Estudo do potencial antiviral sobre Sars Cov-2 dos compostos identificados nas folhas do extrato bruto de Eugenia pyriformis / Study of the antiviral potential on Sars Cov-2 of compounds identified in the leaves of the gross extract of Eugenia pyriformis / Estudio del potencial antiviral sobre Sars Cov-2 de los compuestos identificados en las hojas del extracto crudo de Eugenia pyriformis

Eugenia pyriformis Cambess (Myrtaceae), conhecida popularmente como uvaia. Em seus frutos são encontrados compostos fenólicos com ação antioxidante e nas folhas foram detectados altos teores de flavonoides e taninos hidrolisados que se mostraram inibidor da protease de 2019 - nCoV e SARS-CoV. Neste sentido, o objetivo deste estudo foi a obtenção do extrato bruto das folhas, a análise da composição química e a possibilidade da ação antiviral frente ao SARS COV-2. O extrato bruto (EB) foi obtido a partir das folhas secas de E. pyriformis, pela técnica de maceração dinâmica com esgotamento do solvente (etanol 90º GL) e concentrado em evaporador rotativo. Seis gramas do EB foram fracionados em cromatografia em coluna, e eluído com hexano, diclorometano, acetato de etila e metanol, as frações foram concentradas em um evaporador rotativo (Tecnal TE-210). O EB e as frações foram identificadas por cromatografia líquida de alta eficiência à espectrometria de massas de alta resolução (CLAE-ESI/qTOF). A identificação química do extrato bruto e frações das folhas de E. pyriformis evidenciou a presença de compostos fenólicos destacando os ácidos fenólicos, flavonoides e taninos. De forma complementar, foi realizado um levantamento bibliográfico sobre a provável ação antiviral dos compostos fenólicos e taninos presentes nas folhas de uvaia. Os resultados evidenciaram que os flavonoides quercetina e kaempferol possuem ação antiviral quando se ligam a glicoproteína do envelope ou capsídeo viral interferindo na ligação e penetração do vírus na célula. Este resultado coloca as folhas de E. pyriformis na lista de plantas com ação antiviral.

Eugenia pyriformis Cambess (Myrtaceae), popularly known as uvaia. In its fruits, phenolic compounds with antioxidant action are found and in the leaves, high levels of flavonoids and hydrolyzed tannins were detected, which proved to be an inhibitor of the 2019 protease - nCoV and SARS-CoV. In this sense, the objective of this study was to obtain the crude extract of the leaves, the analysis of the chemical composition and the possibility of antiviral action against SARS COV-2. The crude extract (EB) was obtained from the dried leaves of E. pyriformis, by the dynamic maceration technique with solvent exhaustion (ethanol 90º GL) and concentrated in a rotary evaporator. Six grams of EB were fractionated in column chromatography, and eluted with hexane, dichloromethane, ethyl acetate and methanol, the fractions were concentrated on a rotary evaporator (Tecnal TE-210). EB and fractions were identified by high performance liquid chromatography using high resolution mass spectrometry (HPLC-ESI/qTOF). The chemical identification of the crude extract and fractions of E. pyriformis leaves evidenced the presence of phenolic compounds, highlighting phenolic acids, flavonoids and tannins. In addition, a bibliographic survey was carried out on the probable antiviral action of phenolic compounds and tannins present in uvaia leaves. The results showed that the flavonoids quercetin and kaempferol have antiviral action when they bind to the envelope glycoprotein or viral capsid, interfering with the binding and penetration of the virus into the cell. This result places E. pyriformis leaves in the list of plants with antiviral action.

Eugenia pyriformis Cambess (Myrtaceae), conocida popularmente como uvaia. En sus frutos se encuentran compuestos fenólicos con acción antioxidante y en las hojas se detectaron altos contenidos de flavonoides y taninos hidrolizados que demostraron inhibir la proteasa de 2019 - nCoV y SARS-CoV. En este sentido, el objetivo de este estudio fue obtener el extracto crudo de las hojas, el análisis de la composición química y la posibilidad de acción antiviral contra el SARS COV-2. El extracto crudo (EB) se obtuvo a partir de las hojas secas de E. pyriformis, mediante la técnica de maceración dinámica con agotamiento del disolvente (etanol 90º GL) y se concentró en evaporador rotatorio. Seis gramos de EB se fraccionaron en cromatografía en columna, y se eluyeron con hexano, diclorometano, acetato de etilo y metanol, las fracciones se concentraron en un evaporador rotatorio (Tecnal TE-210). El EB y las fracciones se identificaron mediante cromatografía líquida de alta resolución a espectrometría de masas de alta resolución (HPLC-ESI/qTOF). La identificación química del extracto crudo y de las fracciones de las hojas de E. pyriformis mostró la presencia de compuestos fenólicos destacando los ácidos fenólicos, los flavonoides y los taninos. De forma complementaria, se realizó un estudio bibliográfico sobre la probable acción antiviral de los compuestos fenólicos y los taninos presentes en las hojas de la uva. Los resultados mostraron que los flavonoides quercetina y kaempferol tienen acción antiviral cuando se unen a la glicoproteína de la envoltura o cápside viral, interfiriendo en la unión y penetración del virus en la célula. Este resultado sitúa a las hojas de E. pyriformis en la lista de plantas con acción antiviral.

Obtención de hidrolizados proteicos de leguminosas usando una proteasa recombinante de Pseudomonas aeruginosa M211 / Obtaining protein hydrolysates from leguminous using a recombinant protease from Pseudomonas aeruginosa M211

El género Pseudomonas es una fuente importante de proteasas; sin embargo, su uso está restringido en la industria alimentaria. El clonaje permite aprovechar la capacidad catalítica de estas enzimas mediante su producción en microorganismos inocuos. Por otro lado, las leguminosas son fuentes ricas en proteínas, a partir de las cuales se pueden obtener compuestos con valor agregado mediante procesos de hidrólisis enzimática. En este estudio, se produjo y caracterizó una proteasa recombinante (PT4) alcalina y termoestable de Pseudomonas aeruginosa M211, para la obtención de hidrolizados proteicos de leguminosas. Para ello, el gen de la proteasa se clonó en el vector pJET1.2/blunt utilizando E. coli DHalfa como hospedero. El análisis de la secuencia nucleotídica parcial de la proteasa indicó un 99 % de similitud con Peptidasas de la Familia M4 de Pseudomonas aeruginosa. La enzima recombinante presentó un peso molecular de 80 kDa, demostró ser activa y estable en condiciones alcalinas y termófilas con un pH y temperatura óptimos de 8 y 60 °C, respectivamente, y fue inhibida por EDTA. Además, hidrolizó proteínas de semillas de Glycine max, Phaseolus lunatus, Lupinus mutabilis y Erythrina edulis, obteniéndose fracciones peptídicas menores a 40 kDa. Esta proteasa recombinante se podría utilizar en la elaboración de hidrolizados proteicos funcionales a partir proteínas de distintas fuentes y residuos agroalimentarios.

The genus Pseudomonas is an important source of proteases; however, in the food industry the use of this bacterium is restricted. Cloning allows for the use of the proteolytic activity of Pseudomonas proteases through their production in innocuous microorganisms. Leguminous are protein-rich sources from which value-added compounds can be obtained through enzymatic hydrolysis. In this study, an alkaline and thermostable recombinant protease (PT4) from Pseudomonas aeruginosa M211 was cloned and characterized in order to obtain protein hydrolysates from leguminous. Therefore, protease gene was cloned into the pJET1.2 / blunt vector using E. coli DHalpha as a host. Analysis of protease partial nucleotide sequence showed 99% homology with Peptidases M4 Family from Pseudomonas aeruginosa. The molecular weight of the recombinant enzyme was 80 kDa, it was active and stable under alkaline and thermophilic conditions, presented an optimum pH and temperature of 8 and 60 °C, respectively, and was inhibited by EDTA. In addition, it hydrolysed Glycine max, Phaseolus lunatus, Lupinus mutabilis y Erythrina edulis proteins, obtaining peptide fractions less than 40 kDa. This recombinant protease could be used in the elaboration of functional hydrolysates using protein from different sources and agricultural waste.

Obtención de hidrolizados proteicos bajos en fenilalanina a partir de suero dulce de leche y chachafruto (Erythrina edulis Triana) / Obtaining protein products low in phenylalanine from milk whey and chachafruto (Erythrina edulis Triana)

La fenilcetonuria (PKU) es causada por una actividad deficiente de la enzima fenilalanina hidroxilasa. En los pacientes con esta deficiencia la fenilalanina (Phe) no puede ser convertida en tirosina, aumentando sus niveles en sangre y de otros metabolitos neurotóxicos, provocando un retraso mental irreversible. El tratamiento fundamentalmente se basa en una dieta controlada de Phe. Sin embargo, los alimentos libres o bajos en Phe son escasos. El objetivo de esta investigación es obtener hidrolizados proteicos con bajo contenido de Phe a partir del suero dulce de leche en polvo y harina de E. edulis Triana. El aislado proteico (96,01% proteína cruda) se obtuvo por solubilización y precipitación de las proteínas de la harina, mientras que las proteínas del suero (15,69% proteína cruda) fueron tratadas en su matriz original. Las proteínas del suero y el asilado fueron hidrolizadas enzimáticamente con pepsina y proteasa de Streptomyces griseus. La concentración de Phe se determinó por fluorometría y por HPLC, de lo cual la Phe de las proteínas del suero es liberada una hora antes que las del chachafruto, debido a que las proteínas del suero en parte fueron hidrolizadas en la elaboración del queso. Además, los resultados de la utilización del carbón activados como captor de Phe indican la reducción total del contenido de este aminoácido en los hidrolizados y la reducción de la concentración de otros aminoácidos(AU)

henylketonuria (PKU) is caused by a low activity of the enzyme phenylalanine hydroxylase. In patients with this deficiency, phenylalanine (Phe) cannot be converted to tyrosine, increasing blood levels and other neurotoxic metabolites, causing irreversible mental retardation. The treatment is fundamentally based on a controlled diet of Phe. However, free or low-Phe foods are scarce. The objective of this research is to obtain protein hydrolysates with low Phe content from sweet milk powder and E. edulis Triana flour. The protein isolate (96.01% crude protein) was obtained by solubilization and precipitation of the flour proteins, while the whey proteins (15.69% crude protein) were treated in their original matrix. Serum and asylated proteins were enzymatically hydrolyzed with pepsin and Streptomyces griseus protease. The concentration of Phe was determined by fluorometry and by HPLC, from which the Phe of whey proteins is released one hour earlier than those of chachafruto, due to the fact that the whey proteins were partially hydrolyzed in the elaboration of the cheese. In addition, the results of the use of charcoal activated as Phe captor indicate the total reduction of the content of this amino acid in the hydrolysates and the reduction of the concentration of other amino acids(AU)

Aceptación de fórmulas extensamente hidrolizadas en el tratamiento de la alergia a la proteína de leche de vaca / Acceptance of extensively hydrolysed formulas in treatment for cow's milk protein allergy

Introducción: la sintomatología de la alergia a la proteína de leche de vaca conlleva deterioro en el crecimiento y aumento concomitante de las necesidades nutricionales. En niños que consumen fórmula como complemento a la lactancia materna o cuando ésta no es posible, debe indicarse como primera opción una fórmula con proteína extensamente hidrolizada (FeH). Es necesaria una ingesta adecuada para revertir síntomas y recuperar crecimiento. Sin embargo, los lactantes rechazan frecuentemente las FeHs debido al gusto desagradable. Objetivo: evaluar sensorialmente cinco FeH presentes en el mercado, en orden decreciente de aceptación y relacionarlo con ingredientes responsables del sabor. Materiales y Método: se realizó un testeo sensorial ciego en cinco FeH (A, B, C, D y E) en población universitaria. Los 54 participantes fueron entrenados previamente sobre la metodología de testeo y la forma de completar el cuestionario en estaciones individuales. Las fórmulas fueron calificadas con puntaje del 1 al 5 (más aceptable - menos aceptable) y la preferencia se analizó por prueba de Rangos de Wilcoxon (nivel de significación 0,025). Resultados: según el puntaje de aceptación, las fórmulas quedaron ordenadas de la siguiente manera: E, D, A, C, B; de la más aceptable a menos aceptable. La fórmula E fue la "preferida", aunque no presentó diferencias significativas con D. A, C y B mostraron una baja aceptación significativa con respecto a E y D. El análisis de ingredientes mostró mayor aceptación para hidrolizados de suero con presencia de lactosa y/o jarabe de glucosa y grasa saturada. El nivel de hidrólisis y los péptidos resultantes serían factores determinantes en la aceptación. Conclusión: la resultante de las combinaciones de ingredientes y su estructura química podrían ser responsables de mejor sabor o mayor aceptación de las FeH, facilitando la recuperación nutricional del lactante y la adherencia al tratamiento(AU).

Introduction: symptoms coming from allergy to cow's milk protein may impair a child's growth as well as concomitant increase in nutritional needs. In children consuming formula as a supplement to breastfeeding or when breastfeeding is not possible, a formula with extensively hydrolyzed protein (eHF) should be indicated as first option. Adequate intake is necessary to reverse symptoms and regain growth. However, infants frequently reject eHFs due to unpleasant taste. Objective: to sensorially evaluate five eHFs present in the market, in decreasing order of acceptance, and relate them to ingredients responsible for taste. Materials and Methods: blind sensory testing was performed on five eHFs (A, B, C, D and E) in university population. The fifty-four participants were previously trained on testing methodology and how to complete the questionnaire in individual stations. Formulas were scored from 1 to 5 (more acceptable - less acceptable) and preference was analyzed by Wilcoxon Range test (significance level 0.025). Results: based on acceptance score, formulas remained ordered as follows: E, D, A, C, B; from most acceptable to least acceptable. Formula E was the "preferred" one, although it did not show significant differences with D. A, C and B showed a significant low acceptance with respect to E and D. Ingredients analysis showed greater acceptance for whey hydrolysates with presence of lactose and/or glucose syrup and saturated fat. Level of hydrolysis and resulting peptides would be determining factors in acceptance. Conclusion: combinations of ingredients and their chemical structure could be responsible for better taste or greater acceptance of eHFs, facilitating the nutritional recovery of the infant and adherence to treatment(AU).

Parte: manejo de la alergia a la proteína de leche de vaca / Part 2: Cow ́s Milk Protein Allergy Management

La lactancia materna es un excelente factor protector y una forma inigualable de facilitar el alimento ideal para el crecimiento y desarrollo saludable. Es imprescindible su recomenda-ción exclusiva durante los primeros 6 meses de vida y de ser posible continuar con la lactancia materna durante la alimentación complemen-taria hasta los 2 años de edad; solo se debe recurrir a fórmulas especiales cuando la madre no pueda amamantar. Para estos casos se dispone de varias fórmulas hidrolizadas, soja y elementales.Las fórmulas hidrolizadas pueden ser extensa o parcialmente hidrolizadas, y ser séricas o de caseína. Las fórmulas extensamente hidroliza-das, han sido sometidas a ensayos clínicos donde se comprueba su hipoalergenicidad al eliminar los síntomas de la Alergia a la Proteína de la Leche de Vaca (APLV) luego de su inicio. Estudios recientes demuestran que la adición de Lactobacillusr hamnosus (LGG) a una fórmu-la de caseína extensamente hidrolizada acelera la adquisición de tolerancia en estos niños en comparación con los pacientes que recibieron fórmula sin adición.La fórmula de soja, aunque no es hipoalergéni-ca, se puede emplear para tratar la APLV, pero no antes de los 6 meses. No se pueden emplear como tratamiento de APLV fórmulas parcial-mente hidrolizadas, ni leche de otros rumian-tes, como oveja o cabra. En pacientes con altos niveles de sensibilización o con antecedente de reacción ana láctica, se recomienda la administración de fórmula elemental. El objeti-vo de la presente revisión es dar a conocer el manejo y uso racional de las fórmulas hidroliza-das y elementales en niños con APLV y así evitar el uso indiscriminado de estas en niños con trastornos funcionales...(AU)

Inhibición de la Enzima Convertidora de Angiotensina I con hidrolizados proteicos de Jatropha curcas / Angiotensin I-Converting Enzyme inhibition with protein hydrolysates from Jatropha curcas / Inibição da Enzima Conversora de Angiotensina I com hidrolisados proteicos de Jatropha curcas

Se evaluó la actividad inhibitoria in vitro de los hidrolizados proteínicos obtenidos a partir de la harina desgrasada y del aislado proteínico provenientes del grano de Jatropha curcas L. sobre la actividad de la enzima convertidora de angiotensina I (ECA-1), con la finalidad de emplearlos en un futuro para la formulación de alimentos funcionales. Los hidrolizados fueron obtenidos empleando alcalasa y el sistema enzimático pepsina-pancreatina. Se calculó la concentración media inhibitoria (IC50) para medir el grado de inhibición de la actividad enzimática de ECA-1. Fueron seleccionados los hidrolizados con el menor tiempo de hidrólisis (60 min) para evaluar la bioactividad, dado que las cinéticas de hidrólisis enzimática de la harina desgrasada y del aislado proteínico no encontraron diferencias significativas en el grado de hidrólisis para los tiempos de reacción en cada sistema (60, 90 y 120 min). Los valores de IC50 que presentaron el mejor efecto de inhibición sobre la ECA-I fueron 2,8 y 7,0 µg/mL, obtenidos a partir del aislado proteínico con la enzima alcalasa y con el sistema secuencial pepsina-pancreatina, respectivamente. Los hidrolizados de J. curcas podrían ser incorporados en la elaboración de alimentos funcionales y ser aplicados en tratamientos para personas con hipertensión por su efecto inhibitorio sobre la ECA-I.

In vitro angiotensin I-converting enzyme (ACE) inhibitory activity was evaluated in protein hydrolysates from defatted meal and protein isolate from Jatropha curcas L. Seed, in order to determine their potential inclusion in functional food formulation. Hydrolysates were produced using Alcalase® or a sequential pepsin-pancreatin enzymatic system. Mean inhibitory concentration (IC50) was used to measure the degree of ACE enzymatic activity inhibition. Bioactivity was evaluated in the hydrolysates with the lowest hydrolysis time (60 min) given that no differences in degree of hydrolysis in terms of reaction time in each system were observed (60, 90 and 120 min) in the enzymatic hydrolysis kinetics for the defatted meal and protein isolate. The protein isolate exhibited the highest inhibitory effect, as seen in the IC50 values: 2.8 µg/mL in the alcalase system and 7.0 µg/mL in the pepsin-pancreatin system. Hydrolysates from J. curcas seed exhibit ACE inhibition and could be incorporated into functional foods or treatments for those suffering hypertension.

Foi avaliada a atividade inibitória in vitro dos hidrolisados proteicos obtidos a partir da farinha desengordurada e do isolado proteico provenientes do grão de Jatropha curcas L. sobre a atividade da enzima conversora de angiotensina I (ECA-1), com o objetivo de utilizá-los num futuro para a formulação de alimentos funcionais. Os hidrolisados foram obtidos usando alcalase e o sistema enzimático pepsina-pancreatina. Foi calculada a concentração média inibitória (IC50) para medir o grau de inibição da atividade enzimática da ECA-1. Foram selecionados os hidrolisados com o menor tempo de hidrólise (60 min.) para avaliar a bioatividade visto que as cinéticas de hidrólise enzimática da farinha desengordurada e do isolado proteico não encontraram diferenças significativas no grau de hidrólise para os tempos de reação para cada sistema (60, 90 e 120 min.). Os valores de IC50 que apresentaram o melhor efeito de inibição sobre a ECA-I foram 2.8 e 7.0 µg/mL obtidos a partir do isolado proteico com a enzima alcalase e com o sistema sequencial pepsina-pancreatina respectivamente. Os hidrolisados de J. curcas poderiam ser incorporados na elaboração de alimentos funcionais e ser aplicados em tratamentos para pessoas com hipertensão por seu efeito inibitório sobre a ECA-I.

Bases nutritivas para el cultivo de los microorganismos: parte 2 - principales indicadores de la calidad / Nutritive bases for the culture of microorganisms: Part 2 - main quality characteristics

Las bases nutritivas empleadas para el cultivo microbiano deben reunir una serie de características esenciales como aportantes de nutrientes, en especial, de componentes nitrogenados de origen proteico, tales como aminoácidos, péptidos y polipéptidos; macroelementos y microelementos, así como vitaminas y carbohidratos. Otro grupo de indicadores comprende características fisicoquímicas como pH, densidad aparente, propiedades organolépticas (color) y tecnológicas (rendimiento). Los índices biológicos y sanitarios son fundamentales para su funcionalidad en los medios, entre ellos, la reactividad biológica, que incluye la producción de indol, acetilmetilcarbinol y gas sulfhídrico y presencia de carbohidratos fermentables; el límite microbiano y la promoción del crecimiento de microorganismos específicos.

Nutritive bases for microbial growth, as nutrient sources, should comply with a group of essential characteristics, especially as sources of nitrogenous compounds derivedfrom proteins, such as aminoacids, peptides andpolypeptides, as well as sources of vitamins andcarbohydrates. Other group of characteristics includesphysico-chemical parameters such as pH, apparentdensity, organoleptic (color) and technological (yield)properties. Biological and sanitary characteristics are fundamentalfor their funcionality in culture media, amongthem, the biological reactivity that includes indole, acethylmethylcarbinol and hydrogen sulphide productionand the presence of fermentable carbohydrates, microbiallimit and the growth promotion of specific microorganisms.

Bases nutritivas para el cultivo de los microorganismos: parte 1 - Procesos tecnológicos / Nutritive bases for the culture of microorganisms: part 1 - Technological processes

Los medios de cultivo pueden ser definidos como conjuntos de elementos o sustancias que garantizan a los microorganismos u otras células los nutrientes necesarios para su conservación o desarrollo. Las bases nutritivas son ingredientes fundamentales de muchos de estos medios y aportan, para el crecimiento de los microorganismos, los compuestos nitrogenados de naturaleza proteica, tales como péptidos, polipéptidos, aminoácidos, vitaminas, carbohidratos y otros elementos nutritivos. Se obtienen mediante extracción o hidrólisis del material biológico, por diferentes vías, seguido de clarificación mediante la filtración, concentración, secado y tamizado. Especial interés ocupa la búsqueda de diferentes sustratos proteicos alternativos, debido al incremento de la frecuencia de los brotes de encefalopatía espongiforme bovina y fiebre aftosa en diferentes países, el peligro de transmisión de estas enfermedades al hombre a través de las proteínas derivadas de los sub productos de los animales y las regulaciones para el comercio, importación y uso de estos productos.

Culture media could be defined as a group of elements or substances, which provide, to microorganisms or toother cells, the necessary nutrients for their preservation or growth. Nutritive bases are main ingredients for muchof these media and they provide for the growth of microorganisms, protein derived nitrogen compoundssuch as peptides, polypeptides, aminoacids; vitamins, carbohydrates and other nutritive elements. They areobtained by extraction or hydrolysis of biological rawmaterial by different ways, and then undergo processesof clarification, filtration, concentration, drying andsieving. It is of great interest to identify different alternative protein substrates, due to the increase of Bovine Spongiform Encephalopathy and Aftose Feveroutbreaks in different countries, the possible spread ofthese diseases to humans by proteins derived from animalby-products and due to trading, importation and consumption regulations for these products.

Obtención de la toxina tetánica a partir de hidrolizado de caseina de producción nacional

La producción de toxoide tetánico se realiza a partir de la toxina tetánica destoxificada y purificada por métodos químicos. Un buen rendimiento de la toxina tetánica reviste gran importancia, pues éste es fundamental para obtener el número de dosis necesarias a un bajo costo. Se presentan los resultados obtenidos en la producción de toxina tetánica a partir de hidrolizado de caseína de producción nacional, mediante la realización de pruebas químicas, microbiológicas e inmunológicas, y se comprueba que el rendimiento es superior al obtenido con el hidrolizado de caseína de importación (triptona T, Oxoid).

The production of the tetanus toxoid is developed from the chemically detoxified and purified tetanus toxin. A good yielding of the tetanus toxin has a great importances, since it is fundamental to obtain the amount of necessary doses at a low cost. Here the authors present the results of the production of the tetanus toxin from the nationally produced casein hydrolysate, through chemical, microbiological, and immunological tests, and it is confirmed that the yield is higher than the one obtained with the imported casein hydrolysate (triptone T, Oxoid).