Cell culture: a promising environment for research on cardiology / Cultivos celulares: un entorno promisorio para la investigación en cardiología

Abstract At present, tissue engineering is transforming the area of cardiovascular regenerative medicine, which combines the principles and methods of materials engineering and biological sciences, interacting with biochemical and physicochemical factors, for the understanding of their structure-function relationship. Thus, the course of diseases is reoriented by implementing methods and procedures involved in the regeneration of organs and tissues by means of the interaction with biocompatible matrices, pre-treated organs or stem cell management, among others, thus recovering the functionality in the system affected by acquired pathologies, alterations or congenital defects. Consequently, these procedures are increasingly becoming one the most promising treatment alternative for patients who suffer from any type of functional deficit. Known that all these possibilities make cell cultures a promising study environment to be used in biomedical applications, especially in tissue engineering and regenerative medicine, this manuscript presents a general reviews of established cell lines or primary tissue lines and how cell cultures serve as a model before experimental work on laboratory animals and human subjects which makes it a valuable tool for broad models of study in the research on cardiology.

Resumen En la actualidad, la ingeniería de tejidos está transformando el área de la medicina regenerativa cardiovascular, combinando los principios y métodos de la ingeniería de materiales y las ciencias biológicas, interactuando entre factores bioquímicos y fisicoquímicos, para la comprensión de su relación estructura-función. Así, el curso de las enfermedades se viene a reorientar mediante la implementación de métodos y procedimientos implicados en la regeneración de órganos y tejidos a través de la interacción con matrices biocompatibles, órganos pretratados o manejo de células madre, entre otros, recuperando así la funcionalidad en el sistema afectado por enfermedades adquiridas y alteraciones o defectos congénitos. En consecuencia, estos procedimientos se están convirtiendo en una de las alternativas de tratamiento cada vez más prometedoras para los pacientes que sufren de algún tipo de alteración funcional. Considerando que todas estas posibilidades hacen de los cultivos celulares un entorno de estudio prometedor para ser utilizado en aplicaciones biomédicas, especialmente en ingeniería de tejidos y medicina regenerativa, este manuscrito presenta una revisión general de las líneas celulares establecidas o líneas de tejido primario y cómo los cultivos celulares sirven como modelo de evaluación antes del trabajo experimental en animales de laboratorio y sujetos humanos, lo cual los convierte en una herramienta valiosa para amplios modelos de estudio en la investigación en cardiología.

Alternatives for obtaining a continuous cell line from Apis mellifera / Alternativas para a obtenção de uma linhagem celular contínua de abelhas Apis mellifera

ABSTRACT: In worldwide there are reports of a significant decrease in colonies of the species Apis mellifera, caused by several factors, including viral infections. In order to study and diagnose illnesses caused by viruses, in vitro cell culture is used as a valuable tool. Yet, there are still no immortalized cell lines of honey bee Apis mellifera. Primary cell cultures are promising for this purpose and can supply the lack of continuous strains, but their establishment is difficult and laborious, which often makes them unfeasible for many research centers. Through the use of cell immortalization techniques, it is possible to develop continuous cell lines and thus benefit, in different ways, research related to different species of bees. The choice of technique is challenging, since in addition to the ability to remain viable for countless passages, cells must keep the genotype and phenotype similar or identical to the original tissue. This review intends to present methodologies that can be used to immortalize Apis mellifera cells, aiming to establish a cell line. The genotypic and phenotypic implications of each technique are evaluated, and the purpose of the cell line to be developed.

RESUMO: Ao redor do mundo há relatos da diminuição significativa de colônias da espécie Apis mellifera, causada por diversos fatores, incluindo infecções virais. Para estudo e diagnóstico de enfermidades causadas por vírus utiliza-se, como uma ferramenta valiosa, o cultivo celular in vitro. Contudo, ainda não existem linhagens celulares imortalizadas de abelhas Apis mellifera. Os cultivos celulares primários são promissores para este fim e podem suprir a falta de linhagens contínuas, porém seu estabelecimento é difícil e laborioso o que, muitas vezes, os torna inviáveis para muitos centros de pesquisa. Através do uso de técnicas de imortalização celular é possível desenvolver linhagens contínuas de células e assim beneficiar, de diversas formas, as pesquisas relacionadas às diferentes espécies de abelhas. A escolha da técnica é desafiadora, visto que, além da capacidade de permanecer viável por inúmeras passagens, as células devem manter o genótipo e fenótipo semelhante ou idêntico ao tecido original. O objetivo deste trabalho é apresentar metodologias que podem ser utilizadas para imortalização de células de Apis mellifera, visando o estabelecimento de uma linhagem celular. São avaliadas as implicações genotípicas e fenotípicas de cada técnica, e a finalidade da linhagem celular a ser desenvolvida.

Importancia del mapeo óptico de cultivos de cardiomiocitos HL-1 en estudios electrofisiológicos / Importance of the optical mapping of HL-1 cardiomyocyte cultures in electrophysiological studies

Introducción: El desarrollo de herramientas para investigar la actividad electrofisiológica cardiaca ha permitido profundizar en el conocimiento sobre los mecanismos subyacentes a las arritmias cardiacas. Los sistemas de mapeo óptico constituyen una tecnología que responde a la necesidad de superar varios obstáculos en la experimentación. Objetivo: Proporcionar una visión general de la importancia del mapeo óptico en cultivos celulares HL-1, en las investigaciones en electrofisiología cardiaca. Métodos: Se realizó una revisión sobre los estudios electrofisiológicos que involucran la línea celular HL-1 utilizando la técnica de mapeo óptico. Conclusiones: Los trabajos se caracterizan por la implementación de la técnica respecto a la tecnología de los equipos de mapeo, a la utilización de diferentes colorantes y al objetivo de la investigación. Están enfocados en el estudio de mecanismos arritmogénicos, procesos de estiramiento mecánico o remodelación del tejido y en el análisis de nuevos biomateriales. Lo anterior, sustenta la relevancia del mapeo óptico en la investigación cardiaca(AU)

Introduction: The development of tools to study cardiac electrophysiological activity has made it possible to broaden knowledge about the mechanisms underlying cardiac arrhythmias. Optical mapping systems constitute a technology that responds to the need to overcome several hurdles in experimentation. Objective: Provide an overview of the importance of optical mapping in HL-1 cell cultures in cardiac electrophysiology research. Methods: A review was conducted of electrophysiological studies involving the HL-1 cell line using the optical mapping technique. Conclusions: The studies are characterized by implementation of the technique with respect to the technology of mapping equipment, the use of different colorants and the purpose of the research. They focus on the study of arrhythmogenic mechanisms, mechanical stretch processes or tissue remodeling as well as the analysis of new biomaterials. The above substantiates the relevance of optical mapping in cardiac research(AU)

Evaluación del efecto del plasma rico en plaquetas en diferentes tiempos y conce ntraciones sobre la viabilidad de fibroblastos de ligamento periodontal y osteoblastos / Evaluation of platelet-rich plasma effect at different times and concentrations on periodontal ligament fibroblast and osteoblast viability

Antecedentes: Los factores de crecimiento utilizados en salud se pueden obtener de una fuente autóloga de primera generación llamada plasma rico en plaquetas (PRP). La diversidad de protocolos para prepararlos genera resultados variables en cuanto al tiempo entre la activación del PRP y sus efectos sobre la proliferación y viabilidad celular. Objetivo: Evaluar proliferación y viabilidad celular de fibroblastos de ligamento periodontal y osteoblastos tratados con PRP en diferentes concentraciones y tiempos de aplicación. Métodos: Se cultivaron líneas celulares de fibroblastos y osteoblastos y se preparó el PRP de sangre venosa de un adulto sano mediante centrifugación, seguido de activación con CaCl2 al 10 %. El efecto sobre la proliferación de las líneas celulares tras la aplicación de PRP y plasma pobre en plaquetas al 1 %, al 3 % y al 5 % se evaluó a las 0, 12, 24, 48 y 72 horas después de su activación mediante MTS. El grupo control consistió en cultivos sin tratamiento. Los datos se analizaron mediante las pruebas de Chi cuadrado, Fischer y McNemar. Resultados: Se observó un aumento de la viabilidad en células tratadas con PRP 24 horas después de su activación en una concentración del 5%. El ensayo de viabilidad celular mostró diferencias estadísticamente significativas entre el grupo experimental y el grupo control (p = 0,05). Conclusión: Los cultivos de fibroblastos y osteoblastos mostraron una tendencia a mayor viabilidad 24 horas después de a la activación con PRP al 5 %.

Background : Growth factors used in health treatments can be obtained from a first-generation source called platelet-rich plasma. The variety of protocols to prepare PRP produces variable results regarding PRP activation time and its effects on cell proliferation and viability. Purpose: To evaluate proliferation and cell viability of periodontal ligament fibroblasts and osteoblasts stimulated with PRP in several concentrations and times after PRP activation. Methods: An in vitro study was carried out using periodontal ligament fibroblast and osteoblast cell cultures. PRP from venous blood of a healthy adult was prepared through centrifugation and activated with 10% CaCl2. The effect on cell proliferation after application of 1%, 3%, and 5% PRP and platelet-poor plasma was evaluated at 0, 12, 24, 48, and 72 hours after activation through MTS. The control group consisted of culture that did not receive any treatment. Data were analyzed using Chi square, Fisher, and McNemar tests. Results: The cell viability assay showed statistically significant differences between the experimental and the control groups. Cell viability increased in cells treated with 5% PRP 24 hours after activation (p = 0.05). Conclusions: Fibroblast and osteoblast cell lines tended to be more viable 24 hours after activation with 5% PRP.

Aplicaciones del cultivo celular en odontología / Applications of cell culture in dentistry

Las ciencias básicas, la medicina oral y los nuevos avanzces en biotecnología y bioinformática constituyen un gran campo de investigación dentro de la odontología actual. En este sentido, dichos avances están proporcionandoun nuevo conjunto de estrategias terapéuticas para el manejo clínico de los pacientes con dolencias dentales y craneofaciales. Es importante destacar que las disciplinas relacionadas con las ciencias básicas, la medicina oral, la biotecnología y la bioinformática, han contribuido de manera trascendental al entendimiento de la fisiología y lasdiversas patologías que afectan las condiciones de normalidad del sistema bucal. La ingeniería tisular se considera como un enfoque prometedor para la odontología regenerativa, con el objetivofinal de reemplazar morfológica y funcionalmente los tejidos periodontales y/o los dientes perdidos a través dela síntesis in vitro de sustitutos análogos tisulares, considerando que el diente y las estructuras periodontales son importantes órganos del complejo craneofacial, los tratamientos utilizados para las enfermedades que los afectan no lo restauran completamente. La odontología clínica está incursionando en una nueva era en donde el enfoque terapéutico es el uso de terapia génica, terapia celular, ingeniería tisular y lamedicina regenerativa, ampliando el arsenal de posibilidades para nuestros pacientes. Una línea de investigaciónfundamental en ingeniería tisular y medicina regenerativa son las células madres. Como parte de los nuevos avances de la odontología a nivel mundial, científicos e investigadores del mundo aplican la bioingeniería para lograr reconstrucciones maxilofaciales,regeneraciones óseas y reconstrucciones de piezas dentales a partir de células madre como parte de tratamientos inovadores...

El adipocito en el laboratorio: historia, perspectivas y reporte de experiencia / The adipocyte in the laboratory: history, perspectives and report of experience

Introducción: el tejido adiposo humano está compuesto por diferentes tipos celulares, y ha sido objeto de múltiples estudios en los últimos años debido a su acción en diversas funciones. Métodos: se realizó una búsqueda bilbiográfica en PubMed, Scielo, Science Direct and Google Scholars y se reporta la experiencia de los autores. Resultados: los primeros modelos de estudio fueron con tejido de roedores, y permitieron la comprensión del metabolismo de carbohidratos y ácidos grasos y facilitaron el estudio de la biología del adipocito, junto a estudios histológicos y el aislamiento de adipocitos maduros. Posteriormente se realizaron estudios con células precursoras (preadipocitos) que propiciaron el aislamiento de la línea celular 3T3-1L murina. En Latinoamérica, se han realizado diversos estudios con líneas celulares y con células madre mesenquimales precursoras de adipocitos para estudiar el efecto de hormonas y otras sustancias y para genotipificación. En Colombia se han realizado estudios con adipocitos 3T3-L1 para determinar los efectos de medicamentos y sustancias en estas células. En el laboratorio de Fisiología Celular de la Universidad Tecnológica de Pereira el proceso de obtención de muestras ha evidenciado dificultades por tratarse de tejido humano, pero el protocolo de aislamiento y cultivo pudo ser estandarizado a lo largo de seis años de experimentación; se aislaron preadipocitos y adipocitos maduros que permitieron estudiar los efectos de hormonas, realizar caracterización electrofisiológica y estudiar la fisiología del calcio. Conclusiones: este es un campo de investigación muy relevante debido a la implicación de este tipo celular en funciones metabólicas sistémicas y su relación con patologías de alta prevalencia como la obesidad y el síndrome metabólico.

Introduction: The human adipose tissue is composed of different cell types. It has been subject of several studies in the past years due to its role on diverse functions. Methods: A search in the PubMed, Scielo, Science direct and Google Scholars databases was performed and the authors experience was reported. Results: The first model used was rodent fat, which allowed a better comprehension on carbohydrate and fatty acid metabolism and enhanced research in adipocyte cell biology in addition with histological studies and mature adipocyte isolation. Afterwards, learning about precursor cell (pre-adipocytes) promoted the isolation of murine 3T3-L1 cell line. In Latin America research has been conducted using cell lines and adipocyte precursor mesenchymal stem cells to describe effects of hormones and perform DNA sequencing. In Colombia, studies in 3T3-L1 cell line aimed to stablish the effects of different compounds on these cells. In the Cell Physiology Laboratory of the Universidad Tecnológica de Pereira, sample collection process has shown difficulties because the source was human tissue; nevertheless isolation and cell culture protocols were standardized throughout the last six years of experimentation. Pre-adipocytes and mature adipocytes were isolated to study the effects of hormones, perform electrophysiological characterization and study calcium physiology. Conclusions: This is a relevant research field since these cells have important systemic metabolic functions and they have a clear relationship with high-prevalence pathologies such as obesity and the metabolic syndrome.

Efecto citotóxico de BisGMA en cultivos celulares de fibroblastos humanos mediante ensayos de MTT / BisGMA cytotoxic effects on cell cultures of human fibroblasts by MTT assays

Objetivo: determinar la tasa de muerte celular al exponer fibroblastos humanos (FBH) a concentraciones de BisGMA: IE-6[M], 6E-5[M], IE-5[M] y 4,8E-4[M], con el fin de determinar la citotoxicidad de BisGMA presente en materiales de uso odontológico. Material y métodos: las concentraciones de BisGMA se aplicaron en el cultivo FBH durante 24, 48 y 96 horas. La viabilidad celular se determinó mediante ensayos de reducción metabólica del Bromuro de 3-(4,5dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT). Resultados: las concentraciones de BisGMA generan una disminución en la viabilidad celualr, de una forma dosis y tiempo dependiente. Conclusión: la disminución de la viabilidad celular es dependiente de la concentración de BisGMA presente en los cultivos celulares.

Estandarización de la técnica para la obtención de trypomastigotes en células 3T3 a partir de una cepa local de epimastigotes de Tripanosoma cruzi / Acquisition mode pesticides and drugs in intoxicated patients treated in emergency Hospital Clínico Viedma

Objetivo: evaluar el empleo de cultivos celulares para la obtención de tripomastigotes en células 3T3, a partir de una cepa local de epimastigotes de Tripanosoma cruzi. Método: se realizó cultivo in vitro de células 3T3 en medio DMEM-SBF al 10% más penicilina estreptomicina, a 37°C, 95% de humedad y 5% de CO2 al séptimo día, fueron infectados con epimastigotes de T. cruzi cepa TcV, aislados de pacientes con Chagas agudo y cultivados preliminarmente en medios bifásicos como NNN y LIT. Resultados: a los 14 días de infección se observó al parásito en las formas: de amastigotes (forma intracelular), posteriormente la tripomastigote (forma extracelular) que fueron liberados al medio una vez lisadas las células infectadas. Posteriores sub cultivos de células 3T3 con trypomastigotes obtenidos a partir de los epimastigotes mejoran la obtención de T. cruzi. Conclusiones: es posible la obtención de trypomastigotes a partir de una cepa local de epimastigotes recreando el ciclo biológico del parásito in vitro.

Objective: to evaluate the use of cell cultures for the production of trypomastigotes in 3T3 cells, from a local strain of Trypanosoma cruzi epimastigotes. Method: we previously performed growing 3T3 cells in DMEM-10% FBS more penicillin-streptomycin in vitro at 37 °C, 95% humidity and 5% CO2 on the seventh day, they were infected with T. cruzi epimastigotes TcV strain, isolated from patients with acute Chagas and preliminarily grown in biphasic media as NNN and LIT. Results: after 14 days of infection was observed the parasite forms: extracellular) that were released into the infected cells once lysed. Subsequent sub 3T3 cell cultures trypomastigotes obtained from epimastigotes obtaining improved T. cruzi-TcV. Conclusions: it is possible to obtain trypomastigotes from a local strain epimastigotes recreating the life cycle of the parasite in vitro.

Biotecnología y medicina regenerativa: relación a fortalecer / Biotechnology and regenerative medicine: a relationship to be strenghten

El artículo examina los saltos tecnológicos que se están produciendo en las ciencias de la vida y los impactos que se han producido en la medicina regenerativa y las terapias celulares, incluyendo las células madres (stem cells). La biotecnología se encuentra estrechamente relacionada con las ciencias biológicas básicas, lo cual presenta ventajas, riesgo y confusiones. La biología molecular y celular son necesarias para la biotecnología, pero no constituyen ellas mismas, en sí, la biotecnología. Es necesario, además, incluir en la consideración de esta disciplina las producciones en esacala, las regulaciones, el comercio, la economía, la industria, la política. Serán empresas biofarmacéuticas las que realizarán la fabricación, los estudios clínicos, la distribución y comercialización de las nuevas terapias, por lo que deberán participar en procesos deliberativos con organismos oficiales acerca del uso y desarrollo de sus productos. En Argentina, además de lo anterior, hay que favorecer el desarrollo tecnológico y, en especial, la producción, articulando con los organismo regulatorios. En el artículo se presentan algunas empresas e industrias del mundo que desarrollan biotecnología, se examinan las características, necesidades y desafíos de la producción, y algunos aspectos del sector en Argentina, haciendo hincapié en la importancia de la comunicación social en biotecnología...

Cultivos celulares de Choibá Dipteryx oleifera Benth / Cell cultures of Choiba Dipteryx oleifera Benth

Choibá (Dipteryx oleifera Benth) es un árbol de la familia Fabaceae (Papilionoideae), con una distribución geográfica reportada desde Nicaragua hasta Colombia a una altura de hasta 1000 msnm. Crece en bosque húmedo, muy húmedo o premontano húmedo. Esta especie es considerada vulnerable debido a la sobreexplotación de su madera, ya que es un árbol altamente apetecido por esta y por sus frutos. Su almendra almacena una buena cantidad de aceites con potencial para la industria alimentaria, lo que podría resultar en una nueva fuente alimenticia, por lo cual el cultivo in vitro de vegetales con el propósito de producir compuestos de interés, marca un punto de partida para reducir el uso del suelo y lograr componentes bioactivos bajo condiciones controladas. En este trabajo, como una primera etapa experimental, se evaluó el crecimiento celular en suspensiones, a partir de callo inducido en explantes de cotiledón; se ensayaron 6 tratamientos diferentes, la mitad de estos con MS como medio basal y la otra mitad con B5, cada uno de los dos grupos con un control y la combinación hormonal de 2.5 mg/L de 2,4-D y 1 mg/L de BAP o kinetina, suplementado con adenina, biotina, glutamina y ácido pantoténico y 30 g/L de sacarosa, bajo completa oscuridad. Se encontró que dos tratamientos con MS en combinación con 2.5 mg/L de 2,4-D y 1 mg/L de kinetina o BAP fueron los mejores.

Choibá (Dipteryx olifera) is a tree of the Fabaceae family, with a geographical distribution reported from Nicaragua to Colombia, nearly 1.000 msnm in a tropical rain forest. This species is a highly desired tree for its timber and fruits, the kernel store a lot of important oils for the food industry, resulting in a new possible food source, so we are making in vitro cultivation of vegetables with the purpose of producing compounds of interest and that mark a starting point on the reduction of land use and it achieves bioactive components under controlled conditions. In this work, as a first experimental step was evaluated the tissue cell growth in suspension, using fragments of cotyledon and testing 6 different treatments, the half of those with MS as basal medium and the other half with B5, each of the two groups with one control and hormone combination of 2.5 mg/L 2,4-D and 1 mg/L BAP or kinetin, supplemented with adenine, biotin, pantothenic acid and glutamine and 30 g l sucrose under complete darkness. It was found that two treatments with MS in combination with 2.5 mg/L 2,4-D and 1 mg/L kinetin or BAP were the best.

Evaluación de la citotoxicidad de la Clindamicina en cultivos de fibroblastos gingivales humanos / Evaluation of the cytotoxicity of Clindamycin in cultures of gingival human fibroblasts

Introducción: la presencia de microorganismos residuales post-preparación químico-quirúrgico de los conductos radiculares, sugiere el empleo de medicación intracanal eficaz y biológicamente compatible con los tejidos periapicales. Objetivo: comparar la citotoxicidad de medicaciones de uso intracanal en fibroblastos gingivales humanos. Métodos: estudio de tipo experimental. Con cuatro diferentes grupos: control (G1), Clorhidrato de Clindamicina 2g asociado a fosfato de dexametasona 0,32g (Clindex) vehiculado en solución alcohólica (G2), Clindex Vehiculado en polietilenoglicol 400 (G3), y NDP: paramonoclorofenol asociado a fosfato de dexametasona 0,32g vehiculado en polietilenoglicol 400 y solución salina (G4). Las células fueron estimuladas con las medicaciones por 24, 48 y 72 horas y la viabilidad celular fue evaluada usando la técnica de análisis de MTT y la lectura fue realizada en el espectrofotómetro de ELISA. Resultados: fueron analizados por medio de la actividad mitocondrial y mostraron que el G2 obtuvo los mejores resultados en los tres tiempos estudiados, seguido por el G3 y el G4. Se realizó análisis estadístico (ANOVA y complementado con la prueba de Tukey) mostraron diferencias significante a nivel de 1% G2 y G3 cuando se compararon con el G4. Conclusión: la combinación Clindamicina dexametasona independiente del vehículo presentó mayor viabilidad celular que el paramonoclorofenol asociado a fosfato de dexametasona.

Introduction: the presence of residual microorganisms after chemical-surgical preparation of root canals suggests the use of effective intracanal medication, biologically compatible with periapical tissues. Objective: compare the cytotoxicity of intracanal medications in gingival human fibroblasts. Methods: an experimental study was conducted with four different groups: control (G1), Clindamycin Hydrochloride 2g associated to dexamethasone phosphate 0.32g (Clindex) vehicled in alcoholic solution (G2), Clindex vehicled in polyethylene glycol 400 (G3), and NDP: paramonochlorophenol associated to dexamethasone phosphate 0.32g vehicled in polyethylene glycol 400 and saline solution (G4). The cells were stimulated with the medications for 24, 48 and 72 hours. Cell viability was evaluated with the technique of MTT analysis. Readings were performed in an ELISA spectrophotometer. Results: the groups were analyzed in terms of mitochondrial activity. G2 had the best results in the three times studied, followed by G3 and G4. A statistical analysis was performed (ANOVA and complemented by Tukey's test). Significant differences of 1% were found when comparing G2 and G3 with G4. Conclusion: the Clindamycin dexamethasone combination, irrespective of the vehicle, showed greater cell viability than paramonochlorophenol associated to dexamethasone phosphate.

Citotoxicidad in vitro de extractos laticiferos de Calotropis procera (Aiton) W.T. Aiton y Pedilanthus tithymaloides (L.) Poit / In vitro cytotoxicity of laticifers extracts from Calotropis procera (Aiton) WT and Pedilanthus tithymaloides (L) Poit

In order to assess the anticancer action of extracts obtained by latex from Calotropis procera and Pedilanthus tithymaloides, samples were collected from adult plants. Soluble proteins were extracted with 16 uL of 50 mM sodium acetate pH 5/ug integral latex and centrifugation at 16,000 x g for 15 min, the supernatant was named "latex crude extract" (LCE). The "latex methanolic extract" (LME) was obtained on dried latex. Both extracts were tested in vitro by cytotoxic and cytostatic activity in Jurkat cell cultures. Cellular viability, proliferation, necrosis and apoptosis were evaluated. LCE and LME of C. procera were found with cytotoxic and cytostatic activity after 24 incubation hours (p < 0,05) with doses from 1ug/mL. The LCE and LME of P. tithymaloides presented cytotoxic effect (p < 0,05) from 50 ug/mL and from 1ug/mL, respectively.

Con el objetivo de evaluar el potencial anticanceroso de extractos de látex de Calotropis procera y Pedilanthus tithymaloides se colectaron muestras de plantas adultas. Las proteínas solubles fueron extraídas con 16 uL de acetato de sodio 50 mM pH 5/ug de látex integral y centrifugación a 16.000 x g durante 15 min, denominándose al sobrenadante “extracto crudo de látex” (ECL). El “extracto metanólico de látex” (EML) se obtuvo sobre látex deshidratado. Ambos extractos fueron probados en su actividad citotóxica y citostática in vitro sobre cultivos de células Jurkat. Se realizaron estudios de viabilidad, proliferación, necrosis y apoptosis celular. El ECL y el EML de C. procera presentaron actividad citotóxica y citostática después de 24 y 48 horas de incubación (p < 0,05) con dosis desde 1 ug/mL. Los ECL y EML de P. tithymaloides presentaron efectos citotóxicos (p < 0,05) a partir de 50 ug/mL y desde 1 ug/mL respectivamente.

Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares / Implementation of an internal control in molecular detection of the main mycoplasma species contaminating cell cultures

Objetivo: Construir e implementar un control interno para la detección molecular de micoplasmas en cultivos celulares. Materiales y métodos: Se alinearon secuencias del RNA ribosomal 16S de las principales especies de micoplasmas reportadas como contaminantes de cultivos, y diseñaron oligonucleótidos para la detección de las mismas. Para la construcción del control interno se amplificó una secuencia espadadora, además de las secuencias de hibridación de los oligonucleótidos usados para detección. La amplificación desde dicho control generó un fragmento con tamaño diferente al obtenido desde una muestra positiva. Posteriormente, para la evaluación del efecto del control interno sobre la amplificación de una muestra positiva se realizó la prueba sobre diluciones seriadas de la muestra, en presencia y ausencia del control interno. Finalmente, se ensayó el protocolo utilizando sobrenadantes de cultivo provenientes de diferentes laboratorios. Resultados: Se observó alta homogeneidad al comparar los géneros Mycoplasma y Acholeplasma; no obstante se realizó el diseño de oligonucleótidos degenerados para aumentar teóricamente la eficiencia en la detección de todas las especies. Se demostró que la aplicación del control interno no afecta la sensibilidad de detección de la prueba. Los resultados obtenidos con muestras problema resaltan la importancia del control interno al realizar la prueba desde sobrenadantes de cultivo. Conclusiones: El uso del control interno evita la obtención de resultados falsos negativos, generados por presencia de inhibidores en la muestra. La implementación de la prueba beneficiará los laboratorios en cuyas investigaciones utilicen cultivos celulares y permitirá ejercer un control de calidad, lo cual hará más confiables los resultados/productos obtenidos.

Objective: to construct and implement an internal control for molecular detection of mycoplasma in cell cultures. Materials and Methods: Sequences of 16S ribosomal RNA of the major species of mycoplasma reported as contaminants in cell cultures were aligned, and oligonucleotides for detection were designed. For the construction of the internal control, a spacer sequence as well as sequences for hybridization of the oligonucleotides used for detection, were amplified. Amplification from the internal control and positive samples generated fragments with different sizes. Subsequently, to evaluate the effect of the internal control on the amplification of a positive sample, the assay was performed on serial dilutions of the sample in the presence and absence of the internal control. Finally, the protocol was tested using culture supernatants from different laboratories. Results: High homogeneity was observed when Mycoplasma and Acholeplasma genera were compared; however, degenerated oligonucleotides were designed to increase the efficiency of detection in all the analyzed species. It was shown that implementation of the internal control does not affect the sensitivity of detection. The results obtained with cell cultures samples highlighted the importance of the internal control. Conclusions: The use of an internal control facilitates the detection of false negative results generated by the presence of inhibitors in the sample. Implementation of the test as a quality control will benefit laboratories using cell cultures, making the results and / or products obtained more reliable.

Uso de fibrinógeno humano en la generación de soportes para la obtención de equivalentes tisulares / Use of human fibrinogen in the generation of scaffold for obtaining Tissue equivalents

Desde sus orígenes, la Ingeniería de Tejidos ha buscado diversos materiales que puedan ser utilizados para la generación de soportes que sirvan para el anclaje, proliferación y diferenciación celular que conduzcan a la obtención de tejidos humanos. Muchos materiales de tipo cerámico, polimérico y metálico se han evaluado, pero hasta la fecha muchos de ellos han sido rechazados por diversas razones, entre otras su escasa biocompatibilidad y biodegradabilidad, la respuesta inmune generada, la baja resistencia mecánica o el riesgo de transmisión de virus o priones. El fibrinógeno es una proteína presente en el plasma sanguíneo que puede ser utilizada para la generación de soportes tridimensionales que favorezcan el crecimiento de células; se obtiene a partir del propio paciente, bancos de sangre o como proteína purificada (Tisseel® o Tissucol®, Laboratorios Baxter). El fibrinógeno evita el desencadenamiento de una respuesta inmunológica y el uso de productos xenogénicos. Debido a la estructura proteica, la adhesión y proliferación celular se ven favorecidas dando excelentes resultados en la generación de equivalentes de piel, cartílago, córnea y reemplazos cardiacos en aplicaciones in vitro e in vivo. Como desventajas presenta su rápida degradación y su baja resistencia mecánica; sin embargo, en los últimos años se han venido evaluando mezclas con algunos biopolímeros como ácido poliláctico (PLLA), ácido poli-glicólico (PGA) y alginato de sodio. Esta revisión presenta algunas de las principales aplicaciones del fibrinógeno en Ingeniería de Tejidos.

Since its origin, Tissue Engineering has sought various materials that can be used for generation of scaffolds that serve to anchor, proliferation and cell differentiation leading to the production of human tissues. Many materials such as ceramic, polymeric and metal type have been evaluated to date but many have been rejected for various reasons, including its limited biocompatibility and biodegradability, immune response generated, low mechanical strength or the risk of transmission of virus or prions. Fibrinogen is a protein present in blood plasma that can be used to generate three-dimensional scaffolds that favors growth of cells, it is obtained from the patient itself, bank of blood or purified protein (Tisseel® or Tissucol®, Laboratorios Baxter). Fibrinogen acts slowing or reversing the immune response and avoiding the use of xenogeneic materials. Because the protein structure, adhesion and cell proliferation is favored with excellent results in the generation of skin equivalents, cartilage, cornea and even heart replacements in vitro and in vivo. The disadvantages presented are the rapid degradation and low mechanical strength, but in recent years it has been evaluating some biopolymer mixtures as polylactic acid (PLLA), poly-glycolic acid (PGA) and sodium alginate. This review presents some of the main applications of fibrinogen in Tissue Engineering.

PRODUCCIÓN in vitro DE ANTOCIANINAS - REVISIÓN / In Vitro Production of Anthocyanins - A Literature Review

La producción de metabolitos secundarios en cultivos celulares de plantas puede ser de interés para obtener compuestos difíciles de sintetizar o aislar de otras fuentes, lo cual generalmente se relaciona con un alto valor económico, aunque también puede ser útil para ayudar a dilucidar las vías metabólicas involucradas en la síntesis de estos compuestos. En este trabajo se presenta una descripción general de las antocianinas, un grupo de pigmentos de gran importancia para la industria, complementada con la referencia de los trabajos científicos recientes que se han publicado sobre la producción in vitro de las mismas. Con relación a esto último, se hace una descripción del efecto de cambios en las condiciones de cultivo, de la adición de precursores, del uso de reguladores de crecimiento, así como de la utilización de inductores y factores de estrés sobre la producción de estos compuestos. Finalmente, se hace mención al uso de raíces en cabellera, en inglés hairy roots, obtenidas mediante el uso de Agrobacterium rhizogenes, para la producción de estos compuestos.

The production of secondary metabolites in plant cell cultures may be of interest for obtaining compounds that are difficult to synthesize or isolate from other sources, which is usually associated with high economic value of the substances, but may also be useful to help elucidating the metabolic pathways involved in the synthesis of such compounds. This paper presents a general description of anthocyanins, a group of pigments of great importance to the industry, complemented by referring the scientific papers that have been recently published on their in vitro production. Regarding the latter, a description of the effect of changes in growing conditions, of the addition of precursors, of the use of growth regulators, and of the utilization of elicitors and stressors on the production of these compounds, is done. Finally, this review mentions the use of hairy roots obtained by the use of Agrobacterium rhizogenes for the production of these compounds.

Dengue virus serotypes in Jamaica, 2003-2007 / Serotipos del virus del dengue en Jamaica, 2003-2007

BACKGROUND: Dengue virus (DENV) infection is increasing in prevalence and severity globally. The severity of dengue is influenced by several factors including the immune response, viral and host genetic factors. METHOD: The DENV serotypes were determined in 770 serum samples from dengue immunoglobulin (Ig) M antibody positive (n = 469), dengue IgM negative (n = 185) and dengue antibody negative (n = 116) patients with suspected dengue who presented during (n = 150) or after (n = 620) the acute phase of illness during 2003-2007. Dengue antibodies were detected by enzyme-linked immunosorbent assays and DENV RNA by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) performed on serum and cell culture supernatants of C6/36 mosquito cells inoculated with acute phase serum (n = 150). RESULTS: Based on serological profiles, 41% of acute phase sera and 66% of post acute sera were from patients with current primary or secondary dengue, while 41% and 35% of acute and post-acute phase sera, respectively, were from patients with secondary dengue or past exposure only. Dengue virus RNA was found in 20/770 samples (2.6%). Only 1.5% (9/620) of sera collected after the acute phase of illness tested positive for DENV RNA compared with 2.6% (4/150) of sera collected during the acute phase and 7.3% of cell culture supernatants inoculated with acute phase serum (11/150, p = 0.001). All four serotypes including DENV-1 (3/20, 15%), DENV-2 (7/20, 35%), DENV-3 (3/20, 15%) and DENV-4 (7/20, 35%) were identified over the five-year period. These results also showed that DENV- 1, 2 and 4 were present during 2007 and that DENV-2 and DENV- 4 were the likely causative viruses of the 2007-2008 dengue outbreak in Jamaica. The three strains of DENV-3 were isolated from infants less than three years of age with primary infection during 2006. CONCLUSION: This study highlights the increasing threat of dengue and severe dengue disease to the Jamaican population. Preventative measures including laboratory surveillance and vector control should be strictly maintained at the highest level.

ANTECEDENTES: La infección por virus del dengue (DENV) está creciendo en prevalencia y severidad a nivel global. La severidad del dengue está influida por varios factores, incluyendo la respuesta inmunológica así como factores virales y genéticos del huésped. MÉTODO: Los serotipos del DENV fueron determinados en 770 muestras de suero de pacientes positivos al anticuerpo inmunoglobulina M (Ig) contra el dengue (n = 469), negativos a la IgM contra el dengue (n =185), y negativos al anticuerpo contra el dengue (n =116). Estos pacientes, con sospecha de dengue, se presentaron durante (n = 150) o después (n = 620) de la fase aguda de la enfermedad en el período de 2003-2007. Los anticuerpos contra el dengue fueron detectados mediante ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas (ELISA) y DENV ARN mediante reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (RT-PCR) realizados sobre suero y sobrenadantes del cultivo de células C6/36 de mosquitos, inoculadas con suero de la fase aguda (n =150). RESULTADOS: De acuerdo con los perfiles serológicos, 41% de los sueros de la fase aguda y 66% de los sueros de la fase post-aguda, provenían de pacientes con dengue primario o secundario corriente, mientras que el 41% y el 23% de los sueros de las fases agudas y post-agudas, provenían de pacientes con dengue secundario o exposición pasada solamente. Se halló ARN del virus del dengue en 20/770 muestras (2.6%). Sólo el 1.5% (9/620) de los sueros recogidos tas la fase aguda de la enfermedad resultaron positivos al ARN del DENV, en comparación con 2.6% (4/150) de los sueros recogidos durante la fase aguda y 7.3% de los sobrenadantes del cultivo celular inoculados con suero de la fase aguda (11/150, p = 0.001). Los cuatro serotipos incluyendo DENV-1 (3/20, 15%), DENV-2 (7/20, 35%), DENV-3 (3/20, 15%) y DENV-4 (7/20, 35%) fueron identificados en un período de cinco años. Estos resultados también mostraron que DENV-1, 2 y 4 estuvieron presentes durante 2007 y que DENV- 2 y DENV-4 fueron probablemente los virus causantes del brote de dengue en 2007-2008 en Jamaica. Las tres cepas de DENV-3 fueron aisladas de infantes menores de tres años de edad con infección primaria, durante 2006. CONCLUSIÓN: Este estudio señala la creciente amenaza del dengue y el carácter severo de esta enfermedad para la población jamaicana. Medidas preventivas, incluyendo la vigilancia de laboratorios y el control de vectores, deben mantenerse al más alto nivel.

Cytogenetic aberrations in primary cell cultures of the ovarian surface epithelium / Aberraciones citogenéticas en cultivos primarios del epitelio superficial del ovario

Our objective was to determine the presence of chromosomal abnormalities in primary cultures of ovarian surface epithelial cells in women of different ages with no history of cancer. Throughout conventional cytogenetic techniques, we analyzed chromosome spreads of cultured ovarian epithelial cells from 10 donors who were 50 or more years old (B) and 16 controls between 20 and 49 years old (A), belonging to the mestizo population in Bogota DC, Colombia. Of the 26 cultures that were analyzed in passage 1, 61.5% had an abnormal chromosome complement (62.5% in A, and 60% in B). Abnormalities included polyploidies, endoduplications and monosomies. Deletions in chromosomes 3 and 11 were found in just one metaphase. None of the samples showed weaknesses or breakpoints. After transforming and applying the exact student’s t-test for variance heterogeneity, we found significant differences in the frequency of metaphases, that were higher in A than in B (p=0.05), and in the frequency of polyploidies, which were higher in B than in A (p=0.044). Through the application of the Mann-Whitney test, we determined that the frequency of endoduplications was higher in A than in B (p=0.126), without reaching significant differences. There were no significant differences in the frequency of monosomies. The level of significance was set at p £ 0.05. Taking into account that polyploidization is a marker of chromosomal instability and that the risk of cancer arising from the ovarian surface epithelium augments substantially after menopause, the increase in the frequency of age-associated polyploidies could be used as a predictor of ovarian cancer in women from an ethnically homogeneous population as the mestizo one in Bogota DC.

El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de anormalidades cromosómicas en cultivos primarios de células del epitelio superficial ovárico en mujeres de diferentes edades, sin antecedentes de cáncer. Mediante técnicas de citogenética convencional fueron analizados extendidos de células epiteliales ováricas histológicamente normales, provenientes de cultivos primarios de 10 donantes de 50 o más años (B) y de 16 donantes entre 20 y 49 años que se utilizaron como grupo control (A), pertenecientes a la población mestiza de Bogotá DC, Colombia. De 26 cultivos examinados en pase 1, 61,5% presentó complemento cromosómico anormal, 62,5% en A y 60% en B. Las anomalías numéricas halladas, todas en mosaico, incluyeron poliploidías, endoduplicaciones y monosomías. En una única célula en metafase de un cultivo, se presentaron deleciones en los cromosomas 3 y 11. Ninguna muestra presentó fragilidades o roturas. Previa aplicación de transformaciones, con la prueba exacta t-student para varianzas heterogéneas, se encontraron diferencias significativas en la frecuencia de células con metafase normal, mayor en A que en B (p=0,05) y en la de poliploidías, mayor en B que en A (p=0,044). Con la prueba exacta de Mann-Whitney se determinó que la frecuencia de endoduplicaciones en A fue mayor que en B (p=0,126), sin alcanzar diferencias significativas y que no hubo diferencias significativas en la frecuencia de monosomías. El nivel de significación fue p £ 0,05. Si se tiene en cuenta que la poliploidización es un marcador de inestabilidad cromosómica y, que además, el riesgo de aparición de cáncer derivado del epitelio superficial del ovario aumenta sustancialmente después de la menopausia, el incremento en la frecuencia de poliploidías asociado con la edad podría ser utilizado como predictor de cáncer ovárico en mujeres de una población étnicamente homogénea como la población mestiza de Bogotá DC.

Estudio de cultivos celulares primarios derivados de Lucilia sericata (Diptera: Calliphoridae) / Study of primary cell cultures derived from Lucilia sericata (Diptera: Calliphoridae)

El propósito principal de la investigación aquí presentada fue obtener cultivos celulares primarios derivados de Lucilia sericata (Diptera: Calliphoridae). Esta mosca necrófaga es utilizada para determinar el intervalo post-mortem y en terapia larval. A partir de huevos embrionados, se realizaron explantes en diversos medios de cultivo (Grace, Schneider, MM/VP12, DMEM, Grace/L-15 y L-15), suplementados con 20% de suero fetal bovino. La esterilización del material biológico se efectuó mediante la aplicación de soluciones de formaldehido e hipoclorito de sodio. El crecimiento celular se inicio en los medios L-15, MM/VP12, Grace/L-15 y Schneider, en un tiempo promedio de 10 días después de efectuadas las siembras de tejidos embrionarios, mediante la proliferación de grupos de colonias dispersas en la superficies de los frascos de cultivo y a partir de las terminaciones de los fragmentos larvales. La evolución del crecimiento celular hasta la formación de la monocapa semiconfluente fue relativamente rápida, se alcanzo a las tres semanas post-explantes. La morfología de las células en los cultivos fue heterogénea, se destacaron formas epitelioides, similares a nerviosas, gigantes e irregulares. La comparación de las características de crecimiento de los cultivos celulares de L. sericata con los obtenidos de otras especies de dípteros mostro mayor favorabilidad en la evolución, en razón a que las células se adaptaron mejor a las condiciones fisico-quimicas de varios medios de cultivo. Este es el primer informe de cultivos celulares de una mosca de la familia Calliphoridae.

The main purpose of this study was to obtain primary cell cultures derived from Lucilia sericata (Diptera: Calliphoridae). Necrophagous this fly is used for determination of post-mortem interval and larval therapy. Since explants embryonated eggs were performed in various culture media (Grace Schneider, MM/VP12, DMEM, Grace/L-15 and L-15), supplemented with 20% fetal serum. Sterilization of the biological material was carried out by immersing it in formaldehyde and sodium hypochlorite solutions. The cell growth was initiated in the L-15, MM/VP12, and Schneider Grace/L-15 in an average time of 10 days after completion of planting by the proliferation of groups of colonies scattered on the surface of the boxes crops and also from the endings of larval fragments. The evolution of cell growth to the formation of monolayer semi-confluent was relatively fast, reaching at 3 weeks post-explant. Cellular morphology in cultured cells was heterogeneous, especially epithelioid forms, similar to nerve, giant and irregular. Comparison of the growth characteristics of these cell cultures with those obtained from other species of flies was more favorable in the evolution of those obtained from L. sericata, on the grounds that the cells are better adapted to the physical-chemical conditions of several culture media. This is the first report of a cell culture-fly family Calliphoridae.

In vitro amplification of BVDV field strains isolated in Argentina: effect of cell line and culture conditions / Amplificación in vitro de cepas de campo de virus de la diarrea viral bovina (VDVB) aisladas en Argentina: efecto de la línea celular y las condicioes de cultivo

The aim of this work was to study the in vitro amplification of BVDV (Pestivirus, Flaviridae) field isolates from Argentina in MDBK, BoTur and BHK-21 continuous cell lines. Field isolates 99/134 (mucosal disease), 00/693 (mucosal disease), 04P7016 (respiratory disease) and 04/89 (mucosal disease), genotype 1b, were used and compared with the Singer and NADL reference strains, genotype 1a. Additionally, cell lines derived from explants of bovine testis (RD- 420), bovine uterus (NCL-1) and porcine kidney (PKZ) were tested as alternative substrates for BVDV propagation in vitro. The effect of cell line, harvest time and infection protocol was evaluated. The viral titers observed depended on the virus and harvest time but not on the infection protocol. We found that MDBK and BoTur cell lines were susceptible to the infection whereas BHK-21 and PKZ were not. NADL viral titers, 00/693 and 04/89, increased from 24 to 48 h p.i. in BoTur cells and then reached a plateau, whereas those of 99/134 and 04P7016 remained constant between 24 and 72 h p.i. BVDV Singer, on the other hand, presented a maximum titer at 24 h p.i. and then decreased. BVDV-NADL titers increased in MDBK and NCL-1 but not in RD-420 between 24 and 48 h p.i., and then decreased at 72 h p.i. These facts lead us to conclude that neither the subgenotypes (1a, 1b) nor the clinical symptoms of the animal from the virus had been isolated seem to affect the virus cell line kinetics of viral replication in vitro. On the other hand, the most homogenous behavior, the most similar replication curves, and highest titers observed in MDBK and NCL-1 seem to indicate that these lines are generally more susceptible to BVDV replication.

Se estudió la interacción de aislamientos de campo de Argentina del VDVB (Pestivirus, Flaviridae) en las líneas celulares continuas MDBK, BoTur y BHK-21. Se utilizaron los virus de campo genotipo 1b, 99/134, 00/693 (casos compatibles con enfermedad de las mucosas) y 04P7016 (cuadro respiratorio) y las cepas de referencia genotipo 1a Singer y NADL. Además se evaluó la interacción de VDVB-NADL con las líneas celulares experimentales de bovino RD-420 y NCL-1 y de riñón porcino (PKZ). Se usaron 2 protocolos de infección. Los títulos virales observados dependieron del virus y del tiempo de infección y no así del modo de infección. Mientras que MDBK y BoTur resultaron susceptibles a la infección, BHK-21 y PKZ no lo fueron. Los virus NADL, 00/693 y 04/89 incrementaron su título entre las 24 y las 48 h p.i. en BoTur para mantenerlo posteriormente; los virus 99/134 y 04P7016 no presentaron variaciones y la cepa Singer presentó título máximo a las 24 h p.i para luego descender. La cinética del virus NADL en las células MDBK, RD-420 y NCL-1 tuvo un incremento de título para MDBK y NCL-1 entre las 24 y 48 h p.i que descendió a las 72 h p.i. La interacción virus-línea celular no estaría relacionada con el sub-genotipo del virus (1a o 1b), ni con el cuadro clínico; las células MDBK y NCL-1 serían más susceptibles a la replicación del VDVB.

Morfología y citoquímica de cultivos celulares de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) y susceptibilidad a Leishmania panamensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae)

Morphology and cytochemistry of Aedes aegypti’s cell cultures (Diptera: Culicidae) and susceptibility to Leishmania panamensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae). The first cellular line of Aedes aegypti was developed by Grace in 1966; afterwards, other cellular lines of this species have been generated. These have been used for the study of pathogenic organisms like viruses, bacteria and parasites, which demonstrates their importance in biomedical applications. This research describes, for the first time, some cytochemical characteristics of A. aegypti cell cultures, that were infected with (MHOM/CO/87CL412) strain of Leishmania panamensis. A morphological study of the cell culture was also carried out. Maintenance of the cell culture, parasites and infection in vitro were carried out in the Laboratory of Entomology, Cell Biology and Genetics of the Universidad de La Salle. The cell cultures infected with the parasite were maintained in a mixture of mediums Grace/L15, supplemented with 10 % fetal bovine serum (FBS) at pH 6.8 and a temperature of 26 ºC, during 3, 6 and 9 post-infection days. After this, these cell cultures were processed through High Resolution Light Microscopy (HRLM) and Transmission Electron Microscopy (TEM) based on standard protocols defined by the Group of Microscopy and Image Analyses of the Instituto Nacional de Salud. Semi-fine slices of 1 µm colored with toluidine blue were used for the morphological analysis of the culture, and ultra fine cuts of 60 to 90 nm stained with uranyl acetate and lead citrate where used for the ultrastructural study. In addition, PAS and peroxidase staining was carried out in cells fixed with methanol. The morphometric study was analyzed with software ImageJ (NIH). In the semi-fine slices, small cells were observed showing fibroblastic appearance 10.84±2.54 µm in length and 5.31±1.26 µm wide; other cells had epithelial appearance with a great peripheral nucleus, voluminous and vacuolated cytoplasm, 23.04±4,00 µm in length and 13.96±3.70 µm wide. These last ones predominated over the ones with fibroblastic appearance. Regarding the PAS coloration, 7.08 % of the cells presented abundant PAS positive cytoplasmatic granules which indicated polysaccharides presence. The peroxidase test gave a negative result. The greatest percentage of infection (18.90 %) of one total of 101 cells, turned up by day 6. Some cells analyzed by TEM presented a vacuolated aspect cytoplasm; some contained parasites, other fibrillar material and others were empty. The results indicate that A. aegypti cell culture can support the internalization and transformation of the parasite, which demonstrates the capacity that these cell cultures have to be infected with L. panamensis and to maintain the infection for approximately one week. Rev. Biol. Trop. 56 (2): 447-458. Epub 2008 June 30.

La primera línea celular de Aedes aegypti fue establecida por Grace en 1966 y desde entonces se han utilizado para el estudio de virus, bacterias y parásitos. En el presente trabajo se describen, por primera vez, algunas características citoquímicas de los cultivos celulares de A. aegypti, infectados con la cepa (MHOM/CO/87CL412) de Leishmania panamensis. También se realizó un estudio morfológico de las células del cultivo. Se observaron 30 células pequeñas con apariencia fibrolastoide de 10.84±2.54 µm de largo y 5.31±1.26 µm de ancho; otras 30 presentaron apariencia epitelioide con 23.04±4.00 µm de largo y 13.96±3.70 µm de ancho; éstas últimas predominaron sobre las de apariencia fibroblastoide. De 113 células, un 7.08%, presentaron abundantes gránulos citoplasmáticos positivos con la coloración de PAS, indicando presencia de polisacáridos. La prueba de peroxidasa dio un resultado negativo. El mayor porcentaje de infección (18.90%), de un total de 101 células, se presentó el día 6. Ultraestructuralmente, las células presentaron un citoplasma con aspecto vacuolado; algunas contenían parásitos, otras material fibrilar y otras estaban vacías. Los resultados indican que los cultivos celulares de A. aegypti pueden ser infectados por L. panamensis y mantener dicho proceso por aproximadamente una semana.