Achados microbiológicos, moleculares e histopatológicos em pequenos ruminantes experimentalmente infectados com Actinobacillus seminis / Microbiological, molecular and histopathological findings in small ruminants experimentally infected with Actinobacillus seminis

O objetivo deste trabalho foi avaliar a patogenicidade, em ovinos, de uma cepa de Actinobacillus seminis isolada de caprino no Brasil. Foram utilizadas amostras de sêmen, punção e fragmentos de epidídimo, ducto deferente, testículos e glândulas seminíferas de dois caprinos (animais 1 e 2) e dois ovinos (animais 3 e 4), e foram realizados exame histopatológico, cultivo microbiológico e diagnóstico molecular. O inóculo foi preparado com solução salina na diluição de 10-2 correspondendo ao padrão 1,0 da escala de McFarland, com colônias previamente cultivadas de A. seminis e administrado no volume de 2 mL pelas vias intra-prepucial (animais 1 e 3) e na cauda do epidídimo (animais 2 e 4). Na avaliação clínica observou-se aumento unilateral de consistência firme após 30 dias no epidídimo e testículo do animal 4 que continuou até o dia da eutanásia, bem como o animal 1 apresentou discreto aumento unilateral dos testículos. As lesões macroscópicas e microscópicas observadas nos animais 3 e 4 foram compatíveis com aquelas causadas pela infecção por A. seminis. A. seminis foi isolado de material de punção e sêmen de um ovino (animal 4). Conclui-se que o modelo de infecção experimental utilizando caprinos e ovinos comprovou a patogenicidade da amostra de A. seminis, isolada de um caprino no semiárido brasileiro e reproduzida em um ovino, comprovando a predileção do agente pelo epidídimo, com quadro clinico, achados histopatológicos, isolamento bacteriano e diagnóstico molecular positivo.(AU)

The aim of this study was to evaluate, in sheep, the pathogenicity of an Actinobacillus seminis strain isolated from a goat in Brazil. Samples of semen, puncture and fragments of epididymis, deferent duct, testicles and seminal vesicles from two goats (animals 1 and 2) and two sheep (animals 3 and 4) were used, and histopathological, microbiological culture and molecular diagnoses were performed. The inoculum was prepared with saline solution at 10-2 dilution corresponding to 1.0 McFarland standard, with A. seminis colonies previously cultured and administered on 2mL volume by intra-preputial (animals 1 and 3) and epididymis tail (animals 2 and 4) routes. At clinical evaluation it were found unilateral swelling of firm consistency after 30 days in epididymis and testicle from animal 4 that continued until the day of euthanasia, as well as animal 1 shown discrete unilateral swelling of testicles. Gross and microscopic lesions in animals 3 and 4 were compatibles with that caused by A. seminis infection. A. seminis was isolated from material of puncture and semen of one sheep (animal 4). It is concluded that the experimental infection model using goats and sheep has proved the pathogenicity of the A. seminis strain isolated from a goat in the Brazilian semiarid and reproduced in a sheep, which confirm the prediletion of the agent for epididymis, with clinical signs, histopathological findings, bacterial isolation and positive molecular diagnosis.(AU)

Real-time PCR for detection of Brucella ovis and Histophilus somni in ovine urine and semen / PCR em tempo real para detecção de Brucella ovis e Histophilus somni em urina e sêmen ovino

A epididimite infecciosa ovina é uma das principais enfermidades reprodutivas de carneiros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver protocolos de PCR em tempo real para B. ovis e H. somni e avaliar sua aplicabilidade em amostras de sêmen e urina de carneiros. Delinearam-se primers e sondas espécie-específicos para cada agente. As sondas foram delineadas com o sistema TaqMan incorporando um marcador FAM para B. ovis e Cy5 para H. somni na extremidade 5' e um quencher na extremidade 3'. A PCR em tempo real para B. ovis e H. somni foi altamente sensível, uma vez que a amplificação de DNA ocorreu com até 0,2ng de DNA/reação. A especificidade dos iniciadores e sondas foi avaliada com amostras de DNA de outros agentes causadores de epididimite ovina e nenhuma amplificação inespecífica foi observada. A aplicabilidade da técnica em amostras biológicas também foi confirmada, pois não houve perda de eficácia (P>0,05) quando comparada à PCR convencional com amostras de sêmen e urina de carneiros experimentalmente infectados.

Orquiepididimite em carneiro por Salmonella enterica sub-diarizonae: primeiro caso na América do Sul / Orchiepididymitis in ram by Salmonella enterica sub diarizonae: first case in South America

O objetivo deste artigo é relatar um caso de orquiepididimite associado com infecção por Salmonella enterica subespécie diarizonae em carneiro da raça Santa Inês de quatro anos de idade, vasectomizado. Ao exame clínico reprodutivo, o animal mostrou aumento severo do conteúdo escrotal, sendo o testículo direito maior do que o esquerdo e a cauda do epidídimo direita maior do que a esquerda. A consistência testicular, avaliada em escala de 1 a 5, foi 5 para o testículo direito e 2,5 para o esquerdo; o órgão apresentava-se muito sensível ao toque. Na ultrassonografia foram observadas estruturas anecoicas/hipoecoicas circulares na cauda do epidídimo, sugestivas de abscessos; alguns pontos hiperecogênicos no parênquima testicular, sugerindo lesões de calcificação; e todo o testículo direito rodeado por imagem hipoecoica, indicativa de edema. Uma das estruturas da cauda do epidídimo direita foi puncionada, encontrando-se exsudato purulento, o qual foi enviado para exame microbiológico, sendo isolada e identificada Salmonella enterica subespécie diarizonae. O carneiro foi submetido a orquiepididectomia, e o órgão foi caracterizado macroscopicamente por adesões fibrosas entre as camadas escrotais, coexistência de abscessos epididimários e degeneração testicular. A Salmonella enterica subespécie diarizonae deve ser considerada no diagnóstico diferencial de infecção genital em ovinos.

The objective of this manuscript was to report a case of orchiepididymitis associated with Salmonella enterica subespécie diarizonae infection in a vasectomized 4-year-old Santa Inês ram. In the clinical-reproductive examination, the animal showed a severe enlargement of the scrotal contents, being the right testicle larger than left, and the right epididymal cauda was higher than the left. The testicular consistency, evaluated in a scale from 1 to 5, was 5 to the right and 2.5 to the left, and the organ was very sensitive to the touch. In the ultrasound circular structures anechoic/hypoechoic in the epididymal cauda were observed, and in the parenchyma of testicles some points of hyperechogenic image, suggesting calcification lesions and the entire right testicle was surrounded by hypoechoic image, indicative of edema. One of those structures of the right epididymal cauda was aspirated and a purulent exsudate was found, which was sent to microbiological exam, was isolated and identified Salmonella enterica subespécie diarizonae. The ram was submitted to orchiepididectomy, and the organ was characterized macroscopically by fibrous adhesions between scrotum layers, coexistence of epididymal abscesses and testicular degeneration. The Salmonella enterica subspecie diarizonae must be taken into account in the differential diagnosis of ovine genital infections.

Epididimite ovina por Actinobacillus seminis no Estado de Pernambuco / Sheep epididymitis by Actinobacillus seminis in the state of Pernambuco, Brazil

Relata-se a ocorrência de orquite e epididimite ovina associada ao isolamento de Actinobacillus seminis no Estado de Pernambuco. Clinicamente observou-se aumento de volume nos testículos e epidídimos, dor e aumento de temperatura local à palpação, e atrofia testicular bilateral. Após o abate observou-se a presença de conteúdo purulento no epidídimo. À microscopia dos testículos observou-se espessamento da túnica albugínea, necrose de coagulação e calcificação de túbulos seminíferos, infiltrado inflamatório com predominância de linfócitos entre túbulos seminíferos, além de mineralização incipiente de túbulos. No epidídimo observou-se intensa proliferação de tecido conjuntivo ao redor dos ductos epididimários. O diagnóstico de orquite e epididimite por Actinobacillus seminis foi confirmado pela associação dos achados clínico-patológicos, isolamento e identificação da bactéria.

This study reports the occurrence of sheep epididymitis and the isolation of Actinobacillus seminis in the state of Pernambuco, Brazil. An increase in volume of the testicles and epididymis, pain and increase in the local temperature at palpation, and bilateral testicular atrophy were clinically observed. After slaughter, the presence of purulent content in the epididymis was found. In microscopy of the testicles, coagulation necrosis and calcification of seminiferous tubules, thickening of the tunica albuginea, fibrosis, inflammatory infiltrate with predominance of lymphocytes between seminiferous tubules and incipient mineralization of tubules was observed. In the epididymis, intense proliferation of conjunctive tissue and fibrosis around the epididymal ducts was found. The diagnosis of epididymitis by Actinobacillus seminis was confirmed with association of the clinical findings, isolation and identification of the bacteria, as well as through histopathological exam.

Rapid serum agglutination and agar gel immunodiffusion tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis / Teste de soro aglutinação rápida e do teste de imunodifusão em gel de ágar associados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis

The purpose of this study was to evaluate the agar gel immunodiffusion and the rapid serum agglutination tests associated to clinical signs in rams experimentally infected with Brucella ovis. The serological profile during the 12 months of infection showed a large fluctuation of antibodies that favors the failure in the diagnostic. The evaluation of tests after the experimental infection allowed to suggest that none of the tests were able to detect the infection throughout the period of study. The study reinforces the importance of considering the clinical signs to support the diagnosis of Brucella ovis infection in rams.

O objetivo deste estudo foi avaliar o uso do teste de imunodifusão em gel de ágar e o teste sorológico de aglutinação rápida comparados aos sinais clínicos em carneiros infectados experimentalmente com Brucella ovis para o diagnóstico confirmatório da brucelose ovina. O perfil sorológico durante os 12 meses pós-infecção mostrou flutuação da resposta por anticorpos, que favorece a falha no diagnóstico. A avaliação dos testes indicou que nenhum dos testes foi capaz de detectar a infecção durante todo o período de estudo. O estudo ressalta a importância de considerar os sinais clínicos para apoiar o diagnóstico confirmatório da infecção por Brucella ovis em carneiros.

Trypanosoma vivax nos tecidos testicular e epididimário de ovinos experimentalmente infectados / Trypanosoma vivax in testicular and epidydimal tissues of experimentally infected sheep

Quatro ovinos machos, com cerca de 12 meses de idade (Ovinos 1-4), foram infectados por via intravenosa com aproximadamente 1,25x10(5) tripomastigotas de Trypanosoma vivax, outros quatro ovinos (Ovinos 5-8) destinaram-se ao grupo controle. Após a infecção, exames clínicos visando avaliar temperatura retal, freqüências cardíaca e respiratória e parasitemia foram realizados diariamente por 30 dias, tempo estabelecido para o término do experimento. A avaliação do hematócrito foi realizada a cada cinco dias. Ao final do período experimental, os animais foram castrados e os testículos e epidídimos submetidos ao exame anatomopatológico. Amostras destes órgãos dos Ovinos 1, 4 e 5 foram tomadas para a realização da reação em cadeia da polimerase (PCR). Os parâmetros clínicos (hipertermia, aumento das freqüências cardíaca e respiratória, aumento de volume dos linfonodos e palidez das mucosas) mantiveram-se para o grupo infectado acima dos valores mostrados pelo grupo controle durante todo o período experimental. A parasitemia foi observada a partir do 3º dia pós-infecção (dpi) com picos nos 6-10os dpi e nos 15-18os dpi. Os Ovinos 1 e 4 apresentaram, a partir do 25º dpi, anemia acentuada. Macroscopicamente, todos os testículos dos animais do grupo infectado apresentaram-se flácidos e com coloração pálida. Microscopicamente, observaram-se degeneração testicular moderada a acentuada, epididimite multifocal e hiperplasia do epitélio epididimário. A análise por PCR de T. vivax nos tecidos testicular e epididimário resultou em 100% de positividade para ovinos infectados experimentalmente. As lesões epididimárias e testiculares associadas à presença do parasita nesses órgãos, detectada por PCR, sugerem a participação do parasita no mecanismo etiopatogênico de danos reprodutivos.(AU)

Four adult sheep (number 1, 2, 3 and 4), all males, were inoculated intravenously with 1ml of blood containing 1.25x10(5) trypomastigotes of Trypanosoma vivax, and Sheep 5, 6, 7 and 8 were used as control. After infection, clinical exams considering rectal temperature, respiratory and cardiac frequencies, and parasitaemia were recorded daily for a 30-day experiment period. Blood samples were obtained for 5-day intervals to hematocrit analysis. At the end of the experimental period, the sheep were orquiectomized. Testes and epididymides from these animals were studied anatomopathologically. Samples from these tissues of Sheep 1, 4 and 5 were taken to polymerase chain reaction (PCR). Clinical parameters remained for the infected group above the values observed in the control group during the experimental period. Parasitaemia was observed on day 3 post-infection, and the highest values occurred between day 6 and 10, and day 15 and 18 post-infection. Sheep 1 and 4 showed severe anemia on day 25 post-infection. All sheep of the infected group showed flabby and palid testes. Histologically, moderate to severe testicular degeneration, multifocal epididymitis and hyperplasia of epididymal epithelium were observed. The result of T. vivax PCR analysis in the testes and epididymal tissues was positive in 100% of the samples of the experimentally infected sheep. Epididymal and testicular lesions associated with the presence of the parasite in these tissues, shown by PCR, suggest the participation of T. vivax in the pathophysiological mechanism of reproductive damage.(AU)