Aislamiento y caracterización de macrófagos- células espusas a partir de aorta de un modelo de ateroesclerosis en conejo hipercolesterolémico / Isolation and characterization of macrophages-foam cells from aorta of hypercholesterolemic rabbit

Actualmente existe suficiente evidencia que sustenta que la ateroesclerosis es una patología en la cual están involucrados no sólo procesos de desequilibrio y aumento de lípidos, sino también procesos inflamatorios mediados por macrófagos-células espumosas. Estos hallazgos han sido encontrados en estudios llevados a cabo con animales de experimentación. Con el propósito de racionalizar la utilización de animales y de proponer un modelo biológico alterno en el que se puedan estudiar los mecanismos de patogenicidad que involucren tipos celulares relacionados con la ateroesclerosis, en el presente trabajo se estandarizó una técnica de aislamiento y cultivo de macrófagos-células espumosas, así como, los procedimientos para caracterizar los cultivos establecidos mediante la detección de esterasas no específicas. Para el análisis de la expresión de estas enzimas, se utilizó una técnica histoquímica y electroforesis en gel de poliacrilamida en condiciones no denaturantes. En la literatura revisada, este último método no ha sido empleado para evidenciar expresión de esterasas no específicas en leucocitos. El modelo biológico aportado por este trabajo puede ser usado para estudiar respuestas de los macrófagos activados y células espumosas relacionadas con la ateroesclerosis.

Obtención y caracterización inmunoquímica de una IgY anti-porphyromonas gingivalis / Immunochemical and characterization of a IgY Anti-gingival porphyromonas

El objetivo principal de este trabajo fue la producción y caraterización inmunoquímica de anticuerpos policlonales aviares dirigidos contra porphyromonas gingivalis (P.g). La bacteria fue cultivada en ambiente de anaerobiosis, se homogenizó y se realizaron electroforesis denaturantes para conocer su perfil. Con el homogenizado se inmunizaron dos gallinas Leghorn y se hizo la recolección de los huevos, tanto pre-inmunes, como a los 5 días de terminado el esquema de inmunización. Fueron determinadas las concentraciones de inmunoglobulina presentes, su peso molecular y la pureza del purificado mediante electroforesis no denaturante. Se realizaron pruebas con las diluciones mínimas de trabajo del homogenizado bacteriano (Antígeno), del anticuerpo anti P.g. y del conjugado anti IgY en Dot blot y finalmente un Western blot proporcionó información acerca de la sensibilidad de los complejos formados por proteínas reconocidas por los anticuerpos. Los resultados evidenciaron en primera instancia un alto rendimiento en el proceso de purificación de la IgY y adicionalmente un reconocimiento de alta especificidad y sensibilidad tanto en el Dot blot como en el Western blot, demostrando las grandes ventajas de usar modelos diferentes a los de mamíferos para la obtención de anticuerpos para la investigación, diagnóstico y terapéutica.