ABSTRACT
La Giardiasis es una infección causada por Giardia duodenalis, transmitida por el agua o alimentos contaminados con quistes del parásito, principalmente en escolares que habitan zonas rurales. Se conoce poco sobre la respuesta de anticuerpos específicos, la identificación de antígenos permitirá el diseño de pruebas para evaluar seroprevalencia. En este estudio fueron identificadas proteínas para la respuesta IgG anti-Giardia por inmunodetección. Fueron evaluados ochenta individuos entre 4-80 años, de ambos sexos, de comunidades rurales, fueron clasificados según la presencia o ausencia de quistes del parásito en las heces. Las proteínas fueron obtenidas a partir de un extracto soluble y fracciones por centrifugación diferencial de la cepa WB, analizadas por electroforesis en geles de poliacrilamida, transferidas a membranas de nitrocelulosa y probadas por Western Blot para la respuesta IgG anti-Giardia. Fue observada una prevalencia general entre 9 y 12% de parasitosis intestinales, con 22% de individuos positivos para Giardia duodenalis, 46% negativos en heces y 32% positivos para Giardia duodenalis y otras parasitosis. El perfil de proteínas reveló bandas entre 190-15kDa, donde fueron reconocidas para la respuesta específica de anticuerpos IgG, proteínas en la fracción 2 de 190, 176 y 51kDa, en la fracción 3 una proteína de 23kDa. La identificación de proteínas reactivas para la respuesta IgG en las fracciones 2 y 3 permitirá el diseño de pruebas serológicas más específica para discriminar seropositivos de seronegativos.
Giardiasis is an infection caused by Giardia duodenalis, transmitted by consuming water or food contaminated with Giardia cysts, mainly in children living in rural areas. Little is known about proteins associated to the specific antibody response, the identification of specific antigens is necessary for studies of seroprevalence. The aim of this study was to select antigenic proteins from soluble extract or fractions of the parasite for the design of specific diagnostic tests. Were evaluated eighty individuals between 4-80 years, from rural communities were classified according to the presence or absence of cysts in the stool. The soluble extract and the fractions were obtained from WB (ATCC) strain of Giardia sp by differential centrifugation, analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis and transferred to nitrocellulose membranes and finally tested by Western Blots for the IgG antibody response. The general prevalence was between 9-12%, and 22% of them were positive for G. duodenalis, 46% of individuals were negative in feces; and 32% were positive for G. duodenalis and other parasites. The protein profile revealed several bands from 190-15kDa; in which were recognized mainly proteins of 190, 176 and 51kDa in the fraction 2, and a protein of 23kDa in the fraction 3. The infection by G. duodenalis represents a human public health, and the identification of reactive proteins for the IgG response in the fractions 2 and 3, would allow us the design of serological test more specific, in order to discriminate the seropositive individuals from those seronegative.
ABSTRACT
El objetivo de este trabajo fue evaluar el perfil de la respuesta inmune según sintomatología intestinal en niños con giardiasis. Se realizó un estudio transversal clínico, inmunológico y parasitológico en 182 escolares (6-7 años) de la región de Barlovento, Estado Miranda. La evaluación clínica fue realizada haciendo énfasis en los síntomas intestinales y evaluación antropométrica. Se realizaron exámenes de heces seriadas. Los niveles de IgA secretora (total y específicos a G. duodenalis) así como los niveles de citocinas fueron determinados mediante ELISA. Los niveles de óxido nítrico usando el método colorimétrico de Griess. Análisis estadístico mediante Med calc Software, Versión 12.4.0. Encontramos que Los niveles plasmáticos de TNF-α y de óxido nítrico (en saliva) fueron más elevados en los niños con síntomas intestinales y giardiasis (P<0.001) mientras que los niveles de TGF-β, IL-10 y los niveles de IgA secretora total y especifica a G. duodenalis fueron más elevados (P<0.0001) en el grupo de asintomáticos. Los niveles de IL-6 fueron más elevados en los niños con giardiasis independientemente de la sintomatología. La co-infeccion con A. lumbricoides se asoció negativamente a la presencia de síntomas intestinales. Los indicadores antropométricos (Talla/edad, peso/Edad y Peso/ Talla) se asociaron positivamente a la presencia de citocinas reguladoras (P<0.005) y niveles de IgA secretora (P<0.0001). Así, Diferencias en el perfil de la respuesta inmune podrían asociarse a síntomas intestinales inducidos por giardiasis. Deficiencias en el estado nutricional se asocian a procesos inflamatorios y a la generación de síntomas mientras que la co-infección con helmintos intestinales favorece la reducción de la sintomatología.
We evaluated the immune profile associated to intestinal symptoms in children with giardiasis. A crosssectional study including clinical, immunological and parasitological aspects in 182 children (6-7 years) from the area of Barlovento, Miranda state, Venezuela was carried out. Clinical evaluation was performed with emphasis on intestinal symptoms and anthropometric parameters were also determined. Serial stool examinations were carried out. Secretory IgA levels (total and specific against G. duodenalis) and cytokine levels were determined by ELISA. Nitric oxide levels were determined using the Griess colorimetric method. Statistical analysis was performed by Med Calc Software, Version 12.4.0. We found that plasma levels of TNF-α and nitric oxide (salivary) were higher in children with intestinal symptoms and giardiasis (P<0.001) while the levels of TGF-β, IL-10 and IgA levels (total and anti-G. duodenalis) were higher (P<0.0001) in the asymptomatic group. The levels of IL-6 were higher in children with giardiasis regardless of symptoms. Coinfection with A. lumbricoides was associated negatively with the presence of intestinal symptoms. Anthropometric indicators (height / age, weight / age and weight / height) were positively associated with the presence of regulatory cytokines (P<0.005) and secretory IgA levels (P<0.0001). Therefore, differences in the immune profile may be associated with intestinal symptoms induced by giardiasis. Co-infection with intestinal helminths helps to reduce symptoms while nutritional deficiencies are associated with inflammatory processes and the generation of symptoms.