Inactivación del virus Zika con medio de transporte de ácidos nucleicos, potencialmente aplicable a muestras clínicas para el diagnóstico molecular de SARS-CoV-2 / Inactivation of Zika virus with nucleic acids transport media, potentially applicable to clinical samples for the molecular diagnosis of SARS-CoV-2

RESUMEN Introducción: Los medios de colecta de muestras clínicas con capacidad de desnaturalizar virus reducen los riesgos de contagio durante el transporte y procesamiento. Objetivo: Emplear el medio de transporte de ácidos nucleicos (TAN) en muestras de exudado nasofaríngeo colectadas para el diagnóstico de SARS-CoV-2. Métodos: Se realizó un estudio experimental para demostrar la capacidad del medio de inactivar la infectividad viral. Se tomó como modelo de virus envuelto el virus Zika (VZk), cuyo nivel de bioseguridad es 2. Se evaluó el desempeño clínico del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2. Se empleó una cepa del VZk propagada en la línea celular Vero y, previo a la infección de las células, el VZk se puso en contacto a intervalos de tiempo diferentes (2; 15 y 30 min) con el medio TAN puro; y luego se realizaron diluciones seriadas (10-1-10-4). La inactivación viral se evaluó por RT-PCR, en el sobrenadante y células colectadas, al culminar el periodo de propagación. El desempeño clínico del medio TAN se estimó tomando como referencia el CITOSWAB® VTM, en 30 exudados nasofaríngeos colectados para diagnóstico de la infección por SARS-CoV-2. Resultados: El VZk preservó su infectividad a diluciones del inóculo ≥ 10-2, independientemente del tiempo de contacto. La sensibilidad y especificidad clínica del medio TAN para el diagnóstico de SARS-CoV-2 fueron del 100 %, respectivamente. Conclusiones: Los resultados sugieren que muestras clínicas positivas a VZk en diluciones ≤ 10-1 del medio TAN pueden ser manipuladas de forma segura, lo que pudiera aplicarse potencialmente al diagnóstico molecular del SARS-CoV-2.

ABSTRACT Introduction: Collection media of clinical samples with the capacity to denature viruses reduce the risk of contagion during transportation and processing. Objective: To use the nucleic acids transport media (NATM) in nasopharyngeal swab samples collected for the diagnosis of SARS-CoV-2. Methods: An experimental study was conducted to demonstrate the medium capacity to inactivate viral infectivity. Zika virus (ZIKV), of biosafety level 2, was used as an enveloped virus model. The clinical performance of the NATM for the diagnosis of SARS-CoV-2 was evaluated. A ZIKV strain propagated in the Vero cell line was used and, prior to cells infection, ZIKV was in contact at different intervals (2; 15, and 30 min) with pure NATM; subsequently, serial dilutions (10-1-10-4) were performed. Viral inactivation was evaluated by RT-PCR in the supernatant and the collected cells when the propagation period was completed. CITOSWAB® VTM was used as reference to estimate the clinical performance of the NATM in 30 nasopharyngeal swabs collected for the diagnosis of SARS-CoV-2 infection. Results: ZIKV remained infectious at inoculum dilutions of ≥ 10-2, regardless of contact time. Clinical specificity and sensitivity of the NATM for the diagnosis of SARS-CoV-2 were 100%, respectively. Conclusions: Results suggest that ZIKV positive clinical samples at dilutions ≤ 10-1 of the NATM can be safely handled, which could potentially be applied to the molecular diagnosis of SARS-CoV-2.

Inactivación del carbapenémico, un método alternativo para detectar carbapenemasa tipo KPC en Enterobacteriaceae / Carbapenem inactivation, an alternative method to detect carbapenemase type KPC in Enterobacteriacea

Objetivo: Evaluar al método de inactivación del carbapenémico (MIC*) frente a técnicas como el Test de Hodge modificado (THM), ácido 3-aminofenilborónico (APB) y la reacción en cadena de la polimerasa en enterobacterias productoras de carbapenemasas (EPC) tipo KPC. Materiales y métodos: Se seleccionaron 88 aislados clínicos de K. pneumoniae, K. oxytoca, E.coli, S. marcescens, C. freundii sensibles y 91 resistentes a los carbapenémicos. El APB y el método MIC* se realizaron siguiendo las publicaciones originales. El THM se realizó de acuerdo al CLSI 100S Edición 26-2016. El gen blaKPC se identificó por multiplex PCR. Resultados: El MIC* en EPC tipo KPC presentó una sensibilidad/especificidad cercana al 100% y kappa de 1 comparado con la PCR; se observó la ausencia de halo en todas los aislados EPC tipo KPC a diferencia de los aislados sensibles a los cabapenémicos que presentaron halo > 19mm. Se observó el 3 % de resultados falsos positivos y el 5 % de falsos negativos en THM y ABP respectivamente. Discusión y conclusiones: El MIC* y la PCR demuestran superioridad al THM y ABP para identificar carbapenemasas tipo KPC en EPC. Se recomienda su uso de forma rutinaria dentro del algoritmo para la contención de infecciones por este tipo de patógenos.

Objective: To compare the carbapenem inactivation method (CIM *) with the Modified Hodge Test (MHT), the acid 3-aminophenylboronic test(APB) and the polymerase chain reaction (PCR) detection of the blaKPC gene for the identification of KPC carbapenemase producing Enterobacteriaceae (ECP). Materials and Methods: We selected 88 susceptible and 91 carbapenems resistant clinical isolates of Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Escherichia coli, Serratia marcescens and Citrobacter freundii. We performed APB and CIM* according to previously published methods and the MHT according to CLSI 100S Edition 26-2016. The blaKPC gene was identified by PCR multiplex. Results: The CIM* had a sensitivity and specificity close to 100% and a kappa score of 1 compared with gold standard PCR. The absence of zone diameter was observed in all isolated KPC producers, unlike in isolates susceptible to carbapenems, where a zone diameter >19mm was observed. Three percent of false positive and five percent of false negative was observed in THM and ABP respectively. Discussion and conclusions: The CIM* and the PCR were better than MHT and ABP at identifying carbapenemases in ECP. We recommend the routine use of the CIM* within the algorithm for ECP infection control.

Determinación de la clonalidad en tejidos humanos / Clonality evaluation in human tissues / Determinação da clonagem em tecidos humanos

Las proliferaciones malignas suelen ser clonales. La mayoría de las veces el potencial de una lesión se establece por medio del análisis clínico y el estudio anatomopatológico, pero algunos casos son de difícil diagnóstico. Por otra parte, existen situaciones en las que se producen clonas dominantes cuyo análisis es importante, tal como ocurre en enfermedades autoinmunes e inmunodeficiencias. Este artículo presenta de manera comprensible las técnicas principales para el estudio de la clonalidad, a saber: la evaluación de los reordenamientos génicos del receptor de antígeno y la evaluación del gen del receptor de antígeno humano.

Malignant proliferations are usually clonal. While most times the biological potential can be established through routine pathologic and clinical examinations, some cases are difficult to classify. Moreover, in some situations there are dominant clones whose analysis is important, such as in autoimmune diseases and immunodeficiency. This paper presents in an understandable way the main techniques for the study of clonality, namely: evaluation of gene rearrangements of antigen receptor, and evaluation of human antigen receptor gene.

As proliferações malignas costumam ser clonadas. A maioria das vezes o potencial biológico de uma lesão se estabelece por meio da análise clínica e o estudo anatomopatológico, mas alguns casos são de difícil diagnóstico. Por outra parte, existem situações nas que se produzem clones dominantes cujo análise é importante, tal como ocorre em doenças autoimunes e imunodeficiências. Este artigo apresenta de maneira compreensível as técnicas principais para o estudo da clonagem, a saber: a avaliação dos reordenamentos genéticos do receptor de antígeno e a avaliação do gene do receptor de antígeno humano.

Contributions of ludic care in nursing to chemical detoxification due to the use of crack cocaine / Contribuciones del cuidado lúdico en enfermería en la desintoxicación química debido al uso de crack / Contribuições do cuidado lúdico em enfermagem na desintoxicação química devido ao uso de crack

OBJECTIVE: to understand the contributions of ludic care in nursing by stimulating the acceptance of chemical detoxification from crack on the perception of people in the detoxification process. METHODS: an exploratory, descriptive study with a qualitative approach, performed with five people hospitalized for chemical detoxification from crack, from March to July 2013 in a chemical detox unit of a midsize hospital in the central region of Rio Grande do Sul. Data was collected using a semi-structured interview and was subjected to content analysis. RESULTS: Two categories emerged: Ludic care in nursing as a stimulus to the acceptance of chemical detoxification; Ludic care in nursing in the promotion for healthy living after chemical detoxification. CONCLUSION: ludic care in nursing proved to enhance the acceptance of chemical detoxification from crack in the reality investigated. .

OBJETIVO: conocer las contribuciones del cuidado lúdico en enfermería en el estímulo a la aceptación de la desintoxicación química por el uso del crack en la percepción de las personas en ese proceso. MÉTODOS: estudio exploratorio, descriptivo de abordaje cualitativo realizado con cinco personas hospitalizadas para desintoxicación química, en el período de marzo a julio de 2013, en una unidad de desintoxicación química de un hospital de mediano porte de la región central de Rio Grande do Sur. Los datos fueron recolectados por una entrevista semiestructurada y sometidos a análisis de contenidos. RESULTADOS: surgieron dos categorías: El cuidado lúdico en enfermería, como un estímulo a la aceptación y como la promoción para el vivir saludable después de la desintoxicación química. CONCLUSIÓN: el cuidado lúdico en enfermería, se mostró potenciador a la aceptación de la desintoxicación del crack en la realidad investigada. .

OBJETIVO: conhecer as contribuições do cuidado lúdico em enfermagem no estímulo à aceitação da desintoxicação química pelo uso do crack na percepção das pessoas em processo de desintoxicação. MÉTODOS: estudo exploratório, descritivo, de abordagem qualitativa, realizado com cinco pessoas internadas para desintoxicação química do crack, no período de março a julho de 2013, em uma unidade de desintoxicação química de um hospital de médio porte da região central do Rio Grande do Sul. Os dados foram coletados por meio de uma entrevista semiestruturada e foram submetidos à análise de conteúdo. RESULTADOS: emergiram duas categorias: O cuidado lúdico em enfermagem como um estímulo à aceitação da desintoxicação química; Cuidado lúdico em enfermagem na promoção para o viver saudável após a desintoxicação química. CONCLUSÃO: o cuidado lúdico em enfermagem mostrou-se potencializador para a aceitação da desintoxicação química do crack na realidade investigada. .

Inactivación del metacestodo de Taenia solium a través del proceso de compostaje: Una realista alternativa aplicable en el medio rural en México / Metacestode of Taenia solium inactivation by composting: a feasible alternative in rural areas of Mexico

La cisticercosis causada por el metacestodo de la Taenia solium afecta al cerdo y es causa de decomiso obligatorio. La composta es un medio alternativo para depositar decomisos y otros desechos animales, ya que inactiva y destruye patógenos presentes en canales. En el presente estudio se evaluó el compostaje para la inactivación de metacestodos de T solium. Para ello se construyeron siete pilas de composta en forma de cono, divididas según su profundidad en tres zonas y cada una en cuatro partes, donde se colocó carne contaminada. Se realizaron muestreos a las 24, 36, 48 y 72 h, y se sometieron a la prueba de evaginación in vitro. El tiempo máximo para la inactivación total de los cisticercos fue de 48 h. La carne quedó incorporada a la composta desde los 7 días. No se encontró diferencia significativa (P > 0.05) entre la inactivación de cisticercos en los distintos niveles de las compostas, pero sí con respecto al exterior, por lo que se consideró efectiva cualquier zona para la inactivación de cisticercos de T. solium viables.

Cysticercosis by Taenia solium metacestode affects pigs, giving ground for meat confiscation. Composting is an alternative disposition method for confiscated carcasses and other animal debris, inactivating and destroying pathogens in the carcasses. In this study, composting was evaluated as a method to inactivate T. solium metacestodes. Seven compost cone-shaped piles were built, and three depth-zones were defined within them. Each zone was divided into 4 subzones, and a portion of contaminated meat was introduced into each subzone. Meat was sampled at 24, 36, 48, and 72 h and tested for evagination in vitro. The maximum required time for cysticercus inactivation was 48 h. Meat was incorporated to compost after 7 days. No significant differences were found in cysticercus inactivation among the compost zones (P > 0.05), but significant differences were found with respect to the outside. Therefore, all zones were regarded equally effective to inactivate viable T. solium cysticerci.

Evaluación de la nisina como sustancia inactivadora de Bacillus licheniformis en el extracto líquido de café / Evaluation of the nisin as inactivator substance of Bacillus licheniformis to coffee liquid extract

Objetivo. Evaluar el efecto de la nisina en la inactivación de Bacillus licheniformis en el extracto líquido de café. Materiales y métodos. Se evaluó la acción de la nisina sobre Bacillus licheniformis en extractos líquidos de café variando su concentración, tiempo de incubación, concentración de solidos solubles (grados Brix) y la concentración bacteriana contaminante. Resultados. Se observó que la concentración de nisina, para obtener un efecto inhibitorio del 55%, sin alterar las propiedades fisicoquímicas y sensoriales del producto, es 500 UI/ml que corresponden a 12.5 mg/L. Además, se determinó que la concentración de nisina 1000 UI/ml puede actuar satisfactoriamente en poblaciones bacterianas menores de 5x10(4) UFC/ml en un período de 48 horas. Con relación al efecto de concentración de sólidos solubles en la inactivación del microorganismo, no se encontraron diferencias significativas para un rango entre 15 y 45°Brix. Conclusiones. A partir de este estudio se puede concluir que la nisina puede ser usada como preservante del extracto de líquido de café sin afectar sensorialmente el producto, teniendo en cuenta la concentración bacteriana contaminante y el tiempo de incubación.

Objective. To evaluate the effect of nisin on the inactivation of Bacillus licheniformis to coffee liquid extract. Materials and methods. The action of nisin on Bacillus licheniformis into liquid coffee extracts was evaluated by varying its concentration, incubation time, concentration of soluble solids (°Brix) and bacterial contaminant concentration. Results. The results indicated that the concentration of nisin to achieve the inhibitory effect without affecting the physicochemical and sensory properties of the product is 500 IU/ml corresponding to 12.5 mg/L. Additionally, High levels of nisin 1000 IU/ml can act successfully in bacterial populations lower than 5x10(4) CFU/ml over a period of 48 hours. Furthermore, the concentration of soluble solids did not show a statistically significant effect for values from 15 to 45 °Brix. Conclusions. From this study it can be concluded that nisin may be used as a preservative in liquid coffee extract without sensorially affecting the product, taking into account the bacterial contaminant concentration and incubation time.

Inactivación del cromosoma X en el desarrollo embrionario mamífero / X chromosome inactivation in mammalian embryonic development / Inativação do cromossomo X no desenvolvimento embrionário dos mamíferos

Resumen La regulación de la expresión génica durante el desarrollo embrionario temprano requiere de múltiples y ordenados procesos epigenéticos que garanticen una correcta diferenciación y proliferación celular. La inactivación del cromosoma X es un proceso multiepigenético estrechamente ligado al desarrollo embrionario, que involucra el silenciamiento transcripcional de uno de los dos cromosomas X en las células de hembras mamíferas. El modelo embrionario mejor estudiado es el de ratón, donde se observan ciclos de inactivación y reactivación durante la formación del trofoectodermo y el epiblasto. En el trofoectodermo y el endodermo primitivo se observa una inactivación preferencial por el X paterno, mientras en la masa celular interna se observa una inactivación aleatoria, pudiendo inactivarse tanto el cromosoma X materno como el paterno. La inactivación del cromosoma X se observa también en la meiosis masculina, donde se observa un silenciamiento del cromosoma X, que perdura hasta la fertilización. En este artículo revisamos los eventos moleculares en la progresión de la inactivación, desde la gametogénesis hasta el blastocisto, y las características que regulan los procesos de inactivación y reactivación del cromosoma X en embriones de hembras mamíferas.

Abstract The gene expression regulation during embryonic development early requires multiple and ordered epigenetic processes that ensure a correct differentiation and cellular proliferation. The inactivation of the X chromosome is a multiepigenetic process closely linked to embryonic development, involving the transcriptional silencing of one of the two X chromosomes in mammalian females cells. The best studied embryonic model is the mouse, where inactivation and reactivation cycles are observed during the formation of the trophoectoderm and the epiblast. The trophoectoderm and primitive endoderm shows a preferential inactivation by the paternal X, while the mass cell internal observed one random inactivation, and can inactivate both the paternal and the maternal X chromosome. X chromosome inactivation is also observed in male meiosis, showing silencing of the X chromosome, which lasts until fertilization. Here we review the molecular events in the progression of inactivation, from gametogenesis to the blastocyst, and the characteristics that regulate the processes of inactivation and reactivation of the X chromosome in female mammalian embryos.

Resumo A regulação da expressão génica durante o desenvolvimento embrionário nos primeiros estádios requer de muitos e organizados processos epigenéticos que garantissem uma correta diferenciação e proliferação celular. A inativação do cromossomo X é um processo complexo que esta fortemente ligado ao desenvolvimento embrionário, este processo involucra o silenciamento transcripcional de um dos cromossomos X nas células das fêmeas mamíferas. O modelo embrionário do rato é o melhor estudado, onde se observam ciclos de inativação e reativação durante a formação do trofoectodermo e o epiblasto. No trofoectodermo e o endodermo primitivo se observa uma inativação preferencial pelo X paterno, enquanto na massa celular interna se observa uma inativação aleatória, conseguindo inativar-se tanto no cromossomo X materno quanto no paterno. A inativação do cromossomo X se observa também na meiose masculina onde se observa um silenciamento do cromossomo X, que permanece até a fertilização. Neste artigo revisamos os eventos moleculares na progressão da inativação, desde a gametogênese até o blastocisto, e as características que regulam os processos de inativação e reativação do cromossomo X em embriões de fêmeas mamíferas.

Antigenicidad e inmunogenicidad de una cepa inactivada de Vibrio cholerae O1 El Tor Inaba / Antigenicity and immunogenicity of inactivated Vibrio cholerae 01 El Tor Inaba

INTRODUCCIÓN: el cólera continúa siendo problema de salud, principalmente en las zonas más pobres. La mayoría de los aislamientos que se realizan al nivel mundial pertenecen a Vibrio cholerae O1 biotipo El Tor serotipo Ogawa, aunque se han reportado brotes causados por el serotipo Inaba, por lo que se aconseja que una vacuna efectiva contra la enfermedad deberá contener células o antígenos de ambos serotipos. OBJETIVO: describir las características de la cepa de V. cholerae O1 El Tor Inaba C6706 como posible cepa para la obtención de vacunas inactivadas contra el cólera. MÉTODOS: se elaboró un lote de siembra de trabajo crioconservado a - 70 ºC, se evaluó su identidad, pureza y viabilidad. La cepa fue cultivada en caldo triptona soya y su inactivación se realizó a 56 ºC durante 20 min. Se evaluó la capacidad antigénica del producto obtenido mediante western blot y ELISA de inhibición de lipopolisacárido. La inmunogenicidad en conejos, inoculados por vía intraduodenal, se determinó mediante la cinética de anticuerpos vibriocidas. RESULTADOS: el lote de siembra de trabajo mantuvo su identidad, pureza y viabilidad durante 18 meses de estudio. Se observó la presencia de los antígenos lipopolisacárido, hemaglutinina sensible a manosa y proteína de membrana externa U, en las suspensiones de células inactivadas de V. cholerae O1, no así de las subunidades A y B de la toxina colérica (CTA y CTB, respectivamente) o pilli corregulado con la toxina (TCP). Por otra parte, se obtuvieron títulos vibriocidas en los sueros de conejos, similares a la respuesta inducida por la cepa viva atenuada 638 de V. cholerae O1, candidata a vacuna oral. CONCLUSIONES: la cepa de V. cholerae O1 El Tor Inaba C6706 mostró características culturales, antigénicas e inmunogénicas que permiten considerarla como posible cepa para la obtención de vacunas inactivadas contra el cólera.

INTRODUCTION: cholera continues being a serius health problem, mainly in the poorest areas. Most of the isolations worldwide belong to Vibrio cholerae O1 biotype El Tor serotype Ogawa, although there have been reported outbreaks caused by serotype Inaba, that is why it is recommended that an effective vaccine against the illness should contain cells or antigens of both serotypes. OBJECTIVE: to describe the characteristics of the strain C6706 of V. cholerae O1 El Tor Inaba as a likely strain for the obtaining of inactivated vaccines for cholera. METHODS: a criopreserved working culture batch was made up at - 70 ºC to evaluate identity, purity and viability. The strain was cultured in tryptone soy broth and was inactivated at 56º C for 20 minutes. Antigenicity of this preparation was tested by Western Blot and ELISA inhibition test. Immunogenicity in adult rabbits, inoculated intraduodenally, was determined by means of kinetics of vibriocidal antibodies. RESULTS: the working culture batch kept their identity, purity and viability during 18 months of study. The results confirmed the presence of relevant antigens as lipopolysaccharide (LPS), mannose-sensitive hemagglutinin (MSHA) and outer membrane protein U (OmpU) in the suspension of inactivated V. cholerae O1 cells, but not cholera toxin subunits (CTA, CTB) or toxin-coregulated pili (TCP).On the other hand, vibriocidal titers were found in rabbit sera, which were similar to those previously reported for the live V. cholerae O1 strain 638, an attenuated oral vaccinal candidate CONCLUSIONS: the V. cholerae O1 El Tor Inaba C6706 strain showed cultural, antigenic and immunogenic characteristics that allow us to consider it as a possible strain for the obtaining of inactivated vaccines for cholera.

Métodos de inactivación de patógenos en Plasma Fresco y Concentrados de Plaquetas / Pathogen Inactivation technology in fresh plasma and platelets concentrates

Las Tecnologías de Inactivación de Patógenos (TIPS) proveen un camino adicional para proteger el abastecimiento de sangre de agentes conocidos, emergentes y aún desconocidos. El principio precautorio refrendado por la FDA luego de la crisis del VIH/SIDA, establece que para situaciones de incertidumbre científica debiera tenerse en cuenta la posibilidad de riesgo aún en ausencia de pruebas de lo contrario. Pudiera argumentarse entonces que las TIPS representan la quintaesencia del principio precautorio. Si bien se ha acortado el intervalo entre el reconocimiento de un agente a la implementación de medidas para prevenirlo, hay a menudo un periodo de retardo temprano, durante el que una enfermedad no parece representar un riesgo para el receptor o la salud humana en general. El daño causado por ellos se ha mencionado como "una propiedad fija e inevitable de la práctica transfusional". Las TIPS para plasma fresco incluyen las siguientes: MBLT (Tratamiento con Luz y Azul de Metileno). PLT (Tratamiento con Psoralenos y Luz). RFLT (tratamiento con Riboflavina y Luz) además existe un método de Solvente Detergente para pools de plasma. Mientras que para los concentrados de plaquetas se pueden usar el Tratamiento con Luz Ultravioleta y Amotosaleno-UVA. Existe un riesgo potencial en retrasar la implementación de las TIPS mientras se aguarda la evidencia y el sistema absolutamente perfecto de ponerlas en práctica. Llegó el momento de actuar.

Pathogen Inactivation Technology (PIT) provides an additional way to protect the blood supply from agents known, emerging and yet unidentified. The precautionary principie which was first endorsed by FDA after the crisis of HIV / AIDS, states that for situations of scientific uncertainty should be taken into account the possibility of risk even in the absence of proof to the contrary. It could be argued then, that PITs represent the quintessence of the precautionary principie. Almost all of the potential for TTD is eradicated, often before the responsible agent is even recognized. Although the interval between the recognition of an agent to implement measures to prevent it has been shortened, there is often an earlier period of delay, during which a disease does not appear to represent a risk to the recipient or to human health in general. The damage caused bythem has been called a "fixed and inevitable property of transfusion practice." Techniques for pathogen inactivation of plasma include the following. MBLT (Methylene Blue and Light Treatment). PLT (Psoralens and Light Treatment). RFLT (Riboflavin and Light Treatment) in addition, there is a method of Solvent Detergent (SD) for pools of plasma. Techniques for pathogen inactivation of platelets include the following Ultra Violet Light Treatment and Amotosalen- UVA.There is great potential risk in delaying the implementation of Pathogen Inactivation Technologies (PITs) while awaiting the evidence and the absolute pedect system to put it into operation. It is time to act.

Evaluación del patrón de inactivación del cromosoma X en portadoras sintomáticas y mujeres con hemofilia / Assessing the inactivation pattern in chromosome X among symptomatic carriers and women with haemophilia

La inactivación del cromosoma X es un fenómeno estocástico que ocurre en la embriogénesis temprana femenina para lograr una compensación de dosis génica respecto a los varones. Ciertos mecanismos genéticos afectan el proceso normal, propiciando una inactivación sesgada con efectos clínicos relevantes en portadoras de trastornos recesivos ligados al cromosoma X, como la hemofilia. La herramienta molecular mayormente utilizada para la evaluación del patrón de inactivación del cromosoma X es la amplificación por PCR del gen del receptor de andrógenos humano (HUMARA). El empleo de esta técnica en portadoras sintomáticas y mujeres con hemofilia permite esclarecer si las manifestaciones de la enfermedad se deben a una lyonización desfavorable. Estos estudios, además, son importantes para la comprensión del proceso de inactivación del cromosoma X en humanos.

X chromosome inactivation is a stochastic event that occurs early in female embryo development to achieve dosage compensation with males. Certain genetic mechanisms affect the normal process causing a skewed X inactivation pattern which has clinical relevance in female carriers of X-linked recessive disorders, like haemophilia. The most commonly used assay to evaluate the X inactivation pattern is the PCR amplification of the human androgen receptor gene (HUMARA). The use of this technique in bleeding carriers and women with haemophilia allows identifying if their hemorrhagic symptoms are due to an unfavourable lyonization. Furthermore, these studies are important for understanding the X chromosome inactivation process in humans.

Utilización de las tarjetas FTA® para el diagnóstico molecular del virus de la enfermedad de NEWCASTLE en muestras de fluido alantoideo / Utilization of FTA® Cards for the Molecular Diagnostic of Newcastle Disease Virus in Allantoic Fluid Samples

Se evaluó la factibilidad de utilizar las tarjetas FTA® (Flinders Technology Associates) para la inactivación y transporte de fluido alantoideo infectado con el virus de la enfermedad de Newcastle (VEN). La tarjetas FTA® fueron impregnadas con diluciones seriadas de fluido alantoideo con un título inicial de 10(8,8) DL/50 del VEN cepa LaSota y analizadas mediante la prueba de reacción en cadena por la polimerasa transcriptasa reversa (por sus siglas en ingles RT-PCR) a las 24 horas, 7 y 14 días. La concentración más baja del virus detectada en el fluido alantoideo fue 10(5,8) DL/50. La detección del virus a partir de la tarjeta fue posible hasta 14 días después de su inactivación. El re-aislamiento viral en huevos embrionados a partir de las tarjetas resultó negativo. La inactivación del virus en las tarjetas no afectó la calidad de la secuencia de nucleótidos, permitiendo la determinación de su virulencia mediante la secuenciación de los nucleótidos que codifican la zona de corte de la proteína de fusión resultando ser lentogénico en concordancia con la cepa inicial de virus aplicada a las tarjetas. Se concluye que las tarjetas FTA® representan una alternativa válida para el muestreo, inactivación y diagnóstico molecular del VEN, con un alto grado de bioseguridad.

The feasibility of using FTA® cards (Flinders Technology Associates) for inactivation and transportation of allantoic fluid infected with Newcastle disease virus (NDV) was evaluated. Serial dilutions of allantoic fluid with a titer of 10(8.8) ELD/50 of LaSota strain NDV were loaded on the FTA® cards and analyzed after 24 hour, 7 and 14 days using reverse transcriptase-polimerase chain reaction (RT-PCR). The lowest virus concentration that could be detected from the FTA® cards was 10(5.8) ELD/50. The detection of the inactivated virus was possible after 14 days of virus inactivation. No virus re-isolation in embryonating eggs was possible from the cards. No negative effects of the FTA® card inactivation on the nucleotide sequences were observed, allowing the determination of its virulence by direct nucleotide sequencing of the F protein cleavage site, resulting in a lentogénic strain in concordance with the initial virus applied on the cards. It can be conclude that FTA® cards are a valid alternative for NDV sampling, inactivation and molecular diagnostic with a high degree of biosecurity.

Inactivación de genes de Mycobacterium tuberculosis y su potencial utilidad en la prevención y el control de la tuberculosis

El conocimiento derivado del genoma de Mycobacterium tuberculosis, junto con el desarrollo de sofisticados sistemas para la manipulación genética del bacilo, ofrece la mayor promesa para el desarrollo de herramientas nuevas y más eficientes para prevenir y controlar la tuberculosis. Se han desarrollado métodos más eficientes para la inactivación de genes micobacterianos que se han convertido en el pilar de la genómica funcional micobacteriana. La generación de mutantes mediante la inactivación génica, apoyada directa o indirectamente por el desciframiento del genoma micobacteriano, ha permitido la generación de un número significativo de mutantes de M. tuberculosis. En algunos casos, el análisis de estas mutantes ha establecido relaciones entre los productos génicos y sus funciones en la fisiología y la patogenicidad de la micobacteria. En esta revisión se describen los estudios más representativos basados en dichas mutantes.

Gene inactivation in Mycobacterium tuberculosis and its use in tuberculosis control and prevention Availability of the M. tuberculosis genome sequence and the development of sophisticated systems for genetic manipulation of bacilli offer the potential for new and effective tools to prevent and control tuberculosis. Efficient methods to inactivate mycobacterial genes have been developed. These methods have become the cornerstone for the application and development of mycobacterial functional genomics. Specific mutants are generated to establish the role of targetted genes associated with mycobacterial physiology and pathogenesis. Gene inactivation, supported directly or indirectly by the deciphering of the mycobacterial genome, has permitted the generation of large numbers of M. tuberculosis mutants. Analysis of these mutants has (in some cases) established relationships between gene products and their role in mycobacterial physiology and pathogenesis.