monolayers of mammalian Vero cell lines. The yeast phase of four strains was studied: B339 (avirulent or slightly virulent), U, (intermediate virulence), 93745 and 63265 (both highly virulent). Strains of intermediate and high virulence had higher adherence at first contact (about 16). Strain B339 had a slower adherence at first contact (8) than the others during the same period. The production of extracellular proteases, soluble extracellular factor(s) and extracellular antigen gP43 showed no correlation with the in vitro physiopathogenicity of the analyzed strains. We demonstrate that the Vero model presented in this paper is a suitable system to study infection and virulence in vitro. We are currently assessing its usefulness as a tool for the analysis of the interaction between pathogen, host and antifungal agents.

Differential kinetic patterns for Shiga toxin production by Escherichia coli

El objetivo de este trabajo fue estudiar la cinetica de produccion de los distintos tipos de toxinas Shiga (Stx1; Stx2c) asociadas a Escherichia coli, en cepas de referencia y aisladas de pacientes con Sindrome Uremico Hemolitico (SUH). Las cepas fueron cultivadas en caldo Penassay e incubadas a 37§ con agitacion (200 rpm), tomandose muestras a distintos tiempos (1,5; 3; 9 y 24 horas) para determinar el crecimiento bacteriano y la citotoxicidad libre y asociada a celulas. Para Stx1, a las 3 horas de incubacion, la relacion entre la concentracion intracelular y la extracelular (ic/ec), estuvo comprendida entre 32 y 200 veces. A las 24 horas, ambas concentraciones se igualaron o (ec) resulto 2 veces mayor, dependiendo de la cepa estudiada. Sin embargo, tanto la actividad citotoxica libre como la asociada a celulas presentaron titulos muy bajos. Esto indico una perdida de actividad durante la fase estacionaria que podria deberse al cese de la sintesis de Stx1 o la accion de enzimas proteoliticas. Para Stx2, a las 3 horas (ic) fue igual o 2 veces superior a (ec), a las 34 horas (ec) fue 16 a 32 veces superior a (ic). Para Stx2c, (ec) aumento logaritmicamente con un rendimiento maximo a las 5 horas, permaneciendo luego constante hasta las 24 horas. En ese tiempo (ic) fue dos veces superior a (ec). El estudio de la cinetica de produccion de Stx por cepas de E. coli aisladas de pacientes con SUH demostro que correspondian al tipo Stx2. Estos resultados fueron confirmados por ensayos de citotoxicidad especifica en celulas Vero y por hibridacion con sondas geneticas. El tipo de Stx es considerado uno de los mayores factores de riesgo en la evolucion a SUH en pacientes infectados con E. coli enterohemorragicos. Por lo tanto, la disminucion de la citotoxicidad de Stx1, durante la fase estacionaria de crecimiento, podria explicar la mayor frecuencia de accion entre SUH y cepas de E. coli productoras de Stx2 en distintos paises, incluyendo Argentina