El caseinato de sodio y la caseína α inhiben la proliferación de la línea celular mieloide de ratón 32D clone 3 (32Dcl3) mediante el TNF-α / Sodium caseinate and alfa-casein inhibit proliferation of the mouse myeloid cell line 32D clone 3 (32Dcl3) via TNF-α

Resumen Introducción. Se ha demostrado que el caseinato de sodio y sus componentes (caseínas α, β y κ) inhiben la proliferación de la línea celular hematopoyética de ratón 32D clone 3 (32Dcl3) e inducen su diferenciación hacia macrófagos. Se sabe que la caseína α induce la producción de IL-1β y que esta última citocina inhibe la proliferación celular mediante la producción del factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), pero se desconoce si el caseinato de sodio y las caseínas inducen la producción de TNF y si este es el responsable de la inhibición de la proliferación. Objetivo. Evaluar si el caseinato de sodio y las caseínas α, β y κ inhiben la proliferación de la línea celular 32Dcl3 mediante la producción de TNF-α. Materiales y métodos. Se usaron diferentes concentraciones de caseinato de sodio y de las caseínas α, β y κ en las células 32Dcl3. Posteriormente, se evaluaron la viabilidad celular mediante una prueba con el MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol], la inducción de apoptosis con la citometría de flujo y la síntesis del TNF-α con el ELISA. Además, se hicieron pruebas de neutralización con anti-TNF-α en células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio y caseína α, y se evaluó la proliferación celular. Resultados. Se encontró que el caseinato de sodio y las caseínas α, β y κ reducían la proliferación de la línea celular 32Dcl3 sin afectar la viabilidad, y que solo el caseinato y la caseína α inducían la apoptosis y la liberación al medio de TNF-α. La proliferación de células 32Dcl3 tratadas con caseinato y caseína α se restableció al usar anticuerpos anti-TNF-α. Conclusión. El TNF-α fue el principal responsable de la inhibición de la proliferación en las células 32Dcl3 tratadas con caseinato de sodio o caseína α.

Abstract Introduction: Sodium caseinate (CS) and its components (alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein) have been shown to inhibit the proliferation of the mouse hematopoietic 32D clone 3 (32Dcl3) cell line and induce its differentiation into macrophages. It is well-known that alpha-casein induces IL-1β production and that this cytokine inhibits the proliferation via the production of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha), but it is not known if CS and the caseins inhibit the proliferation via TNF-alpha production. Objective: To evaluate if CS and alpha-casein, beta-casein and kappa-casein inhibit the proliferation on 32Dcl3 cell line via TNF-alpha. Materials and methods: We used different concentrations of CS, alpha-casein, beta-casein and kappa-casein in 32Dcl3 cells to evaluate cell proliferation. We assessed cell viability by MTT, induction to apoptosis by flow cytometry, and TNF-alpha synthesis by ELISA. Additionally, we performed anti-TNF-alpha neutralization assays on 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein and we evaluated proliferation. Results: The results showed that CS, alpha-casein, beta-casein, and kappa-casein reduced proliferation of the 32Dcl3 cell line without affecting the viability and that only CS and alpha-casein induced apoptosis and the release of TNF-alpha. The 32Dcl3 cells treated with CS and alpha-casein reestablished their proliferation by using anti-TNF-alpha antibodies. Conclusion: TNF-alpha was the main responsible for the inhibition of proliferation in 32Dcl3 cells treated with CS or alpha-casein.

El factor de células totipotenciales (stem cell factor; SCF) sostiene la supervivencia de progenitores de granulocitos en cultivos de médula ósea de ratón / Stem cell factor supports survival of granulocyte progenitors in mouse bone marrow cultures

La regulación de la proliferación y la muerte celular es crucial para la generación de células hematopoyéticas tanto in vitro como in vivo. El papel biológico del factor de células totipotenciales (Stem Cell factor; SCF) en el desarrollo del sistemahematopoyético no está bien definido. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la supervivencia, proliferación y diferenciación de células de médula ósea de ratón en cultivo en presencia de SCF. Para ello utilizamos la siguiente metodología: examen de la formación de colonias, MTT y el suicidio por timidina tritiada de las células de médula ósea los cuales revelaron que el SCF es un factor de supervivencia principalmente. Nuestros resultados muestran que el SCF mantiene a las células en un estado indiferenciado. Los progenitores de macrófagos y granulocitos (CFU-GM) sobreviven por siete días en presencia de SCF, y no se obtienen granulocitos ni macrófagos. La exposición de estas células a cultivos que contienen el factor estimulante de la formación de colonias de macrófagos y granulocitos (GM-CSF), que favorece la emergencia de macrófagos y granulocitos, provoca la proliferación y diferenciación terminal de ellas. Nuestros datos indican que el SCF induce la supervivencia de progenitores hematopoyéticos y en especial favorece la de progenitores granulocíticos sobre la de progenitores de monocitos. En ausencia de factores tardíos, tales como el GM-CSF, las células que progresan más allá del estadio CFU-GM pierden la expresión de c-Kit y mueren. De ahí que la ausencia de expansión celular en presencia de SCF sea debida a la supervivencia, y un balance entre una reducida proliferación y muerte celular. En contraste, la presencia de SCF y GM-CSF permite la continua supervivencia y expanción de los progenitores hematopoyéticos en cultivo y su posterior diferenciación en macrófagos y granulocitos. La producción de factor estimulante de colonia de granulocitos (G-CSF) e (interleucina-6 (IL-6), dos citocinas involucradas en la producción de granulocitos, en macrófagos generados con GM-CSF sugiere una inducción indirecta del GM-CSF durante la granulopoyesis. Finalmente, nuestros datos sugieren que las señales de supervivencia del CSF son cruciales durante el proceso de diferenciación de los granulocitos, apoyando el modelo determinístico

Biología de las células totipotenciales hematopoyéticas / Biology of hemopoietic stem cells

Todas las células que comprenden el sistema hematopoyético son derivadas de un precursor común, la célula totipotencial hematopoyética (CTH), la cual por procesos de proliferación y diferenciación da lugar a las células maduras que se localiza en la sangre y órganos linfohematopoyéticos. Para que se lleven a cabo los procesos de proliferación, supervivencia, apoptosis,inhibición y diferenciación desde las CTH hasta las células maduras funcionales, se requiere de la participación de proteínas denominadas colectivamente citocinas, las cuales promueven y regulan una o varias funciones celulares, e intervienen en una o varías etapas de diferenciación de las CTH. Por el empleo de diferentes técnicas de cultivo, se concluyó que el estroma de la médula ósea: fibroblastos, células endoteliales y adipocitos, tiene un papel importante. La participación de esta células radica en la producción de citocinas, así como en proveer de un soporte sobre el cual se asientan las CTH. Aunque podría parecer que las citocinas son los factores fundamentales para regular los procesos mencionados de las células hematopoyéticas, se han propuesto dos hipótesis principales para explicar cómo se lleva a cabo la hematopoyesis: el modelo determinístico y el modelo estocástico. Ambos modelos aportan pruebas para apoyar sus postulados; sin embargo, a la fecha decidir cuál modelo es el acertado es todavía materia de controversia. Aunque el estudio de las CTH plantea muchas preguntas de orden básico, en muchos laboratorios en el mundo se han comenzado a indagar sobre la aplicación de las CTH en terapia humana: su uso en transplantes, sustituyendo el trasplante de médula ósea completa y, aún en etapas experimentales, el empleado de las CTH para insertar genes que pudieran ser de importancia terapéutica en enfermedades deficitarias o incluso en el tratamiento contra el cáncer

Receptores Fc gamma en salud y enfermedad / Fc gamma receptors in health and disease

Los receptores para la porción Fc de las inmunoglobulinas G (Fc gamma R) forman parte de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresan en diferentes tipos celulares y que por su peso molecula, afinidad y especificidad por ligandos, se clasifican en tres grupos (Fc gamma RI, Fc gamma RII y Fc gamma RIII). Además, ciertos polimorfismos genéticos son responsables de la expresión de isoformas que aumentan la heterogeneidad de cada grupo. Los Fc gamma R son tema de intensidad investigación: se conoce la organización de sus genes, propiedades bioquímicas y estructurales. Por otro lado, se sabe que funcionalmente lo Fc gamma R juegan un papel importante en la regulación de la respuesta biológicas generadas durante episodios inflamatorios (infección, por ejemplo), ya que actúan como conectores entre las respuestas inmune celular y humoral. En este artículo presentamos ejemplos donde destaca la participación de los Fc gamma R en funciones de regulación de la respuesta inmune, así como los mecanismos intracelulares que se activan cuando los Fc gamma R son entrecruzados por complejos antígeno-antícuerpo. También recibimos el efecto de citocinas y factores de crecimiento en la regulación de la expresión de los Fc gamma R, remarcando la importancia del posible empleo de éstos en situaciones clínicas en donde las alteraciones de sus niveless de expresión se asocian con ciertos padecimientos y enfermedades. Finalmente, se analiza la participación de los Fc gamma R como vía de entrada para agentes infecciosos tales como el VIH

Los factores de crecimiento hematopoyéticos estimulan la proliferación de células tumorales no hematopoyéticas / The hematopoietic growth factors induce the proliferation of non-hematopoietic tumoral cells

Objetivo. Evaluar el efecto de los factores de crecimiento hematopoyético mieloides (IL-3, G-CSF, GM-CSF y M-CSF) y linfoide (IL-2) sobre la proliferación de pitelios y fibroblastos normales, así como de líneas celulares tanto transformadas como provenientes de tumores malignos. Métodos. La proliferación celular fue evaluada por incorporación de cistal violeta cuantificada por espectrofotometría. Resultados. Todos los factores de crecimiento utilizados indujeron la proliferación de dos líneas epiteliales de origen tumoral (5637 y CaLo), así como de una transformada de origen fibroblástico (L-929). Mientras que en fibroblastos de pulmón y epitelios de riñón de ratón los factores mieloides indujeron la proliferación, la IL-2 careció de esta propiedad. Estos resultados sugieren que las células estromales (fibroblastos y epitelios) que se sabe presentan un contacto estrecho con las células hematopoyéticas en la médula ósea, son capaces de responder a los efectos proliferativos de factores mieloides generando así una interdependencia entre estos tipos celulares. Por otro laso, el hecho de que la IL-2 sólo indujera la proliferación de células transformadas y de origen tumoral, pero no de células normales, sugiere la existencia de un mecanismo de participación con la respuesta inmune por parte de estas células

Establecimiento y caracterización de la línea celular CaLo y del CLON Kalo, obtenidos a partir de un carcinoma de cervix, y efecto de IL-2, IL-3, GM-CSF, M-CSF, TNF-Ó E IFN-ç sobre su proliferación / Establishing and characterization of the CaLo cell line and KaLo clon, ontained from a cervix carcinoma and IL-2, IL-3, GM-CSF, M-CSF, TNF-Ó and IFN-ç on it's proliferation

En este trabajo se describe la caracterización morfológica, cromosómica y presencia de desmosomas de una línea celular (CaLo) derivada de una biopsia de cáncer cervicouterino. Nuestros resultados indican que CaLo posee una morfología típica de células epiteliales, una aneuploidia cromosómica con número modal de 58 y presencia de desmosomas de bida a la positividad en membrana para la presencia de desmogleína-1. A partir de CaLo también se aisló un clon llamado KaLo. esta clonación nos proporciona una evidencia del origen maligno de estas células. Ambos tipos celulares fueron cultivados en presencia de algunas citocinas recientemente empleadas en ciertos protocolos clínicos (TNF-Ó, IL-2. IL-3 GM-CSF, M-CSF e IFN-ç). Nuestros resultados demuestran un efecto inhibidor de la proliferación por parte de TNF-Ó, IL-3 y GM-CSF, mientras que con M-CSF e IFN-ç no se detectó efecto. Por otra parte, obresvamos un incremento en la proliferación celular en presencia de la IL-2. Estos resultados dan indicios de que el TNF-Ó, la IL-3 y el M-CSF pueden tener posibilidades de aplicación clínica por sus propiedades inhibidoras; mientras que ponen en evidencia el riesgo de utilizar in vivo la IL-2, pues activa la proliferación de células tumorales de cérvix, tal como se ha informado para algunos carcinomas de cabeza y cuello

Proliferación de leucocitos de sangre periférica en presencia de sueros de pacientes con cáncer cervicouterino e interleucina-2 recombinante / Proliferation of peripheral blood lymphocytes in presence of sera from patients with cervical cancer and interleukin-2

Diversos estudios han centrado su atención en el establecimiento de una técnica que permita activar y hacer responder de forma específica a linfocitos del paciente contra su propio tumor. Esto se ha conseguido en ocasiones activando linfocitos con mitógenos endógenos, como la interleucina-2 (IL-2). Sin embargo, se ha encontrado que algunos tumores secretan al torrente sanguíneo factores inhibidores de este tipo de respuesta inmune. Con la finalidad de determinar si las células de cáncer de cérvix (CaCu) secretan al torrente sanguíneo factores inhibidores de la respuesta proliferadora de linfocitos, en este trabajo se utilizaron sueros de 12 pacientes con CaCu en cultivos de leucocitos de sangre periférica (LSP). Para evaluar la posible inhibición de estos sueros en la activación mediada por la IL-2, se utilizaron tanto LSP de pacientes con CaCu como de donadores normales. Los resultados obtenidos muestran que in vitro no existe inhibición de la activación a la proliferación de LSP provenientes de pacientes con CaCu por la rIL-2, tanto en presencia de sueros normales como de pacientes con CaCu. En consecuencia, estos resultados indican que las células malignas que constituyen al CaCu probablemente no secretan factores inhibidores de la activación linfocitaria y que los LSP de estos pacientes no han perdido la capacidad de ser activados por la IL-2.

Evidencia de que la célula blanco del factor estimulador de colonias de macrófagos y granulocitos es precursos de macrófagos / Evidence that the target cell of macrophage and granulocyte colony stimualting factor is the precursor of macrophages

En este trbajo se evaluó si el factor estimulador de colonias de macrófagos y granulocitos (GM-CSF) tiene al marcófago como única célula clanca. Para ello, se determinó la cinética de respuesta de precurores mieloides al GM-CSF en cultivos semisólidos. Los macrófagos son capaces de secretar el estimuladora de granulocitos (G-CSF), por tanto también se evaluó la posible secreción de G-CSF por los macrófagos inducidos con GM-CSF, Nuestros resultados indican que únicamente los precursores de macrófagos responden en forma temprana al GM_CSF, ya que al resembrar los grupos generados a los dos días se originan exclusivamente colonias de macrófago. Por otro lado el lisado de estas colonias promueve principalmente la formación de colinias granulocíticas. Finalmente se discute la posibilidad de que el GM-CSF sean en realidad un estimulador de macrófagos con capacidad de inducir la secreció de G-CSF, así como de la posible inexistencia de un precursor común demacrófagos y garnulocitos.

Quimioterapia antineoplástica y comportamiento en la recuperación celular, receptores Fc y C3 de médula ósea / Antineoplastic chemotherapy, recovery of bone marrow cells and Fc and C3 cellular receptors

La acción de los fármacos antibeoplásicos in vitro cultivo de médula ósea murina ha mostrado ser un buen modelo experimental para valorar los efectos citotóxicos en la proliferación mioloide y el daño a receptores Fc y F3 de granulocito-monocito. En este trabajo se expusieron los cultivos celulares a la acción de dósis medias terapéuticas en el plasma de Amethopterina, Ara-C, Vincristina y Doxorrubicina, mostrando daño a la proliferación celular y a receptores FC y C3, estadisticamente significativo, comparado con el testigo positivo. Se intentó además verla recuperación celular después de haber eliminado el quimioterápeutico del cultivo y volver a poner los estimulos para tal fin. Como resultado encontramos que la recuperación celular fue tan rápida en los cultivos donde cesó el efecto de la quimioterápia, como en el testigo positivo que no habia recibido medicamento pero sí los factores estimulantes (MCP), lo cual, comparado con el testigo nehativo que no habia recibido éstod, la diferencia fue significativa (p<0.05). Algo paredcido sucedió con los receptores a Fc Y C3 de granulocitos-monocitos .