Fluorescence in situ hybridization (FISH) as an irreplaceable diagnostic tool for Williams-Beuren syndrome in developing countries: a literature review / Hibridização in situ fluorescente (FISH) como ferramenta diagnóstica insubstituível para a síndrome de Williams-Beuren em países em desenvolvimento: uma revisão de literatura

ABSTRACT Objective: The aim of this study was to sum up and characterize all Williams-Beuren syndrome cases diagnosed by fluorescence in situ hybridization (FISH) since its implementation, as well as to discuss FISH as a cost-effective methodology in developing countries. Data source: From January 1986 to January 2022, articles were selected using the databases in PubMed (Medline) and SciELO. The following terms were used: Williams syndrome and In Situ Hybridization, Fluorescence. Inclusion criteria included Williams-Beuren syndrome cases diagnosed by FISH with a stratified phenotype of each patient. Only studies written in English, Spanish, and Portuguese were included. Studies with overlapping syndromes or genetic conditions were excluded. Data synthesis After screening, 64 articles were included. A total of 205 individuals with Williams-Beuren syndrome diagnosed by FISH were included and further analyzed. Cardiovascular malformations were the most frequent finding (85.4%). Supravalvular aortic stenosis (62.4%) and pulmonary stenosis (30.7%) were the main cardiac alterations described. Conclusions: Our literature review reinforces that cardiac features may be the key to early diagnosis in Williams-Beuren syndrome patients. In addition, FISH may be the best diagnostic tool for developing nations that have limited access to new technologic resources.

RESUMO Objetivo: Caracterizar todos os casos de síndrome de Williams-Beuren (SWB) diagnosticados por hibridização in situ fluorescente (FISH) desde sua implementação, assim como discutir a relação custo-benefício da metodologia de FISH em países em desenvolvimento. Fontes de dados: Entre janeiro de 1986 e janeiro de 2022 foi realizada uma busca nas bases de dados PubMed (Medical Literature Analysis and Retrieval System Online — Medline) e Scientific Electronic Library Online (SciELO) usando os seguintes termos: síndrome de Williams e hibridização in situ fluorescente. O critério de inclusão utilizado foi conter a descrição detalhada de caso(s) de SWB por FISH. Apenas estudos escritos em inglês, espanhol e português foram incluídos. Trabalhos que apresentavam sobreposição de síndromes/condições genéticas foram excluídos. Síntese dos dados: Após os processos de inclusão, 64 artigos e 205 indivíduos com SWB diagnosticados por meio do método de FISH foram incluídos. O achado mais frequente entre os indivíduos foi a presença de algum tipo de malformação cardíaca (85,4%). A estenose aórtica supravalvar (62,4%) e a estenose pulmonar (30,7%) foram as alterações cardíacas mais descritas. A maioria dos estudos era proveniente dos continentes Europa, Ásia e América do Norte. Conclusões: A presente revisão de literatura reitera que as malformações cardíacas podem ser a chave para o diagnóstico precoce em pacientes com SWB. Ainda, a técnica de FISH parece ser a melhor ferramenta de diagnóstico para os países em desenvolvimento, cujo acesso às novas tecnologias ainda é escasso.

Validation of chromogenic in situ hybridization reactions for DNA and RNA detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissue / Validação das reações de hibridização in situ cromogênica para detecção de DNA e RNA em tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina

ABSTRACT Introduction: Chromogenic in situ hybridization (CISH) is used alternatively to the traditional immunohistochemical methods for the diagnosis of infectious diseases in formalin-fixed paraffin-embedded samples, since it presents high sensitivity and specificity. This type of sample undergoes several chemical modifications during histological processing, and both poor and excessive fixation can impair sample quality, making it difficult to obtain good results. In CISH, it is common to use positive samples as quality control for the reactions; however, this practice does not provide any information regarding the preservation of the genetic material, nor does it avoid false-negative results. Objective: The objective of this study was to validate the deoxyribonucleic acid (DNA) (+) and (-), and ribonucleic acid (RNA) (+) and (-) control probes to be used as quality control for the samples, evaluating preservation of the genetic material. Materials and methods: Twelve histological sections were used (in quadruplicate, n = 48), prepared from a pool of tissues without microscopic changes related to infectious and/or inflammatory processes. The CISH protocol was conducted according to the manufacturer's instructions, standardized under the conditions of our laboratory, using commercial DNA and RNA probes chemically linked to digoxigenin. Results and conclusion: Our results were very satisfactory, showing high reproducibility, accuracy, sensitivity and analytical specificity, high predictive values for positive and negative assays and with zero ratio of false-positive and false-negative results, allowing the validation of this reaction.

RESUMEN Introducción: La hibridación in situ cromogénica (CISH) es una alternativa a los métodos tradicionales inmunohistoquímicos para el diagnóstico de enfermedades infecciosas en muestras fijadas en formoly embebidas enparafina, puesto que tiene alta sensibilidad y especificidad. Este tipo de muestra sufre diversas modificaciones químicas durante elprocesamiento histológico, y tanto la mala fijación cuanto la fijación excessiva pueden perjudicar la calidad de las muestras, impidiendo buenos resultados. En la CISH, es común el empleo de muestras positivas para control de calidad de reacciones; sin embargo, esta práctica no proporciona ninguna información acerca de la preservación del material genético. Objetivo: El propósito de este estudio ha sido realizar la validación de las sondas comerciales para ácido desoxirribonucleico (ADN) (+) y (-) y ácido ribonucleico (ARN) (+) y (-), para que sean utilizadas como control de calidad, evaluando la preservación del material genético en las muestras testadas. Material y métodos: Se incluyen en el estudio 12 cortes histológicos (en cuadruplicado, n = 48), confeccionados a partir de un pool de tejidos sin alteraciones microscópicas relacionadas con procesos infecciosos y/o inflamatorios. El protocolo de CISH se desarrolló de acuerdo a las instrucciones del fabricante y bajo las condiciones del nuestro laboratorio, haciendo uso de sondas comerciales de ADN y ARN quimicamente ligadas a digoxigenina. Resultados y conclusión: Nuestros resultados han sido muy satisfactorios, demostrando alta reproducibilidad, exactitud, sensibilidad, y especificidad analítica, así como altos valores predictivos para ensayos positivos y negativos, y con proporción nula de falsos negativos y falsos positivos, lo que ha permitido la validación de esa reacción.

RESUMO Introdução: A hibridização in situ cromogênica (CISH) é uma alternativa aos métodos tradicionais imuno-histoquímicospara diagnóstico de doenças infecciosas em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina, visto que apresenta grande sensibilidade e especificidade. Esse tipo de amostra sofre diversas modificações químicas durante o processamento histológico, e tanto a má fixação quanto a fixação em excesso podem prejudicar a qualidade das amostras, inviabilizando bons resultados. Na CISH, é comum a utilização de amostras positivas como controle de qualidade das reações; entretanto essa prática não fornece nenhuma informação a respeito da preservação do material genético, nem evita resultados falso-negativos nas amostras testadas. Objetivo: O objetivo deste estudo foi realizar a validação das sondas comerciais para ácido desoxirribonucleico (DNA) (+) e (-) e ácido ribonucleico (RNA) (+) e (-), para serem utilizadas como controle de qualidade, avaliando apreservação do material genético nas amostras testadas. Materiais e métodos: Foram utilizados 12 cortes histológicos (em quadruplicata, n = 48), confeccionados a partir de um pool de tecidos sem alterações microscópicas relacionadas com processos infecciosos e/ou inflamatórios. O protocolo de CISH foi conduzido de acordo com as instruções do fabricante e padronizado conforme as condições do nosso laboratório, utilizando sondas comerciais de DNA e RNA quimicamente ligadas à digoxigenina. Resultados e conclusão: Nossos resultados foram muito satisfatórios, demonstrando alta reprodutibilidade, acurácia, sensibilidade e especificidade analítica, bem como altos valores preditivos para ensaios positivos e negativos e com proporção nula de resultados falso-negativos e falso-positivos, o que possibilitou a validação dessa reação.

Assessment of the nitrification process in a culture of pacific white shrimp, using artificial substrate and bacterial inoculum in a biofloc technology system (BFT) / Avaliação do processo de nitrificação no cultivo do camarão branco do pacífico Litopenaeus vannamei com uso de substrato artificial e inóculo de bactérias em sistema de bioflocos (BFT)

ABSTRACT: Litopenaeus vannamei is the most cultured marine shrimp in all types of systems including the Bioflocs Technology System (BFT). Bioflocs are formed by microorganisms, among these, autotrophic bacteria are responsible for the nitrification process. This study aimed to identify and promote the development of nitrifying bacteria by adding artificial substrates and biofloc inoculum in L. vannamei culture in a BFT system. The experiment consisted of four treatments with three replics (4x3) as follows: (1) Control: clear water in which bioflocs were formed; (2) IN (10%): clear water with biofloc inoculum (10%); (3) IB: clear water with substrate (immature "bioballs"); and (4) MB: clear water with mature "bioballs" inoculum from a recirculation system. Treatments were stocked with shrimp juveniles (4.92±0.45 g) in 12 tanks with 200 L working volume at a stocking density of 200 shrimp/m³. Shrimps were fed twice a day with a commercial feed (38% CP) following a feeding table, and daily observations intake were made over the four weeks of the experiment. Biofloc and "bioballs" samples were collected to detect the growth of the population of nitrifying and heterotrophic bacteria by FISH. There was no significant difference between treatments (P>0.05) for survival, obtaining mean values greater than 88%. The IN (10%) treatment had lower concentrations of ammonia and nitrite, and nitrate concentration increased, while MB had a higher weight and biomass final, productivity, weekly weight gain and lower conversion of apparent feed for production performance results.

RESUMO: Litopenaeus vannamei é o camarão marinho mais cultivado em todos os tipos de sistemas, incluindo o Sistema de Tecnologia de Bioflocos (BFT). Os bioflocos são formados por microorganismos, entre estes, bactérias autotróficas que são responsáveis pelo processo de nitrificação. Este estudo teve como objetivo identificar e promover o desenvolvimento de bactérias nitrificantes pela adição de substratos artificiais e inóculo de bioflocos no cultivo de L. vannamei em sistema BFT. O experimento consistiu de quatro tratamentos com três repetições (4x3), sendo: (1) Controle: água limpa, na qual foram formados os bioflocos; (2) IN (10%): água limpa com inóculo de bioflocos (10%); (3) BI: água limpa com substrato ("bioballs" imaturos); e (4) BM: água limpa com inóculo de "bioballs" maduros de um sistema de recirculação. Para tanto, os tratamentos foram estocados com juvenis de camarão (4,92±0,45 g) em 12 tanques com 200 L de volume útil com densidade de 200 camarões/m³. Os camarões foram alimentados duas vezes ao dia com ração comercial (38% PB) seguindo uma tabela de alimentação, e observações diárias foram feitas ao longo das quatro semanas de experimento. Amostras de bioflocos e "bioballs" foram coletadas para detectar o crescimento da população de bactérias nitrificantes e heterotróficas por FISH. Não houve diferença significativa entre os tratamentos (P>0,05) para sobrevivência, obtendo-se valores médios superiores a 88%. O tratamento com IN (10%) apresentou menores concentrações de amônia e nitrito, e a concentração de nitrato aumentou, enquanto o BM apresentou maior peso e biomassa final, produtividade, ganho de peso semanal e menor conversão alimentar aparente para resultados de desempenho zootécnico.

Chromosomal distribution of the retroelements Rex 1, Rex 3 and Rex 6 in species of the genus Harttia and Hypostomus (Siluriformes: Loricariidae)

The transposable elements (TE) have been widely applied as physical chromosome markers. However, in Loricariidae there are few physical mapping analyses of these elements. Considering the importance of transposable elements for chromosomal evolution and genome organization, this study conducted the physical chromosome mapping of retroelements (RTEs) Rex1, Rex3 and Rex6 in seven species of the genus Harttia and four species of the genus Hypostomus, aiming to better understand the organization and dynamics of genomes of Loricariidae species. The results showed an intense accumulation of RTEs Rex1, Rex3 and Rex6 and dispersed distribution in heterochromatic and euchromatic regions in the genomes of the species studied here. The presence of retroelements in some chromosomal regions suggests their participation in various chromosomal rearrangements. In addition, the intense accumulation of three retroelements in all species of Harttia and Hypostomus, especially in euchromatic regions, can indicate the participation of these elements in the diversification and evolution of these species through the molecular domestication by genomes of hosts, with these sequences being a co-option for new functions.(AU)

Os elementos transponíveis (TE) têm sido amplamente aplicados como marcadores cromossômicos. Contudo, em Loricariidae, há poucas análises de mapeamento físico destes elementos. Considerando a importância de elementos transponíveis para a evolução cromossômica e organização genômica, este trabalho realizou o mapeamento físico cromossômico dos retroelementos (RTEs) Rex1, Rex3 e Rex6 em sete espécies do gênero Harttia e em quatro espécies do gênero Hypostomus, com o intuito de melhor compreender a organização e dinâmica dos genomas das espécies de Loricariidae. Os resultados evidenciaram um intenso acúmulo dos RTEs Rex1, Rex3 e Rex6 e distribuição dispersa em regiões heterocromáticas e eucromáticas no genoma das espécies estudadas. A presença de retroelementos em algumas regiões cromossômicas sugere sua participação em vários rearranjos cromossômicos. Além disso, o intenso acúmulo dos três retroelementos em todas as espécies de Harttia e Hypostomus, especialmente em regiões eucromáticas, pode indicar a participação destes elementos na diversificação e evolução destas espécies através da domesticação molecular pelo genoma dos hospedeiros, com estas sequências sendo co-optadas paras novas funções.(AU)

Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

Assessment of HER-2 status in invasive breast cancer in Brazil / Avaliação de HER-2 no câncer de mama invasivo no Brasil

Summary Objective: To characterize the frequency of HER-2-positive breast cancer in Brazil. Method: In this prospective observational study, we first ascertained the HER-2 status of invasive breast cancer specimens by automated immunohistochemistry (IHC). For specimens classified as 2+ by IHC, we performed in situ hybridization (ISH). Results: From February, 2011 to December, 2012, 1,495 breast specimens were registered, and 1,310 samples collected at 24 centers were analyzed. Median patient age was 54 years, and the majority of samples were obtained from segmental (46.9%) or radical mastectomy (34.4%). The predominant histological type was invasive breast carcinoma of no special type (85%), 64.3% had tubule formation (grade 3), and estrogen/progesterone receptors (ER/PR) were positive in 77.4/67.8% of the specimens analyzed, respectively. Using IHC, we found a negative HER-2 status (0 or 1+) in 72.2% of specimens, and 3+ in 18.5%; the 9.3% scored as 2+ were further analyzed by ISH, of which 15.7% were positive (thus, 20.0% of samples were HER-2- -positive by either method). We found no association between HER-2 scores and menopausal status or histological type. Tumors classified as 3+ came from younger patients, and had higher histological grade and less frequent expression of ER/PR. In the North region of Brazil, 34.7% of samples were 3+, with lower frequencies in the other four regions of the country. Conclusion: Our findings provide estimates for the frequency of HER-2 positivity in Brazil and raise the hypothesis that biological differences may underlie the different distribution of breast-cancer phenotypes among different Brazilian regions.

Resumo Objetivo: Estimar a frequência de câncer de mama positivo para HER-2 no Brasil. Método: Neste estudo observacional e prospectivo, verificamos o escore de HER-2 de espécimes de câncer de mama invasivo por imuno-histoquímica automatizada (IHQ). Para amostras classificadas como 2+ por IHQ, fizemos hibridização in situ (HIS). Resultados: De fevereiro de 2011 a dezembro de 2012, 1.495 espécimes de mama foram registrados, e 1.310 amostras coletadas por 24 centros foram analisadas. A idade mediana das pacientes foi 54 anos, e a maioria das amostras foram obtidas a partir de mastectomia segmentar (46,9%) ou radical (34,4%). O tipo histológico predominante foi o carcinoma invasivo da mama, sem tipo especial (85%); 64,3% tinham formação de túbulos (grau 3); e os receptores de estrógeno (RE)/progesterona (RP) foram positivos em 77,4%/67,8% das amostras analisadas. Por IHQ, encontramos HER-2 negativo (0 ou 1+) em 72,2% das amostras, e 3+ em 18,5%; os 9,3% de casos classificados como 2+ foram analisados por HIS, e 15,7% deles foram positivos (assim, 20,0% das amostras foram positivas para HER-2 por qualquer método). Não encontramos associação entre escores de HER-2 e estado menopausal ou tipo histológico. Tumores classificados como 3+ vieram de pacientes mais jovens, tinham maior grau histológico e foi menos frequente a expressão de RE/RP. Na região Norte do Brasil, 34,7% das amostras foram 3+, com frequências mais baixas nas outras quatro regiões do país. Conclusão: Nossos resultados permitem estimar a frequência de positividade do HER-2 no Brasil, gerando a hipótese de que pode haver diferenças biológicas subjacentes à distribuição dos fenótipos de câncer de mama entre as diferentes regiões brasileiras.

Comparative study of five commercial probes for the detection of Epstein-Barr virus (EBV) by in situ hybridization in cases of nodular sclerosis Hodgki's lymphoma / Estudo comparativo de cinco sondas comerciais para detecção do vírus Epstein-Barr (EBV) por hibridização in situ em casos de linfoma de Hodgkin esclerose nodular

ABSTRACT Introduction: Epstein-Barr virus (EBV) may serve as a target in therapeutic treatments, thus reliable diagnostic results are necessary. Objective: The aim of this study was to evaluate the accuracy of EBV detection by in situ hybridization (ISH) using five commercial probes in formalin-fixed and paraffin-embedded samples of nodular sclerosis Hodgkin's lymphoma (HL), and to compare the results with immunohistochemistry (IHC) and polymerase chain reaction (PCR). Material and method: Thirty samples were selected, 28 were lymph nodes, one bone marrow and one mediastinum. The following parameters were analyzed: signal intensity; proportionality of positive cells; quality of the reaction according to comfort for evaluation, sign quality and homogeneity of labeled cells; background reaction; morphology; presence of artifacts; and positivity in other non-neoplastic cells. All samples were analyzed for EBV detection using the five probes, IHC for latent membrane protein type 1 (LMP1) and PCR for Epstein Barr virus nuclear antigen 1 (EBNA1). Statistical analyses were performed with the R1 software; Fleiss' test and Cohen Kappa index of 5% were considered significant. Results: The detection by IHC-LMP1 was 26.7% (8/30) and 66.7% (20/30) by PCR-EBNA1. All probes detected EBV. Positivity was observed in 42/90 (46.7%), 38/90 (42.2%), 45/90 (50%), 27/90 (30%) and 61/90 (67.8%) for probes A, B, C, D and E, respectively. Discussion: All five probes demonstrated positivity. Conclusion: Probe E showed better rate (67.8%), sensitivity, specificity and accuracy (100%), a very good correlation among the different observers and with PCR, besides great cost-benefits relation.

RESUMO Introdução: O vírus Epstein-Barr (EBV) pode servir como alvo nos tratamentos terapêuticos, sendo necessário resultado diagnóstico confiável. Objetivo: Avaliar a acurácia da detecção do EBV pela hibridização in situ (ISH), utilizando cinco sondas comerciais em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina de linfoma de Hodgkin (LH) esclerose nodular, comparando os resultados com a imuno-histoquímica (IHQ) e a reação em cadeia pela polimerase (PCR). Material e método: Trinta amostras foram selecionadas, sendo 28 linfonodos, uma medula óssea e um mediastino. Os seguintes parâmetros foram analisados: intensidade do sinal; proporcionalidade das células positivas; qualidade da reação de acordo com o conforto na avaliação, qualidade do sinal e homogeneidade das células marcadas; reação de fundo; morfologia; presença de artefatos; e positividade em outras células não neoplásicas. Todas as amostras foram analisadas para a detecção do EBV usando as cinco sondas, IHQ para proteína da membrana latente tipo 1 (LMP1) e PCR para antígeno nuclear do EBV (EBNA1). As análises estatísticas foram realizadas com o software R1; os índices de 5% para Kappa de Fleiss e Cohen foram considerados significantes. Resultados: A detecção pela IHQ-LMP1 foi de 26,7% (8/30) e 66,7% (20/30) pela PCR-EBNA1. Todas as sondas detectaram EBV. A positividade foi observada em 42/90 (46,7%), 38/90 (42,2%), 45/90 (50%), 27/90 (30%) e 61/90 (67,8%) para as sondas A, B, C, D e E, respectivamente. Discussão: Todas as sondas demonstraram positividade. Conclusão: A sonda E mostrou melhor taxa (67,8%), sensibilidade, especificidade e precisão (100%), boa correlação entre os diferentes observadores e com a PCR, além de ótimo custo/benefício.

Correlation and comparison of immunohistochemistry for HER2/neu, using the antibody SP3 and chromogenic in situ hybridization in breast carcinomas samples / Correlação e comparação de imuno-histoquímica para HER2/neu, utilizando o anticorpo SP3 com a hibridização in situ cromógena em amostras de carcinomas mamários

ABSTRACT Introduction: Advances in the field of molecular biology have provided the differentiation of molecular subtypes of breast tumors, providing better prognosis and important tools for the treatment of patients with breast cancer. Among these subtypes, the changes in the human epidermal growth factor receptor 2 gene (HER2/neu), increase its copy number and generating HER2 protein amplification. Studies show that patients with breast cancer HER2/neu amplified tend to relapse earlier and have shorter survival time, the monoclonal antibody Trastuzumab is the therapy indicated. The eligibility of patients for therapy is initially made by the immunohistochemistry (IHC) technique, which evaluates the expression level of the HER2 protein. After this evaluation, the cases with equivocal diagnosis (score 2+), are referred to a more accurate technique, the chromogenic in situ hybridization (CISH). Objective: To analyze the sensitivity and specificity of the antibody SP3, and determine their level of agreement with the CISH technique. Material and methods: Retrospective study in the database of the anatomy-pathology laboratory, in CISH tests reports for HER2/neu. Conclusion: The results revealed that clone SP3 showed 100% specificity and 92% sensitivity. IHC reveals variability in its results; however, it is known that the technique is an important tool in the daily routine of laboratories, contributing to the initial screening of patients with breast cancer, which later showed satisfactory results when compared with the CISH technique.

RESUMO Introdução: Avanços no campo da biologia molecular têm proporcionado a diferenciação dos subtipos moleculares das neoplasias mamárias, fornecendo melhor prognóstico e ferramentas importantes para a terapêutica de pacientes com câncer de mama. Entre esses subtipos, as alterações ocorridas no gene receptor tipo 2 do fator de crescimento epidérmico humano (HER2/neu) amplificam o seu número de cópias e geram o aumento da proteína HER2. Estudos mostram que pacientes portadoras de câncer de mama HER2/neu amplificado tendem a ter recaída mais cedo e tempo de sobrevida menor, sendo o anticorpo monoclonal Trastuzumab a terapia indicada. A elegibilidade das pacientes para a terapia é feita inicialmente pela técnica de imuno-histoquímica (IHQ), que avalia o nível de expressão da proteína HER2. Após essa avaliação, os casos que apresentam diagnósticos equívocos (escore 2+) são encaminhados para uma técnica mais precisa, a hibridização cromógena in situ (CISH). Objetivo: Analisar a sensibilidade e a especificidade do anticorpo SP3, além de determinar o seu nível de concordância com a técnica de CISH. Material e métodos: Estudo retrospectivo no banco de dados de um laboratório anatomopatológico, em laudos de exames de CISH para HER2/neu. Conclusão: Os resultados revelaram que o clone SP3 apresentou 100% de especificidade e 92% de sensibilidade. A IHQ revela variabilidade em seus resultados, porém é sabido que a técnica é uma importante ferramenta na rotina diária dos laboratórios, contribuindo na triagem inicial das pacientes portadoras de câncer de mama, que, posteriormente, mostram resultados satisfatórios quando comparados com a técnica de CISH.

Molecular biology techniques for loss of heterozygosity detection: the glioma example / Técnicas de biologia molecular para avaliação da perda de heterozigosidade: o exemplo em glioma

ABSTRACT In recent years, many oncology institutions have implemented the use of molecular approaches to assess and manage cancer patients. One commonly observed type of genetic alteration in cancer is the loss of heterozygosity (LOH). In the clinical setting, this molecular genetic marker is an important tool for disease prognosis, diagnosis and treatment. For example, the loss of 1p/19q is a classical molecular marker for oligodendroglioma assessment. In addition, this marker is associated with a favorable prognosis and chemosensitivity in oligodendroglial tumors. Interpretation of the clinical significance of molecular markers requires that health professionals and biomedical scientists understand the basic theoretical fundamentals of molecular diagnostic techniques. Although there are different methodologies to assess LOH, including high-performance techniques, this review aims to describe the polymerase chain reaction (PCR)-based LOH assays and fluorescence in situ hybridization (FISH), which are the molecular techniques most used for evaluation of 1p/19q status in pathology laboratories.

RESUMO Nos últimos anos, instituições de oncologia têm implementado o uso de abordagens moleculares para avaliar e conduzir pacientes com câncer. O tipo mais comum de alteração encontrada no câncer é a perda de heterozigosidade (LOH). Na clínica, esse marcador molecular pode ter importância para o prognóstico, o diagnóstico e/ou na decisão do tratamento. Por exemplo, a perda de 1p/19q é um marcador molecular clássico para a avaliação do oligodendroglioma. Além disso, esse marcador está associado ao prognóstico favorável e à quimiossensibilidade em tumores oligodendrogliais. A interpretação do significado clínico dos marcadores moleculares exige que os profissionais da área da saúde entendam os fundamentos básicos teóricos das técnicas de diagnóstico molecular. Embora existam diferentes metodologias para avaliar a LOH, inclusive técnicas de alta performance, esta revisão tem o objetivo de descrever o ensaio de LOH com base na reação da cadeia da polimerase (PCR) e a hibridização in situ fluorescente (FISH), que são as técnicas moleculares mais usadas para avaliação do status 1p/19q em laboratórios de patologia.

Clinical and cytogenetic features of a Brazilian sample of patients with phenotype of oculo-auriculo-vertebral spectrum: a cross-sectional study / Características clínicas e citogenéticas de uma amostra brasileira de pacientes com fenótipo de espectro óculo-aurículo-vertebral: um estudo transversal

CONTEXT AND OBJECTIVE: Oculo-auriculo-vertebral spectrum (OAVS) is considered to be a defect of embryogenesis involving structures originating from the first branchial arches. Our objective was to describe the clinical and cytogenetic findings from a sample of patients with the phenotype of OAVS. DESIGN AND SETTING: Cross-sectional study in a referral hospital in southern Brazil. METHODS: The sample consisted of 23 patients who presented clinical findings in at least two of these four areas: orocraniofacial, ocular, auricular and vertebral. The patients underwent a clinical protocol and cytogenetic evaluation through high-resolution karyotyping, fluorescence in situ hybridization for 5p and 22q11 microdeletions and investigation of chromosomal instability for Fanconi anemia. RESULTS: Cytogenetic abnormalities were observed in three cases (13%) and consisted of: 47,XX,+mar; mos 47,XX,+mar/46,XX; and 46,XX,t(6;10)(q13; q24). We observed cases of OAVS with histories of gestational exposition to fluoxetine, retinoic acid and crack. One of our patients was a discordant monozygotic twin who had shown asymmetrical growth restriction during pregnancy. Our patients with OAVS were characterized by a broad clinical spectrum and some presented atypical findings such as lower-limb reduction defect and a tumor in the right arm, suggestive of hemangioma/lymphangioma. CONCLUSIONS: We found a wide range of clinical characteristics among the patients with OAVS. Different chromosomal abnormalities and gestational expositions were also observed. Thus, our findings highlight the heterogeneity of the etiology of OAVS and the importance of these factors in the clinical and cytogenetic evaluation of these patients. .

CONTEXTO E OBJETIVO: O espectro oculoauriculovertebral (EOAV) é considerado um defeito de embriogênese envolvendo estruturas originadas a partir dos primeiros arcos branquiais. Nosso objetivo foi descrever os achados clínicos e citogenéticos de uma amostra de pacientes com fenótipo de EOAV. TIPO DE ESTUDO E LOCAL: Estudo transversal em um hospital de referência no sul do Brasil. MÉTODOS: A amostra foi composta de 23 pacientes que apresentaram achados clínicos em pelo menos duas das quatro áreas: orocraniofacial, oculares, auriculares e vertebrais. Os pacientes foram submetidos a um protocolo clínico e avaliação citogenética através do cariótipo de alta resolução, hibridização in situ fluorescente para as microdeleções 5p e 22q11 e pesquisa de instabilidade cromossômica para anemia de Fanconi. RESULTADOS: Alterações citogenéticas foram observadas em três casos (13%) e consistiam de: 47,XX,+mar; mos 47,XX,+mar/46,XX e 46,XX,t(6;10)(q13;q24). Observamos casos de EOAV com história de exposição gestacional à fluoxetina, ácido retinoico e crack. Um dos nossos pacientes foi um gêmeo monozigótico discordante que teve restrição de crescimento assimétrica durante a gravidez. Nossos pacientes com EOAV foram caracterizados por um amplo espectro clínico e alguns apresentaram achados clínicos atípicos como um defeito de redução de membro inferior e um tumor do braço direito, sugestivo de hemangioma/linfangioma. CONCLUSÕES: Verificamos grande variedade de características clínicas entre os pacientes com EOAV. Também foram observadas diferentes anomalias cromossômicas e exposições gestacionais. Assim, nossos achados salientam a heterogeneidade da etiologia do EOAV e a importância desses fatores na avaliação clínica e citogenética desses pacientes. .

Uso da FISH em mucosa oral para investigação de mosaicismo com linhagem 45,X: estudo com homens saudáveis e pacientes com distúrbios da diferenciação do sexo / The use of FISH on buccal smear to investigate mosaicism with a 45,X cell line: study on healthy men and patients with disorders of sex development

Objetivo: Verificar se a hibridização in situ por fluorescência (FISH) em células de mucosa oral poderia ser empregada para detectar criptomosaicismo com linhagem 45,X em pacientes 46,XY. Sujeitos e métodos: Amostra de 19 jovens saudáveis 46,XY e cinco pacientes com distúrbios da diferenciação do sexo (DDS), quatro 45,X/46,XY e um 46,XY. FISH com sondas específicas para X e Y em núcleos interfásicos de linfócitos e mucosa oral para investigar a proporção de núcleos contendo apenas o sinal do cromossomo X. Resultados: A frequência de núcleos contendo apenas o sinal do X nos dois tecidos dos homens saudáveis não diferiu (p = 0,69). Em todos os pacientes com DDS essa frequência foi significativamente maior, e também não houve diferença entre os dois tecidos (p = 0,38). Conclusões: A investigação de mosaicismo com linhagem 45,X em pacientes com DDS 46,XY ou esterilidade pode ser feita por FISH diretamente em células de mucosa oral. .

Objective: To verify whether fluorescence in situ hybridization (FISH) of cells from the buccal epithelium could be employed to detect cryptomosaicism with a 45,X lineage in 46,XY patients. Subjects and methods: Samples of nineteen 46,XY healthy young men and five patients with disorders of sex development (DSD), four 45,X/46,XY and one 46,XY were used. FISH analysis with X and Y specific probes on interphase nuclei from blood lymphocytes and buccal epithelium were analyzed to investigate the proportion of nuclei containing only the signal of the X chromosome. Results: The frequency of nuclei containing only the X signal in the two tissues of healthy men did not differ (p = 0.69). In all patients with DSD this frequency was significantly higher, and there was no difference between the two tissues (p = 0.38), either. Conclusions: Investigation of mosaicism with a 45,X cell line in patients with 46,XY DSD or sterility can be done by FISH directly using cells from the buccal epithelium. .

Monitoramento do perfil microbiológico de dentes com infecção endodôntica primária durante terapia com diferentes medicações intracanal / Monitoring the microbiological profile of teeth with primary endodontic infection during therapy with different intracanal medications

Os objetivos deste estudo foram: 1. Correlacionar características clínicas e radiográficas com a microbiota presente no canal radicular de dentes com infecção primária; 2. Monitorar o perfil microbiológico após o preparo biomecânico e uso de diferentes medicações intracanal; 3) Verificar a susceptibilidade de complexos microbianos a diferentes medicações intracanal. Trinta dentes unir radiculares com necrose pulpar e lesão periapical visível radiograficamente foram submetidos ao tratamento endodôntico utilizando hipoclorito de sódio 2,5% como solução irrigadora e divididos em 3 grupos de acordo com a medicação intracanal utilizada: hidróxido de cálcio P.A. + solução salina fisiológica; hidróxido de cálcio P.A. + Zingiber officinale (extrato glicólico de gengibre); hidróxido de cálcio P.A. + gel de clorexidina 2%. Foram realizadas coletas do canal radicular com cones de papel absorvente após a abertura coronária, após a instrumentação e após 14 dias de ação da medicação intracanal. Para análise do conteúdo microbiológico dos canais radiculares, as amostras foram analisadas a partir de sondas de DNA pelo método de hibridização DNA-DNA checkerboard. Além disso, foi realizado teste de avaliação da atividade antimicrobiana do tratamento clínico por cultura microbiológica. Os resultados foram submetidos à análise estatística pelo teste de tendência linear, teste exato de Fisher, teste pareado de Wilcoxon e teste de Mann-Whitney, valor de p < 0,05. Houve associação entre dor à palpação e complexos roxo, verde e laranja. Fístula foi associada ao complexo vermelho. Maiores áreas de reabsorção foram associadas à presença de Capnocytophaga ochracea. Foi observada redução de bactérias após o tratamento endodôntico. Ao utilizar o método de hibridização DNA-DNA checker board, as bactérias mais prevalentes foram Strepctococcus anginosus, Veillonella parvula, Parvimonas micra, Enterococcus faecium e Capnocytophaga ochracia, tanto inicialmente quanto após o ...

The objectives of this study was: 1. Correlate clinical and radiographic features and microbiota present in root canal of teeth with primary infection; 2 Monitoring the microbiological profile after biomechanical preparation and use of different intracanal medications; 3) Verify the microbial susceptibility of bacterial complexes of different intracanal medications. Thirty single-rooted teeth with pulp necrosis and periapical lesion are undergoing treatment using 2.5% sodium hypochlorite as irrigating solution and divided into 3 groups according to the intracanal medication used: calcium hydroxide + saline solution, calcium hydroxide + 20% ginger glycolic extract, calcium hydroxide + 2 % chlorhexidine gel. Samples of the root canal were taken with absorbent paper cones after the coronal opening, after instrumentation and 14 days after medication. For analysis of the microbial content of the root canal the samples were analyzed from DNA probes using the method of DNA-DNA hybridization checkerboard. In addition, tests of antimicrobial activity of clinical treatment were performed by microbiological culture. The results werestatistically analyzed with linear trend test, Fisher’s exact test, Wilcoxonmatched pairs test and Mann-Whitney post hoc Dunn test. For all performed tests, a P-value < 0.05 was set as statically significant. There was an association between pain on palpation and purple, green and orange complex. Sinus tract was associated with the red complex. Bone resorptions were associated with the presence of Capnocytophaga. ochracea. The reduction of bacteria was observed after endodontic treatment. By using the method of checkerboard DNA-DNA hybridization, the more prevalent bacteria were Strepctococcus anginosus, Veillonella parvula, Parvimonas micra, Enterococcus faecium and Capnocytophaga ochracia, both initially and after biomechanical preparation. All treatments reduced the number of bacterial species compared to the initial collection. ...

Identificação do gene EBER1 e EBNA1 do vírus de Epstein Barr (EBV) em tecidos de pacientes com doença de Hodgkin na região Norte do Brasil / Identification of gene EBER1 and EBNA 1 of Epstein Barr virus (EBV) in tissues of patients with Hodgkin’s disease in Northern Brazil

O vírus de Epstein Barr (EBV) é o agente causador da mononucle¬ose infecciosa e está associado a várias desordens proliferativas malignas tais como: linfoma de Burkitt, linfoma de Hodgkin e lin¬fomas não Hodgkin. Objetivo: detectar o genoma do EBV mediante a identificação dos genes EBER1 e EBNA1 em casos de doença de Hodgkin. Métodos: um total de 65 casos de linfomas diagnosti¬cados no Hospital Ophir Loyola no período de 1996 e 2005 foram analisados no Instituto Evandro Chagas, Ananindeua, Brasil. Todos os espécimes parafinizados foram analisados por hibridização in situ (gene EBER1) e PCR em tempo real (EBNA1). Resultados: do total, 64,6% (42/65) dos pacientes eram do sexo masculino e 35,4% (23/65) do sexo feminino. O EBV foi identificado por HIS nas células Reed Sternberg e variantes em 76,9% (50/65) dos casos com idade média de 28,3 anos (variação 2-84 anos). Os subtipos histológicos de casos EBV-positivos foram os seguintes: esclerose nodular em 50% (25/50), celularidade mista em 28% (14/50), depleção linfocitária em 14% (7/50) e predominância linfocitária em 8% (4/50). O DNA do EBV foi detectado em 53% (26/49) dos casos de doença de Hodgkin com um coeficiente de regressão para a curva padrão de 0,99. Conclusão: este estudo foi a primeira descrição do vírus de Epstein Barr em casos de linfoma de Hodgkin na Amazônia Brasileira, reforçando a hipótese de que o EBV seja um co-fator no processo de transformação neoplásica em conjunto com a predisposição genética e imunidade do paciente

Introduction: EBV is the causative agent of infectious mononucleosis and is associated with several malignant proliferative disorders such as Burkitt’s lymphoma, Hodgkin’s lymphoma, some B and T cell non-Hodgkin’s lymphomas. Objective: The main objective of the study was to determine the prevalence of EBER 1 gene and EBNA1 gene in cases of Hodgkin’s disease. Material and Methods: A total of 65 cases of lymphomas diagnosed between 1996 and 2005 were obtained from “Instituto Ofir Loyola” and analyzed at the “Instituto Evandro Chagas” Ananindeua, Brazil. The EBV antigens using EBER 1 probe in situ hybridization (HIS) and real time quantitative PCR. Results: From the total obtained, 64.6% (42/65) were male and 35.4% (23/65) female. EBV was identified in the Reed- Sternberg cells and variants in 76.9% (50/65) of Hodgkin’s disease cases, the median age were 28.3 years (range 2-84). The histologic subtypes of EBV-positive cases were as follows: nodular sclerosis in 50% (25/50), mixed cellularity in 28% (14/50), lymphocyte depletion in 14% (7/50) and lymphocyte predominance in 8% (4/50). We detected EBV DNA in 53% (26/49) with a coefficient of regression for the standard curve of a minimum of 0.99. Conclusion: These results were the first demonstration of the role of Epstein Barr virus in cases of Hodgkin diseases in northern Brazil and are consistent with the hypothesis that the presence of EBV during neoplasic transformation could be an additional cofactor acting together with both genetic predisposition and immunity of the patient

Análise do gene PTEN por hibridização in situ fluorescente no carcinoma de células renais / Analysis of PTEN gene by fluorescent in situ hybridization in renal cell carcinoma

OBJETIVO: avaliar a frequência de deleção do gene PTEN no carcinoma de células renais e o impacto da deleção nas taxas de sobrevida global e livre de doença. MÉTODOS: foram analisados 110 pacientes portadores de carcinoma de células renais submetidos à nefrectomia radical ou parcial entre os anos de 1980 e 2007. Em 53 casos foi possível a análise do gene PTEN pelo método de hibridização in situ fluorescente através da técnica de "tissue microarray". Para a análise estatística, os pacientes foram classificados em dois grupos, de acordo com a presença ou ausência de deleção. RESULTADOS: o tempo médio de seguimento foi de 41,9 meses. Deleção hemizigótica foi identificada em 18 pacientes (33,9%), ao passo que deleção homozigótica esteve presente em três (5,6%). Em aproximadamente 40% dos casos analisados havia deleção. Monossomia e trissomia foram detectadas, respectivamente, em nove (17%) e dois pacientes (3,8%). Em 21 pacientes (39,6%), a análise por hibridização in situ do gene PTEN foi normal. Não houve diferenças estatisticamente significativas nas taxas de sobrevida global (p=0,468) e livre de doença (p=0,344) entre os pacientes portadores ou não de deleção. Foram fatores independentes para a sobrevida global: estádio clínico TNM, sintomatologia ao diagnóstico, alto grau de Fuhrmann performance status (Ecog) e recorrência tumoral. A livre de doença foi influenciada unicamente pelo estádio clínico TNM. CONCLUSÃO: deleção do gene PTEN no CCR foi detectada com frequência de aproximadamente 40% e sua presença não foi determinante de menores taxas de sobrevida, permanecendo os fatores prognósticos tradicionais como determinantes da evolução dos pacientes.

OBJECTIVE: To evaluate the frequency of deletion of the PTEN gene in renal cell carcinoma (RCC) and its impact on the rates of overall and disease-free survival. METHODS: We analyzed 110 patients with renal cell carcinoma who underwent radical or partial nephrectomy between 1980 and 2007. In 53 cases it was possible to analyse the PTEN gene by the method of fluorescent in situ hybridization using the technique of tissue microarray. For statistical analysis, patients were classified in two groups according to the presence or absence of the deletion. RESULTS: The mean follow-up time was 41.9 months. Hemizygous deletion was detected in 18 patients (33.9%), while the homozygous one was present in three (5.6%). Deletion was present in approximately 40% of the analyzed cases. Monosomy and trisomy were detected in nine (17%) and two patients (3.8%), respectively. In 21 patients (39.6%) the analysis of the PTEN gene by in situ hybridization was normal. There were no statistically significant differences in overall (p = 0.468) and disease-free (p = 0.344) survival rates between patients with or without deletion. Factors which were independent for overall survival: TNM clinical stage, symptoms at diagnosis, high Fuhrmann grade, performance status (ECoG) and tumor recurrence. Disease-free survival was influenced only by the clinical TNM stage. CONCLUSION: Deletion of the PTEN gene in RCC was detected with a frequency of approximately 40% and its presence was not determinant of lower survival rates, the traditional prognostic factors remaining as determinants of outcome.

Características, ventajas y desventajas de la hibridización in situ para la identificación de agentes patógenos / Features, Advantages and Disadvantages of in situ Hybridization to Identify Pathogenic Agents / Características, vantagens e desvantagens da hibridização in situ para identificar agentes patogênicos

La citogenética molecular y los métodos de hibridización in situ (HIS) han revolucionado la comprensión de la estructura, función, organización y evolución de los genes y el genoma, además de permitir identificar la presencia y expresión de agentes patógenos dentro de las células afectadas. La HIS es una técnica que combina la biología molecular y las técnicas de histoquímica para estudiar la expresión de genes en secciones de tejido y preparados citológicos, de tal manera que el ADN o el ARN puedan localizarse rápidamente en una célula específica. La HIS localiza la secuencia específica de un gen in situ y visualiza el producto de la expresión de dicho gen preservando al tiempo la integridad de la célula dentro del tejido que la rodea, lo cual permite dictar interpretaciones anatómicas significativas. Esta técnica es el resultado de una reacción en la cual una sonda marcada se une a una secuencia de ácido nucleico complementarias entre sí. Los métodos de HIS son aplicables en investigación clínica y en patología diagnóstica, siendo muy utilizados para buscar expresión de genes cromosomales o para detectar la presencia de bacterias o virus en tejidos infectados, ya que permiten diferenciar los agentes contaminantes de los verdaderos agentes patógenos en un proceso infeccioso.

Molecular cytogenetics and in situ hybridization (ISH) methods have revolutionized the understanding of the structure, function, organization and evolution of genes and genomes, and allow identifying the presence and expression of pathogens within the affected cells. ISH is a technique that combines molecular biology and histochemical techniques to study gene expression in tissue sections and cytological preparations, so that the DNA or RNA can be quickly located in a specific cell. ISH locates the specific sequence of an in situ gene and displays the result of the expression of said gene while preserving the integrity of the cell in the surrounding tissue, which allows for significant anatomical interpretations. This technique is the result of a reaction in which a labeled probe binds to a nucleic acid sequence, which is complementary. ISH methods are applicable in clinical research and diagnostic pathology, being widely used to search for chromosomal gene expression or to detect the presence of bacteria or viruses in infected tissues, as it makes it possible to differentiate pollutants from real pathogens in an infectious process.

A citogenética molecular e os métodos de hibridização in situ (HIS) têm revolucionado a compreensão da estrutura, função, organização e evolução dos genes e o genoma, além de que permite identificar a presença e expressão de agentes patógenos dentro das células afetadas. A HIS é uma técnica que combina a biologia molecular e as técnicas de histoquímica para estudar a expressão de genes em seções de tecido e preparos citológicos, de tal modo que o ADN ou o ARN possam localizar-se rapidamente em uma célula específica. A HIS localiza a sequência específica de um gene in situ e visualiza o produto da expressão deste gene preservando ao mesmo tempo a integridade da célula dentro do tecido que a rodeia, o que permite ditar interpretações anatômicas significativas. Esta técnica é o resultado de uma reação na qual uma sonda marcada se une a uma sequência de ácido nucleico complementares entre si. Os métodos de HIS são aplicáveis em pesquisa clínica e em patologia diagnóstica, sendo muito utilizados para buscar expressão de genes cromossômicos ou para detectar a presença de bactérias ou vírus em tecidos infectados, já que permite diferenciar os agentes contaminantes dos verdadeiros agentes patogênicos em um processo infeccioso.

Estudos transcriptômicos no contexto da conectividade perturbada em esquizofrenia / Transcriptome studies in the context of disturbed connectivity in schizophrenia

Esquizofrenia é uma severa doença neurobiológica com fatores genéticos e ambientais desempenhando um papel na fisiopatologia. Diversas regiões cerebrais têm sido implicadas no processo da doença e estão conectadas em complexos circuitos neuronais. Nos níveis molecular e celular, a conectividade afetada entre essas regiões, envolvendo mielinização disfuncional dos axônios neuronais, bem como as alterações no nível sináptico e metabolismo energético levando a distúrbios na plasticidade sináptica, são os maiores achados em estudos post-mortem. Estudos de microarranjos investigando a expressão gênica contribuíram para os achados de alterações em vias complexas em regiões cerebrais relevantes na esquizofrenia. Além disso, estudos utilizando microdissecção e captura a laser permitiram a investigação da expressão gênica em grupos específicos de neurônios. Entretanto, deve ser mantido em mente que em estudos post-mortem, confusos efeitos de medicação, qualidade de RNAm, bem como capacidade de mecanismos regenerativos neuroplásticos do cérebro em indivíduos com história de vida de esquizofrenia, podem influenciar o complexo padrão de alterações no nível molecular. Apesar dessas limitações, estudos transcriptômicos livres de hipóteses em tecido cerebral de pacientes esquizofrênicos oferecem uma possibilidade única para aprender mais sobre os mecanismos subjacentes, levando a novas ópticas da fisiopatologia da doença

Schizophrenia is a severe neurobiological disease with genetic and environmental factors playing a role in the pathophysiology. Several brain regions have been implicated in the disease process and are connected in complex neuronal circuits. On the cellular and molecular level, affected connectivity between these regions, involving dysfunctional myelination of neuronal axons, as well as alterations on the synaptic level and energy metabolism of neurons leading to disturbances in synaptic plasticity are major findings in post-mortem studies. Microarray studies investigating genome-wide gene expression have contributed to the findings of alterations in complex pathways in relevant brain regions in schizophrenia. Moreover, first Laser-capture Microdissection studies allowed the investigation of gene expression in specific groups of neurons. However, it must be kept in mind that in post-mortem studies confounding effects of medication, mRNA quality as well as the capability of the brain for neuroplastic regenerative mechanisms in individuals with a lifetime history of schizophrenia may influence the complex pattern of alterations on the molecular level. Despite these limitations, hypothesis-free transcriptome studies in brain tissue from schizophrenia patients offer a unique possibility to learn more about underlying mechanisms, leading to new insights in the pathophysiology of the disease

Buschke -Loewenstein tumor: identification of HPV type 6 and 11 / Condiloma acuminado gigante de Buschke-Lowenstein: identificação dos HPV 6 e 11

The authors report a case of exuberant giant condyloma acuminatum of Buschke-Loewenstein in a male patient, slow-growing, progressive and with locally destructive behavior in the inguinal, body of the penis, scrotum, perineal and perianal regions. After surgery he showed no signs of recurrence in 20 months of follow-up. The identification of HPV types 6 and 11 was performed using in situ hybridization.

Os autores relatam um caso exuberante de condiloma acuminado gigante de Buschke-Lowenstein, em paciente do sexo masculino, de crescimento lento e progressivo e de comportamento destrutivo das regiões inguinal, corpo do pênis, escroto, perineal e perianal. Após tratamento cirúrgico, não apresentou sinais de recidiva em 20 meses de seguimento. A identificação dos HPVs, tipos 6 e 11, foi realizada através da técnica de hibridização in situ.

Papiloma invertido (Papiloma Schneideriano) com envolvimento da cavidade oral: relato de caso incomum / Inverted papilloma (Schneiderian papilloma) with involvement of the oral cavity: report of an unusual case

O papiloma invertido schneideriano é uma neoplasia de origem no epitélio de revestimento que surge da mucosa respiratória revestindo a cavidade nasal e os seios paranasais. Frequentemente, surge como uma lesão unilateral no septo nasal e estende-se secundariamente para o nariz e os seios paranasais. Este trabalho relata um caso incomum desta patologia, com o envolvimento da cavidade oral em um homem branco, de 61 anos de idade, cuja avaliação clínica revelou uma massa vegetante no rebordo alveolar direito da maxila, com duração de aproximadamente 4 meses. Após avaliação radiográfica, constatouse o envolvimento do seio maxilar. A análise microscópica, hibridização in situ e análise imunoistoquímica da peça cirúrgica levaram a um diagnóstico de displasia moderada em PIS associado à infecção por HPV.

Inverted Schneiderian papilloma (ISP) is a neoplasm of epithelial lining origin which arises in the respiratory mucosa that lines the nasal cavity and paranasal sinuses. The inverted Schneiderian papilloma frequently appears as a unilateral lesion in the nasal septum and extends secondarily to the nasal and paranasal sinuses. This paper reports an unusual case of this pathology with involvement of the oral cavity in a 61-year-old white man. Clinical evaluation revealed a vegetating mass in the alveolar ridge of the right maxilla that had been present for approximately 4 months. After radiographic evaluation, involvement of the maxillary sinus was detected. Microscopic evaluation, in situ hybridization and immunohistochemical analysis of the specimen led to a diagnosis of ISP moderate dysplasia associated with HPV infection.

Síndrome de deleção 22q11.2 e cardiopatias congênitas / 22q11.2 deletion syndrome and congenital heart defects

OBJETIVO: Revisar as características clínicas, etiológicas e diagnósticas da síndrome de deleção 22q11 e sua associação com as cardiopatias congênitas. FONTES DOS DADOS: Foram pesquisados artigos científicos presentes nos portais Medline, Lilacs e SciELO, utilizando-se descritores específicos como "22q11", "DiGeorge syndrome", "velocardiofacial syndrome", "congenital heart defects" e "cardio-vascular malformations". O período adotado para a revisão foi de 1980 a 2009. SÍNTESE DOS DADOS: As malformações cardíacas são os defeitos congênitos observados mais frequentemente ao nascimento e representam um problema importante de Saúde Pública. Dentre suas principais causas conhecidas destaca-se a síndrome de deleção 22q11, também chamada de síndrome de DiGeorge, síndrome velocardiofacial e CATCH22. Trata-se de uma doença autossômica domi-nante caracterizada por um fenótipo altamente variável, o que dificulta em muito seu reconhecimento clínico. Além disso, a maior parte dos pacientes apresenta uma microdeleção identificada principalmente por técnicas de citogenética molecular, como a hibridização in situ fluorescente, pouco disponíveis em nosso meio. De forma similar a outras síndromes, a síndrome de deleção 22q11 associa-se a certos defeitos cardíacos específicos, no caso os do tipo conotruncal. Apesar disso, não há ainda na literatura um consenso sobre quais os pacientes com car-diopatia congênita que deveriam ser investigados para a síndrome de deleção 22q11. CONCLUSÕES: Cardiologistas e cirurgiões cardíacos, espe-cialmente pediátricos, devem estar cientes das peculiaridades e dos cuidados dispensados à síndrome de deleção 22q11. Os indivíduos com a síndrome apresentam comumente alterações envolvendo vários sistemas, o que pode levar a dificuldades e a complicações durante seu manejo clínico e cirúrgico.

OBJECTIVE: To review clinical, etiological and diagnostic characteristics of the 22q11 deletion syndrome and its as-sociation with congenital heart defects. DATA SOURCES: Medline, Lilacs and SciELO databases were searched from 1980 to 2009 using specific descrip-tors as "22q11", "DiGeorge syndrome", "velocardiofacial syndrome", "congenital heart defects" and "cardiovascular malformations". DATA SYNTHESIS: Heart malformations are the most fre-quent congenital defects at birth and represent an important Public Health problem. The 22q11 deletion syndrome, also called DiGeorge syndrome, velocardiofacial syndrome and CATCH22, stands out as one of the main known causes of congenital heart defects. This is an autosomal dominant genetic disease characterized by a highly variable phenotype, which renders its difficult clinical identification. In addition, the majority of the patients present a microdeletion identified mainly by molecular cytogenetic techniques as fluorescent in situ hybridization, which are rarely available in Brazil. Similarly to other syndromes, 22q11 deletion syndrome is associated to some specific heart defects, espe-cially conotruncal. It is still not clear which patients with congenital heart defect should be screened for 22q11 dele-tion syndrome. CONCLUSIONS: Cardiologists and cardiac surgeons, particu-larly the pediatric ones, must be aware about the features and health care related to 22q11 deletion syndrome. Subjects with the syndrome very often present abnormalities of mul-tiple systems, that could result in difficulties and complica-tions during their clinical and surgical course.