Susceptibilidad del género aspergillus a los antifúngicos por el método de microdilución en caldo / Susceptibility of the aspergillus genus to antifungal agents by the broth microdilution method

La aspergilosis es una micosis ocasionada por el género Aspergillus que afecta tanto a pacientes inmunocompetentes como inmunosuprimidos. La presentación clínica depende del estado inmune del hospedero y de los factores de riesgo asociados; en la medida en que progrese la inmunosupresión habrá mayor probabilidad de adquirir la enfermedad invasora que se asocia a una elevada morbimortalidad. El objetivo de este trabajo fue Establecer la susceptibilidad del género Aspergillus a diferentes antifúngicos por el método de Microdilución en caldo según el documento M38-A2, con el fin de conocer los patrones de susceptibilidad de los aislados clínicos de Aspergillus spp. Se utilizaron 76 cepas clínicas que se encuentran en resguardo en la micoteca del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel". Se utilizaron cepas controles A. fumigatus ATCC 204305, A. flavus ATCC 204304, C. parapsilosis ATCC 22019 y C. krusei ATCC 6258. Obteniendo como resultado que las CMI más elevadas in vitro frente a las 4 especies de Aspergillus fueron Voriconazol y AmB. Itraconazol y Caspofungina reportaron las CMI más bajas y por consiguiente los PCE obtenidos se encontraron entre más o menos 2 CMI comparadas con otras investigaciones. Este estudio aportó información importante sobre el comportamiento del género Aspergillus frente a los antifúngicos más utilizados en el tratamiento de la aspergilosis en nuestro país como a nivel mundial.

Aspergillosis is a mycosis caused by the genus Aspergillus that affects both immunocompetent and immunosuppressed patients. The clinical presentation depends on the host's immune status and the associated risk factors; As immunosuppression progresses, there is a greater probability of acquiring the invasive disease that is associated with high morbidity and mortality. The objective of this work was to establish the susceptibility of the genus Aspergillus to different antifungals by the method of Microdilution in broth according to document M38-A2, in order to know the susceptibility patterns of the clinical isolates of Aspergillus spp. Seventy-six clinical strains were used in the mycology department of the National Institute of Hygiene "Rafael Rangel". Control strains A. fumigatus ATCC 204305, A. flavus ATCC 204304, C. parapsilosis ATCC 22019 and C. krusei ATCC 6258 were used. As a result, the highest MICs in vitro against the 4 Aspergillus species were Voriconazole and AmB. Itraconazole and Caspofungin reported lower MICs and therefore the PCEs obtained were found between plus or minus 2 MICs compared to other investigations. This study provided important information about the behavior of the genus Aspergillus against the most commonly used antifungals in the treatment of aspergillosis in our country as a worldwide.

Susceptibilidad in vitro a cinco antifúngicos de aislamientos del Complejo Fusarium solani provenientes de úlceras corneales / In vitro susceptibility to five antifungals of Fusarium solani Complex isolates obtained from corneal ulcers

El Complejo Fusarium solani (CFS) se encuentra distribuido en la naturaleza, causando un amplio espectro de infecciones en los humanos, desde superficiales, como la queratitis, hasta infecciones fúngicas invasoras, caracterizándose por su resistencia a los antimicóticos. El objetivo de esta investigación fue determinar la susceptibilidad in vitro del CFS frente a cinco antifúngicos. Se utilizaron 30 aislados obtenidos de úlceras corneales provenientes de la colección de cultivos del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” y se siguió el protocolo descrito en el documento M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI), determinando las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMI) por microdilución en caldo para anfotericina B, itraconazol, posaconazol, voriconazol y fluconazol. En general, todas las drogas presentaron CMI elevadas, siendo voriconazol y anfotericina B los antifúngicos que exhibieron mejor actividad, mientras que itraconazol, posaconazol y fluconazol mostraron actividad nula. Los resultados de este estudio aportaron información importante sobre el comportamiento del CFS frente a los antifúngicos de uso común en la práctica clínica por primera vez en Venezuela. Es imprescindible que el médico conozca la actividad de estas drogas para poder tomar decisiones y orientar una conducta terapéutica adecuada.

The Fusarium solani Complex (FSC) is distributed in nature, producing a wide spectrum of infections in humans, from superficial ones such as keratitis, to invasive fungal infections, characterized by their resistance to antimycotics. The purpose of this investigation was to determine the in vitro susceptibility of the FSC to five antifungals. We used 30 isolates obtained from corneal ulcers kept at the culture collection of the Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” and we followed the protocol described in the M38-A2 document of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) determining the Minimal Inhibitory Concentrations (MIC) by broth microdilution for amphotericin B, itraconazole, posaconazole, voriconazole and fluconazole. In general, all the drugs presented high MICs, voriconazole and amphotericin B being the antifungals which showed the best activity, while itraconazole, posaconazole and fluconazole showed a null activity. The results of this study provided, for the first time in Venezuela, important information about the behavior of the FSC towards commonly used antifungals. It is mandatory that physicians know the activity of these drugs in order to be able to take decisions and devise an guide an appropriate therapeutic management.

Susceptibilidad in vitro del complejo fusarium solani frente a cinco antifúngicos por concentración mínima inhibitoria según el método M-38A2 del CLSI / In vitro susceptibility of the fusarium solani complex against five antifungal agents by minimum inhibitory concentration according to CLSI method M-38A2

El complejo Fusarium solani (CFS) se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza, causando un amplio espectro de infecciones en los humanos, desde superficiales, como la queratitis, hasta infecciones fúngicas invasoras, caracterizándose por presentar una escasa actividad frente a los antifúngicos. El objetivo de esta investigación fue determinar la susceptibilidad in vitro del CFS frente a 5 antifúngicos según el método M38-A2 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI). Se utilizaron 30 aislamientos clínicos de úlceras corneales provenientes de la colección de cultivos del Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" y del Hospital Universitario de Caracas. Se siguió el protocolo descrito en el documento M38-A2, que consistió en determinar las Concentraciones Mínimas Inhibitorias (CMI) por microdilución en caldo para anfotericina b (AB), itraconazol (IZ), posaconazol (POS), voriconazol (VZ) y fluconazol (FZ). En general, todas las drogas presentaron CMI elevadas, siendo VZ y AB los antifúngicos que mostraron mejor actividad, mientras que para IZ, POS y FZ la actividad fue nula. Los resultados de este estudio aportaron información importante sobre el comportamiento del CFS ante los antifúngicos de uso común en la práctica clínica por primera vez en Venezuela. Es imprescindible conocer la actividad de estas drogas para poder tomar decisiones y orientar una conducta terapéutica adecuada.

The Fusarium solani species complex (FSSC) is widely distributed in nature, causing a wide spectrum of human infections, from superficial as keratitis to invasive fungal infections, characterized by having low antifungal activity. The objective of this research was to determine the in vitro susceptibility of FSSC to 5 antifungal agents, according to the M38-A2 method of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). It was used 30 clinical isolates of corneal ulcers, coming from the culture collection of the Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel and the Hospital Universitario de Caracas. It was followed the protocol described in the document M38-A2 to determine the minimum inhibitory concentrations (MIC) by broth microdilution for amphotericin B (AB), itraconazole (IZ), (POS), voriconazole (VZ), and fluconazole (FZ). In general, all the drugs showed elevated MICs, being VZ and AB the drugs presenting the best antifungal activity, while IZ, POS and FZ showed no activity. The results of this study provided important information about the behavior of the FSSC against antifungal agents commonly used in clinical practice for the first time in Venezuela. It is essential to know the activity of these drugs in order to make decisions and to orient an appropriate therapeutic behaviour.

Estandarización del inóculo por desintometría para las pruebas de susceptibilidad antifungica en aspergillus spp / Standardization of inoculum by densitometry for antifungal susceptibility testing in aspergillus spp

En los últimos años, la enfermedad invasora causada por Aspergillus spp. ha constituido un problema creciente en pacientes inmunosuprimidos, debido a su elevada incidencia y mortalidad. La aparición de nuevas alternativas terapéuticas como el voriconazol y la caspofungina, aunada a la resistencia documentada de especies de Aspergillus a la anfotericina B e itraconazol, conllevan a la realización de pruebas de susceptibilidad antifúngica de aislados clínicos de Aspergillus spp. Actualmente existen dos documentos de referencia aprobados par a las pruebas de susceptibilidad de Aspergillus spp., el M38-A2 y el E.DEF 9.1. Una de las variables que influye significativamente en éstas pruebas, es la preparación del inoculo; en tal sentido, los documentos mencionados presentan diferentes metodologías, el M38-A2 refiere que la preparación del inóculo se realice mediante el uso de, mientras que E.DEF 9. 1 indica que dicha preparación se realice mediante el contaje de conidias en una cámara de Neubauer. Por otra parte, algunos investigadores han obtenido resultados controversiales al evaluar y/o comparar la reproducibilidad de las metodologías de preparación del inóculo de ambos métodos de referencia En ésta investigación se estandarizó una metodología alternativa para la preparación del inóculo, la densitometría, que resultó ser un método adecuado, sencillo y rápido. Para la preparación de los inóculos y se estableció los siguientes rangos de unidades: MacFarland: de 0.4 a 0.6 para A.flavus, y A. nidulans. De 0.3 a 0.4 para A.fumigatus, y A.terreus y de 0.2 a 0.8 para A.niger.

In recent years, invasive disease caused by Aspergillus spp. has become an increasing problem in immunosuppressed patients because of its high incidence and mortality. The emergence of new therapies such as voriconazole and caspofungin, coupled with documented resistance of Aspergillus species to amphotericin B and itraconazole, leading to the realization of antifungal susceptibility testing of clinical isolates of Aspergillus spp .Currently there are two reference documents approved for susceptibility testing of Aspergillus spp., the M38-A2 and E. DEF 9.1. One of the variables that significantly influence these tests, is the preparation of inoculum; in this way, the documents before mentioned show differ entmethodologies, the M38-A2 refers to the preparation of the inoculum was performed by using spectrophotometry, while E. DEF 9.1 indicates that this preparation is executing by counting conidia in a Neubauer chamber. On the other hand, some researchers have obtained controversial results when evaluating and or compare the reproducibility of the methods of preparing the inoculum of the two methods of reference. For this study, it was standardized an alternative methodology for the preparation of inoculum, "densitometry", and this resulting an appropriate method, simple and fast. For preparation of inocula by densitometry was established the following range s of units MacFarland: 0.4 to 0.6 for A.flavus, and A. nidulans. from 0.3 to 0.4 for A.fumigatus, and A. terreus and from 0.2 to 0.8 for A.niger.

Study on Antifungal Susceptibility of Different Extract Parts of Euphorbia humifusa / 中国中医药信息杂志

Objective:To examine the antifungal effect of different extraction parts of Euphorbia humifusa in vitro,and measure the minimum inhibition concentrations(MICs).Methods Separated the Dijincao extract and got four parts by solvent extraction.Applied the standard which was approved by the National Committee for Clinical Laboratory Standards(NCCLS):Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous,Fungi(M38-A).MICs of different parts of Dijincao extract against 23 strains of common clinical dermatophytes were investigated.Results Chloroform extract and petroleum ether extract could not get clear and definite MIC because their solubility disturbed the determination of experiment's results.However,water and n-butanol fraction could get definite and clear results.Both of these two parts could clearly inhibit fungal growth.Conclusion Euphorbia humifusa extract parts have antifungnal activity against dermatophytes in vitro.