Genotipificación del gen RHD en ADN fetal libre en plasma de embarazadas RhD negativo / Genotyping of the RHD gene in free fetal DNA in plasma of RhD negative pregnant women

Objetivo: Determinar el grupo RhD fetal a través del estudio del gen RHD en ADN fetal que se encuentra libre en plasma de embarazadas RhD negativo. Método: Se analizó la presencia de los genes RHD, SRY y BGLO en ADNfl obtenido de plasma de 51 embarazadas RhD negativo no sensibilizadas, utilizando una qPCR. Los resultados del estudio genético del gen RHD se compararon con el estudio del grupo sanguíneo RhD realizado por método serológico en muestras de sangre de cordón, y los resultados del estudio del gen SRY fueron cotejados con el sexo fetal determinado por ecografía. Se calcularon la sensibilidad, la especificidad, los valores predictivos y la capacidad discriminativa del método estandarizado. Resultados: El gen RHD estaba presente en el 72,5% de las muestras y el gen SRY en el 55,5%, coincidiendo en un 100% con los resultados del grupo RhD detectado en sangre de cordón y con el sexo fetal confirmado por ecografía, respectivamente. Conclusiones: Fue posible deducir el grupo sanguíneo RhD del feto mediante el estudio del ADN fetal que se encuentra libre en el plasma de embarazadas con un método molecular no invasivo desarrollado y validado para este fin. Este test no invasivo puede ser utilizado para tomar la decisión de administrar inmunoglobulina anti-D solo a embarazadas RhD negativo que portan un feto RhD positivo.

Objective: To determine the fetal RhD group through the study of the RHD gene in fetal DNA found free in plasma of RhD negative pregnant women. Method: The presence of the RHD, SRY and BGLO genes in fetal DNA obtained from plasma of 51 non-sensitized RhD negative pregnant women was analyzed using qPCR. The results of the genetic study of the RHD gene were compared with the RhD blood group study performed by serological method in cord blood samples, and the results of the SRY gene study were compared with the fetal sex determined by ultrasound. Sensitivity, specificity, predictive values and discriminative capacity of the standardized method were calculated. Results: The RHD gene was present in 72.5% of the samples and the SRY gene in 55.5%, coinciding 100% with the results of the RhD group detected in cord blood, and with the fetal sex confirmed by ultrasound, respectively. Conclusions: It was possible to deduce the RhD blood group of the fetus through the study of fetal DNA found free in the plasma of pregnant women with a non-invasive molecular method developed and validated for this purpose. This non-invasive test can be used to make the decision to administer anti-D immunoglobulin only to RhD-negative pregnant women carrying an RhD-positive fetus.

Nuevas perspectivas en diagnóstico prenatal / New perspectives in prenatal diagnosis

Las anormalidades fetales afectan alrededor del 1 por ciento de los recién nacidos en todo el mundo y están asociadas con cerca del 20 por ciento de la mortalidad infantil durante el primer año de vida. El diagnóstico prenatal permite la detección temprana tanto de enfermedades del feto como de la madre, con el fin de brindar una mejor manera de afrontar la situación o iniciar medidas terapéuticas durante el embarazo o después del nacimiento, incluso en algunos países se permite cuestionar la continuación del embarazo. Este diagnóstico se realiza mediante análisis citológicos y genéticos con métodos invasivos y no invasivos. Los métodos invasivos, que incluyen amniocentesis, cordocentesis y biopsia de vellosidades coriónicas, permiten extraer el material para el análisis, pero generan en la madre ruptura de membranas, propiciando complicaciones como hemorragias, infecciones y abortos. Frente a esto, se ha venido proponiendo el uso de métodos no invasivos, entre ellos el estudio de células fetales como linfocitos, eritroblastos y trofoblastos, y ácidos nucleicos fetales (ADN y ARNm) que circulan en la sangre periférica de la madre, con el fin de evitar lesiones del feto o de la madre. En el presente artículo se pretende realizar una revisión de los métodos de diagnóstico prenatal, su aplicación y su desarrollo potencial.

Diagnóstico prenatal no invasivo: Ácidos nucleicos de origen fetal en sangre materna / Non invasive prenatal diagnosis: Fetal nucleic acid analysis in maternal blood

Las técnicas actuales de diagnóstico prenatal de enfermedades génicas y cromosómicas incluyen procedimientos invasivos que conllevan un pequeño, pero significativo, riesgo. Por muchos años se ha estudiado la posibilidad de utilizar células fetales en circulación materna; sin embargo, ha fracasado su implementación clínica debido a su escasez y persistencia luego del parto. Desde hace más de una década se detectó ADN fetal libre en sangre de embarazadas. Este sería de origen placentario e indetectable después del parto, y fuente de material fetal para el desarrollo de técnicas diagnósticas utilizando sangre materna. No obstante, la mayoría del ADN libre en circulación materna es de origen materno con una contribución fetal del 3% al 6% aumentando a lo largo de la gestación. Dado que los métodos actuales no permiten separar el ADN libre fetal del materno, las aplicaciones se focalizan en el análisis de genes no presentes en la madre, tales como secuencias del cromosoma Y, o gen RHD en madres Rh negativas, o mutaciones paternas o de novo. Asimismo, la detección de ARN fetal libre en sangre de embarazadas abrió la posibilidad de obtener información acerca de patrones de expresión génica de tejidos embrionarios y, utilizando genes que se expresan sólo en la unidad feto-placentaria, se podría establecer un control de presencia de material fetal, independiente del material genético de la madre. El presente trabajo describe las evidencias acerca del pasaje de ácidos nucleicos fetales a circulación materna, su aplicación actual en el diagnóstico prenatal y posibles usos futuros.

Current prenatal diagnosis of monogeneic and chromosomal diseases, includes invasive procedures which carry a small but significant risk. For many years, analysis of fetal cells in maternal circulation has been studied, however it has failed its clinical use due to the scarcity of these cells and their persistance after delivery. For more than a decade, the presence of cell-free fetal DNA in maternal blood has been identified. These fetal DNA fragments would derive from the placenta and are not detected after delivery, making them a source of fetal material for carrying out diagnosis techniques using maternal blood. However, the vast majority of cell free DNA in maternal circulation is of maternal origin, with the fetal component contributing from 3% to 6% and rising towards term. Available methodologies do not allow separation of fetal from maternal cell free DNA, so current applications have been focused on the analysis of genes not present in the mother, such as Y chromosome sequences, or RHD gene in RhD-negative women, or paternal or de novo mutations. Also, the detection of cell-free fetal RNA in maternal blood offers the possibility of obtaining information regarding genetic expression profiles of embrionic tissues, and using genes expressed only at the feto-placental unit, controls for the presence of fetal material could be established, regardless of maternal genetic tissue. The present article describes the evidences regarding the passage of fetal nucleic acids to maternal circulation, its current prenatal diagnosis application and possible future perspectives.

El diagnóstico prenatal no invasor: análisis de células y ADN fetal circulantes en la sangre materna / Non invasive prenatal diagnosis: analysis of circulating fetal DNA and cells in maternal blood

El diagnóstico prenatal temprano y no invasor por medio del análisis de células o ADN fetalescirculantes en la sangre materna es un área prometedora de la obstetricia moderna. Entre lasenfermedades que se pueden diagnosticar o cuyo comportamiento es posible predecir por estosmétodos se encuentran la preeclampsia, la restricción del crecimiento intrauterino y el partopretérmino. Algunas condiciones fetales que podrían detectarse son el sexo, ciertas anomalíascromosómicas y los defectos de un solo gen. Sin embargo, estas técnicas tienen limitaciones y hastael momento no se practican de manera rutinaria. Con esta revisión pretendemos darles a loslectores información actualizada sobre las principales técnicas para el estudio de las células y elADN fetales circulantes en la sangre materna y sus aplicaciones. Para tal fin se hizo una búsqueda enrevistas indexadas hasta 2008 en las bases Pubmed, Scielo y Latindex y se escogieron, a juicio de lasautoras, artículos especialmente relevantes.

Non invasive prenatal diagnosis: analysis of circulating fetal DNA and cells in maternal bloodPrenatal non invasive diagnosis by means of analyses of foetal DNA or cells circulating in maternalblood is one of the most promising areas of obstetrics. Among maternal diseases that could bediagnosed by these methods, or whose behaviour could be predicted, are preeclampsia, growthrestriction and preterm labour. Some foetal conditions that could be detected are sex, chromosomalanomalies and single-gene defects. However, these are complex and expensive techniques that arenot regularly performed in health care institutions. With this review we intend to provide the readerswith up to date information on the main techniques available for the study of circulating foetal cellsand DNA, and on their possible clinical applications. The review was based on a search for journalsindexed up to 2008 in Pubmed, Scielo and Latindex. Especially relevant articles were chosen by theauthors.