ABSTRACT
Introdução: o mercúrio constitui um dos metais mais tóxicos e sua contaminação tem sido alvo de muitos estudos que buscam desvendar os mecanismos envolvidos em sua toxicidade e seus efeitos deletérios para os seres vivos. A espécie Duguetia furfuracea (A. St.-Hil.) Saff., conhecida popularmente como araticum-bravo, ata-brava e ata de lobo, tem sido utilizada na medicina popular como anti-reumáticas, para o tratamento de disfunções renais, dores na coluna e no estômago, e contra pediculose. Objetivo: avaliar o efeito citoprotetor do extrato etanólico e frações de D. furfuracea frente ao metal pesado cloreto de mercúrio (HgCl 2). Métodos: a caracterização dos metabólitos secundários foi realizada através de prospecção fitoquímica, na qual se observam a alteração de cor ou formação de precipitados após adição de reagentes específicos. A Concentração Inibitória Mínima (CIM) foi determinada pelo método de microdiluição em caldo e a Concentração Bactericida Mínima (CBM) verificada utilizando placas de petri com HIA (Heart Infusion Agar) para transferência das soluções incubadas em placas de microdiluição. Resultados: a prospecção fitoquímica revelou a presença de taninos, flavonoides e alcaloides. Todas as amostras apresentaram um CIM ≥ 1024 µg/mL. De acordo com os resultados obtidos na CBM, o extrato etanólico e as frações de D. furfuracea, exceto a fração hexânica, apresentaram atividade citoprotetora à bactéria E. coli frente ao metal pesado cloreto de mercúrio, sendo essa ação atribuída às propriedades quelantes dos flavonoides. Conclusões: os dados obtidos indicam a espécie D. furfuracea como uma fonte promissora no combate a metais pesados, apresentando-se como protetora de seres procariontes. Este é o primeiro relato do uso de plantas medicinais como agente citoprotetor em modelo bacteriano.
Introduction: mercury is one of the most toxic metals. Contamination by mercury has been the object of many studies aimed at unraveling the mechanisms involved in its toxicity and its harmful effects on living beings. The species Duguetia furfuracea (A. St.-Hil.) Saff., popularly known asaraticum-bravo’, ‘ata-brava’ and ‘ata de lobo’, has been used in folk medicine as antirheumatic and for the treatment of renal dysfunction, spinal pain, stomach ache and pediculosis. Objective: evaluate the cytoprotective effect of the ethanolic extract and fractions of D. furfuracea against the heavy metal mercury chloride (HgCl 2). Methods: characterization of secondary metabolites was performed by phytochemical screening, in which color change and precipitate formation are examined after the addition of specific reagents. Minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by broth microdilution, and minimum bactericidal concentration (MBC) was verified using petri plates with HIA (heart infusion agar) to transfer the solutions incubated on microdilution plates. Results: phytochemical screening revealed the presence of tannins, flavonoids an alkaloids. All samples exhibited a MIC ≥ 1024 µg/mL. MBC results showed that the ethanolic extract and all fractions of D. furfuracea except for the hexane fraction have cytoprotective activity by the bacterium E. coli against mercury chloride, an action attributed to the chelating properties of flavonoids. Conclusions: data point to the promising value of the species D. furfuracea against heavy metals, presenting as protectors of procaryote beings. This is the first report on the use of medicinal plants as cytoprotective agents on the bacterial model.
Introducción: el mercurio es uno de los metales más tóxicos y su contaminación ha sido objeto de muchos estudios que tratan de desentrañar los mecanismos implicados en su toxicidad y sus efectos nocivos en los seres vivos. La especie Duguetia furfuracea (A. St.-Hil.) Saff., popularmente conocido como ‘araticum-bravo’, ‘ata-brava’ y ‘ata de lobo’, se ha utilizado en la medicina popular como un anti-reumático para el tratamiento de la disfunción renal, dolor vertebral y de estómago, y contra la pediculosis. Objetivo: evaluar el efecto citoprotector del extracto de etanol y fracciones de D. furfuracea al metal pesado cloruro de mercurio (HgCl2). Métodos: la caracterización de metabolitos secundarios se realizó mediante la prospección fitoquímica, en la que se observa el cambio de color o la formación de precipitados después de la adición de los reactivos específicos. La Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) se determinó mediante microdilución en caldo y la Concentración Bactericida Mínima (CBM) verificada usando placas de petri con HIA ( Heart Infusion Agar) para transferencia de las soluciones incubadas en placas de microdilución. Resultados: la prospección fitoquímica reveló la presencia de taninos, flavonoides y alcaloides. Todas las muestras presentaron una CIM ≥ 1024 µg/mL. De acuerdo con los resultados obtenidos en la CBM, el extracto de etanol y fracciones de D. furfuracea, excepto la fracción de hexano, mostraron actividad citoprotectora de la bacteria E. coli delante del cloruro de mercurio, siendo esa acción atribuida a las propiedades quelantes de los flavonoides. Conclusiones: los datos obtenidos indican que la especie D. furfuracea como una fuente prometedora para combatir los metales pesados, que se presentan como protectores de seres procariotas. Este es el primer informe del uso de plantas medicinales como agente citoprotector en el modelo bacteriano.
ABSTRACT
Brine shrimp lethality test as a biological model for the preliminary selection of pediculicidal components from a natural source. In order to achieve a good correlation between pediculicidal activity and brine shrimp lethality (BSL) test, several pediculicidal substances and active essential oils were tested in BSL test, with the purpose to use the latter as convenient preliminary protocol for pediculicidal activity. Benzyl benzoate, deltametrine and essential oil of Eucalyptus were purchased and clove essential oil obtained by hydrodistillation, besides essential oils, chloroform extracts from Duguetia furfuracea were also submitted to BSL test. All of them were carried out with same protocol described to pediculicidal assay found in the literature, i.e, flask tests were examined every five minutes in the first half hour and then every ten minutes until all the naupli were dead or no movements were observed (knockdown). During the BSL test, it was possible to observe the effect of a particular lethal dose or only a knockdown in the arthropod, as occurred in the test with lice. The results of the BSL test for essential oils and other active substances are essentially in agreement with those described in literature for pediculicidal activity. Extracts and essential oil obtained from aerial parts of D. furfuracea did not present activity, but the essential oil from underground stem bark was active. α-asarone has already been isolated from the underground stem and it has been previously described to possess insecticidal activity.
O teste de toxicidade frente a Artemia salina (TAS) foi utilizado como modelo biológico preliminar na busca de substâncias potencialmente pediculicidas a partir de fontes naturais. Foi encontrada uma boa correlação entre a atividade pediculicida e o TAS, várias substâncias e óleos essenciais descritos como pediculicidas foram testados sobre o microcrustáceo, com o objetivo de se obter um protocolo preliminar e apropriado para detectar aquela atividade. Benzoato de benzila, deltametrina, e óleos essenciais de eucalipto e cravo foram obtidos comercialmente e/ou por extração. Além desses, extratos e óleos essenciais de Duguetia furfuracea também foram testados frente a Artemia. Todas as amostras foram conduzidas utilizando o mesmo protocolo proposto para atividade pediculicida, ou seja, os frascos testes foram lidos a cada cinco minutos na primeira meia hora e depois a cada dez minutos até os nauplios estarem mortos ou sem movimento (knockdown). Durante o TAS foi possível observar a dose letal ou somente o knockdown na larva, como ocorrido no teste com piolho. Os resultados do TAS para os óleos essencial e os demais compostos ativos estão essencialmente de acordo com o descrito na literatura para a atividade pediculicida. Extratos das sementes e óleos essenciais das folhas e sementes D. furfuracea não apresentaram atividade, mas o óleo das cascas do caule subterrâneo foi ativo α-asarona foi isolado das cascas do caule e esta substância apresenta atividade inseticida.
Subject(s)
Artemia , Benzoates , Biological Assay , Oils, Volatile , Pediculus capitisABSTRACT
Duguetia furfuracea, Annonaceae, uma invasora de pastagens, é também usada na medicina tradicional em diversos estados no Brasil. Devido à significante diferença de odor entre dois grupos de indivíduos desta planta em um remanescente de cerrado em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, seis amostras foram selecionadas de acordo com a intensidade de odor em suas folhas: In-01, In-03 e In-05: odor pronunciado (Perfil A); In-02, In-04 e In-06: odor fraco ou ausência de odor (Perfil B). As folhas foram coletadas e submetidas a hidrodestilação para obtenção dos óleos essenciais, os quais foram analisados por CG/EM. Uma boa compatibilidade foi encontrada entre os resultados obtidos por CG/EM e a análise olfativa adotada para as amostras: espécimes odor pronunciado apresentaram uma alta porcentagem de monoterpenos e alguns sesquiterpenos: In-01 (β-felandreno, 42,2 por cento; mirceno, 6,8 por cento; α-felandreno, 4,6 por cento); In-03 (terpin-4-ol, 21,6 por cento; sabineno, 17,3 por cento; p-cimeno, 5,6 por cento); In-05 (sabineno, 25,1 por cento; terpin-4-ol, 16,2 por cento; p-cimeno, 8,3 por cento). Apenas sesquiterpenos foram encontrados nos espécimes que apresentaram odor fraco ou ausência do mesmo (com constituinte majoritário biciclogermacreno: 21,4 por cento, 24,0 por cento, and 29,1 por cento, respectivamente, para os In-02, In-04 e In-06).
Duguetia furfuracea, Annonaceae, a pasture weed, is also used in folk medicine in several Brazilian states. Because of the significant difference in odor between two groups of this plant in a remnant patch of savanna in Campo Grande county, Mato Grosso do Sul, six samples were selected according to the odor intensity in the leaves (In-01, In-03, and In-05: pronounced odor; In-02, In-04, and In-06: weak odor or its absence). The leaves were collected and subjected to steam distillation for extraction of essential oils, which were analyzed by GC-MS. A good agreement was found between CG/MS results and olfactory evaluation of the samples: specimens exhibiting leaf scent had a high percentage of monoterpenes and some sesquiterpenes, as follows: In-01 (β-phellandrene, 42.2 percent; myrcene, 6.8 percent; α-phellandrene, 4.6 percent); In-03 (terpin-4-ol, 21.6 percent; sabinene, 17.3 percent; p-cymene, 5.6 percent); In-05 (sabinene, 25.1 percent; terpin-4-ol, 16.2 percent; p-cymene, 8.3 percent). Only sesquiterpenes were found in the specimens having weakly scented or scentless leaves (main constituent bicyclogermacrene: 21.4 percent, 24.0 percent, and 29.1 percent, respectively, for In-02, In-04 and In-06).