Ensayo de citotoxicidad de extractos de Pleurotusostreatus en diferentes líneas celulares para aplicaciones inmunonutricionales

Introducción: Los bioderivados propuestos como candidatos a ingredientes alimentarios suelen requerir ciertas evaluaciones para las aplicaciones inmunonutricionales Los hongos comestibles-medicinales son un surtidor de compuestos con estas potencialidades. Entre ellos, las setas Pleurotus ostreatus contienen metabolitos bioactivos, con importantes usos en la industria alimenticia y en la práctica terapéutica de la industria médico-farmacéutica. Los ensayos de citotoxicidad in vitro constituyen métodos valiosos para evaluarproductos de origen natural, como los extractos fúngicos. Objetivo: Evaluar la citotoxicidad de dos extractos obtenidos de la seta Pleurotus ostreatus en diferentes líneas celulares. Método: Se obtuvieron extractos hidrosolubles a partir del micelio y de los cuerpos fructíferos de Pleurotus ostreatus en laboratorios del Centro de Estudios de Biotecnología Industrial de la Universidad de Oriente. Se evaluó la citotoxicidad de los bioproductos por el ensayo de reducción del colorante resazurina sobre tres líneas celulares en el Laboratorio de Microbiología, Parasitología e Higiene (LMPH) de la Universidad de Amberes, Bélgica. Se utilizaron células no adherentes THP-1 (pre-monocitos de leucemia humana), células adherentes Caco-2 (epitelio de adenocarcinoma de colon humano) y células adherentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Los extractos de Pleurotus ostreatus no resultaron citotóxicos para ninguna de las líneas celulares estudiadas humanas o murina, ya que no ocasionaron daños sobre la viabilidad de las célulasepiteliales del sistema gastrointestinal, nisobrelas células del sistema inmune empleadas. Conclusiones: Este resultado demuestra que ambos bioderivados fúngicos pueden ser aplicados con seguridad en estudios inmunonutricionales.

Introduction: Bioderivatives proposed as candidates for food ingredients usually require certain evaluations for immunonutritional applications. Edible-medicinal mushrooms are a source of compounds with these potentials. Among them, Pleurotus ostreatus mushrooms contain bioactive metabolites, with important uses in the food industry and in the therapeutic practice of the medical-pharmaceutical industry. In vitro cytotoxicity assays are valuable methods to evaluate products of natural origin, such as fungal extracts. Objective: To evaluate the cytotoxicity of two extracts obtained from the Pleurotus ostreatus mushroom in different cell lines. Method: Water-soluble extracts were obtained from the mycelium and fruiting bodies of Pleurotus ostreatus in laboratories of the Center for Industrial Biotechnology Studies of the Universidad de Oriente. The cytotoxicity of the bioproducts was evaluated by the resazurin dye reduction assay on three cell lines at the Laboratory of Microbiology, Parasitology and Hygiene (LMPH) of the University of Antwerp, Belgium. Non-adherent THP-1 cells (human leukemia pre-monocytes), Caco-2 adherent cells (human colon adenocarcinoma epithelium) and RAW 264.7 adherent cells (murine macrophages) were used. Results: Pleurotus ostreatus extracts were not cytotoxic for any of the human or murine cell lines studied, since they did not cause damage to the viability of the epithelial cells of the gastrointestinal system, nor to the immune system cells used. Conclusions: This result demonstrates that both fungal bioderivatives can be safely applied in immunonutritional studies.

Introdução: Bioderivados propostos como candidatos a ingredientes alimentícios geralmente requerem determinadas avaliações para aplicações imunonutricionais. Pleurotus ostreatus contêm metabólitos bioativos, com importantes utilizações na indústria alimentícia e na prática terapêutica da indústria médico-farmacêutica. Ensaios de citotoxicidade in vitro são métodos valiosos para avaliar produtos de origem natural, como extratos de fungos. Objetivo: Avaliar a citotoxicidade de dois extratos obtidos do cogumelo Pleurotus ostreatus em diferentes linhagens celulares. Método: Extratos hidrossolúveis foram obtidos do micélio e dos corpos frutíferos de Pleurotus ostreatus nos laboratórios do Centro de Estudos de Biotecnologia Industrial da Universidade de Oriente. A citotoxicidade dos bioprodutos foi avaliada pelo ensaio de redução do corante resazurina em três linhagens celulares no Laboratório de Microbiologia, Parasitologia e Higiene (LMPH) da Universidade de Antuérpia, Bélgica. Foram utilizadas células THP-1 não aderentes (pré-monócitos de leucemia humana), células aderentes Caco-2 (epitélio de adenocarcinoma do cólon humano) e células aderentes RAW 264.7 (macrófagos murinos). Resultados: Os extratos de Pleurotus ostreatus não foram citotóxicos para nenhuma das linhagens celulares humanas ou murinas estudadas, pois não causaram danos à viabilidade das células epiteliais do sistema gastrointestinal, nem às células do sistema imunológico utilizadas. Conclusões: Este resultado demonstra que ambos os bioderivados fúngicos podem ser aplicados com segurança em estudos imunonutricionais.

Broad-spectrum survey of medicinal plants as a potential source of anticancer agents / Estudio de amplio espectro de plantas medicinales como fuente potencial de agentes contra el cáncer

Cancer is an abnormal and uncontrolled growth of cells that spreads through cell division. There are different types of medicines available to treat cancers, but no drug is found to be fully effective and safe for humans. The major problem involved in the cancer treatments is the toxicity of the established drug and their side effects. Medicinal plants are used as folk medicines in Asian and African populations for thousands of years. 60% of the drugs for treating cancer are derived from plants. More than 3000 plants have anticancer activity. The present review aims at the study of a broad spectrum survey of plants having anticancer components for different type of cancers. This article consists of 364 medicinal plants and their different parts as potential Source of Anticancer Agents.

El cáncer es un crecimiento anormal y descontrolado de células que se disemina a través de la división celular. Hay diferentes tipos de medicamentos disponibles para tratar el cáncer, pero no se ha encontrado ningún medicamento que sea completamente efectivo y seguro para los seres humanos. El principal problema involucrado en los tratamientos del cáncer es la toxicidad del fármaco establecido y sus efectos secundarios. Las plantas medicinales se utilizan como medicinas populares en poblaciones asiáticas y africanas durante miles de años. El 60% de los medicamentos para el tratamiento del cáncer se derivan de plantas. Más de 3000 plantas tienen actividad anticancerígena. La presente revisión tiene como objetivo el estudio de un estudio de amplio espectro de plantas que tienen componentes anticancerígenos para diferentes tipos de cánceres. Este artículo consta de 364 plantas medicinales y sus diferentes partes como fuente potencial de agentes anticancerígenos.

Modelos in vitro utilizados para predecir hepatotoxicidad de medicamentos en la fase pre-clínica / In vitro models used to predict hepatotoxicity of medications in the pre-clinical phase

El hígado es el órgano principal del cuerpo encargado de mantener la homeostasis interna, además cumple un rol fundamental en el metabolismo de medicamentos (xenobióticos) por lo tanto es vulnerable a lesiones fisiológicas o anatómicas. La lesión hepática inducida por fármacos (DILI) es la causa más común del fracaso del desarrollo pre-clínico y clínico de nuevos medicamentos, y de las advertencias de recuadro negro y el retiro de un medicamento del mercado. Por lo tanto, representa un problema grave para las industrias farmacéuticas, así también para el paciente, profesionales de la salud y las entidades reguladoras. Cabe mencionar que existen dos tipos de lesión hepática inducida por fármacos: farmacológicas o intrínsecas y la idiosincrásica. Durante la etapa pre-clínica del proceso de desarrollo de un medicamento se realiza un panel de cribado a los medicamentos candidatos empleando modelos celulares in vitro que incluyen sistemas de cultivos en 2D, 3D y líneas celulares de hepatoma humano, aunque también existen otros enfoques en el cual utilizan al pez cebra (reemplazo a los modelos animales) o modelos celulares basados en cribado de alto contenido. Posteriormente se emplean animales que, aunque presenten diferencias específicas respecto al humano a nivel hepatocelular igualmente se utiliza, para realizar predicciones cuantitativas y cualitativas de las principales propiedades farmacodinámicas, farmacocinéticas y toxicológicas del medicamento candidato. Actualmente existe un mayor esfuerzo para ir mejorando algunos modelos in vitro ya existentes, acoplando alguna herramienta o modificándolo genéticamente hacia el producto de interés proporcionando nuevos enfoques útiles para la predicción potencial tóxico a nivel hepático de los medicamentos candidatos.(AU)

The liver is the main organ of the body whose function is to maintain internal homeostasis, it also plays a fundamental role in the metabolism of drugs (xenobiotics), therefore it is vulnerable to physiological or anatomical injuries. Drug-induced liver injury (DILI) is the most common cause of preclinical and clinical development failure of new drugs, black box warnings, and drug recall. Therefore, it represents a serious problem for the pharmaceutical industries, as well as for the patient, health professionals and regulatory entities. It should be mentioned that there are two types of drug-induced liver injury: pharmacological or intrinsic and idiosyncratic. During the pre-clinical stage of the drug development process, candidate drugs are screened using in vitro cell models that include 2D, 3D culture systems and human hepatoma cell lines, although other approaches use zebrafish (replacement for animal models), or cell models based on high content screening. Subsequently, animals are used, which despite having specific differences with respect to humans at the hepatocellular level are also used to make quantitative and qualitative predictions of the main pharmacodynamic, pharmacokinetic and toxicological properties of the candidate drug. Currently, there is a major effort to improve some existing in vitro models, coupling a tool or genetically modifying it towards the product of interest, providing new useful approaches for the potential prediction of liver toxicity, of the candidate drugs.(AU)

Síndrome de Turner mixoploide: aberración estructural del cromosoma Y y su correlación con los dermatoglifos / Mixoploid turner Syndrome with a Y-chromosome structural aberration and its correlation with dermatoglyphs

Resumen ANTECEDENTES El análisis citogenético del síndrome de Turner suele ser una línea monosómica X. Son raros los casos reportados con más de una línea celular y aún menos con aberraciones estructurales del cromosoma Y. No es común que se incluyan análisis dermatoglíficos. CASO CLÍNICO Paciente de 8 años de edad, que al examen físico no evidenció ninguna característica fenotípica propia del síndrome de Turner, excepto talla baja, 1.28 cm (por debajo del percentil 3). La laparoscopia exploradora mostró al útero hipoplásico, trompas rudimentarias, cintillas ováricas hipoplásicas delgadas y anillos inguinales normales sin evidencia de hernias, no se detectó tejido testicular. El resultado de la citogenética convencional en sangre periférica fue de: 46,XY; bandeo "C" 46,XY; FISH 45,X[230]/46,XY[117]/46,X,dic.Y[64]. La dactiloscopia con aumento de verticilos coincidió con el aumento del número de crestas mayor al reportado como normal (127 ± 0.8), en quiroscopia ángulo ATD (92°), número de crestas a-b (86) y el porcentaje de t (24.3%). CONCLUSIÓN Se discute uno de los pocos casos reportados en la bibliografía de síndrome de Turner con tres líneas celulares diferentes, resultantes de un evento no disfuncional poscigótico y estructural cromosómico, así como el análisis de la dactiloscopia y quiroscopia y los aspectos genéticos, medio ambientales y bioquímicos de los dermatoglifos, coincidentes con los del síndrome clásico.

Abstract BACKGROUND Usually, cytogenetic analysis of Turner´s syndrome is presented as a single monosomic X cell line. Are rare the reported cases in which there are multiple cell lines and even less frequent descriptions of structural chromosomal aberrations of the Y-chromosome. Additionally, the cases reported to date do not include finger/palm process analysis. We present an infrequent case of a Turner syndrome with three different cell lines including a structural aberration of the Y-chromosome and to correlate with finger process and palm process analysis. CLINICAL CASE A 8-year-old female patient who did not show any Turnerian syndrome phenotypic characteristics except low height, 1.28 cm (under 3th percentile). Exploratory laparoscopy shows hypoplastic uterus, with rudimentary tubes, thin hypoplastic ovaries and normal inguinal rings without evidence of hernias. No testicular tissue was detected. Conventional cytogenetic findings in peripheral blood are: 46, XY; "C" banding 46, XY; FISH 45, X [230] / 46, XY [117] /46,X,dic.Y [64]. Finger process with increase of whorls was observed, coinciding with the increase in the number of ridges higher than that reported as normal (127 ± 0.8) and in the palm process the atd angle (92º), number of a-b crests (86) and the percentage of t (24.3%). CONCLUSION We discuss one of the few cases reported in the scientific literature of Turner syndrome with three different cell lines results from a non-dysfunctional post-zygotic etiology and its chromosomic structure; as well as the results of genetic, environmental and biochemical aspects of the finger/palm process and their correlation with the classical syndrome.

Evaluación de la citotoxicidad de extractos marinos sobre un panel de líneas celulares / Evaluation of cytotoxicity of different marine extracts in a cell line panel

Introducción: los extractos naturales provenientes de fuentes marinas representan una importante fuente en el descubrimiento de nuevos compuestos con potencialidades como anticarcinogénicos. Objetivos: determinar el efecto de cinco extractos provenientes de diferentes organismos marinos sobre la viabilidad de un panel de cinco líneas celulares (A549, HEp-2, MDA-MB-231, SiHa y MRC-5). Metodos: el efecto de los extractos (Physalia physali, Cassiopea xamachana, Tripneustes ventricosus, Echinometra lucunter) se determinó mediante el ensayo colorimétrico con el empleo de bromuro de 3(4,5 dimetil-2-tiazoil)-2,5-difeniltetrazolio. Mediante de RT-PCR se determinó adicionalmente el efecto del extracto de Echinometra lucunter sobre la expresión de los genes apoptóticos p53, survivin, bcl-xL y noxa en SiHa. Resultados: todos los extractos afectaron la viabilidad celular de la línea normal MRC-5 de pulmón humano. Sin embargo, no disminuyeron la viabilidad de las líneas celulares de origen tumoral con excepción del extracto de Echinometra lucunter. Este extracto solo afectó la viabilidad de la línea celular tumoral SiHa. Los valores de las concentraciones inhibitorias medias (CI50) mostraron que solo para el extracto de Echinometra lucunter, la línea celular tumoral SiHa evidenció una CI50 de 52,07±11 µg/mL que es significativamente inferior a MRC-5 con una CI50 de 98,6±14 µg/mL, por lo que se muestra selectividad frente a las células tumorales. Adicionalmente, el extracto disminuyó significativamente la expresión de los genes proapoptóticos lo que sugiere la muerte celular por necrosis en las células SiHa. Conclusiones: el extracto proveniente de Echinometra lucunter resultó selectivo frente a las células tumorales SiHa. Experimentos que incluyan otras líneas celulares de cáncer cérvicouterino podrían confirmar el potencial de este extracto frente a esta variedad histológica de cáncer(AU)

Introduction: natural extracts from marine sources represent an important source for the discovery of new compounds with anti-carcinogenic potentialities. Objectives: to determine the effect of five extracts from several marine organisms pm the viability of a panel of five cell lines (A549, HEp-2, MDA-MB-231, SiHa y MRC-5). Methods: the effects of the extracts (Physalia physali, Cassiopea xamachana, Tripneustes ventricosus, Echinometra lucunter) were then determined by using the colorimetric assay with 3 (4,5 dimethyl-2-tiazoil)/2,5-difeniltetrazolium bromide. Additionally, the effect of extract of Echinometra lucunter was determined on the expression of apoptotic genes p53, survivin, bcl-xL and noxa in SiHa. Results: all the extracts affected the cell viability of the normal cell line MRC-5 of the human lung. However, viability of tumoral cell lines did not decrease except for the extract from Echinometra lucunter. This extract just affected the viability of tumor cell line SiHa. The mean inhibitory concentrations (IC50) showed that only for Echinometra lucunter extract, the tumor cell line SiHa revealed a IC50 of 52,07±11 µg/mL that is significantly lower than that of MRC-5 with IC50 of 98,6±14 µg/mL, therefore the selectivity against the tumor cells was shown. Moreover, the extract markedly decreased the expression of propapoptosis genes, thus indicating the cell death from necrosis in SIHa cells. Conclusions: extract from Echinometra lucunter was selective against tumor cells SiHa. Other experiments that will include other cervix uterine cancer cell lines can confirm the potential of this extract to have an effect on this histological cancer type(AU)

Efectos citotoxicos in vitro de extractos y fracciones de Bursera tomentosa (Jacq.) Triana & Planch., Burseraceae, frente a lineas celulares tumorales humanos / In vitro cytotoxicity of extracts and fractions of Bursera tomentosa (Jacq.) Triana & Planch., Burseraceae, against human tumor cell / Efeitos citotóxicos in vitro de extratos e frações de Bursera tomentosa (Jacq.) Triana & Planch., Burseraceae, frente a linhagens celulares tumorais humanos

A los extractos, fracciones y subfracciones obtenidos de hojas, flores y corteza de Bursera tomentosa (Jacq.) Triana & Planch., Burseraceae, se les evalúo su actividad citotóxica preliminar frente a las líneas celulares CSC-1595 y Colo 205, siguiendo el método de fraccionamiento guiado por bioensayo de citotoxicidad MTT. Los resultados obtenidos de esta prueba muestran a la subfracción en diclorometano-metanol (9.5:0.5) obtenida de la fracción acetato de etilo del extracto en éter de petróleo de hojas, como la que presentó las sustancias bioactivas con una marcada actividad citotóxica, con porcentajes de viabilidad del 3 por ciento y 15.3 por ciento a la concentración 30 µg/mL en las líneas tumorales humanas Colo 205 y CSC-1595 respectivamente.

To the extracts, fractions and subfractions obtained from leaves, flowers and bark of Bursera tomentosa (Jacq.) Triana & Planch., Burseraceae, its preliminary cytotoxic activity against to the cellular lines CSC-1595 and Colo 205 were evaluated, following the MTT method. The results showed that dichloromethane-methanol (9.5:0.5) subfraction obtained of ethyl acetate part from petroleum extract of leaves, like to display the bioactives substances with a strong cytotoxic activity, showing viability percentage of 3 percent and 15,3 percent to the concentration 30 µg/mL in human tumor cellular lines Colo 205 and CSC-1595 respectively.

A atividade citotóxica de extratos frações e subfrações obtidas das folhas e cascas de Bursera tomentosa (Jacq.) Triana & Planch., Burseraceae, foram preliminarmente avaliados pelo método MTT frente a linhagens celulares tumorais CSC-1595 e Colo 205. Os resultados mostraram que a subfração diclorometano-metanol (9.5:0.5), obtidos a partir da fração acetato de etila do extrato em éter de petróleo das folhas, como sendo a que apresenta substâncias bioativas com forte atividade citotóxica, taxa de viabilidade de 3 por cento e de 15,3 por cento na concentração de 30 µg/mL em linhagens de células tumorais humanas Colo 205 e CSC-1595, respectivamente.

Evaluación de la toxicidad in vitro del veneno del alacrán Rophalurus junceus a través de un ensayo celular / In vitro toxicity assessment caused by Rophalurus junceus scorpion poison though a cellular assay

El veneno del alacrán azul, Rophalurus junceus es comercializado con el nombre de Escozul. Este producto natural se emplea en el tratamiento de diferentes patologías. Este trabajo evaluó el efecto citotóxico in vitro de este producto en las líneas tumorales P3-X63/AG8/653 y Dunning R3327-G provenientes de mieloma murino y próstata de rata, respectivamente. La citotoxicidad fue evaluada mediante la cinética de crecimiento celular y el daño metabólico. Se utilizaron dosis de 1, 10, 20, 50, 100 y 200 mg/mL. El veneno presentó un efecto citostático dependiente de la línea tumoral en cuestión. Las dosis efectivas variaron entre las líneas celulares ensayadas. Se estudió además la estabilidad del producto almacenado durante 30 días a temperaturas de -20 y 4ºC, se evidenció la pérdida de la actividad biológica. El trabajo demostró la citotoxicidad del veneno crudo del alacrán azul en cultivos celulares.

Poison of blue scorpion (Rophalurus junceus) is marketed as Escozul. This natural product is used in treatment of different pathologies. Present paper evaluated the in vitro cytotoxic effect of this product in P3-X63/AG8/653 and Dunning R3327-G tumor lines from murine myeloma and rat prostate, respectively. Cytotoxic effect was evaluated by means of cellular growing kinetics and the metabolic damage. Doses of 1,10, 20, 50, 100, and 200 ìg/mL. Poison had a cytostatic effect dependent of tumor line at issue. Doses effective varied among the cellular lines assessed. We studied also stability of product stored during 30 days at temperatures of -20° and 4° C, evidenced the loss of biological activity. We showed cytotoxic effect of crude poison of blue scorpion in cellular cultures.