Mycelial biomass cultivation of Lentinus crinitus / Crescimento micelial de Lentinus crinitus

Lentinus crinitus is a medicinal basidiomycete, little studied regarding the basic cultivation conditions, which is used in bioremediation and consumed by native Indians from the Brazilian Amazon. Also, it produces a fungal secondary metabolite panepoxydone that has been described as an essential regulator of the inflammatory and immune response. This study aimed to evaluate basic conditions of temperature, pH, and nitrogen concentration and source in the cultivation of L. crinitus mycelial biomass. In order to evaluate fungal growth temperature, 2% malt extract agar (MEA) medium, pH 5.5, was utilized from 19 to 40 °C. For pH, MEA had pH adjusted from 2 to 11 and cultivated at 28 °C. Urea or soybean meal was added to MEA to obtain final concentration from 0.5 and 16 g/L of nitrogen, pH of 5.5, cultivated at 28 °C. The best temperature growth varies from 31 to 34 ºC and the optimal one is 32.7º C, and the best pH ranges from 4.5 to 6.5 and the optimal one is 6.1. Protein or non-protein nitrogen concentration is inversely proportional to the mycelial biomass growth. Nitrogen concentrations of 2.0 g/L soybean meal and urea inhibit mycelial biomass growth in 11% and 12%, respectively, but high concentrations of 16.0 g/L nitrogen inhibit the growth in 46% and 95%, respectively. The fungus is robust and grows under extreme conditions of temperature and pH, but smaller adaptation with increasing nitrogen concentrations in the cultivation medium, mainly non-protein nitrogen.

Lentinus crinitus é um basidiomiceto medicinal consumido por índios nativos da Amazônia brasileira. Este fungo tem sido estudado quanto ao potencial de biorremediação de metais, mas ainda carece de estudos sobre às condições básicas de crescimento. L. crinitus produz panepoxidona - um metabólito secundário fúngico - descrito como regulador da resposta inflamatória e imune em células animais. Este trabalho teve como objetivo avaliar as condições básicas de temperatura, pH e concentração e fonte de nitrogênio para o crescimento micelial de L. crinitus. O fungo foi crescido em meio agar extrato de malte a 2% (MEA), pH 5,5 e mantido entre 19 e 40 °C. Para a avaliação de pH o MEA teve o pH ajustado de 2 a 11 e o crescimento foi realizado a 28 °C. As fontes de nitrogênio estudadas foram a uréia e o farelo de soja adicionado ao MEA para obter entre 0,5 a 16 g/L de nitrogênio, pH de 5,5, cultivado a 28 ° C. A melhor faixa temperatura para o crescimento micelial foi de 31 a 34 ºC com ótimo a 32,7 º C; a melhor faixa de pH de 4,5 a 6,5 e com ótimo de 6,1. A concentração de nitrogênio proteico ou não proteico é inversamente proporcional ao crescimento do fungo. Concentrações de nitrogênio de 2,0 g/L reduzem o crescimento da biomassa micelial em 11% e 12%, respectivamente e meios com nitrogênio de 16,0 g/L reduzem o crescimento em 46% e 95%, respectivamente. O fungo é robusto e cresce sob condições extremas de temperatura e pH, mas menor adaptação em meios com alta concentração de nitrogênio, principalmente não proteico.

Antifungal potential of crude extracts of Trichoderma spp / Potencial antifúngico de extratos brutos de Trichoderma spp

Abstract Antibiosis is the mechanism by which certain microorganisms respond to the presence of others, secreting compounds or metabolites capable of inhibiting or impeding their development. The crude extract of Trichoderma contains a mixture of secondary compounds, which may show antibiotic effect, and has been used for the prospect of this fungus for biological control and other industrial purposes. Faced with the increasing demand of agriculture for ecologically compatible alternatives for the management of diseases, this work aimed to investigate the spectrum of action of Non-Volatile Metabolites (NVMs) of Trichoderma isolates against different plant pathogenic fungi. The antagonistic potential of NVMs was evaluated through the incorporation method of the filtered liquid extract in PDA medium. The assays showed that all the NVMs produced inhibited the fungus Sclerotinia sclerotiorum similarly. On the other hand, strains CEN1245 and CEN1274, both belonging to the species Trichoderma brevicompactum, showed broad spectrum against Sclerotium rolfsii, Colletotrichum gloesporioides, Verticillium dahliae, Fusarium oxysporum and Cylindrocladium sp. The present study describes isolates producing non-volatile metabolites with broad spectrum of antifungal action, as well as pathogen-specific. The Trichoderma spp. NVMs obtained from different soil samples cultivated with vegetables, cassava and maize were efficient in inhibiting plant pathogenic fungi belonging to other patossystems, such as forest or fruit, which could increase their potential application in biological control of plant diseases. In addition, these antagonistic fungi should be studied in greater depth for the identification of bioactive molecules of industrial interest or in commercial formulations of products for biological control of plant pathogens.

Resumo Antibiose é um mecanismo pelo qual certos microrganismos respondem à presença de outros, secretando compostos ou metabólitos capazes de inibir ou impedir o seu desenvolvimento. O extrato bruto de Trichoderma contém uma mistura de compostos secundários e tem sido utilizado na prospecção deste fungo para o controle biológico e demais fins industriais. Diante da crescente demanda da agricultura por alternativas ecologicamente compatíveis para o manejo de doenças, este trabalho teve como objetivo investigar o espectro de ação de Metabólitos Não Voláteis (MNVs), produzidos por isolados de Trichoderma, contra diferentes fungos fitopatogênicos. O potencial antagônico dos MNVs foi avaliado através do método de incorporação do extrato líquido filtrado em meio BDA. Os ensaios mostraram que todos os MNVs produzidos inibiram de forma semelhante o fungo Sclerotinia sclerotiorum. Por outro lado, os isolados CEN1245 e CEN1274, ambos Trichoderma brevicompactum, mostraram um amplo espectro de ação, atuando contra Sclerotium rolfsii, Colletotrichum gloesporioides, Verticillium dahliae, Fusarium oxysporum e Cylindrocladium sp. O presente estudo descreve isolados que produziram metabólitos não voláteis com amplo espectro de ação antifúngico, assim como patógeno-específico. Os MNVs de Trichoderma spp. obtidos de diferentes amostras de solo cultivadas com vegetais, mandioca e milho, foram eficientes na inibição de fungos fitopatogênicos pertencentes a outros patossistemas, como os de espécies florestais e frutíferas, o que poderia aumentar sua potencial aplicação no controle de doenças de plantas. Adicionalmente, estes fungos antagonistas devem ser mais bem estudados para identificação de moléculas bioativas de interesse industrial ou formulação de produtos para o controle biológico de patógenos de plantas.

Efeitos da temperatura e regime de luz sobre Corynespora cassiicola e da temperatura e período de molhamento foliar no desenvolvimento da mancha-alvo em acerola / Effects of temperature and light regime on Corynespora cassiicola and of temperature and of leaf wetness period in development of target spot in barbados cherry

O presente estudo teve como objetivos: (i) determinar, in vitro, o efeito da temperatura sobre o crescimento micelial (10 a 35oC) e a germinação de conídios (10 a 45oC) de Corynespora cassiicola ; (ii) avaliar, in vitro , o efeito do regime de luz (luz contínua, fotoperíodo de 12 h e escuro) sobre o crescimento micelial, a esporulação e a viabilidade dos esporos de C. cassiicola ; e (iii) verificar, in vivo , a influência da temperatura (20 a 30oC) e da duração do período de molhamento foliar (4 a 48 h) no desenvolvimento da mancha-alvo em folhas de acerola. As temperaturas ótimas, estimadas a partir das equações, para o crescimento micelial e a germinação de esporos foram de 30 e 29oC, respectivamente. O regime de luz não afetou o crescimento micelial e a germinação dos esporos, entretanto, luz contínua favoreceu a esporulação, e a ausência de luz durante a produção dos esporos diminuiu sua viabilidade. Houve um incremento na área das lesões da mancha-alvo em folhas de acerola conforme a temperatura aumentou até 30oC. Foram necessárias 12 h de molhamento foliar para que a infecção e as lesões ocorressem.(AU)

The objective of this study were: (i) to assess, in vitro , the effect of temperature on mycelial growth (10-35oC) and spores germination (10-45oC); (ii) to evaluate, in vitro¸the effect of the light regime (continuous light, 12 h photoperiod and continuous darkness) on mycelial growth, sporulation and viability of the spores of C. cassiicola ;and (iii) to assess, in vivo,the effect of temperature (20-30oC) and the duration of leaf wetness (4-48 h) in the development of target spot in leaves of barbados cherry. The estimated maximum temperatures for mycelia growth and spore germination were 30 and 29oC, respectively. The light regime did not affect the mycelial growth and spores germination. However, continuous light regime favored the sporulation, and the absence of light during spore production decreased the spore viability. The target spot lesions area in barbados cherry leaves increased with the increment in the temperature up to 30oC. Twelve hours of leaf wetness were necessary for the infection and lesion development of target spot.(AU)

Cultivo do champignon em função da temperatura / Buton mushroom cultivation in function of temperature

O cogumelo Agaricus bisporus é um cogumelo de clima temperado que requer baixa temperatura para a indução da frutificação. Essa exigência limita o seu cultivo no Brasil nos meses mais frios do ano ou exige a utilização de ambiente controlado, onerando muito a produção. Por isso, este trabalho teve como objetivo avaliar a produtividade de diferentes linhagens em função da temperatura de cultivo após a indução da frutificação. Diferentes linhagens de A. bisporus foram avaliadas quanto ao efeito da temperatura sobre a colonização do composto e a produtividade do cogumelo. As temperaturas de 21 e 25°C foram utilizadas durante a colonização do composto e, após a indução da frutificação, durante o ciclo de cultivo. Para todas as linhagens testadas, a temperatura de 25°C proporcionou maior velocidade de colonização do composto, favorecendo ciclos de cultivo mais curtos. Além disso, após a indução da frutificação a 18°C, a manutenção do ambiente de cultivo a 25°C proporcionou maior produtividade, quando comparada ao cultivo a 21°C. Para a linhagem mais produtiva, os três primeiros fluxos foram responsáveis por mais de 50% da produção total. Portanto, para um cultivo comercial em que é necessário manter volumes constantes de produção, os ciclos de cultivo poderiam ser limitados a três fluxos de produção.

The Agaricus bisporus is a button mushroom that requires low temperature to induce fruiting. This requirement limits our cultivation in Brazil during the coldest months of the year and requires the use of controlled environment. Therefore, this study aimed to assess the productivity of different strains depending on the growth temperature after induction of fruiting. A. bisporus strains were evaluated for the effect of temperature on the colonization of compost and mushroom productivity. Temperatures of 21 and 25°C were used for the substrate colonization and after induction of fruiting crop cycle. For all strains tested, temperature 25°C gave a quickly colonization of the compound, favoring shorter production cycles. Furthermore, after induction of fruiting at 18°C, maintaining the culture environment at 25°C gave a higher productivity to contrast with culture at 21°C. For the most productive strain, the first three streams were responsible for over 50% of total production. Thus, for a cash crop where it is necessary to maintain constant volumes of production, crop cycles could be limited to three productions flows.

Efeito de fungicidas e herbicidas no controle de Sclerotinia sclerotiorum / Effect of fungicides and herbicides in the control of Sclerotinia sclerotiorum

O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito de fungicidas e herbicidas sobre o crescimento micelial de S. sclerotiorum, e o efeito preventivo e curativo de fungicidas no controle da podridão branca da haste da soja. No experimento in vitro, vinte e oito fungicidas e quatro herbicidas, na concentração de 100 µg.i.a.mL-1, foram incorporados ao meio BDA e avaliados sobre o crescimento micelial de dois isolados. No experimento em campo, os fungicidas fluazinam, epoxiconazol+piraclostrobina, tebuconazol+trifloxistrobina, tebuconazol, ciproconazol+propiconazol, procimidona, iprodiona, vinclozolin, protioconazol, azoxistrobina+ciproconazol e tiofanato metílico, foram testados preventiva e curativamente no controle da doença. Com exceção de azoxistrobina, clorothalonil, pencycuron, quintozeno, tiofanato metílico, carboxin+thiram e carbendazim, todos os outros fungicidas inibiram entre 98% a 100% do crescimento micelial dos dois isolados. Dentre os herbicidas, clorimurom-etílico reduziu em 79,4% e 84,1% o crescimento micelial dos isolados. Os fungicidas protioconazol, iprodiona, ciproconazol+propiconazol, fluazinam, vinclozolin e epoxiconazol+piraclostrobina proporcionaram menor severidade da doença quando aplicados preventivamente. Em aplicações curativas, apenas iprodione destacou-se na redução da doença.

This study evaluated the effect of fungicides and herbicides on mycelial growth of S. sclerotiorum, and the preventive and curative effects of fungicides on the control of soybean stem white rot. Twenty eight fungicides and four herbicides were used in the in vitro experiment, at the concentration of 100 µg a.i. mL-1, incorporated into the medium PDA, and evaluated on the mycelial growth of two isolates. The fungicides fluazinam, epoxiconazole+piraclostrobine, tebuconazole+trifloxistrobine, tebuconazole, ciproconazole+propiconazole, procimidone, Biosci. J., Uberlândia, v. 29, n. 6 , p. 1989-1996, Nov./Dec. 2013 iprodione, vinclozolin, protioconazole, azoxistrobine+ciproconazole and methyl thiophanate were tested in the field for the preventive and curative control of the disease. Except for the fungicides azoxistrobine, clorothalonil, pencycuron, quintozene, methyl thiophanate, carboxin+thiram and carbendazim, all others inhibited from 98% to 100% of the mycelial growth of both isolates. Among the herbicides, clorimurom-ethyl reduced from 79.4% to 84.1% the growth of both isolates. The fungicides protioconazol, iprodione, ciproconazole+propiconazole, fluazinam, vinclozolin and epoxiconazole+piraclostrobine provided lower disease severity in prventive application; in contrast, only iprodione was effective in curative effect of disease reduction.

Efeito de óleos essenciais de plantas medicinais sobre a antracnose do sorgo / Effect of essential oils of medicinal plants on the anthracnose of sorghum

Objetivou-se avaliar a fungitoxicidade in vitro dos óleos essenciais de capim-limão, citronela, erva-cidreira e hortelã-pimenta sobre o fungo Colletotrichum graminicola (Ensaio I) e o efeito in vivo desses óleos e do óleo comercial de nim sobre a antracnose do sorgo (Ensaio II). No Ensaio I avaliou-se, em cinco épocas (dois, quatro, seis, oito e dez dias de incubação), o crescimento micelial do C. graminicola sob cinco concentrações dos óleos essenciais (C1= 0,25 µL mL-1; C2= 0,50 µL mL-1; C3= 0,75 µL mL-1; C4= 1,0 µL mL-1; C5= 1,25 µL mL-1). No Ensaio II, para avaliar o efeito preventivo, utilizou-se cinco tipos de óleos (capim-limão, citronela, erva-cidreira, hortelã-pimenta e nim) em quatro concentrações (2,5, 5,0, 7,5 e 10,0 µL mL-1). Para o efeito curativo, foram utilizados os mesmos óleos do efeito preventivo em duas concentrações (2,5 e 5,0 µL mL-1). Os óleos essenciais de C. nardus e C. citratus foram os mais eficientes na redução do crescimento micelial de C. graminicola (Ensaio I). No Ensaio II, no efeito preventivo, tanto os óleos essenciais quanto as concentrações reduziram significativamente a severidade da doença, destacando-se os óleos de capim-limão, erva-cidreira e nim. No efeito curativo, os tratamentos reduziram a severidade, porém não apresentaram diferença significativa entre si.

The objective was to evaluate the in vitro fungitoxicity of essential oils of lemongrass, citronella, lemongrass and peppermint on the fungus Colletotrichum graminicola (Test I) and in vivo effects of these oils and neem oil trade on the anthracnose sorghum (Test II). In Test I was evaluated in five seasons (two, four, six, eight and ten days of incubation), the mycelial growth of C. graminicola under five concentrations of essential oils (C1= 0,25 µL mL-1; C2= 0,50 µL mL-1; C3= 0,75 µL mL-1; C4= 1,0 µL mL-1; C5= 1,25 µL mL-1). In Test II, to assess the preventive effect, we used five types of oils (lemongrass, citronella, lemon balm, peppermint and neem) at four concentrations (2,5, 5,0, 7,5 e 10,0 µL mL-1). For curative effect, we used the same oils of preventive effect in two concentrations (2,5 e 5,0 µL mL-1). The essential oils of C. nardus and C. citratus were the most effective in reducing mycelial growth of C. graminicola (Test I). In Test II, the preventive effect, essential oils and concentrations significantly reduced the severity of the disease, especially oils of lemongrass, lemon balm and neem. In the curative effect, treatments reduced the severity, but no significant differences between them.

Avaliação in vitro de diferentes métodos de análises de fungitoxicidade de óleos essenciais / Evaluation in vitro of different methods of analysis fungitoxicity of essential oils

Os problemas ambientais causados por fungicidas sintéticos têm elevado as buscas por métodos alternativos de controle de doenças de plantas. Objetivou-se avaliar o efeito do óleo essencial de capim citronela, sobre o fungo Rhizoctonia solani, em diferentes métodos de avaliação de fungitoxicidade in vitro. Foi utilizado delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial com quatro repetições, onde os fatores foram compostos por quatro métodos de avaliação da fungitoxicidade in vitro do óleo essencial (óleo essencial diluído em Tween 80 (0,5%) e incorporado ao meio de cultura BDA (batata, dextrose e ágar) ainda fundente; óleo essencial diluído em Tween 80 (0,5%) e distribuído na superfície do BDA; óleo essencial diluído em Tween 80 (0,5%) e distribuído em papel filtro fixado na superfície interna da tampa da placa de Petri; óleo essencial puro e distribuído na superfície do meio de cultura; e testemunha) e por cinco épocas de avaliação (2, 4, 6, 8 e 10 dias de incubação). Foram utilizados 0,25µL mL-1 do óleo do capim citronela em todos os tratamentos. Dos tratamentos avaliados o uso do óleo puro distribuído na superfície do meio de cultura foi mais eficiente na redução do diâmetro micelial em todas as avaliações. Neste método a taxa de crescimento micelial foi de 9, 02 mm dia-1, atingindo na última época de avaliação 79,77 mm.

Environmental problems caused by synthetic fungicides have increased the search for alternative methods of control of plant diseases. The objective was to evaluate the effect of essential oil of citronella grass, on the fungus Rhizoctonia solani, in different methods of in vitro fungitoxicity. We used a randomized design in a factorial design with four replications, where the factors were composed of four methods for assessing the in vitro fungitoxicity of the essential oil of citronella grass (essential oil diluted in Tween 80 (0.5%) and embedded in the culture medium PDA (potato dextrose agar) still melting, essential oil diluted in Tween 80 (0.5%) and distributed on the surface of the PDA; oil essential diluted in Tween 80 (0.5%) and distributed on filter paper attached to the inner surface of the lid of the Petri dish, pure essential oil and distributed on the surface of the culture medium, and control) and five evaluation periods (2, 4, 6, 8 and 10 days of incubation). Was used 0.25µL mL-1 of citronella oil in all treatments. Of the treatments evaluated the use of pure oil distributed on the surface of the culture medium was more effective in reducing the mycelial diameter in all evaluations. In this method the rate of mycelial growth was 9,02 mm day-1, reaching in last evaluation 79,77 mm.

Crescimento micelial de Lentinus sajor caju (Fr.) Fr. E Pleurotus spp. em diferentes resíduos agrícolas / Mycelial growth of Lentinus sajor caju (Fr.) Fr. and Pleurotus spp. in different agricutural wastes

O objetivo deste trabalho foi avaliar o desenvolvimento in vitro de três linhagens de cogumelos [Pleurotus ostreatoroseus Singer, Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél. e Lentinus sajor caju (Fr.) Fr.], reativados em meio de cultura BDA e cultivadas em meios de cultura formulados à base de resíduos agrícolas, como a palha de arroz, casca de mamona, casca de amendoim. No meio sólido formulado foi adicionado um disco de cultura no centro da placa, estas foram incubadas a 25oC até a colonização do meio. Avaliou-se, diariamente, o diâmetro da colônia e obteve-se, aos cinco dias de cultivo, a massa miceliana, sendo os resultados obtidos submetidos a análise de variância e teste de Tukey. O meio contendo extrato da casca de amendoim foi o mais adequado para o crescimento da linhagem utilizada de Lentinus sajorcaju, que colonizou 68,30% da placa de Petri. O meio contendo extrato de casca de mamona foi mais favorável ao crescimento de Pleurotus ostreatoreoseus que colonizou 40,01% da placa. A linhagem nativa de Pleurotus pulmonarius cresceu indiferentemente nos meios testados e teve maior crescimento comparada a linhagem de Pleurotus ostreatoroseus. A linhagem de Lentinus sajor-caju no meio contendo extrato da casca de amendoim, apresentou massa micelial seca significativamente maior que todas as demais. O crescimento micelial das linhagens de Lentinus sajor-caju e Pleurotus ostreatoroseus é influenciado pelo meio de cultivo, enquanto o da linhagem nativa utilizada não é influenciado pelos meios testados.

The aim of this study was evaluate the in vitro development of three mushrooms strains [Pleurotus ostreatoroseus Singer, Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél. e Lentinus sajor-caju (Fr.) Fr.], growing media based in agricultural wastes, such rice straw, castor bean seed husks and peanut shells. In the solid medium was added a culture disc in the center of a petri dish and than was incubated at 25oC even the completly colonization of the medium, the data obtained were submitted to variance analysis and Tukey test. Was evaluated, daily, the colony diameter and the mycelial mass obtained after five days of culture. The medium containing peanut husks extract provides the optimal development for the Lentinus sajor-caju strain, when an average of 68.3% of each petri dishes was colonized by mycelia. The medium containig castor bean seed shells were most favorable for Pleurotus ostreatoreoseus development, such colonizing 40,01% of each petri dishes. The wild strain of Pleurotus pulmonarius grew indifferently in the tested media and reaches the higher development when compared with Pleurotus ostreatoroseus strain. Lentinus sajor-caju demonstrate significantly more mycelial dry mass in the peanut shells medium when compared with the others strains. This result suggests that the mycelial growing of Lentinus sajor-caju and Pleurotus ostreatoroseus are influencied by the media. For the wild strain the mycelial growing its not significantly influencied by the tested media.

Atividade antifúngica de óleo e extratos vegetais sobre Sclerotinia sclerotiorum / Antifungal activity of vegetable oils and extracts against Sclerotinia sclerotiorum

Considerando a importância do mofo branco, causado pelo patógeno Sclerotinia sclerotiorum na cultura da soja (Glycine max) e a falta de estudos sobre alternativas de controle deste patógeno, este trabalho teve como objetivo estudar o efeito de óleos e extratos vegetais sobre o crescimento micelial de S. sclerotiorum. No experimento de óleos essenciais, concentrações de 25, 50, 75 e 100 µg de i.a mL-1 de azadiractina, obtida de nim indiano (Azadirachta indica A. Juss), foram estudadas em associação às doses de 0, 1/3, 1/6, 1/8 e 1/10 do óleo de Karanja (Pongamia glabra). Quanto ao experimento de extratos vegetais, estudou-se as espécies Aroeirinha (Schinus molle L.), Mentrasto (Ageratum conyzoides L.), Alfavaca (Ocimum gratissimum L.), Losna (Artemisia absinthium L.), Jambolão (Syzygium cumini (L.) Skeels), Arruda (Ruta graveolens L.), Mandioca (Manihot esculenta Crantz), Santa Bárbara (Melia azedarach L.) e Pimenta longa (Piper aduncum L.) na concentração de 30%. Óleos e extratos vegetais foram incorporados, separadamente, ao meio de cultura BDA e vertido em placa de Petri de 9 cm de diâmetro, na qual depositou-se um disco de BDA, contendo micélio do fungo. As placas foram incubadas à temperatura de 22 ± 3 oC e fotoperíodo de 12 horas. As avaliações consistiram em medições diárias do diâmetro da colônia, durante 48 horas. A maior inibição do crescimento micelial foi diretamente proporcional ao aumento das concentrações dos óleos de nim indiano e de Karanja. A concentração de azadiractina, correspondente a 100 µg de i.a mL-1 com 1/3 de óleo de Karanja foi a mais eficiente na redução do crescimento micelial, com 63% de inibição. Em relação aos extratos vegetais, o fruto de pimenta longa foi o mais promissor sobre a redução do crescimento micelial, com 43% de inibição.

Considering the importance of white mold, caused by the pathogen Sclerotinia sclerotiorum, to soybeans (Glycine max) and the lack of studies about alternative control ways of plant pathogens, this study evaluated the effect of vegetable oils and extracts on the mycelial growth of S. sclerotiorum. Concentrations of 25, 50, 75 and 100 µg a.i. mL-1 of azadiractine, obtained from neem (Azadirachta indica A. Juss), were evaluated associated with the doses of 0, 1/3, 1/6, 1/8 or 1/10 of Karanja (Pongamia glabra) oil in the experiment with essential oils. Vegetable extracts of the species Schinus molle L., Ageratum conyzoides L., Ocimum gratissimum L., Artemisia absinthium L., Syzygium cumini (L.) Skeels, Ruta graveolens L., Manihot esculenta Crantz, Melia azedarach L. and Piper aduncum L. were evaluated in the concentration of 30%. Oils and vegetable extracts were incorporated, separately, into PDA culture medium and poured in 9-cm diameter petri plates, over which a PDA disk containing mycelium of the fungus was placed. The plates were incubated at 22 ± 3 oC and 12 hours lighting. The evaluations consisted of daily measurements of colony diameter for two days. The greatest mycelial growth inhibition was directly proportional to the concentration increase of neem and Karanja oils. Azadiractin concentration corresponding to 100 µg a.i. mL-1 with 1/3 Karanja oil was the most effective on reducing mycelial growth, with 63% inhibition. Among the vegetable extracts, fruits of long pepper were the most promising for reducing mycelial growth, with 43% inhibition.

Atividade antimicrobiana de óleos essenciais no controle de alguns fitopatógenos fúngicos in vitro e no tratamento de sementes / Antimicrobial activity of essential oils on the in vitro control of some fungal phytopathogens and on seed treatment

Este trabalho verificou o efeito dos óleos essenciais (OE) extraídos de Eremanthus erythropappus (candeia), Cymbopogon martinii (palmarosa) e de Rosmarinus officinalis (alecrim) no crescimento micelial de alguns fitopatógenos fúngicos e no tratamento de sementes de milho, soja e feijão. No teste in vitro, alíquotas de 20, 40, 60, 100, 200, 500 e 1000 μL de cada um dos óleos essenciais foram distribuídas na superfície do meio de cultura. Posteriormente, discos de meio de cultura com micélio de Alternaria carthami, Alternaria sp. e Rhizoctonia solani foram transferidos para o centro de cada placa. O crescimento foi mensurado e calculada a taxa de inibição do crescimento micelial (ICM). Para verificar o efeito dos OE na germinação das sementes utilizou-se a aplicação deles por fumigação. Foi avaliada a percentagem de sementes germinadas e a incidência de patógenos nas sementes. Sobre o crescimento micelial, o óleo de palmarosa inibiu completamente todos os patógenos fúngicos, independentemente da concentração. Já os óleos de candeia e alecrim foram melhores quando foram adicionadas alíquotas superiores a 200 μL. Os óleos influenciaram diferentemente a germinação e a sanidade das sementes de milho, soja e feijão.

This study aimed to verify the effect of essential oils (EO) extracted from Eremanthus erythropappus ("candeia") Cymbopogon martinii ("palmarosa") and Rosmarinus officinalis (rosemary) on the mycelial growth of some fungal phytopathogens, as well as on the treatment of corn, soybean and bean seeds. In the in vitro test, aliquots of 20, 40, 60, 100, 200, 500 and 1000 μL of each essential oil were distributed on the surface of the culture medium. Then, discs of culture medium with mycelium of Alternaria carthami, Alternaria sp and Rhizoctonia solani were transferred to the center of each plate. Growth was measured and the mycelial growth inhibition rate (MGI) was calculated. To verify the effect of EO on seed germination, application of oils was by means of fumigation. Percentage of germinated seeds and their incidence of pathogens were evaluated. For mycelial growth, "palmarosa" oil completely inhibited all fungal pathogens, regardless of the concentration. On the other hand, "candeia" and rosemary oils were better when aliquots higher than 200 μL were added. The oils differently influenced the germination and health of corn, soybean and bean seeds.

Efeito da toxicidade de Cr (VI) e Zn (II) no crescimento do fungo filamentoso Aspergillus niger isolado de efluente industrial / Toxicity effect of Cr (VI) and Zn (II) on growth of filamentous fungi Aspergillus niger isolated from industrial effluent

Processos convencionais de tratamento de efluentes utilizam microrganismos vivos, o que sugere limitações relativas À toxicidade de metais para os microrganismos. O experimento consistiu em adicionar soluções monoelementares de Cr (VI) e Zn(II) em diferentes concentrações (0, 20, 50, 100, 200, 300, 400, 500 mg.L-1) ao meio de crescimento e observar a influência dos metais no crescimento micelial e germinativo do fungo Aspergillus Níger por verificação visual da expansão radial do micélio e da germinação de esporos, seguida de registro fotográfico. Os resultados mostraram que o metabolismo do fungo foi completamente inibido em concentrações acima de 500 mg Zn (II).L-1 e 150 mg Cr (VI).L-1. O ED50 (concentração de ingrediente ativo capaz de inibir 50 por cento do crescimento micelial do fungo) para os dois íons metálicos, nas condições estudadas, está na faixa entre 100 e 150 mg.L-1. Palavras-chave: metais pesados; inibição; crescimento micelial; Aspergillus niger; ED50.

Many standard processes of wastewater treatment use live microorganisms, which suggests limitations on a metal toxicity to the microorganism. The experiment consisted in adding mono elementary solutions of Cr (VI) and Zn (II) at different concentrations (0, 20, 50, 100, 200, 300, 400, 500 mg.L-1) to the growth mean, and to observe the influence of metals on mycelial and germinative growth of the Aspergillus niger fungus, by means of visual observation of the radial expansion of the mycelius and the germination of spores, followed by photograph registration. The results showed that the metabolism of the fungus was completely inhibited at concentrations above 500 mg Zn (II).L-1 and 150 mg Cr (VI).L-1. The ED50 (concentration of active ingredient capable of inhibiting 50 percent of mycelial growth of the fungus) for both metal ions, under the studied conditions, is in the range between 100 and 150 mg.L-1.

Avaliação do efeito do óleo de melaleuca sobre o crescimento micelial in vitro de fungos fitopatogênicos / Evaluation of the effect of melaleuca oil on mycelial growth of phytopathogenic fungi in vitro

A exploração da atividade biológica de compostos secundários presentes no extrato bruto ou óleos essenciais de plantas pode constituir, em uma forma efetiva de controle de doenças em plantas cultivadas. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do óleo essencial de Melaleuca alternifolia na inibição do crescimento micelial "in vitro" de fungos fitopatogênicos. Os fungos fitopatogênicos testados foram: Macrophomina phaseolina, Sclerotinia sclerotiorum e Alternaria alternata. As concentrações do óleo adicionadas ao meio de cultura foram: 0,0, 0,2, 0,4, 0,6 e 0,8%. A avaliação consistiu em medições do diâmetro das colônias. O óleo essencial de melaleuca inibiu o desenvolvimento dos fungos fitopatogênicos testados podendo representar uma alternativa econômica e ecologicamente viável de controle de doenças de plantas.

The exploration of the biological activity of secondary compounds present in crude extracts or essential oils of plants can in an effective way to control diseases in crops. The objective of this study was to evaluate the effect of essential oil of Melaleuca alternifolia on the inhibition of mycelial growth in vitro of pathogenic fungi. The pathogenic fungi were tested: Macrophomina phaseolina, Sclerotinia sclerotiorum and Alternaria alternata. The concentrations of oil added to the culture medium were 0,0, 0,2, 0,4, 0,6 and 0,8%. The evaluation consisted of measurements of the diameter of the colonies. The essential oil of melaleuca inhibited the development of pathogenic fungi tested could represent an economical and environmentally viable alternative to control plant diseases

Antifungal activity of extracts from Brazilian Cerrado plants on Colletotrichum gloeosporioides and Corynespora cassiicola / Atividade antifúngica de extratos de plantas do Cerrado brasileiro sobre Colletotrichum gloeosporioides e Corynespora cassiicola

This study aimed to determine the antifungal activity of leaf aqueous and hydroethanolic extracts of 10 plants from the Brazilian Cerrado on Colletotrichum gloeosporioides and Corynespora cassiicola. Antifungal activity was measured through the incorporation of each extract in a culture media or spore suspension, at 50 percent concentration relative to the volume, determining respectively the mycelial growth and the spore germination. Then, the percentages of mycelial growth inhibition and spore germination inhibition were obtained based on the comparison with the control. The extracts had a variable action on the phytopathogens, from mycelial growth stimulation for Aristolochia esperanzae and Byrsonima verbascifolia extracts to complete inhibition of mycelial growth and spore germination for Myracrodruon urundeuva and Lafoensia pacari extracts. M. urundeuva, L. pacari and Caryocar brasiliense leaf extracts had antifungal activity against Colletotrichum gloeosporioides and Corynespora cassiicola; the hydroethanolic extracts presented more antifungal activity than the aqueous extracts, and spore germination of both phytopathogens was more affected than their mycelial growth.

O objetivo deste trabalho foi determinar a atividade antifúngica de extratos aquosos e extratos hidroetanólicos de folhas de 10 plantas do Cerrado brasileiro sobre Colletotrichum gloeosporioides e Corynespora cassiicola. A determinação da atividade antifúngica foi realizada pela incorporação do extrato em meio de cultura ou na suspensão de esporos, na concentração de 50 por cento em relação ao volume, determinando-se, respectivamente, o crescimento micelial e a germinação de esporos. Em seguida, pela comparação com a testemunha, foram obtidas as percentagens de inibição do crescimento micelial e da germinação dos esporos. Foi constatado comportamento variável dos extratos sobre os fitopatógenos, desde o estímulo no crescimento micelial para os extratos de Aristolochia esperanzae e Byrsonima verbascifolia, até a inibição completa do crescimento micelial e dagerminação dos esporos para os extratos de Myracrodruon urundeuva e Lafoensia pacari. Extratos de folhas de L. pacari, de M. urundeuva e de Caryocar brasiliense apresentaram atividade antifúngica sobre Colletotrichum gloeosporioides e Corynespora cassiicola; os extratos hidroetanólicos proporcionaram mais atividade antifúngica que os extratos aquosos, e a germinação de esporos de ambos os fitopatógenos foi mais afetada que o crescimento micelial.

Spore production in Paecilomyces lilacinus (Thom. ) samson strains on agro-industrial residues / Produção de esporos em linhagens de Paecilomyces lilacinus (Thom. ) samson em resíduos agro-industriais

Paecilomyces lilacinus has potential for pests control. We aimed to analyze mycelial growth and spore production in P. lilacinus strains in several agro-industrial residues and commercial media. This study suggests alternative nutrient sources for fungi production and that the biotechnological potential of agro-industrial refuses could be employed in byproducts development.

Paecilomyces lilacinus apresenta potencial para controle de pragas. O objetivo deste trabalho foi analisar o crescimento micelial e a produção de esporos de linhagens de P. lilacinus em resíduos agro-industriais e meios comerciais. Este estudo sugere fontes alternativas para produção de fungos com potencial biotecnológico para desenvolvimento de bioprodutos.

Optimization of nutritional requirements for mycelial growth and sporulation of entomogenous fungus Aschersonia aleyrodis Webber / Otimização das exigências nutricionais para crescimento micelial e esporulação do fungo entomopatogênico Aschersonia aleyrodis Webber

The objective of the present study was to investigate the optimal nutritional requirements for mycelial growth and sporulation of entomopathogenic fungus Aschersonia aleyrodis Webber by orthogonal layout methods. Herein the order of effects of nutrient components on mycelial growth was tryptone > Ca2+ > soluble starch > folacin, corresponding to the following optimal concentrations: 1.58 percent Soluble Starch, 3.16 percent Tryptone, 0.2 mmol l-1 Ca2+ and 0.005 percent Folacin. The optimal concentration of each factors for sporulation was 1.16 percent lactose, 0.394 percent tryptone, 0.4 mmol l-1 Fe2+ and 0.00125 percent V B1, and the effects of medium components on sporulation were found to be in the order lactose > V B1 > Fe2+ > tryptone. Under the optimal culture conditions, the maximum production of mycelial growth achieved 20.05 g l-1 after 7 days of fermentation, while the maximum spore yield reached 5.23 ×10(10) spores l-1 after 22 days of cultivation. This is the first report on optimization of nutritional requirements and design of simplified semi-synthetic media for mycelial growth and sporulation of A. aleyrodis.

O objetivo deste estudo foi investigar as exigências nutricionais ótimas para o crescimento micelial e esporulação do fungo entomopatogênico Aschersonia aleyrodis Webber. A ordem dos efeitos dos nutrientes na multiplicação micelial foi triptona>Ca2+>amido solúvel>folacina, com as seguintes concentrações ótimas: amido solúvel 1,58 por cento, tritona 3,16 por cento, Ca2+ 0,2mmol.l-1 e folacina 0,005 por cento. Para a esporulação, a concentração ótima de cada fator foi: lactose 1,16 por cento, triptona 0,394 por cento, Fe2+ 0,4mmol.l-1 e V B1 0,00125 por cento, na seguinte ordem: lactose> V B1> Fe2+>tritona. Em condições ótimas de cultura, a produção máxima de micélio foi 20,05g.l-1 após 7 dias de fermentação, enquanto o rendimento máximo de esporos foi 5,23 x 10(10) esporos.l-1 após 22 dias de cultivo. Esse é o primeiro relato sobre otimização das exigências nutricionais e desenvolvimento de meio de cultura semi-sintético para crescimento micelial e esporulação de A. aleyrodis.

Extratos, decoctos e óleos essenciais de plantas medicinais e aromáticas na inibição de Glomerella cingulata e Colletotrichum gloeosporioides de frutos de goiaba / Extracts, decoctions and essential oils of medicinal and aromatic plants in the inhibition of Colletotrichum gloeosporioides and Glomerella cingulata isolates from guava fruits

A principal doença da goiaba (Psidium guajava L.), após a colheita, é a antracnose, causada por Glomerella cingulata e Colletotrichum gloeosporioides. Estes patógenos e o resíduo de fungicidas em frutos são considerados os principais problemas para a exportaçãodesta fruta. Neste trabalho, foi avaliado o efeito fungitóxico de extratos, decoctos e óleos essenciais de plantas medicinais e aromáticas, no crescimento micelial dos patógenos, in vitro, recomendados como alternativa para o controle químico em pós-colheita. Os extratos aquosos a 10 por cento e os decoctos (subprodutos da hidrodestilação) foram adicionados em BDA, autoclavados e distribuídos em placas de Petri. Os óleos essenciais foram adicionados em três pontos eqüidistantes nas placas de Petri contendo BDA. Discos dos isolados foram repicados para o centro das placas de Petri. O efeito fungitóxico foi avaliado medindo-se o diâmetro das colônias, quando na testemunha ou em qualquer tratamento os patógenos atingiram a borda da placa. O extrato aquoso e o óleo essencial de cravo-da-Índia inibiram em 100 por cento o crescimento de G. cingulata e C. gloeosporioides, sendo este último totalmente inibido pelo óleo essencial de capim-limão. Os decoctos de alecrim, gengibre, calêndula e laranja (Citrus sinensis) apresentaram potencial de inibição sobre os isolados dos patógenos. No controle de C. gloeosporioides, destacaram-se também os decoctos de marcela, camomila e tagetes. A inibição total ou parcial do crescimento micelial de Glomerella cingulata e Colletotrichum gloeosporioides, in vitro, evidenciou a existência de compostos biologicamente ativos, com efeito fungitóxico nos extratos, decoctos e óleos essenciais de plantas medicinais e aromáticas. Isto indica uma aplicação potencial destes produtos no controle alternativo da antracnose em frutos de goiabeira.

The main disease of the guava (Psidium guajava L.), after harvesting, is anthracnose, caused by Glomerella cingulata and Colletotrichum gloeosporioides. This pathogen and chemical residues of fungicides in fruits are considered the mains problems for exportation. In this work was evaluated the fungitoxic effect of extracts, decoctions and essential oils of medicinal and aromatic plants in the mycelium growth of the pathogens, in vitro, to be recommended as an alternative to chemical control in postharvest. To prepare the aquous extracts a 10 percent and the decoctions (sub-products of hydrodistillation) were added in PDA medium, autoclaved and distributed into Petri dishes. The essential oils were added in three equidistant points by Petri dishes contening PDA medium. Discs of the isolates of the pathogen were placed on the center of the Petri dishes. The fungitoxic effect was evaluated by measuring the diameter of the colonies when the pathogens or any other treatment reached the border of the Petri dishes. The aquous extract and the essential oil from the clove inhibit in 100 percent of G. cingulata and C. gloeosporioides growth, and the last one was totally inhibited by the essential oil of the lemon grass. The decoctions of rosemary, ginger, calendula, orange (Citrus sinensis) showed inhibition potencial to control both isolates of the pathogen. In the control of C. gloeosporioides also had good results the decoctions of mayweed, chamomile and tagetes. The total or partial mycelium growth inhibition of the Glomerella cingulata e Colletotrichum gloeosporioides showed the existence of compounds biologically actives with fungitoxic effect, in the extracts, decoctions and essential oils of medicinal and aromatic plants. This indicated a potential application of this products as an alternative to control anthracnose in guavas fruits.

Germination and mycelial growth of Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho as influenced by herbicides and surfactants

Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho can be combined with herbicide in order to control a large spectrum of weed species, being a strong candidate for the biocontrol of Euphorbia heterophylla L. (milk weed). The fungus release can be combined with herbicide in order to control a broader spectrum of weed species. Thus, laboratory experiments were set up to study the feasibility of using tank mixes of B. euphorbiae spores with herbicides or surfactants recommended for soybean. Mycelial growth and conidia germination were evaluated in PDA medium enriched with the herbicides oxasulfuron (80 g/ha), glyphosate (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) and imazetaphyr (1 L/ha), and the surfactants Energic (2 ml/L), Aterbane (2.5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) and Natur L'óleo (10 ml/L). Dilution of the herbicides at 50% and 25% were evaluated based on solution consumption of 300 L/ha. The surfactants were evaluated only in the recommended concentrations. Mycelial growth was not affected by bentazon and fomesafen and slightly by oxasulfuron. However, glyphosate and the surfactants Energic, Herbitensil and Aterbane strongly reduced its growth. The reduction observed on imazetaphyr enriched medium was intermediate and the Natur L'óleo promoted mycelial growth. All of the surfactants allowed B. euphorbiae conidia germination equivalent to that reached in the presence of water. Energic and Herbitensil caused an expressive retardation on spore germination. The germinative process only began after 120 minutes in the presence of Herbitensil. In relation to the herbicides, it was observed that only in the presence of glyphosate and imazetaphyr the conidia germination did not follow the trend of the treatment with water.

Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho é um forte candidato para o controle de Euphorbia heterophylla L. (amendoim bravo). Este fungo pode ser aplicado em combinação com herbicidas para controlar um maior espectro de espécies daninhas. Para tanto, experimentos laboratoriais foram realizados para verificar a possibilidade da utilização de mistura de tanque de esporos de B. euphorbiae e herbicidas ou surfatantes recomendados para a cultura da soja. Crescimento micelial e germinação de conídios foram avaliados em meio BDA acrescido dos herbicidas, nas concentrações recomendadas dos produtos comerciais, oxasulfuron (80 g/ha), glifosato (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) e imazetaphyr (1 L/ha) e dos surfatantes Energic (2 ml/L), Aterbane (2,5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) e Natur L'óleo (10 ml/L). Diluições dos herbicidas de 50% e 25% foram avaliadas com um consumo de calda equivalente a 300 L/ha. Os surfatantes foram somente utilizados nas concentrações recomendadas. O crescimento micelial não foi afetado por bentazon e fomesafen e apenas levemente por oxasulfuron. Porém, glifosato, chlorimuron-ethyl, lactofen, Energic, Herbitensil, Silwet, e Aterbane o reduziram drasticamente. A redução observada com imazetaphyr foi intermediária e Natur L' óleo promoveu o crescimento micelial. Na presença dos surfatantes, observou-se que todos permitiram uma porcentagem de germinação equivalente àquela alcançada na presença de água. Energic e Herbitensil causaram um retardamento expressivo. Com Herbitensil, o processo germinativo iniciou somente aos 120 minutos. Com herbicidas, foi observado que somente na presença de glifosato e imazetaphyr a germinação dos conídios não seguiu a tendência observada com água, como ocorreu com os outros produtos testados.