Developmental stages and viability of Toxocara canis eggs outside the host / Desarrollo y viabilidad de huevos de Toxocara canis

ABSTRACT Introduction: Toxocariasis is a soil-transmitted zoonotic disease caused mainly by ingestion of larvated eggs of Toxocara canis. Objectives: To study the morphology of the intraovular developmental stages of Toxocara canis in culture, characterize non-viable eggs and the sequences of larval molting and compare the viability of eggs at the early stages of division and at reaching full maturation. Material and methods: Observation of developing embryos and characterization of non-viable eggs were done using light microscope. The proportions of viable eggs during embryonation were compared to the proportions of viable mature eggs. Results: Cell division commenced after 24 hours of cultivation. Early stages were found to be present over a period of 3-5 days. The developmental stages identified were eggs with: One cell, two cells, three cells, four cells, early morula, late morula, blastula, gastrula, tadpole, pre-larva, first, second and third stage larva. Two larval molts occurred. Non-viable eggs had degenerated cytoplasm, thin or collapsed shell and the larvae did not move after exposure to light. No significant differences were found between the proportions of viable eggs from day five to day 21 as compared to viability of fully mature eggs (30 days). Conclusion: Developing embryos in the environment may be considered as a potential threat to the public health. The precise identification of developmental stages and the clear differentiation of viable and non-viable eggs can help in determining an accurate baseline rate of development that could be used in studies of ovicidal compounds.

RESUMEN Introducción. La toxocariasis es una enfermedad zoonótica transmitida por contacto con el suelo contaminado y causada principalmente por la ingestión de huevos larvados de Toxocara canis. Objetivos. Estudiar la morfología de los estadios intraovulares en desarrollo de T. canis en cultivo, caracterizar los huevos no viables y las secuencias de las mudas larvarias, y comparar la viabilidad de los huevos en las etapas tempranas de división y al alcanzar la maduración completa. Materiales y métodos. Se observó el desarrollo de los embriones y se caracterizaron los huevos no viables, mediante microscopía de luz. Se comparó la proporción de huevos viables con embrión con la de huevos maduros viables. Resultados. La división celular comenzó 24 horas después de iniciado el cultivo. Los estadios tempranos estuvieron presentes por un periodo de tres a cinco días. Los estadios de desarrollo identificados fueron: huevos con una célula, con dos células, con tres células y con cuatro células;mórula temprana, mórula tardía, blástula, gástrula, renacuajo, prelarva, primer, segundo y tercer estado larvario. Se presentaron dos mudas larvarias. Los huevos no viables tenían el citoplasma degradado, cubierta exterior delgada o colapsada, y su larva no se movía al exponerla a la luz. No se encontraron diferencias significativas entre la proporción de huevos viables del día 5 al día 21, al compararla con la viabilidad de los huevos completamente maduros (30 días). Conclusión. Los embriones en desarrollo en el medio ambiente pueden considerarse como un riesgo potencial para la salud pública. La identificación precisa de los estadios de desarrollo y la clara diferenciación de huevos viables y no viables, pueden ayudar a determinar con exactitud una tasa basal de desarrollo, la cual sería útil en el estudio de compuestos ovicidas.

Embrioteca: espacio para la investigación científica y la docencia en la universidad médica villaclareña / Embrioteca: space for scientific research and teaching at the medical university of Villa Clara

Las embriotecas humanas son valiosas colecciones de material embrionario humano que honran las instituciones que las poseen. Entre las más citadas actualmente están prestigiosas embriotecas en España, Estados Unidos y Argentina. Resultan de un laborioso trabajo de recolección y procesamiento de delicadas muestras embrionarias con potencialidades de uso docente e investigativo. Han sido múltiples las aportaciones al conocimiento científico a partir del estudio de sus series, además del inestimable valor didáctico de las imágenes que atesoran. La Universidad de Ciencias Médicas de Villa Clara presenta la modesta colección que posee, abierta a nuevas contribuciones y a los interesados en su consulta. El objetivo de esta revisión es exponer su relevancia científica y docente en un contexto de revisión histórica y actualidad.

Human embryos are valuable collections of human embryonic material that honor the institutions that own them. Among the most cited are currently prestigious embryos in Spain, the United States and Argentina. They result from a laborious work of collection and processing of delicate embryonic samples with potential for teaching and research use. There have been many contributions to scientific knowledge from the study of their series, in addition to the invaluable didactic value of the images they treasure. The University of Medical Sciences of Villa Clara presents the modest collection that it has, open to new contributions and to those interested in its consultation. The objective of this review is to expose its scientific and teaching relevance in a context of historical review and current affairs.

Odontogenic cell culture in PEGDA hydrogel scaffolds for use in tooth regeneration protocols

In order to obtain a tooth-like structure, embryonic oral ectoderm cells (EOE) and bone marrow-derived stem cells (BMSC) were stratified within a synthetic hydrogel matrix (PEGDA) and implanted in the ileal mesentery of adult male Lewis rats. Wholemount in situ hybridization was used to evaluate the expression of Pitx2, Shh and Wnt10a signals indicative of tooth initiation. In rats, expression of the three markers was present in the oral ectoderm starting at embryonic stage E12.5, which was therefore selected for cell harvesting. Embryos were obtained by controlled service of young female Lewis rats in which estrus was detected by impedance reading. At E12.5, pregnant rats were humanely euthanized and embryos were collected. The mandibular segment of the first branchial arch was dissected and the mesenchyme separated from the ectoderm by enzymatic digestion with pancreatin trypsin solution. BMSCs were collected by flushing the marrow of tibiae and femurs of adult Lewis rats with a-MEM and cultured in a-MEM in 25 cm2 flasks. Second passage BMSC's were recombined with competent oral ectoderm (E12.5-E13) stratifying them within a 3D PEGDA scaffold polymerized by exposure to UV (365nm) inside a pyramidal polypropylene mold. Constructs were incubated from 24 to 48 hrs in a-MEM and then implanted for four to six weeks in the mesentery of adult male (3- 6 month old) Lewis rats. 76 constructs were implanted (37 experimental, 27 negative controls and 12 positive controls). Upon maturation, constructs were harvested, fixed in buffered formalin, processed and stained with hematoxylin eosin (HE). Histological evaluation of the experimental and negative constructs showed that BMSCs underwent an apoptotic process due to lack of matrix interactions, known as anoikis, and were thus incapable of interacting with the competent ectoderm. In contrast, embryonic oral ectoderm was able to proliferate during the mesenteric implantation. In conclusion, PEGDA scaffolds are incompatible with BMSCs, therefore it is essential to continue the search for an ideal scaffold that allows proper tissue interactions.

Para lograr la formacion de una estructura similar a un diente se estratificaron celulas de ectodermo oral embrionario (EOE) con celulas troncales de medula osea (BMSC) dentro de una matriz de diacrilato de polietilenglicol (PEGDA) que se implanto en el mesenterio ileal de machos adultos de ratas Lewis. Mediante hibridizacion in situ de bloque completo se evaluo la expresion de tres genes iniciadores putativos de la formacion dental (Pitx2, Shh y Wnt10a), estableciendo que en ratas las senales iniciadoras de dentogenesis aparecen entre E12.5 y E13. El tejido ectodermico embrionario se obtuvo haciendo cruces controlados de hembras a las que se les detecto el estro mediante impedanciometria. En E12.5 las hembras se sacrificaron y se extrajeron los embriones. Se diseco la porcion mandibular del primer arco branquial y el ectodermo se separo del mesenquima mediante disociacion enzimatica con una solucion de pancreatina tripsina. Las BMSC se extrajeron de los huesos largos de las extremidades inferiores de ratas mediante lavado con a-MEM y se cultivaron en cajas de 25cm2 hasta un segundo pasaje. Las BMSC fueron recombinadas con ectodermo embrionario competente (E12.5 - E13) estratificandolas en un soporte tridimensional de PEGDA, polimerizado con luz ultravioleta (365nm) dentro de un molde piramidal de polipropileno (PP). Los constructos se cultivaron entre 48 y 72 horas en a-MEM y posteriormente fueron implantados en el mesenterio ileal de machos adultos (3 a 6 meses de edad) por un periodo de cuatro a seis semanas. Se implantaron 76 constructos (37 experimentales, 27 controles negativos y 12 controles positivos). En la fecha determinada los animales se sacrificaron mediante asfixia con una mezcla de CO2 y aire recuperando los constructos que se fijaron en formalina tamponada para luego procesarlos y tenirlos con hematoxilina eosina (HE). La evaluacion histologica de los constructos experimentales, positivos y negativos mostro que las BMSC incluidas en el hidrogel sufrieron un proceso de apoptosis conocido como anoikis que impidio su interaccion con las celulas ectodermicas. En contraste el EOE prolifero durante el periodo de implantacion. A futuro se debe buscar la matriz portadora ideal que permita el confinamiento de los dos grupos celulares y que brinde el soporte estructural necesario para la proliferacion de las BMSC facilitando su interaccion con las celulas inductoras de origen ectodermico.

Miocardiopatia não compactada: uma visão atual / Noncompaction cardiomyopathy: a current view / Miocardiopatía no compactada: una visión actual

A miocardiopatia não compactada isolada é uma doença rara, que provavelmente surge no período embrionário, com a parada intrauterina da compactação miocárdica no início do desenvolvimento fetal, e que determina trabeculações miocárdicas proeminentes com recessos intertrabeculares profundos e espessamento do miocárdio em duas camadas distintas (compactado e não compactado). Embora descrita inicialmente na população pediátrica ou em conjunto com cardiopatia congênita, pode-se compreender que essa doença ocorre de forma isolada, porque o diagnóstico é cada vez mais comum em pacientes adultos que não apresentam outra doença cardíaca. As manifestações clínicas são altamente variáveis, porque partem da ausência de sintomas à insuficiência cardíaca congestiva, arritmias e tromboembolismo sistêmico. A ecocardiografia é o procedimento diagnóstico mais utilizado, porém o pouco conhecimento sobre essa doença, sua semelhança com outras afecções miocárdicas e a limitação da técnica ecocardiográfica empregada fazem com que o diagnóstico seja postergado. Esta revisão objetiva mostrar que outras modalidades de imagem como ressonância magnética, tomografia computadorizada e ventriculografia esquerda são alternativas diagnósticas.

Isolated non-compaction cardiomyopathy is a rare disease that is likely to develop in the embryonic period. It is caused by the intrauterine arrest of the myocardial compaction process in the beginning of the fetal development. It is characterized by prominent myocardial trabeculations and deep intertrabecular recesses, as well as the thickening of the myocardium into two distinct layers (compacted and not compacted). Even though this disease is said to be prevalent in the pediatric population or together with congenital heart disease, one can understand that this disease occurs in isolation, because the diagnosis is becoming more common in adult patients that have no other heart disease. The clinical manifestations vary greatly, because they range from absence of symptoms to congestive heart failure, arrhythmias and systemic thromboembolism. Echocardiography is the most widely used diagnostic procedure, but the little knowledge about this disease, its similarity to other myocardial diseases and the limitation of the echocardiographic technique used delay the diagnosis. The purpose of this review is to show that that other imaging techniques, such as MRI, CT and left ventriculography have emerged as diagnostic alternatives.

La miocardiopatía no compactada aislada es una enfermedad rara, que probablemente surge en el período embrionario, con la parada intrauterina de la compactación miocárdica en el comienzo del desarrollo fetal, y que determina trabeculaciones miocárdicas prominentes con recesos intertrabeculares profundos y espesamiento del miocardio en dos capas distintas (compactado y no compactado). Aunque descripta inicialmente en la población pediátrica o en conjunto con cardiopatía congénita, se puede comprender que esa enfermedad ocurre de forma aislada, porque el diagnóstico es cada vez más común en pacientes adultos que no presentan otra enfermedad cardíaca. Las manifestaciones clínicas son altamente variables, porque parten de la ausencia de síntomas a la insuficiencia cardíaca congestiva, arritmias y tromboembolismo sistémico. La ecocardiografía es el procedimiento diagnóstico más utilizado, sin embargo el poco conocimiento sobre esa enfermedad, su semejanza con otras afecciones miocárdicas y la limitación de la técnica ecocardiográfica empleada hacen que el diagnóstico sea postergado. Esta revisión pretende mostrar que otras modalidades de imagen como resonancia magnética, tomografía computarizada y ventriculografía izquierda son alternativas diagnósticas.