Efeito antibiofilme e citotoxicidade do hidróxido de cálcio associado ao óleo essencial de Melaleuca alternifolia / Antibiofilm effect and cytotoxicity of calcium hydroxide associated with the Melaleuca alternifolia essential oil

Objetivo: Avaliar e comparar os efeitos antimicrobiano e antibiofilme, e a citotoxicidade promovida pela associação do hidróxido de cálcio ao óleo essencial de Melaleuca alternifolia (MA), em diferentes concentrações, e ao propilenoglicol (PG). Métodos: As seguintes medicações compuseram os grupos experimentais: G1) HC/MA 1%; G2) HC/MA 5%; G3) HC/MA 10%; G4) HC/MA 20%; e G5) HC/PG. Solução salina 0,85% e meio DMEM serviram como controle nos testes antimicrobianos e de citotoxidade em fibroblastos do ligamento periodontal humano (FbLP), respectivamente. A atividade antimicrobiana (n = 12) foi avaliada por meio do teste de difusão em ágar. O efeito antibiofilme (n = 12) imediato das medicações foi avaliado por meio do teste de viabilidade bacteriana em biofilmes de 72 horas de E. faecalis, formados sobre discos de dentina e tratados por sete dias com as medicações. Após a coleta microbiológica do biofilme remanescente, os discos de dentina foram imersos em meio estéril e armazenados por mais sete dias, para a análise do efeito antibiofilme residual das medicações, quando nova coleta microbiológica foi realizada. A atividade metabólica de FbLP foi avaliada por meio do ensaio colorimétrico MTS (n = 9). Os valores médios dos halos de inibição, em mm, das unidades formadoras de colônia, e o percentual de atividade metabólica celular foram analisados pelos testes Kruskal-Wallis e post hoc Dunn (α = 5%). Resultados:Todas as medicações experimentais apresentaram superior ação antimicrobiana e antibiofilme comparadas ao controle, solução salina (p < 0,05), e mantiveram viáveis os FbLP, semelhante ao controle DMEM (p > 0,05). Conclusão: A associação do óleo essencial de Melaleuca alternifolia, nas concentrações de 1%, 5%, 10% e 20%, ao hidróxido de cálcio promoveu excelente ação antimicrobiana, antibiofilme e biocompatibilidade com fibroblastos, de forma semelhante à associação com propilenoglicol.

Aim:To evaluate and compare the antimicrobial and antibiofilm effect, as well as the cytotoxicity of calcium hydroxide (CH) associated with the Melaleuca alternifolia (MA)essential oil, in different concentrations, and with propylene glycol. Methods: The following medications composed the experimental groups: G1) CH/MA 1%; G2) CH/MA 5%; G3) CH/MA 10%; G4) CH/MA 20%; and G5) CH/PG. Saline solution and culture medium DMEM were used as a control in antimicrobial and cytotoxicity tests in human periodontal ligament fibroblasts (PDLF), respectively. The antimicrobial activity (n = 12) was evaluated by the disk-diffusion agar method. The immediate antibiofilm effect (n = 12) of the medications was evaluated for bacterial viability in 72 hours-biofilms of E. faecalis, formed on the dentin disc surface and treated for seven days with medications. After microbiological sampling of the remaining biofilm, the dentin discs were immersed in sterile culture medium and stored for another seven days, for analysis of the residual antibiofilm effect of the medications, when a new microbiological sampling was performed. PDLF viability was evaluated by MTS colorimetric assay (n = 9). The mean values of the inhibition halos, in mm, the colony forming units, and the metabolic cell activity percentage were analyzed by means of Kruskal-Wallis and post hoc Dunn (α = 5%) tests. Results:All of the experimental medications presented higher antimicrobial and antibiofilm effects, when compared to the saline solution control (p < 0.05), and maintained the PDLF feasible, similar to the DMEM control (p > 0.05). Conclusions:The association of the Melaleuca alternifolia essential oil, at concentrations of 1%, 5%, 10%, and 20%, with calcium hydroxide promoted an excellent antimicrobial and antibiofilm activity, and biocompatibility with fibroblasts, similarly to the association with propylene glycol.

The sensitivity of Demodex canis (Acari: Demodicidae) to the essential oil of Melaleuca alternifolia - an in vitro study / A sensibilidade do Demodex canis (Acari: Demodicidae) ao óleo essencial de Melaleuca alternifolia - um estudo in vitro

Abstract The essential oil of the Melaleuca alternifolia (Maiden & Betche) (tea tree oil) has been effective in previous studies, in the treatment of infestation by Demodex mites in humans. The present study aimed at evaluating the in vitro acaricidal effect of this herbal medicine on Demodex canis. For the parasitological examination, samples were collected from a dog's skin and examined using optical microscopy. Only samples with intact mites and with evident movement of chelicerae and tarsi were selected. Twenty-one samples were tested with the oil, in seven different concentrations: 100%; 50%; 25%; 12.5%; 6.25%; 5.0% and 3.13%. Three samples were tested with the positive control amitraz, and three with the negative control neutral shampoo. The interval between the time the solution was added and the moment the movement of the last mite ceased defined the survival time in the sample. By comparing the times at different concentrations and controls, the results showed that the higher the concentration of the oil, the more quickly its lethal effect occurred, and that the survival times in the controls were longer than in the different concentrations of melaleuca oil.

Resumo O óleo essencial de Melaleuca alternifolia (Maiden & Betche) (óleo da árvore do chá) foi eficaz em estudos anteriores, no tratamento da infestação por ácaros Demodex em humanos. O presente estudo teve por objetivo avaliar o tempo do efeito acaricida, in vitro, desse fitoterápico sobre Demodex canis. Para o exame parasitológico, amostras foram coletadas da pele de um cão e examinadas por microscopia óptica. Apenas amostras com ácaros íntegros e com evidente movimentação de quelíceras e tarsos foram selecionadas. Vinte e uma amostras foram direcionadas para teste com o óleo, em sete concentrações diferentes: 100%; 50%; 25%; 12,5%; 6,25%; 5,0% e 3,13%. Três amostras foram testadas com o controle positivo, amitraz, e três com o controle negativo, xampu neutro. O intervalo entre o momento em que a solução foi adicionada e o instante em que cessou o movimento do último ácaro definiu o tempo de sobrevivência na amostra. Os tempos nas diferentes concentrações e nos controles foram comparados. Quanto mais alta a concentração do óleo, mais rapidamente ocorreu seu efeito letal. Os tempos de sobrevivência nos controles foram maiores que nas diferentes concentrações do óleo de melaleuca.

Efeitos do extrato de própolis e do óleo de melaleuca na formação do biofilme e na desmineralização dental: estudo in situ

Avaliar os efeitos de soluções naturais na formação do biofilme e na prevenção da desmineraliza- ção dos dentes. Sujeitos e método: realizou-se um estudo piloto, in situ, com 12 voluntários, que utilizaram dispositivos de acrílico removível, contendo 4 blocos de dente cada. Os blocos de dente foram submetidos ao desafio cariogênico, quatro vezes ao dia, e testados com uma solução experimental, duas vezes ao dia, durante 14 dias. A amostra foi dividida em quatro grupos, com três indivíduos em cada grupo, os quais testaram as seguintes soluções: soro fisiológico (Grupo 1), clorexidina 0,12% (Grupo 2), óleo de melaleuca 0,2% (Grupo 3) e extrato de própolis 30% (Grupo 4). Ao final de 14 dias o biofilme formado foi coletado e semeado em três meios de cultura diferentes, os blocos de dente foram pesados em balança de precisão e testados quanto à microdureza superficial. Resultados: os resultados mostraram que houve um grande crescimento microbiano em todos os meios de cultura; houve uma tendência de perda de peso mineral nos blocos dos Grupos 1, 2 e 3, enquanto o grupo 4 mostrou uma tendência de ganho de peso. Na análise da microdureza superficial, observou-se uma tendência de menor resistência da dentina após o desafio cariogênico, em todos os grupos, comparados ao grupo controle que não foi submetido ao desafio cariogênico. Conclusão: o óleo de Melaleuca 0,2% não influenciou na formação de placa, na dureza superficial e no peso dos blocos, enquanto que o extrato de própolis mostrou uma tendência de interferir na formação de placa e no peso mineral dos dentes.

Analysis of pH and release of calcium of association between melaleuca alternifolia oil and calcium hydroxide / Análise de pH e liberação de cálcio da associação entre óleo de melaleuca alternifólia e hidróxido de cálcio

Introduction: The use of intracanal medications with antimicrobial properties is essential for decontaminating root canals during endodontic treatment. Calcium hydroxide is used for this because of its excellent properties. Melaleuca alternifolia oil has shown medicinal importance by demonstrating antifungal and bactericidal action against proven human pathogens. Objective: To evaluate the physical and chemical aspects such as pH and calcium release, of Melaleuca alternifolia oil associated with calcium hydroxide, during different time intervals. Material and method: Calcium hydroxide powder was added to vehicles to reach a concentration of 72mg / 0.1mL. Three groups were formed: Group I: Calcium Hydroxide + Distilled Water; Group II: Calcium hydroxide + Propylene Glycol; Group III: Calcium hydroxide + Melaleuca oil. The pH of each group was measured after time intervals of 10 minutes; 24 and 48 hours; 7, 15 and 30 days after tooling by a pH meter. Calcium release was analyzed by atomic absorption spectrometry equipped with a calcium hollow cathode lamp. Data were statistically analyzed by using the Kruskall-Wallis and Dunn test. Result: Group II showed high pH, similar to group III that remained uniform at 15 and 30 days. Calcium release that began after 24 hours, was similar in Groups II and III, and showed a peak release in 48 hours. Conclusion: The association of Melaleuca oil with calcium hydroxide showed good results in the pH and calcium release analyses, and showed action similar to that of propylene glycol + calcium hydroxide.

Introdução: O uso de medicações intracanais com propriedades antimicrobianas é fundamental para descontaminação dos canais radiculares durante o tratamento endodôntico. O hidróxido de cálcio é utilizado como medicação intracanal por apresentar excelentes propriedades. O óleo de Melaleuca alternifólia apresenta importância medicinal demonstrando ação antifúngica e bactericida comprovada contra patógenos humanos. Objetivo: Avaliar aspectos físico-químicos da associação do óleo de Melaleuca Alternifólia com hidróxido de cálcio, como: pH e liberação de cálcio durante diferentes períodos. Material e método: O pó do hidróxido de cálcio foi adicionado aos veículos até a concentração de 72mg/0,1mL. Foram divididos três grupos: Grupo I: Hidróxido de Cálcio + Água Destilada; Grupo II: Hidróxido de Cálcio + Propilenoglicol; Grupo III: Hidróxido de Cálcio + Óleo de Melaleuca. O pH de cada grupo foi medido após 10 minutos, 24, 48 horas, 7, 15 e 30 dias após a espatulação por um pHmetro. A liberação de cálcio foi analisada através da espectrometria de absorção atômica equipada com uma lâmpada cátodo para cálcio. Os dados foram analisados estatisticamente pelos testes de Kruskall-Wallis e Dunn. Resultado: O grupo II apresentou pH elevado, semelhante ao grupo III, permanecendo uniforme aos 15 e 30 dias. A liberação de cálcio iniciou em 24 horas, de forma semelhante nos grupos II e III e seu pico de liberação deu-se em 48 horas. Conclusão: A associação do Óleo de Melaleuca com hidróxido de cálcio apresentou bons resultados quanto à análise de pH e liberação de cálcio, demonstrando ação semelhante ao propilenoglicol + hidróxido de cálcio.

Efeito do óleo essencial de Melaleuca alternifolia e de seu principal componente Terpinen-4-ol sobre isolados clínicos de Candida albicans resistentes / Effect of Melaleuca alternifolia essential oil and its main component Terpinen-4-ol against clinical isolates of Candida albicans resistant

O óleo essencial de Melaleuca alternifolia (TTO) é um extrato de ação antifúngica e preventiva em escala farmacêutica ou cosmética. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do TTO e Terpinen-4-ol sobre isolados clínicos de Candida albicans. Este estudo foi realizado em três fases: 1- Identificação da CIM (Concentração Inibitória Mínima) e CFM (Concentração Fungicida Mínima) do TTO (0,25 a 2%) e Terpinen-4- ol (0,11 a 0,95%) sobre C. albicans na forma planctônica. 2- Análise das diferentes concentrações do óleo sobre biofilme monoespécie de C. albicans por meio da contagem das UFC/mL e avaliação da atividade metabólica das células pelo método colorimétrico de XTT. 3- Análise da ação inibitória das soluções de TTO e Terpinen-4- ol sobre biofilmes de C.albicans (cepa padrão e isolados clínicos) formados em corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável previamente cobertos com saliva humana, por meio do teste de XTT e por microscopia confocal de varredura à laser (MCVL). A nistatina (Sigma) foi utilizada como controle positivo. Os resultados mostraram que isolados de C. albicans planctônicos foram sensíveis ao TTO 1%, Terpinen-4-ol 0,47% e Nistatina 8 ?g/mL. As menores concentrações fungicidas para os isolados foram TTO 2 %, Terpinen-4-ol 0,95 % e Nistatina 16 ?g/mL. Quando analisado em biofilme através da quantificação (UFC/mL) e teste de XTT as concentrações de TTO 2 % e Terpinen-4-ol 0,95 % foram eficazes quando comparado ao controle, sendo que as amostras da genotipagem A2 e B1 foram as mais resistentes. Os resultados de MCVL mostraram que todos os biofilmes desenvolvidos em corpos de resina acrílica apresentaram-se semelhantes à ação da Nistatina. Os extratos avaliados apresentaram ação antifúngica para os isolados clínicos e podem ser considerados tratamento alternativo para paciente com candidíase.

The essential oil of Melaleuca alternifolia (TTO) is an extract of antifungal action and preventive in pharmaceutical or cosmetic scale. The aim of this study was to evaluate the efficacy of TTO and Terpinen-4-ol against clinical isolates of Candida albicans. This study was conducted in three phases: 1- Identification of MIC (Minimum Inhibitory Concentration) and CFM (Minimum Fungicidal Concentration) of TTO (0.25 to 2%) and Terpinen-4-ol (0.11 to 0.95 %) on C. albicans in planktonic form . 2- Analysis of different concentrations of oil on C. albicans biofilm single species by counting CFU/mL and evaluation of the metabolic activity of cells by XTT colorimetric method. 3- Analysis of the inhibitory action of TTO and Terpinen-4-ol solutions on C. albicans biofilms (standard strain and clinical isolates) formed in specimens of polymerizable resin acrylic microwave previously coated with human saliva , by means of the XTT test and confocal laser scanning microscopy (CLSM) . The nystatin (Sigma) was used as a positive control. The results showed that isolates of C. albicans planktonic were sensitive to TTO 1%, Terpinen-4-ol 0.47% and Nystatin 8 mg/mL. The smaller fungicidal concentrations for the isolates were TTO 2%, Terpinen-4-ol 0.95% and Nystatin 16 mg / mL. When analyzed by quantifying biofilm (CFU / ml) and XTT test, the concentrations TTO 2% and Terpinen-4-ol 0.95% were effective when compared to the control, and genotyping of samples A2 and B1 were more resistant. The CLSM results showed that all biofilms developed in bodies of acrylic resin were similar to the action of Nystatin. The extracts showed antifungal action for the clinical isolates and can be considered an alternative treatment for patients with candidiasis

Comparison of hand hygiene antimicrobial efficacy: Melaleuca alternifolia essential oil versus triclosan / Comparação da eficácia antimicrobiana na higienização das mãos: óleo essencial de Melaleuca alternifolia versus / Comparación de la eficacia antimicrobiana en la higienización de las manos: aceite esencial de Melaleuca alternifolia versus triclosan

OBJECTIVE: this study aimed to evaluate the efficacy of hand hygiene performed with two different soap formulations: 0.3% Melaleuca alternifolia essential oil versus 0.5% triclosan, and to compare them with two reference hygiene procedures: the official methodology procedure (soft soap) versus the draft version of the procedure (soft soap + propan-2-ol). METHOD: using the European EN 1499 method, logarithmic reduction factors were determined for the number of colony forming units of Escherichia coli K12 before and after hand hygiene of 15 volunteer subjects, and compared using the one-tailed Wilcoxon test. RESULTS: referring to the soft soap, there was no difference between the performance of soap with 0.3% M. alternifolia and soap containing 0.5% triclosan. The soft soap + propan-2-ol proved to be more effective than the other hand hygiene procedures. CONCLUSION: studies to verify the therapeutic efficacy of essential oil in hand hygiene can improve adherence to this practice. .

OBJETIVOS: os objetivos deste estudo foram avaliar a eficácia da higienização das mãos, realizada com duas formulações diferentes de sabonetes: óleo essencial de Melaleuca alternifolia a 0,3% versus triclosan a 0,5%, e compará-las com duas higienizações de referência: procedimento da metodologia oficial (soft soap) versus procedimento da versão draft (soft soap+propan-2-ol). MÉTODO: utilizando-se a metodologia europeia EN 1499, foram determinados fatores de redução logarítmica do número de unidades formadoras de colônia de Escherichia coli K12, antes e após a higiene das mãos, de 15 sujeitos voluntários e comparados pelo teste de Wilcoxon unicaudal. RESULTADOS: tomando como referência o soft soap, não houve diferença entre o desempenho do sabonete com M. alternifolia a 0,3% ou sabonete contendo triclosan a 0,5%. O soft soap+propan-2-ol demonstrou ser mais eficaz em relação aos demais procedimentos de higienização das mãos. CONCLUSÃO: estudos que verifiquem a eficácia terapêutica de óleo essencial na higienização das mãos podem melhorar a adesão a essa prática. .

OBJETIVOS: este estudio objetivó evaluar la eficacia de la higienización de las manos realizada con dos fórmulas diferentes de jabones: aceite esencial de Melaleuca alternifolia al 0,3% versus triclosan al 0,5%, y compararlas con dos higienizaciones de referencia: procedimiento de la metodología oficial (soft soap) versus procedimiento de la versión draft (soft soap + propan-2-ol). MÉTODO: utilizando la metodología europea EN 1499, fueron determinados factores de reducción logarítmica del número de unidades formadoras de colonia de Escherichia coli K12 antes y después de la higiene de las manos de 15 sujetos voluntarios y comparados por el test de Wilcoxon de una sola cola. RESULTADOS: Tomando como referencia el soft soap, no hubo diferencia entre el desempeño del jabón con Melaleuca alternifolia al 0,3% o jabón conteniendo triclosan al 0,5%. El soft soap + propan-2-ol se demostró más eficaz en relación a los demás procedimientos de higienización de las manos. CONCLUSIÓN: estudios que verifiquen la eficacia terapéutica de aceite esencial en la higienización de las manos pueden mejorar la adhesión a esa práctica. .

Avaliação comparativa ?in vivo? da eficácia do óleo de melaleuca, clorexidina e listerine sobre streptococcus mutans e microrganismos totais na saliva / ?In Vivo? Comparative Evaluation of the Efficacy of Melaleuca Oil, Chlorhexidine and Listerine against Streptococcus mutans and Total Microorganisms in Saliva

Objetivo: Comparar a eficácia dos enxaguatórios bucais: clorexidina 0,12%, Listerine e óleo de Melaleuca Alternifolia 0,5% e 2% sobre os níveis salivares de Streptococcus mutans e microrganismos totais. Métodos: O estudo foi um ensaio clínico, controlado, duplo cego e emparelhado. Para tanto foram selecionados 26 voluntários com idade entre 21 - 35 anos. Foi coletada de cada participante, no baseline, a quantidade de 1 mL de saliva não estimulada, 1 e 15 min após os bochechos com as seguintes soluções: água destilada estéril, digluconato de clorexidina 0,12%, Listerine (©Johnson & Johnson do Brasil), Melaleuca Alternifolia (Sigma-Aldrich St Louis, MO, USA) nas concentrações de 0,5% e 2%. Os participantes fizeram uso de todos os enxaguatórios bucais pesquisados, com intervalo de 15 dias entre cada solução. Imediatamente após o bochecho, foi coletada a saliva e realizadas as diluições seriadas, seguidas de plaqueamento em meio de cultura Agar sangue para o crescimento de microrganismos totais e SB-20 (Agar Sacarose Bacitracina) para S. mutans, mantidos por 48h a 37°C em microaerofilia. Após o período de incubação, as colônias foram contadas e transformadas em unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Resultados: A clorexidina mostrou ação antimicrobiana na redução dos microrganismos totais e S. mutans, enquanto a ação do óleo Melaleuca Alternifolia 0.5% foi semelhante à água destilada. O listerine e o óleoMelaleuca Alternifolia 2% apresentaram redução microbiana, respectivamente, de 11% e 9% para microrganismos totais, entretanto para S. mutans o listerine reduziu os níveis em 20% e o óleo Melaleuca Alternifolia 2% em 11%. Conclusão: O bochecho único com clorexidina 0,12% é eficaz na redução de níveis de microrganismos totais e S. mutans presentes na saliva. Ao comparar a clorexidina com o listerine e óleo Melaleuca Alternifolia 0,5% e 2% nas mesmas condições a eficácia da ação destas soluções é diminuída.

Objective: To compare the efficacy of the mouthwashes 0.12% chlorhexidine, Listerine, and 0.5% and 2% Melaleuca Alternifolia oil against the salivary levels of Streptococcus mutans and total microorganisms.Methods: This study was double-blind controlled and paired clinical assay. Twenty-six volunteers aged 21 to 35 years old were enrolled. At baseline, 1 mL of unstimulated saliva was collected from each subject, 1 and 15 min after mouthrinsing with the following solutions: sterile distilled water, 0.12% chlorhexidine digluconate, Listerine (©Johnson & Johnson do Brasil), 0.5% and 2% concentrations of Melaleuca Alternifolia (Sigma-Aldrich). The volunteers used all the evaluated mouthrinses with a 15-day interval between the solutions. Immediately after rinsing, saliva was collected and serial dilutions were performed, followed by plating in blood agar culture medium for growth of total microorganisms and SB-20 (Sucrose-Bacitracin agar) for growth of S. mutans, and incubation at 37 °C for 48 h in microaerophilia. After incubation, the number of colonies was counted and expressed as colony forming units (UFC/mL).Results: Chlorhexidine showed antimicrobial action by reducing total microorganisms and S. mutans, while the action of 0.5% Melaleuca Alternifolia was similar to that of distilled water. Listerine and 2%Melaleuca Alternifolia oil reduced total microbial counts by 11% and 9% respectively, and S. mutans by 20% and 11%.Conclusion: A single rinse with 0.12% chlorhexidine is effective in reducing the levels of total microorganisms and S. mutans present in saliva. Under the same testing conditions, Listerine and 0.5% and 2%Melaleuca Alternifolia oil presented lower efficacy than chlorhexidine.

Caracterização da ação modulatória de citocinas inflamatórias pelo óleo de Melaleuca alternifolia e seus componentes (terpinen-4ol e alfa-terpineol) em macrófagos humanos ativados lipopolissacarídeos de Porphyromonas gingivalis e Escherichia coli / Characterization of modulatory action of inflammatory cytokine by Melaleuca alternifolia oil and its components (terpinen-4ol and alpha-terpineol) in human macrophages activated lipopolysaccharide of Porphyromonas gingivalis and Escherichia coli

O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1β, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1β, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação 8 modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase

The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alpha-terpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of Porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1β, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1β, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1β, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by 10 inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase

Caracterização da ação modulatória de citocinas inflamatórias pelo óleo de Melaleuca alternifolia e seus componentes (terpinen-4ol e alfa-terpineol) em macrófagos humanos ativados por lipopolissacarídeos de Porphyromonas gingivalis e Escherichia coli / Characterization of modulatory action of inflammatory cytokines by Melaleuca alternifolia oil and its components (terpinnen-4ol and alpha-terpineol) in human macrophages activated lipopolysaccharide of Porphyromonas gingivalis and Escherichia coli

O óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) tem propriedades antimicrobianas e somado a isso, sugere-se que apresente características anti-inflamatórias. Este estudo investigou o potencial do TTO e seus componentes (terpinen-4-ol e alfa-terpineol) em modular citocinas e os mecanismos intracelulares participantes desta ação. Células monocíticas (U937) foram diferenciados em macrófagos com 40ng/mL de 12-miristato 13-acetato de forbol. A citotoxicidade dos óleos foi determinada com o ensaio de redução de Metil-tetrazolium (MTT). A habilidade em modular a produção das citocinas após o estímulo com LPS de Porphyromonas gingivalis (agonista de TLR2) e Escherichia coli (agonista de TLR4), foi estabelecida por meio de ensaios ELISA. Os efeitos dos compostos testados, na ativação de vias de sinalização intracelular, foram avaliados por western blot. As concentrações selecionadas pelo MTT foram: 0,015% e 0,004% para o TTO, 0,059% e 0,0073% para o terpinen-4-ol e 0,0064% e 0,0007% para alfa-terpineol. A influência do TTO na produção de citocinas foi mais marcante após estímulo de TLR4, com diminuição de IL-1ß, IL-6 e IL-10. O terpinen-4-ol reduziu a produção de INF-γ, IL-1ß, IL-6, IL-4, IL-10 e IL-17 após ativação tanto TLR4 quanto TLR2. O alfa-terpienol atua após ativação de TLR2 e 4 inibindo a produção de IL-1ß, IL-6 e IL-10. Nenhuma das vias analisadas (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) sofreram interferência dos óleos. O TTO tem ação modulatória inibindo produção de citocinas inflamatórias e o terpinen-4-ol é o seu maior componente ativo, entretanto este mecanismo não ocorre via inibição de NF-kB, ERK e p38 MAP-Kinase

The oil of Melaleuca alternifolia (TTO) has antimicrobial properties, coupled with this, it is suggested that it also has antiinflammatory characteristics. This study investigated the potential of TTO and its components (terpinen-4-ol and alphaterpineol) and cytokines in modulating the intracellular mechanisms that participate in this action. Monocytic cells (U937) were differentiated into macrophages with 40ng/mL 12-myristate 13-acetate phorbol. The olil cytotoxicity was determined with the reduction assay Methyl-tetrazolium (MTT). The ability to modulate cytokine production after stimulation with LPS of porphyromonasgingivalis (TLR2 agonist) and Escherichia coli (TLR4 agonist), was established by ELISA assays. The effects of the tested compounds, the activation of intracellular signaling pathways were evaluated by western blot. The concentrations selected by the MTT were 0.015% and 0.004% for the TTO, 0.059% and 0.0073% to terpinen-4-ol and 0.0064% and 0.0007% for alpha-terpineol. The influence of TTO in cytokine production was more marked after TLR4 stimulation, with decreased IL-1ß, IL-6 and IL-10. The terpinen-4-ol reduced the production of INF-γ, IL-1ß, IL-6, IL-4, IL-10 and IL-17 activation after both TLR4 as TLR2. The alpha-terpienol acts upon activation of TLR2 and four inhibiting the production of IL-1ß, IL-6 and IL-10. None of the analyzed pathways (NF-kB, ERK, p38 MAP-Kinase) suffered interference oils. The TTO has modulatory action by inhibiting the production of inflammatory cytokines and terpinen-4-ol is your greatest asset component however, this mechanism does not occur via inhibition of NF-kB, ERK and p38 MAP-kinase

Eficácia do óleo de Melaleuca alternifolia sobre bactérias cariogênicas e sua citoxicidade sobre cultura de queratinócitos / Efficacy of Melaleuca alternifólia oil against cariogenic bacteria and cytotoxicity on keratinocytes culture

Objetivo: O objetivo geral deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar in vitro o efeito do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) sobre as bactérias Streptococcus mutans (S.mutans) e Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) e seu possível efeito citotóxico sobre cultura de queratinócitos (HaCat). Materiais e Métodos: No estudo 1, a análise antimicrobiana foi avaliada em 3 fases: 1. Identificação da CIM e CBM do TTO nas concentrações de 0.25% a 2% sobre os microrganismos na forma planctônica, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo; 2. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em SSB (biofilme monoespécie) e DSB (biofilme multiespécie), formados em placa de cultura celular, tratados com diferentes concentrações de TTO, por meio de ensaio de XTT; 3. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em DSB formado sobre blocos de esmalte e dentina e submetidos às seguintes soluções: TTO 2%, clorexidina 0.12% (controle positivo) ou PBS (controle negativo) pelo tempo de 60 s, por meio de ensaio de XTT e análise das imagens obtidas por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). No estudo 2, a análise citotóxica de diferentes concentrações de TTO foi realizada sobre células HaCat usando diferentes tempos de contato (60 s, 2 h e 60 s, com recuperação de 24 h), por meio do ensaio de MTT para avaliação da atividade metabólica. Os dados obtidos apresentaram distribuição não normal e, portanto, foram utilizados os testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis e de Mann-Whitney. Todos os testes estatisticos foram considerados em nível de significância de 5%. Resultados: Na análise antimicrobiana, para ambos, S.mutans e L.acidophillus, os valores de CIM e CBM foram 0.5% e 1 %, respectivamente. Os valores de densidade óptica (DO) referentes ao metabolismo bacteriano, obtidos pelo ensaio de XTT, apresentaram diferença estatisticamente significante para S. mutans SSB, em concentrações de TTO de 0.25 a 2%, e para L. acidophillus SSB, na concentração de 2% (p<0.05). Entretanto não houve diferença estatisticamente significante para DSB (p>0.05). Quando DSB sob blocos de esmalte e dentina foram expostos a diferentes soluções, os valores de DO apresentaram diferença estatíticamente significante para o TTO 2% (p<0.05), porém com menor efeito de diminuição de metabolismo que a CHX 0.12% (p<0.05). As imagens obtidas por meio da MCVL concordam com os dados do ensaio de XTT, indicando que o TTO aumentou o número de bactérias mortas sobre a superfície dos blocos. Na análise da citotóxicidade, os valores de DO referente ao metabolismo celular, obtidos pelo teste de MTT, apresentaram diferença estatistica (p<0.05) entre os grupos controle negativo e todas as concentrações de TTO para exposição de 2 h e a partir da concentração de TTO 0.5% para as exposições de 60 s e 60 s com recuperação de 24 h. Ambos, controle positivo e CHX 0.12%, não apresentaram diferença estatistica (p>0.05). Conclusão: Apesar de apresentar baixo efeito antimicrobiano comparado a CHX 0.12%, o TTO mostrou ser capaz de reduzir o metabolismo de bactérias cariogênicas e não apresentar toxicidade em baixas concentrações e em curto tempo de exposição

Objective: The aim of this research, divided in two studies was to evaluate in vitro the effect of oil of Melaleuca alternifolia (TTO) against bacteria Streptococcus mutans (S. mutans) and Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) and its cytotoxic effect on keratinocyte cells (HaCat). Materials and Methods: In study 1, the antibacterial analysis was evaluated in 3 phases: 1. Identification of MIC and MBC of TTO (0.25% to 2%) on the microorganisms in the planktonic form using the broth microdilution technique; 2. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in SSB (monospecie biofilm) and DSB (multispecies biofilm) formed in cell culture plate and treated with different concentrations of TTO, using XTT assay; 3. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in DSB formed on blocks of enamel and dentin and submitted to the following solutions: 2% TTO, 0.12% chlorhexidine (positive control) or PBS (negative control) for 60 s, using XTT assay. Images obtained by confocal laser scanning microscopy (CLSM) were analyzed, too.. In study 2, the cytotoxic analysis of different concentrations of TTO was performed on HaCat cells at different contact times (60 s, 2 h, 60 s, with recovery of 24 h) was using the MTT assay to evaluate metabolic activity. The data showed non-normal distribution and therefore were used the nonparametric tests Kruskal-Wallis and Mann-Whitney. All statistical tests were considered at a significance level of 5%. Results: In the antibacterial analysis, for both S. mutans and L. acidophillus, the values of MIC and MBC were 0.5% and 1% respectively. The values of optical density (OD) for the bacterial metabolism, obtained by the XTT assay showed statistically significant for S. mutans SSB, at concentrations of TTO 0.25 to 2%, and for L. acidophillus SSB, at concentration of TTO 2% (p <0.05). However, there was no statistically significant difference in DSB (p> 0.05). When DSB on blocks of enamel and dentin were exposed to different solutions, the OD values showed statistically significant difference for the TTO 2% (p <0.05), but with less reduction of the metabolism than with CHX 0.12% (p <0.05). The images obtained by CLSM agree with the data from the XTT assay, indicating that the TTO has increased the number of dead bacteria on the surface of the blocks. In the analysis, of cytotoxity OD values or the cell metabolism, obtained by MTT test, showed significant differences (p <0.05) between the control and all concentrations of TTO for exposure of 2 h and for the concentrations between of 0.5% and 2% for TTO exposures of 60 s and 60 s to recovering 24 h. Both positive control and 0.12% CHX showed no statistical difference (p> 0.05). Conclusion: Although TTO results were not so good as the results with 0.12% CHX, TTO reduced the metabolism of cariogenic bacteria and presented low toxicity at low concentrations and in short exposition times

Curativo imediato com hidrogel à base de água, óleo de melaleuca alternifolia e emulsificantes após queimaduras / Burns immediate dressing with water, oil of melaleuca and emulsificants

Introdução: O Burnshield® (United Medical, Brasil) é uma opção de curativo imediato paraqueimaduras que visa à hidratação e ao resfriamento da ferida, sendo objetivo deste trabalhoavaliar sua eficácia. Método: Estudo experimental controlado cego, com 36 ratos Wistardivididos em 3 grupos de 12: (A) tratados com Burnshield®, (B) tratados com água correntepor 15 minutos e (C) não tratados. Metade dos animais de cada grupo foi sacrificada com 30minutos após queimadura, e a outra metade com 24 horas de evolução. O critério de avaliaçãofoi a maior profundidade de lesão encontrada em cada animal. Resultados: O grupo Capresentou as queimaduras mais profundas em relação aos demais, com 30 minutos e 24 horas.Não houve diferença entre os grupos A e B com 30 minutos, porém houve melhor resultadosignificativo no grupo A nas 24 horas de evolução. Conclusão: O Burnshield® mostroueficácia comparável à água corrente no tratamento inicial de queimaduras, com melhoresresultados depois de 24 horas de evolução. Apresenta como maior vantagem a praticidade,podendo ser usado enquanto o paciente é deslocado até o centro de tratamento especializado.

Introduction: Burnshield® (United Medical, Brazil) is an option of immediate dressing forburns aimed at hydrating and cooling the wound. Purpose: Investigate, histopathologically,the efficacy of Burnshield® as initial treatment for thermal burns. Method: Blind controlledexperimental study, with 36 Wistar rats divided into 3 groups of 12 rats: (A) treated withBurnshield®, (B) treated with running water for 15 minutes and (C) not treated. Half of theanimals of each group were sacrificed 30 minutes after the burn and the other half, within 24of evolution. The assessment criterion was the extension of lesion found in each animal.Results: Group C showed the deepest burns compared to the others, within 30 minutes and24 hours. There was no difference between groups A and B within 30 minutes; however, groupA showed better and significant results within 24 hours of evolution. Conclusion:Burnshield® showed efficacy comparable to running water at the initial treatment of burns,with better results after 24 hours of evolution. Its main advantage is its practicality, once itcan be used while the patient is carried up to the center of specialized treatment.