Diferentes patrones de circulación dentro de los subgrupos A y B del virus sincitial respiratorio humano en algunas provincias de Cuba / Different patterns of circulation in subgroups A and B of human respiratory syncytial virus in some provinces of Cuba

Se realizó la secuenciación nucleotídica de la región del tercio C-terminal de la proteína G de 37 muestras de exudados nasofaríngeos, de niños menores de 1 año provenientes de algunas provincias de Cuba durante 5 períodos epidémicos (1995-2000), para conocer los patrones de circulación de cepas del virus sincitial respiratorio humano; el cual se clasifica en 2 subgrupos antigénicos A y B, y cada uno contiene múltiples variantes. El subgrupo A circuló durante todos los años, el subgrupo B se detectó solamente durante el año 2000. Dentro del subgrupo A se observó la presencia de cepas con 2 tamaños diferentes de la proteína G (297 aa y 298 aa), mientras que para el subgrupo B fue observado un único tamaño (295 aa). El análisis filogenético permitió identificar 5 y 2 genotipos dentro de los subgrupos A y B, respectivamente. Los virus de Cuba se relacionaron filogenéticamente con cepas de otras partes del mundo. Dentro del subgrupo A se encontraron 2 cepas, las cuales fueron muy similares a la cepa prototipo Long. Casi todas las cepas del año 2000 de ambos subgrupos, se agruparon filogenéticamente con cepas que circularon en Sudáfrica durante ese mismo período

Isolation and identification of Adenovirus in hospitalized children, under five years, with acute respiratory disease, in Havana, Cuba

Nine Adenovirus (Ad) strains isolated in Cuba, from 128 nasopharingeal swab specimens of children below five years old, with acute respiratory diseases, during 1996 and 1997, were studied by restriction enzyme analysis of genomic DNA with two endonucleases BamH I and Sma I. All different fragment patterns were compared with the respective prototypes. The identified adenoviruses were Ad 1 (n=4), Ad 2 (n=1) and Ad 6 (n=4). Males were more frequently infected than females. The analysis of the occurrence of these Adenovirus strains of subgenus C revealed that Ad 1 and Ad 6 were the predominant serotypes in 1996 and in 1997, respectively

Antigenic and Genetic Characterization of Twenty-six Strains of Human Respiratory Syncytial Virus (Subgroup A) Isolated During Three Consecutive Outbreaks in Havana City, Cuba

Twenty-six human respiratory syncytial virus strains (subgroup A) isolated from three outbreaks in Havana City during the period 1994/95, 1995/96 and 1996/97 were analyzed to determine their antigenic and genetic relationships. Analyses were performed by monoclonal antibodies and restriction mapping (N gene) following amplification of the select region of the virus genome by polymerase chain reaction. All isolated strains were classified as subgroup A by monoclonal antibodies and they showed a restriction pattern NP4 that belonged to subgroup A. Thus the results obtained in this work, showed a close relation (100 percent) between antigenic and genetic characterization of the isolated strains in our laboratory. These methods permit the examination of large numbers of isolates by molecular techniques, simplifying the researchs into the molecular epidemiology of the virus

Variabilidad antigénica de cepas de virus sincitial respiratorio aisladas en ciudad de la Habana mediante ELISA utilizando anticuerpos monoclonales / Antigenic variance of strains of the espiratory sincitial virus isolated in Habana city by eans of ELISA using antibodies

Se realizó el estudio de caracterización y análisis de la variabilidad antigénica con un panel de 10 anticuerpos monoclonales que reconocen a epítopes lineales de la protéina G, a 15 cepas de Virus Sincitial Respiratorio aisladas en dos brotes ocurridos en Ciudad Habana entre los meses de octubre a enero (1994-1995) y octubre (1996), respectivamente. Para ello se utilizaron dos cepas de referencia: la Cepa Long y la Cepa A/Mon/3/88. El ELISA fue el método empleado para los ensayos. Los resultados mostraron la variabilidad de la proteína G entre los aislamientos y su relación antigénica con la cepa prototipo Long, además de confirmar que todas las cepas que habían circulado en estos períodos correspondían antigénicamente al Subgrupo A

Analysis of respiratory syncytial virus in clinical samples by reverse transcriptase-polymerase chain reaction restriction mapping

The aim of this study was to develop a polymerase chain reation (PCR) for detection of respiratory syncytial virus (RSV) genomes. The primers were designed from published sequences and selected from conserved regions of the genome encoding for the N protein of subgroups A and B of RSV. PCR was applied to 20 specimens from children admitted to the respirary ward of "William Soler" Pediatric Hospital in Havana City with a clinical diagnosis of bronchiolitis. The PCR was compared with viral isolation and with an indirect immunofluorescence technique that employs monoclonal antibodies of subgroups A and B. Of 20 nasopharyngeal exudates, 10 were found positive by the three assayed methods. In only two cases, samples that yielded positive RNA-PCR were found negative by indirect immunofluorescence and cell culture. Considering viral isolation as the "gold standard" technique, RNA-PCR had 100 per cent sensitivity and 80 per cent specificity. RNA-PCR is a specific and sensitive technique for the detection of the RSV genome. Technical advantages are discussed.

Aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa para la identificación del virus sincitial respiratorio / Application of the polymerase chain reaction to identify the respiratory syncytial virus

Se desarrolló la reacción en cadena de la polimerasa (RCP) para la identificación del virus sincitial respiratorio (VSR) con el uso de la cepa de referencia. La alta sensibilidad y la especifidad obtenidas en nuestro trabajo demuestran la utilidad de la RCP para la detección del genoma del VSR y su aplicación en el diagnóstico

Normalización de un ensayo de ultramicroELISA para la detección de anticuerpos IgG al virus sincitial respiratorio

Se normalizó un ensayo de ultramicroELISA de doble anticuerpo para la detección de anticuerpos IgG al virus sincitial respiratorio (VSR), para ello se dispuso de un anticuerpo monoclonal antiproteína F del VSR, producido por el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología de La Habana (CIGB). La utilización de este anticuerpo posibilitó la inclusión de preparaciones antigénicas crudas en lugar de fracciones purificadas, lo que disminuye notablemente la reactividad obtenida con el control de antígeno. Las condiciones del ensayo fueron determinadas mediante titulación cruzada y se obtuvo una sensibilidad de 97,2 %, un 91 % de coincidencia y una especificidad 83,3 % del UMELISA con respecto a la fijación del complemento. Los resultados pueden ser expresados cualitativamente o en títulos de anticuerpos empleando una sola dilución de suero (1:40) y una curva patrón.

An ultramicroELISA assay of double antibody for the detection of IgG antibodies to the respiratory syncytial virus (RSV) wasstandardized. It was used a RVS antiprotein F monoclonal antibody produced by the Genetic Engineering and Biotechnology Center (GEBC) in Havana. The use of this antibody allowed to include crude antigenic preparations instead of purified fractions, which caused a significant reduction of the reactivity obtained with the antigen control. The assay conditions were determined by crossed titration. It was obtained a sensitivity of 97.2 %, a coincidence of 91 %, and a specificity of 83.3 % of the UMELISA as regards the complement fixation. The results may be qualitatively expressed or by antibody titres using only one serum dillution (1:40) and a pattern curve.

Clasificacion en subgrupos de cepas del virus sincitial respiratorio aisladas de un brote en Ciudad de La Habana / Classification into subgroups of respiratory sincytial virus strains isolated during an outbreak in Havana City

Se detecto un alto numero de casos de enfermedades repiratorias agudas en ninos menores de 1 ano, ingresados en un hospital de Ciudad de La Habana. De 93 pacientes estudiados se obtuvieron 25 cepas del virus sincitial respiratorio. Los aislamientos virales fueron multiplicados en celulas HEP-2, y despues de observarse un efecto citopatico del 80 por ciento se clasificaron en subgrupos por la tecnica de immunofluorescencia indirecta del subgrupo A. Este tipo de estudio es el primero realizado en nuestro pais, lo cual nos permitio profundizar en la causa viral de estas enfermedades y conocer que durante el brote circulo el subgru-po A del virus sincitial respiratorio

Diagnóstico de la infección por Citomegalovirus en pacientes infectados por el VIH. Comparación de las técnicas de inmunofluorescencia indirecta y aislamiento viral / Diagnosis of cytomegalovirus infection in patients presenting with HIV infection. Comparison of indirect immunofluorescence technique and viral isolation

Se comparó la técnica para la detección de antígenos precoces fluorescentes (DAPF) con el método clásico de aislamiento viral en células de pulmón humano (PH). El estudio fue a partir de 85 muestras de orina provenientes de 64 pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia hunam (VIH). La técnica de DAPF presentó una sensibilidad del 91 por ciento , especificidad del 97 por ciento y coincidencia del 94 por ciento con respecto al aislamiento viral. La principal ventaja que presenta la DAPF con respecto al aislamiento viral es que brinda un diagnóstico acelerado de infección por Citomegalovirus en 48 a 72 h, además de ser muy fácil de ejecutar

Detection of cytomegalovirus in urine of HIV-infected patients by DNA-DNA hybridization comparison with virus isolation, immunofluorescence and immunoperoxidase

Immunofluorescence and immunoperoxidase test directed against early viral antigens, and DNA-DNA hybridization were compared with viral isolation for their abilities to detect Cytomegalovirus (CVM) in the urine of 89 HIV infected patients. From the 100 urine samples collected, 70 were found positive by at least one method. Considering viral isolation as the "gold standard" technique, immunofluorescence and immunoperoxidase had a sensitivity of 92.3% and88% respectively, with a specificity in both cases of 95%. DNA-DNA hybridization showed a sensitivity of 90% but with lower (60%) specificity. All of the three assays were effective in detecting CVM from urine and the technical advantage of each is discussed.