Perfil de la flora bacteriana vaginal: Un riesgo potencial para la reproducción de vacas criollo limonero / Profile of vaginal bacterial flora: A potential risk for reproduction in criollo limonero cows

El objetivo del presente estudio fue determinar la población bacteriana vaginal de la vaca Criollo Limonero. Se tomaron muestras que consistieron en hisopados por duplicado a nivel del fornix de la vagina anterior, las cuales se sometieron a cultivos bacterianos en ambiente aerobio/anaerobio y pruebas bioquímicas convencionales para el aislamiento. De 102 hisopados se lograron 55 crecimientos (53,9%) y 47 sin crecimiento (46,1%). Los 55 crecimientos se distribuyeron de varias maneras: 23 (41,82%) aerobios y 32 (58,18%) anaerobios; 29 (52,72%) aislamientos puros y 26 (47,27%) aislamientos mixtos. Las bacterias Gram positivas predominaron (81,82 y 73,08%), con respecto a las Gram negativas (18,18 y 26,92%), tanto en aerobiosis como en anaerobiosis, respectivamente. Las bacterias más aisladas fueron Arcanobacterium pyogenes (22,92%), Staphilococcus aureus (15,63%), Staphylococcus coagulasa negativo (17,71%), Erysipelothrix rhusiopathiae (6,25%), Bacteroides spp. (13,54%) y Peptostreptococcus spp. (7,29%). En conclusión, se identificaron las bacterias que forman parte de la flora bacteriana vaginal de la vaca Criollo Limonero, su distribución en cuanto a especie, género, exigencia de oxígeno, tipo de aislamiento, tinción de Gram y potencial de patogenicidad son discutidos.

The objective of the current study was to determine the population of vaginal bacteria in Criollo Limonero cows. Two swabs from every cow were taken at the level of the fornix for bacterial isolation with biochemical test. From 102 swabs, 55 achieved bacterial growth (53.9%) and 47 did not get to any bacterial growth (46.1%). The 55 samples that achieved bacterial growth were distributed as follows: 23 (41.82%) aerobic bacteria and 32 (58.18%) anaerobic bacteria; 29 (52.72%) pure isolations and 26 (47.27%) mixed isolations. Gram positive bacteria were predominant (81.82 and 73.08%) compared to Gram negative bacteria (18.18 y 26.92%), both in aerobic and anaerobic media, respectively. Predominant bacteria were Arcanobacterium pyogenes (22.92%), Staphylococcus aureus (15.63%), Staphylococcus coagulase negative (17.71%), Erysipelothrix rhusiopathiae (6.25%), Bacteroides spp. (13.54%) and Peptostreptococcus spp. (7.29%). In conclusion, vaginal bacterial flora from Criollo Limonero cows were identified, in reference to the distribution of their specie, genus, oxygen requirements, type of isolation, Gram stain and potential pathogenic capacity were discussed.

Frecuencias Alélicas de Beta-lactoglobulina en ganado criollo Limonero / Allelic Frequency of Beta-lactoglobulin in Limonero Creole Cattle

Con el objeto de caracterizar el gen de la beta-lactoglobulina (BLG) en la raza Criollo Limonero, se utilizó la técnica PCR-RFLP en 163 animales puros de la estación local Carrasquero (Carrasquero-estado Zulia), los genotipos fueron determinados a través de electroforesis en geles de agarosa. Las frecuencias obtenidas del locus de la BLG fueron A (0,22) y B (0,78) y las frecuencias genotípicas fueron AA (0,07 ); AB (0,29) y BB (0,64), la población estudiada se encuentra en equilibrio de Hardy-Weinberg (P<0,05), los resultados indican que la frecuencia alélica del alelo B fue más alta que la de A, siendo esto importante, ya que se han determinado los efectos de esta variante alélica de la BLG sobre la cantidad de grasa y proteínas en la leche, la selección a favor del alelo B en la población conllevará a una mejora en la calidad y rendimiento en la producción de queso, estos resultados representan un valioso aporte al conocimiento de esta raza y de su importancia, ya que, representa una alternativa para sistemas dirigidos a la producción de queso.

In order to characterize the beta-lactoglobulina gene (BLG) in the Limonero Creole cattle through PCR-RFLP technique, 163 purebreed animals were used from the Carrasquero local station (Carrasquero-Zulia State), genotypes were determined through gel electroforesis in agarosa. Gene and genotypic frequencies obtained were A (0.22) and B (0.78) and AA (0.07), AB (0.24) and BB (0.64) respectively, the population is in equilibrium of Hardy-Weinberg with (P<0.05), the results indicate that the alelic frequency of was more high B but that A, being this important one, since the effects of the variants of the BLG on the amount of fat and proteins in milk have been determined, the selection in favor of allele B in the population will entail to an improvement in the quality and yield in the cheese production, these results represent a valuable contribution the knowledge of this race and its importance, since, represents an alternative for systems directed to the cheese production.

Polimorfismo genético de la kappa-caseína en ganado criollo limonero / Genetic polymorphism of kappa-casein in creole limonero bovine

Con el objeto de estudiar el polimorfismo del gen CSN3 en la raza bovina Criollo Limonero, se extrajeron muestras séricas de 163 individuos (machos y hembras), los cuales fueron caracterizados mediante la técnica PCR-RFLP. Los resultados obtenidos indican que las frecuencias encontradas correspondieron a 0,11; 0,56 y 0,33 para los AA, AB y BB, respectivamente, correspondiendo a frecuencias alélicas de 0,39 para el alelo A y 0,61 para el B, respectivamente. Cabe destacar que a partir de esta información de la CSN3 y su relación con caracteres, tales como la producción de leche y rendimiento quesero, se pueden llevar a cabo planes de mejoramiento asistido por marcadores, garantizando el mantenimiento de la variabilidad genética de estas poblaciones locales que se caracterizan por censos reducidos y la amenaza constante por cruzamientos con razas mejoradoras o comerciales, que buscan incrementar el volumen de producción de leche en detrimento de la calidad del producto; así mismo, se indica la ventaja potencial que presenta la leche del ganado Criollo Limonero en la producción de quesos, por mostrar mayoritariamente alelos del tipo B de la CSN3.

In order to assess the polymorphism of CSN3 gen in Limonero Creole breed, blood samples were collected from 163 male and female individuals, with which characterization through RFLP-PCR was conducted. Results showed that genotypic frequencies were 0.11, 0.56 and 0.33 for AA, AB and BB, respectively. Allelic frequencies were 0.39 and 0.61 for allele A and B, accordingly. It is important to mention that with this information of CSN3 and its relationship with some traits such as milk production and cheese productivity, markers-assisted genetic improvement plans can be undertaken, which would maintain genetic variability of these local populations characterized by small numbers of animals and by the constant threat of crossbreeding with improved or commercial breeds, with the objective of increasing milk production over product quality; moreover, a potential advantage of Limonero Creole breed in milk production by its having mainly B-type alleles in CSN3 is shown.

Infección por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en un rebaño criollo limonero / Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis infection in a criollo limonero herd

El objetivo de este estudio consistió en definir, analizar y evaluar la situación de un rebaño Criollo Limonero elite en relación a la paratuberculosis bovina. La investigación se llevó a cabo utilizando las variables epidemiológicas y el análisis de muestras (leche y suero) mediante inmunoensayo enzimático (ELISA) comercial. Posteriormente, se tomaron como base estos resultados y utilizando otras herramientas diagnósticas como la exploración clínica, tinción directa, cultivos, identificación mediante ensayo de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y estudio histomorfológico, todas ellas dirigidas a confirmar el estado de la infección. Los resultados permiten aseverar la existencia de infección por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAsP) en tasas de positividad variable. La técnica de ELISA mostró alta capacidad en la identificación de animales subclinicamente afectados, lo que demuestra su potencial como prueba primaria de diagnóstico en el establecimiento de futuros programas de control. La técnica de amplificación por PCR reveló la presencia de genoma de subespecies de Mycobacterium avium, lo cual apoya fuertemente la presunción de infección en estos animales por MAsP, pese a la imposibilidad de lograr claras evidencias clínicas, clinicopatológicas, microbiológicas e histopatológicas que permitieran corroborar este dictamen. La estrecha correlación entre los resultados de ELISA y PCR, ratifica no sólo la confirmación diagnóstica, sino también validan los datos obtenidos a través de la prueba serológica.

The purpose of this research was to define, analyze and evaluate the situation of an elite Criollo Limonero herd related to bovine paratuberculosis. The investigation was carried out using the epidemiological variables and samples analysis (milk and serum) through a commercial enzyme immunoassay (ELISA). The results of the above test were taken as a foundation to use other diagnostic tools, such as clinical examination, direct staining, bacterial culture, identification through polymerase chain reaction (PCR) and histopathologic studies, to find out the status of the disease. The results allowed asserting the infection by the presence of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAsP) in positive variable rates. The ELISA technique showed high capacity in identification of the sub clinical affected animal, which proved its potential as a diagnostic primary test in the establishment of future control programs. The PCR amplification revealed Mycobacterium avium subspecie genome presence, which lead to predict these animals infection by MAsP, in spice of the impossibility to accomplish clear clinical, clinic pathologic, microbiologic and histopathologic evidences that allowed corroborating the diagnosis. The narrow relation between ELISA and PCR results ratified not only the diagnostic confirmation, but also they validated the data collected through the serological test.

Diversidad genética de la raza criollo limonero utilizando marcadores de ADN microsatélites / Genetic diversity of limonero creole breed using microsatellites molecular markers

Con la finalidad de estudiar la variabilidad genética de la raza Criollo Limonero considerada patrimonio Nacional y orientada a la producción de leche, se analizaron 95 animales puros utilizando 14 marcadores moleculares de ADN del tipo microsatélites. Los animales pertenecen al rebaño de la estación local Carrasquero, adscrita al Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas del estado Zulia (INIA-Zulia) y ubicado al noroeste del Estado. Para medir la diversidad genética se estimaron y discutieron los valores de heterocigosis observada (HO) y esperada (HE) total y entre familias (HMO, HME), probabilidad de exclusión (PE), Índice de Contenido Polimórfico (PIC) y número de alelos por locus. El número promedio de alelos por locus, HE y PIC fueron: 8,7; 0,689 y 0,651, respectivamente. Las HE variaron desde 0,355 hasta 0,787 y el PIC fluctuó de 0,302 a 0,757. El locus menos polimórfico fué el ILST5 y el más polimórfico fue el CSSM66. La PE con los 14 marcadores fue de 0,9962 y 0,9999 para uno y dos padres conocidos, respectivamente. Los resultados indicaron que este grupo de marcadores resultaron ser eficientes para realizar pruebas de paternidad en esta raza, así mismo se muestran que los niveles de heterocigosis indican la existencia de una alta diversidad molecular en la población estudiada, la cual deberá mantenerse como estrategia para la conservación del Criollo Limonero como recurso genético bovino de Venezuela para la producción animal en la región tropical.

In order to study the genetic variability of the Criollo Limonero Breed, a dairy breed considered National Patrimony of Venezuela, 95 purebred animals were analyzed using 14 DNA microsatellites. The animals belonged to the local Carrasquero station, assigned to the National Institute of Agriculture Research of Zulia (INIA-Zulia) and located in the northwest of Zulia State. Average values of observed and expected heterocigocities (HO, HE), between families (HMO, HME) respectively, exclusion probability (PE), Polymorphic Information Content (PIC) and number of alelles by locus were considered and discussed to measure the genetic diversity. The average of alleles by locus, HE and PIC were: 8.7; 0.689 and 0.651, respectively. HE ranged from 0.355 to 0.787 and PIC fluctuated from 0.302 to 0.757. The least polymorphic locus was ILST5 and the most polymorphic was the CSSM66. PE with the 14 markers was of 0.9962 and 0.9999 for one and both known parents, respectively. The results indicate that this set of markers are efficient to make paternity tests in this breed, it is also evident that there are heterozigosity levels indicating the existence of a high molecular diversity in this population, which should be maintained as a strategy for the conservation of the Criollo Limonero breed, a bovine genetic resource of Venezuela for animal production in the tropical regions.

Pedigree analysis in criollo limonero

Con el objetivo de continuar el programa de conservación genética de la raza Criollo Limonero, se realizó un estudio para evaluar la variabilidad genética del rebaño, utilizando 2552 registros genealógicos disponibles entre los años 1985 y 2003 en la Estación Local Carrasquero, ubicada en el sector playa Bonita, municipio Mara, al norte del estado Zulia-Venezuela. Se determinó la consanguinidad de cada animal y la consanguinidad global del rebaño (fh), el promedio de relación de parentesco (AR), los parámetros de la probabilidad de orígen del gen, el número de fundadores (NF), el número efectivo de fundadores (fe), el número efectivo de ancestros (fa), número de genomas fundadores (Ng) y el número de fundadores que explican el 50 por ciento (F50) de la variabilidad genética. La fh en el año 2003 fue de 0,35 por ciento y el AR 3,4 por ciento, el NF 386, fe 63,5, fa 38, Ng 27,71; y el valor de F50 fue 18. La fh no tuvo un incremento marcado a pesar que el AR indicó que existe una alta relación entre los individuos de la población, por lo que los apareamientos deben planificarse para evitar el apareamiento de animales emparentados. Los valores de probabilidad de origen de los genes indican que la población ha perdido variabilidad genética por un efecto de cuello de botella y por deriva genética aunque este deterioro no se refleje en un incremento en la consanguinidad. Aun existe una cantidad importante de diversidad que debe preservarse, dada la importancia que representa este germoplasma para la región y el país.

In order to continue the genetic program for the conservation of the Criollo Limonero population, a study was carried out to evaluate the genetic variability of this local breed. For this purpose, 2552 genealogical records from the Criollo herd at the Carrasquero Local Station (INIA) located at Playa Bonita, Mara County, North of Zulia State-Venezuela, during the 1985-2003 period were used. Global inbreeding of the herd (fH) and animal inbreeding were determined; in addition, Average of relatedness (AR), probabilities of gene origin, number of founders (NF), effective number of founders (fe), effective ancestors number (fa), genome founders number (Ng ) and number of founders explaining 50% (F50) of the genetic variability. For the year 2003 fH was 0.35%, whereas AR, NF, fe, fa, Ng and F50 were 3.4%, 386, 63.5, 38, 27.71 and 18 respectively. Even though AR showed a high relationship among the individuals in the herd, fH did not have a significant increase. For this reason, mates should be planned carefully in order to avoid related mates. Probabilities of gene origin suggest that genetic variation has decreased in this population due to a bottleneck effect and genetic drift, without increasing inbreeding. An important genetic diversity exists in this population which should be preserved, given the importance of this genetic resource for the region and the country.