Natural killer activity of the spleen cells of Ehrlich tumor-bearing mice treated with Copaifera multijuga extract / Atividade natural killer das células esplênicas de camundongos portadores do tumor de Ehrlich tratados com extrato de Copaifera multijuga

AIMS: Copaifera multijuga Hayne oleoresin is commonly used in traditional medicine owing to its anti-inflammatory, antiseptic, antitumor, and antibacterial properties. However, little is known about the effect of the compounds from the bark of this plant. In this study, the immunomodulatory effect of the ethanolic extract of C. multijuga bark via natural killer activity of non-adherent spleen cells of Ehrlich tumor-bearing mice was evaluated. METHODS: Male Swiss mice were inoculated subcutaneously with 1×106 Ehrlich tumor cells (Ehrlich and Ehrlich/C. multijuga group) or phosphate buffered saline solution (control group and C. multijuga group) and treated orally daily with C. multijuga extract (200 mg kg-1, 0.1 mL per mouse, for the Ehrlich/C. multijuga and C. multijuga groups) or phosphate buffered saline solution (control group and Ehrlich group). The four experimental groups consisted in eight mice each and were organized in two sets, one treated for seven days and another treated for 14 days, totalizing 64 mice throughout the experiment. Twenty-four hours after the last oral administration, the mice were euthanized and the spleen tissue was isolated to prepare a non-adherent spleen cell suspension and to evaluate natural killer activity. Data are presented as the cell lysis percentage of Yac.1 target cells by non-adherent spleen cells. RESULTS: Treatment for seven days increased natural killer activity in the Ehrlich/C. multijuga group (21.20±8.89, p<0.05) compared to the control group (3.14±2.71, p<0.05); however, this effect was not maintained in the groups treated for 14 days (Control: 6.02±6.98, Ehrlich: 4.82±7.72, C. multijuga: 2.07±2.10, Ehrlich/C. multijuga: 2.01±1.63, p>0.05). CONCLUSIONS: Treatment for seven days with an ethanolic extract of C. multijuga bark enhanced the natural killer activity of non-adherent spleen cells from Ehrlich tumor-bearing mice.

OBJETIVOS: O óleo-resina de Copaifera multijuga Hayne é popularmente utilizado na medicina tradicional por suas propriedades antiinflamatória, antisséptica, antitumoral e antibacteriana. Entretanto, há poucos estudos sobre o efeito dos compostos obtidos da casca da planta. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito imunomodulador do extrato etanólico da casca da C. multijuga na atividade natural killer das células esplênicas não aderentes de animais portadores do tumor de Ehrlich. MÉTODOS: Camundongos Swiss machos foram inoculados subcutaneamente com 1×106 células do tumor de Ehrlich (grupo Ehrlich e Ehrlich/C. multijuga) ou com solução salina tamponada (grupo controle e C. multijuga) e tratados diariamente (gavagem) com extrato de C. multijuga (200 mg kg-1, 0,1mL cada um, para os grupos Ehrlich/C. multijuga e C. multijuga) ou com solução salina tamponada (grupo controle e grupo Ehrlich). Os quatro grupos experimentais consistiram de oito animais cada e foram organizados em dois conjuntos, um tratado por sete dias e outro tratado por 14 dias, totalizando 64 animais durante todo o experimento. Após 24 horas do término do tratamento, os animais foram eutanasiados para obtenção da suspensão de células esplênicas não aderentes e avaliação da atividade natural killer. Os resultados são apresentados como porcentagem da lise celular das células alvo Yac.1 pelas células esplênicas não aderentes. RESULTADOS: A análise dos resultados demonstrou que aos sete dias de tratamento a C. multijuga aumentou a atividade natural killer no grupo Ehrlich/C. multijuga (21,20±8,89, p<0,05) em comparação ao grupo controle (3,14±2,71, p<0,05), entretanto tal efeito não foi mantido nos grupos tratados por 14 dias (Controle: 6,02±6,98; EHR: 4,82±7,72; C. multijuga: 2,07±2,10; EHR/C. multijuga: 2,01±1,63, p>0,05). CONCLUSÕES: Os resultados demonstraram que o tratamento com o extrato etanólico da casca de C. multijuga favoreceu a atividade natural killer das células esplênicas não aderentes dos animais portadores do tumor de Ehrlich apenas aos sete dias de tratamento.

Daily intake of watercress causes inhibition of experimental Ehrlich tumor growth / O consumo diário de agrião causa inibição do crescimento do tumor experimental de Ehrlich

ABSTRACT Introduction: Increasing cruciferous vegetable intake has been associated with reduced risk of cancer. Experimental and epidemiological studies suggest that the watercress it is a cruciferous vegetable with high concentration of compounds with recognized antitumor activity. Objective: To investigate the effects of daily intake of an aqueous solution of watercress on the growth of the experimental Ehrlich tumor (EET). Methods: Swiss mice were divided into three groups A, B and C (n = 6). The animals from the control group (A) received, by gavage, 0.05 ml of saline throughout the experiment. The animals in group B, from the first day of the experiment, received daily, by gavage, 0.05 ml of watercress aqueous solution (0.5 g/ml). The animals from group C began, on day 21, daily intake of this solution. At day 21.2 × 106 EET cells were inoculated subcutaneously in the left footpad of all mice, and tumor growth was assessed by measuring the thickness of the paw. On day 42, the animals were sacrificed and their footpads removed for histopathological analysis. Results: The animals from groups B and C have showed a suppression of tumor growth and a small area of necrosis compared to the animals of group A. Conclusion: The present study demonstrated that the daily intake of aqueous solution of watercress was able to activate a suppression of the EET growth, probably due to the main compounds with antitumor properties present in this vegetable.

RESUMO Introdução: O aumento da ingestão de vegetais crucíferos tem sido associado à redução de risco de câncer. Estudos experimentais e epidemiológicos sugerem que o agrião é um vegetal crucífero que apresenta alta concentração de compostos com reconhecida atividade antitumoral. Objetivo: Investigar o efeito do consumo diário de solução aquosa de agrião no crescimento do tumor experimental de Ehrlich (TEE). Métodos: Camundongos Swiss foram separados em três grupos, A, B e C (n = 6). Os animais do grupo-controle (A) receberam, por gavagem, 0,05 ml de solução salina durante todo o experimento. Os animais do grupo B, a partir do 1º dia do experimento, receberam diariamente, por gavagem, 0,05 ml de solução aquosa de agrião (0,5 g/ml). Os animais do grupo C, no 21º dia, iniciaram a ingestão diária dessa solução. No 21º dia, todos os camundongos foram inoculados subcutaneamente no coxim plantar esquerdo com 2 × 106 células do TEE (0,05 ml), e o desenvolvimento tumoral foi avaliado pela mensuração da espessura das patas. No 42º dia, os animais foram sacrificados e suas patas, removidas para análise histopatológica. Resultados: Os animais dos grupos B e C apresentaram supressão do crescimento tumoral e menor área de necrose em relação aos animais do grupo A. Conclusão: O presente estudo demonstrou que a ingestão diária de solução aquosa de agrião foi capaz de causar supressão do crescimento do TEE provavelmente devido aos principais compostos presentes neste vegetal com propriedades antitumorais.

Use of raw Euphorbia tirucalli extract for inhibition of ascitic Ehrlich tumor / Avaliação do uso do extrato bruto de Euphorbia tirucalli na inibição do tumor ascítico de ehrlich

Objective: to evaluate the effect of the Euphorbia tirucalli hydroalcoholic extract (ETHE) on the development of Ehrlich Tumor, in its ascitic form. Methods: we intraperitoneally inoculated 15 Swiss mice with 10.44 x 107 cells of Ehrlich Tumor and divided them in two groups one day after: ETHE Group (eight mice), treated with a dosage of 125 mg/kg/day of EHTE for five days; and Control Group (seven mice), treated only with 0.9% isotonic saline solution over the same period. The treatment was done by gavage. Ten days after inoculation, four mice from each group were sacrificed for quantification of tumor cell number, ascitic fluid volume and bone marrow cell number. The remaining animals were maintained to evaluate survival. Results: The ascitic fluid volume and the tumor cell number were decreased in the ETHE group when compared with the control group, but with no statistical significance. On the other hand, survival was higher in the ETHE group, as well as the number of bone marrow cells. Conclusion: Treatment with ETHE after inoculation of Ehrlich Tumor decreases its development and increases survival and the bone marrow cellularity, thus reducing the myelosuppression present in the Ehrlich Tumor bearing mice.

Objetivo: avaliar o efeito do extrato hidroalcoólico de Euphorbia tirucalli (ETHE) sobre o desenvolvimento do tumor de Ehrlich em sua forma ascítica. Métodos: quinze camundongos Swiss foram inoculados via intraperitoneal com 10,44x107 células do tumor de Ehrlich e um dia depois foram divididos em dois grupos: Grupo ETHE (oito camundongos), tratados com a dose de 125mg/kg/dia de ETHE por cinco dias e Grupo Controle (sete camundongos), tratado apenas com 0,9% de solução salina isotônica em relação ao mesmo período. O tratamento foi realizado por gavagem. Dez dias após a inoculação, quatro animais de cada grupo foram sacrificados para a quantificação do número de células de tumor, do volume de fluido ascítico e do número de células da medula óssea. Os demais animais foram mantidos, para avaliar a sobrevivência. Resultados : o volume de líquido ascítico e do número de células tumorais foram menores no grupo ETHE quando comparado ao grupo controle, porém sem significância estatística. Por outro lado, a sobrevivência dos animais foi maior no grupo de ETHE, bem como, a quantidade de células de medula óssea. Conclusão: o tratamento com ETHE, após a inoculação do tumor, diminuiu o seu desenvolvimento e aumentou sobrevida, bem como, a celularidade da medula óssea, reduzindo assim, a mielossupressão presente nos animais portadores de tumor de Ehrlich.

Evaluation of acetone cyanohydrin effect in "in vitro" inativation of the Ehrlich ascites tumor cells / Avaliação do efeito de acetona cianidrina na inativação de células do tumor ascítico de Ehrlich "in vitro"

PURPOSE: To evaluate the antitumor effect of acetone cyanohydrin in Ehrlich ascites tumor cells in vitro. METHODS: The Ehrlich ascites tumor cells and lymphocytes were incubated with different concentrations of acetone cyanohydrin (0, 0.5, 1.0, 2.0, 10.0, 20.0 and 30.0 μg.mL-1), After 1, 2, 3, 4, 18 and 24 hours cell viability tests were performed by the trypan blue method. RESULTS: The results demonstrated a dose-dependent cytotoxic effect against the cells of Ehrlich ascites tumor. The concentrations of 20 and 30 μg.mL-1 was 100 percent of cell death in only 1 and 2 hours respectively. In lower doses of 0.5, 1.0 and 2.0 μg.mL-1 the cytotoxic effect was less intense, increasing gradually with time. CONCLUSIONS: At low concentrations of 0.5, 1.0 and 2.0 μg.mL-1, more than 90 percent of cell death was observed only after 24 hours of incubation which is the evidence that the tumor cell has the ability to poison cumulatively and irreversibly itself with the acetone cyanohydrin when compared with the results presented by human lymphocytes that the same doses and at the same time of incubation reached a maximum of 30 percent of cell death, suggesting an activity of rhodanese differentiated between the two cells.

OBJETIVO: Avaliar o efeito antitumoral da acetona cinidrina em células do tumor ascítico de Ehrlich in vitro. MÉTODOS: Células do tumor ascítico de Ehrlich e linfócitos foram incubadas com diferentes concentrações de acetona cianidrina (0, 0,5, 1,0, 2,0, 10,0, 20,0 e 30,0 μg.mL-1), depois de 1, 2, 3, 4, 18 e 24 horas foi verificada a viabilidade celular atravéz do método de azul de trypan. RESULTADOS: Os resultados demonstraram um efeito citotóxico dose dependente frente as células do tumor ascítico de Ehrlich. Nas concentrações de 20 e 30 μg.mL-1 ocorreu 100 por cento de morte celular em apenas 1 e 2 horas respectivamente. Nas doses mais baixas de 0,5, 1,0 e 2,0 μg.mL-1 o efeito citotóxico foi menos intenso, aumentando gradativamente com o tempo. CONCLUSÕES: Nas concentrações baixas de 0,5. 1,0 e 2,0 μg.mL-1, foi observado mais de 90 por cento de morte celular somente após 24 horas de incubação o que evidência a capacidade da célula tumoral de se intoxicar de maneira irreversível e acumulativa com a acetona cianidrina, quando comparadas com os resultados apresentados pelos linfócitos humanos que nas mesmas doses e nos mesmos tempos de incubação atingiram um máximo de 30 por cento de morte celular, o que sugere uma atividade de rodanase diferenciada entre as duas células.

Effect of L-Arginine and L-NAME treatments on polymorphonuclear leukocytes and mononuclear cells influx during tumor growth / Efeito dos tratamentos com L-Arginina e L-NAME sobre o influxo de leucócitos polimorfonucleares e células mononucleares durante o desenvolvimento tumoral

PURPOSE: Evaluate polymorphonuclear leukocytes (PMN's) and mononuclear cells (MN's) involvement in the Ehrlich´s solid tumor (ET) growth. METHODS: 90 Swiss mice were inoculated with 10(7) tumor cells (sc), distributed in three groups and treated once a day, via intraperitoneal (ip), with 0.1ml of diluent, L-Arginine (20mg/Kg) or L-NAME (20mg/Kg). After 7, 15 and 30 days of treatment, ten animals of each group were euthanized, the tumor mass was removed, processed and fixed for HE. Later, a morphometric analysis of the total area, parenchyma, necrosis, tumor stroma and PMN's leukocytes and MN's cells influx was performed. RESULTS: The L-Arginine treatment increased PMN's influx in the initial stage, whereas L-NAME reduced it. Our data suggests that NO effect on PMN's migration is dose-dependent. On the other hand, the MN´s cells influx was reduced by L-NAME treatment at all evaluated periods and at the same periods an increase in tumor growth was observed. CONCLUSION: At initial stages of tumor implantation, both PMN's leukocytes and MN's cells act together to control ET development.

OBJETIVO: Avaliar o envolvimento de leucócitos polimorfonucleares (PMN's) e células mononucleares (MN's) no crescimento do Tumor Sólido de Ehrlich (TE). MÉTODOS: 90 camundongos Suíços foram inoculados com 10(7) células tumorais (sc), distribuídos em três grupos e tratados uma vez ao dia, via intraperitoneal (ip), com 0.1ml de diluente, L-Arginina (20mg/Kg) ou L-NAME (20mg/Kg). Após 7, 15 e 30 dias, dez animais de cada grupo foram eutanasiados, a massa tumoral foi removida, processada e corada pela HE. Posteriormente, foi realizada análise morfométrica das áreas total, parênquima, necrose, estroma e influxo de leucócitos PMN's e células MN's. RESULTADOS: O tratamento com L-Arginina favoreceu o influxo de PMN's em períodos iniciais, enquanto o tratamento com L-NAME o reduziu. Nosso estudo sugere que o efeito do ON sobre a migração de PMN's é dose-dependente. Por outro lado, o influxo de células MN´s foi contido pelo tratamento com L-NAME em todos os períodos avaliados, mesmos períodos em que se observou um aumento no crescimento tumoral. CONCLUSÃO: Em fases iniciais do implante tumoral, ambos, leucócitos PMN's e células MN's, atuam juntos no controle do desenvolvimento do TE.

The anti-proliferative effects of the ethanolic extract of Uncaria tomentosa in Ehrlich ascitic carcinoma / Efeitos antiproliferativos do extrato etanólico de Uncaria tomentosa sobre o tumor ascítico de Ehrlich

Objective: to evaluate the antineoplasic effect of ethanolic extract of the vine of Uncaria tomentosa (cat:.. claw) on cell viability and survivorship of Ehr/ich tumor-bearing mice. Methods: 2,8x107 Ehr/ich tumor cells were inoculated in the peritoneum of 30 Swiss male mice distributed on 3 groups of 10 animals, which were observed for 30 days and received the following solutions by gavage : CGcontrol group, which received NaCl 0,9%; EG 100 - experimental group that received the ethano/ic extract on a 100 mg/Kg dosage; and EG 200 - experimental group that received the ethano/ic extract on a 200 mg/Kg dosage. After eleven days oftreatment, 1ml of ascitic liquid was withdrawn of each animal and cellular counting was made on a Neubauer chamber by optic microscopy using the Trypan blue stain. Results: there were reduction on tumor proliferation on EG 100 and 200 of 39 and 43,5%, respectively, and a slightly increase on survivorship of EG 100 compared to control gro/lp. Conc/usion: the ethanolic extract of the vine of Uncaria tomentosa had a statistically significant and dose-dependant anti-proliferative action on Ehrlich tumor. However, on the dosages and routes studied, there was no significant increase on survi vorship of the animais.

Objetivo: avaliar os efeitos antineoplásicos do extrato etanólico (EA) do cipó de Uncaria tomentosa (Unha de gato) sobre a viabilidade celular e sobrevida de camundongos portadores do Tumor Ascítico de Ehrlich (TA E). Método: inoculadas 2,8 x 107 células do TA E, por via intraperitoneal, em 30 camundongos suíços, machos, distribuídos e.m três grupos de dez animais cada, sendo observados por 30 dias e recebendo as seguintes soluções por gavagem, por onze dias, após a inoculação do tumor: GC - GrttpO controle, que recebeu solução salina de NaCl a 0,9%; GE 100 - Grupo experimental que recebeu o EA na dose de 100 mglKg; e GE 200 - Grupo experimental, que recebeu o EA na dose de 200 mglKg. Após onze dias de tratamento, foi retirado 1 ml de líquido ascítico de cada animal e feita a contagem celular sob microscopia óptica em câmara de Neubauer, utilizando a coloração de azul de Trypan. Resultados: Houve redução na proliferação do tumor dos animais dos grupos GE 100 e GE 200 da ordem de 39 e 43,5%, respectivamente, e um ligeiro aumento da sobrevida dos animais do grupo GE /00 em cerca de três dias, comparado ao grupo controle. Conclusão: o extrato alcoólico do cipó de Uncaria tomentosa exerceu ação antiproliferativa do TA E, de forma estatisticamente significativa e dose dependente. Porém, nas doses e vias mencionadas o extrato não aumentou de forma significativa a sobrevida dos animais.