Evaluación del cultivo in vitro de una cepa mexicana de Ganoderma lucidum / Evaluation of in vitro cultivation of a Mexican strain of Ganoderma lucidum

RESUMEN La cepa mexicana CP-145 de Ganoderma lucidum debido a la importancia medicinal que ha presentado últimamente, la presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto de la temperatura y medio de cultivo sobre el crecimiento micelial óptimo en diferentes rangos de pH. Los tratamientos correspondieron en la utilización del medio de cultivo papa dextrosa agar (PDA) y extracto de malta agar (EMA), con dos niveles de temperatura (25 y 28 °C) y seis rangos de pH (4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0 y 6.5). El diseño experimental fue completamente al azar con medidas repetidas a través del tiempo, analizados con el paquete REPEATED MEASURE y el efecto tiempo con PROC MIXED de SAS. Como resultado se obtuvieron que el efecto de la temperatura y medios de cultivo en los diferentes rangos de pH, presentaron diferencias significativas (P ≤ 0.05). El crecimiento micelial óptimo de la cepa mexicana de G. lucidum fue en el medio de cultivo EMA en los rangos de pH de 4.0 y 4.5 con 8.3 y 8.2 cm respectivamente. De igual forma, en los rangos de pH 4.0 y 4.5 se obtuvieron los crecimientos miceliales óptimos a temperatura de 25 °C con 8.1 y 8.0 cm respectivamente. El cual concluyó esta investigación que el crecimiento micelial óptimo de la cepa mexicana fueron a pH 4.0 y 4.5, temperatura de 25 °C y medio de cultivo EMA.

ABSTRACT The Mexican strain CP-145 of Ganoderma lucidum due to the medicinal importance it has presented lately, the present investigation had as objective to evaluate the effect of temperature and culture medium on the optimal mycelial growth in different pH ranges. The treatments corresponded to the use of potato dextrose agar (PDA) and malt extract agar (EMA), with two temperature levels (25 and 28 °C) and six pH ranges (4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 5.5, 6.0 and 6.5). The experimental design was completely randomised with repeated measures over time, analysed with the REPEATED MEASURE package and the time effect with PROC MIXED of SAS. As a result, the effect of temperature and culture media in the different pH ranges showed significant differences (P ≤ 0.05). The optimal mycelial growth of the Mexican strain of G. lucidum was in the EMA culture medium in the pH ranges of 4.0 and 4.5 with 8.3 and 8.2 cm respectively. Similarly, in the pH ranges 4.0 and 4.5 the optimum mycelial growth was obtained at 25 °C with 8.1 and 8.0 cm respectively. This research concluded that the optimal mycelial growth of the Mexican strain was at pH 4.0 and 4.5, temperature of 25 °C and EMA culture medium.

Supervivencia de células fibroblásticas humanas en ausencia de suplementación / Survival of Human Fibroblastic Cells in the Absence of Supplementation

Resumen Introducción. Los fibroblastos gingivales (FGs) son células del tejido conjuntivo gingival que han tomado en los últimos años una relevancia promisoria por su probable utilización en la terapia celular, dadas sus capacidades de multipotencialidad y de autorrenovación. Objetivo. Conocer y describir el impacto de la ausencia en la suplementación de Suero Fetal Bovino (SFB) en la supervivencia de fibroblastos gingivales en cultivos. Materiales y métodos. Fibroblastos gingivales fueron aislados de tejido gingival de pacientes sanos y cultivados en medios de cultivos DMEM (Dulbecco's Modified of Eagle Medium) en ausencia y suplementados con 0.2% de SFB a 37°C en una atmósfera húmeda con 5% de CO2. Se llevó a cabo una evaluación morfológica, de supervivencia y proliferación de los FGs, así como la identificación mediante la técnica de inmunofluorescencia de marcadores del citoesqueleto celular como la actina y mitocondrias. Resultados. Los FGs cultivados en ausencia y con suplementación de 0.2% de SFB evidenciaron una forma fusiforme, con núcleos ovalados y numerosas prolongaciones citoplasmáticas durante el tiempo de cultivo. Un leve aumento en la proliferación de FGs fue observado en aquellas células en contacto con el medio DMEM+0.2% de SFB comparadas con el medio donde estuvo ausente la suplementación. El inmunomarcaje de la actina y las mitocondrias dejó en evidencia que la ausencia y suplementación a 0.2% de SFB no afectó su localización en los FGs evaluados. Conclusión. Los fibroblastos gingivales sobreviven y proliferan en ausencia de SFB, conservando sus características morfológicas celulares.

Abstract Introduction. Gingival fibroblasts (GF) are cells of gingival connective tissue that have taken promising relevance in recent years due to their probable use in cell therapy, given their multipotencial and self-renewal capabilities. Objective. To know and to describe the impact of the absence of Fetal Bovine Serum (FBS supplementation on the survival of gingival fibroblasts in cultures. Materials and methods. Gingival fibroblasts were isolated from gingival tissue of healthy patients and cultured in DMEM (Dulbecco's Modified of Eagle Medium) culture media in absence and supplemented with 0.2% FBS at 37 ° C in a humid atmosphere with 5% CO2. A morphological evaluation, survival and proliferation of GF were carried out, as well as the identification by the immunofluorescence technique of cellular cytoskeleton markers such as actin and mitochondria. Results. The GF grown in the absence and with supplementation of 0.2% FBS showed a fusiform shape, with oval nuclei and numerous cytoplasmic extensions during the culture time. A slight increase in the proliferation of GF was observed in those cells in contact with the DMEM medium +0.2% FBS compared to the medium where the supplementation was absent. Immunostaining of actin and mitochondria showed that the absence and supplementation to 0.2% of FBS did not affect its location in the evaluated. Conclusion. Gingival fibroblasts survive and proliferate in the absence of FBS, preserving their cellular morphological characteristics.

Cultivo de células epiteliales dentales: impacto del suero fetal bovino / Culture of dental epithelial cells: impact of fetal bovine serum

RESUMEN Objetivo. Describir la influencia del Suero Fetal Bovino (SFB) en la supervivencia, crecimiento y expresión de organelas celulares en las células epiteliales dentales de rata. Materiales y métodos. Cultivos de células epiteliales dentales de rata fueron llevados a cabo a 37°C en una atmosfera húmeda, en ausencia y a una concentración de 10% de SFB. Una evaluación morfológica fue realizada durante la proliferación y confluencia de las células en cultivo. Dobles marcajes por inmunofluorencia fueron efectuados haciendo uso de anticuerpos anti-actina, anti-TOMM20 y anti-LAMP1. Resultados. Se evidenciaron células epiteliales dentales circulares u ovoides con núcleos voluminosos durante la proliferación y confluencias de manera similar en las células cultivas en presencia y ausencia de SFB. La carencia de SFB impactó negativamente la proliferación de las células epiteliales. No fueron observadas alteraciones en la localización de los inmunomarcajes anti-actina, anti-TOMM20 y anti-LAMP1 en las dos condiciones de cultivos experimentales. Conclusiones. La supresión del SFB en el cultivo de células epiteliales dentales de rata disminuyó la supervivencia, proliferación y sugiere no tener un impacto sobre las organelas evaluadas.

ABSTRACT Objective. Describe the influence of Fetal bovine serum (FBS) on the survival, growth and expression of cellular organelles in rat dental epithelial cells. Material and methods. Cell cultures of rat dental epithelial cells were carried out at 37°C in a humid atmosphere, in the absence and at a concentration of 10% FBS. Morphological evaluation was performed during the proliferation and confluence of cell in culture. Double immunofluorescence labels were made using anti-Actin, anti-TOMM20A, and anti-LAMP1 antibodies. Results. Circular or ovoid dental epithelial cells with bulky nuclei were evidenced during proliferation and confluences in a similar manner in culturing cells in the presence and absence of FBS. The lack of FBS negatively impacts the proliferation of epithelial cells. No alterations were observed in the localization of the anti-actin, anti-TOMM20 and anti-LAMP1 immunomarkers in both conditions of experimental cultures. Conclusion. FBS suppression in rat dental epithelial cells decreased survival, proliferation and suggests not having an impact on the organelles evaluated.

Diagnóstico genético preimplantacional no invasivo; datos preliminares en México / Non-invasive preimplantation genetic diagnosis; preliminary data in Mexico

Resumen: OBJETIVO: Analizar las tasas de concordancia, falsos positivos y negativos entre el ADN embrionario circulante en medio de cultivo y su relación con los reportes de la biopsia de trofoectodermo. MATERIALES Y MÉTODOS: Estudio observacional, prospectivo y comparativo, llevado a cabo en el Centro de Reproducción Arcos Nascere en noviembre 2018. Criterios: de inclusión: parejas en esquema de fertilización in vitro, con diagnóstico genético preimplantacional de aneuploidias. Criterios de exclusión: pacientes con anomalías estructurales o enfermedades monogénicas. Criterio de eliminación: blastocistos con eclosión asistida. Variables de respuesta: tasa de concordancia, falsos positivos y negativos entre las biopsias de trofoectodermo y los medios de cultivo. El análisis estadístico se realizó con SPSS 25.0, con pruebas t de Student y χ2 con valor de p < 0.05 significativa. RESULTADOS: Se analizaron 20 blastocistos de 5 parejas y se obtuvieron resultados informativos de 17 (amplificación global exitosa); 70% en día 5 y 100% en día 6. La tasa general de concordancia entre las biopsias de trofoectodermo y los medios de cultivo fue de 68.7% (42.8% en día 5 y 88.8% en día 6). En cuanto a las discrepancias, solo se observaron 2 falsos negativos en los medios de cultivo vs la biopsia de trofoectodermo (14.2% en día 5 y 11.11% en día 6); hubo 3 casos de falsos positivos (la mitad en día 5 y ninguno en día 6-7). CONCLUSIONES: Con la prueba genética no invasiva de aneuploidias se alcanzaron altas tasas de concordancia, sobre todo en embriones en día 6.

Abstract: OBJECTIVE: Analyze the concordance, false positive and false negative rates between circulating free DNA of the culture media compared to the results of the trophectoderm biopsy. MATERIALS AND METHODS: Observational, prospective and comparative study, conducted at Arcos Reproduction Center S.C. Nascere in november 2018. Couples with indication of preimplantation genetic diagnosis of aneuploidies undergoing In vitro Fertilization were included; carriers of structural anomalies or monogenic diseases were excluded and blastocysts with assisted hatching were eliminated. The response variables were the concordance, false positives and false negatives rates between trophoctoctoderm biopsies and culture media. Statistical analysis was performed with SPSS 25.0, using t-Student and chi-square tests with a value of p <0.05 significant. RESULTS: Informative results were obtained in 17 of the 20 culture media (85% successful global amplification); 70% on day 5 and 100% on day 6. The general concordance rate between trophectoderm biopsies and culture media was 68.7% (42.8% on day 5 and 88.8% on day 6). Regarding discrepancies, only 2 false negatives were observed in the culture media compared to the trophectoderm biopsy (14.2% on day 5 and 11.1% on day 6). There were 3 cases false positives (42.8% on day 5 and 0% on day 6). CONCLUSIONS: High rates of concordance were reached with the non-invasive genetic aneuploidy test, mainly in embryos on day 6.

Impacto de la concentración de suero fetal bovino sobre las células epiteliales dentales / Impacto da concentração de soro bovino fetal nas células epiteliais dentárias / Impact of bovine fetal serum concentration on dental epithelial cells

Resumen El esmalte dental, tejido más duro del cuerpo humano, es formado por medio de la diferenciación de células epiteliales conocidas como ameloblastos. Recientemente, las células epiteliales dentales de incisivo de rata han sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante la formación del esmalte dental. Sin embargo, en función de los eventos estudiados es meritorio comprender su comportamiento, particularmente cuando la concentración del Suero Fetal Bovino (SFB) varia. El propósito de este trabajo es evaluar el impacto de la concentración del SFB sobre el crecimiento, proliferación y supervivencia de las células epiteliales dentales. Células epiteliales dentales fueron cultivadas en DMEM/F12, en presencia y ausencia de SFB. Observaciones morfológicas e inmunohistoquímicos de la actina, vimentina y fibronectina fueron realizados. Los resultados permitieron constatar que la ausencia de SFB afectó negativamente la proliferación de las células epiteliales dentales, pero mantuvo una expresión óptima de la actina y vimentina. Se identificó una alteración en la expresión de la fibronectina en las células tratadas en ausencia de SFB. En conclusión, la carencia de SFB disminuyo drásticamente la supervivencia, proliferación y expresión de la fibronectina en las células epiteliales dentales de rata.

Abstract Dental enamel, the hardest tissue in the human body is formed by the differentiation of epithelial cells known as ameloblasts. Recently rat incisor dental epithelial cells have been used as a cellular model of pathophysiological events during tooth enamel formation. However depending on the events studied, it is necessary to understand the behavior of these cells, particularly when the concentration of Bovine Fetal Serum (FBS) varies. The purpose of this work is to evaluate the impact of FBS concentration on the growth, proliferation, and survival of dental epithelial cells. Dental epithelial cells were cultured in DMEM/F12 culture medium in the absence and presence of 10% FBS. Morphological and immunohistochemical observations of actin, vimentin, and fibronectin were performed. The results confirm that the absence of FBS negatively affected the proliferation of dental epithelial cells but maintained an optimal expression of actin and vimentin. An alteration in the expression of fibronectin in the cells treated in the absence of FBS was identified. In conclusion, the lack of FBS dramatically decreased the survival, proliferation, and expression of fibronectin in rat dental epithelial cells.

RESUMO O esmalte dentário, o tecido mais duro do corpo humano, é formado pela diferenciação de células epiteliais conhecidas como ameloblastos. Recentemente, células epiteliais dentárias de incisivo de rato têm sido utilizadas como modelo celular de eventos fisiopatológicos durante a formação do esmalte dentário. No entanto, dependendo dos eventos estudados, é meritório entender seu comportamento, particularmente quando a concentração de soro fetal bovino (FBS) varia. O objetivo deste trabalho é avaliar o impacto da concentração de SFB no crescimento, proliferação e sobrevivência de células epiteliais dentárias. Células epiteliais dentárias foram cultivadas em DMEM / F12, na presença e ausência de SFB. Observações morfológicas e imunohistoquímicas de actina, vimentina e fibronectina foram realizadas. Os resultados permitiram confirmar que a ausência de SFB afetou negativamente a proliferação de células epiteliais dentárias, mas manteve uma ótima expressão de actina e vimentina. Uma alteração na expressão de fibronectina nas células tratadas na ausência de SFB foi identificada. Em conclusão, a falta de SFB diminuiu drasticamente a sobrevivência, proliferação e expressão de fibronectina em células epiteliais dentárias de ratos

Adaptación del método acreman para la limpieza de plantas en lemna minuta (araceae: lemnoideae) / Adaptation of the acreman method for cleaning plants in lemna minuta (araceae: lemnoideae)

RESUMEN Lemna minuta es una macrófita flotante de amplia distribución en ecosistemas lénticos, que puede ser útil en el desarrollo de experimentos ecofisiológicos y ecotoxicológicos debido a su potencial sensibilidad a contaminantes acuáticos como toxinas y metales pesados. Para estos, inicialmente se deben establecer cultivos axénicos con sus poblaciones bajo condiciones de laboratorio, los cuales requieren técnicas de limpieza para sus frondas que aún no han sido definidas. Se adaptó el método de Acreman en su tiempo de exposición y concentración de hipoclorito de sodio, propuesto para la desinfección de las especies pertenecientes al género Lemna L. (Lemnoideae) a partir de colonias nativas. Las colonias se obtuvieron de un humedal de la ciudad de Bogotá, y posteriormente se aclimataron y desinfectaron en diferentes tiempos y soluciones de hipoclorito. Los resultados más adecuados para la remoción de algas epífitas y otros microrganismos de las frondas, sin presentar alta mortalidad de las colonias, se obtuvieron, respectivamente, en las concentraciones 0,5 % (45 y 30 segundos) y 0,25 % (60 segundos) de hipoclorito. Por el contrario, el tiempo de exposición de 60 segundos propuesto por el método Acreman (0,5%) resultó en la mortalidad total de las frondas (100 %). Se sugiere utilizar una solución de hipoclorito de sodio 0,5% en un tiempo de exposición menor o igual a 45 segundos para la desinfección de colonias de L. minuta con fines experimentales.

ABSTRACT Lemna minuta is a floating macrophyte widely distributed in lentic ecosystems, which may be useful for development of ecophysiological and ecotoxicological experiments, due to its sensitivity to water pollutants such as toxins and heavy metals. Axenic cultures and cleaning techniques of fronds from their populations under laboratory conditions have not yet been defined. Acreman method was modified in exposure time and concentration of sodium hypochlorite for disinfection from native colonies of species belong to genus Lemna L. (Lemnoideae). The colonies were obtained from an urban wetland of Bogota city, and they were acclimatized and disinfected at different times with hypochlorite solutions. The most suitable results for the removal of epiphytic algae and other microorganisms of the fronds, without showing high mortality of colonies, were obtained, respectively, in 0,5 % (45 and 30 seconds) and 0,25 % (60 seconds) hypochlorite concentrations. By contrast, the exposure time of 60 seconds proposed by Acreman method (0,5 %) resulted in total mortality of fronds (100 %). This report suggests use a solution of 0,5 % sodium hypochlorite in an exposure time of 45 seconds or less for disinfect colonies of L. minuta with experimental purposes.

Micropropagacion in vitro de Rosa rosa sp. a partir de yemas axilares y respuesta callogénica / Rose rosa sp. in vitro micropropagation from axillary buds and callogenic response

El objetivo de este trabajo fue obtener plántulas de Rosa sp y respuesta callogénica a partir de yemas axilares y hojas. Se utilizó Murashige y Skoog (MS) al 100%, como medio de cultivo para la fase de establecimiento, adicionado con myo-inositol 0,1 mg/L, ácido ascórbico 0,1 mg/L, tiamina 0,2 mg/L, sacarosa 30 g, benzylaminopurina (BAP) 0,4 mg/L, kinetina 0,3 mg/L, ácido naftaleno-acético (ANA) 0,3 mg/L, y Agar sigma 6 g; ajustando el pH a 5,8; esterilizados en autoclave a 120°C bajo 15 lb de presión. El análisis de varianza para la fase de multiplicación y enraizamiento determinó que existen diferencias altamente significativas para la variable altura ( p=0,000), para determinar en cuáles medias son significativamente diferentes se realizó la prueba de Kruskal ­ Wallis. Para las variables presencia de raíz (p = 0,3398), número de hojas (p = 0,4775) y formación de callos (p = 0,1964), sin diferencias estadísticamente significativas.

The objective of this work was to obtain Rosa sp seedlings and callogenic response from axillary buds and leaves. Murashige and Skoog (MS) 100%, was used as culture medium for the establishment phase, added with myo-inositol 0.1 mg / L, ascorbic acid 0.1 mg / L, thiamin 0.2 mg / L, sucrose 30 g, benzylaminopurine (BAP) 0.4 mg / L, kinetin 0.3 mg / L, indole-acetic acid (IAA) 0.3 mg / L, and Sigma agar 6 g; adjusting the pH to 5.8; sterilized in an autoclave at 120 °C under 15 lb of pressure. The analysis of variance for the phase of multiplication and rooting determined that there are highly significant differences for the variable height (p = 0.000), in order to determine which means are significantly different, the Kruskal - Wallis test was performed. For the variables presence of root (p = 0. 3398), number of leaves (p = 0.4775) and callus formation (p = 0.1964), without statistically significant differences.

Influencia del medio de cultivo sobre la cinética de crecimiento y expresión de la proteína recombinante Rv2626c de Mycobacterium tuberculosis H37Rv expresada en Streptomyces lividans TK24 / Influence of the culture medium on the kinetics of growth and expression of the recombinant protein Rv2626c of Mycobacterium tuberculosis H37Rv expressed in Streptomyces lividans TK24

Streptomyces lividans, ha ganado gran atención en los últimos tiempos, como vector de expresión y producción de proteínas de Mycobacterium tuberculosis de interés biomédico, como alternativa a su obtención tradicional en E. coli. La proteína Rv2626c, Proteína de Respuesta Hipóxica 1, es codificada por el gen Rv2626c (hrp1) de M. tuberculosis, perteneciente al regulón de la fase de latencia DosR. Esta proteína se sobre-expresa en la fase de latencia de la tuberculosis bajo condiciones de estrés como hipoxia y bajos niveles, de óxido nítrico. Se ha demostrado la inmunogenicidad y capacidad de esta proteína, de inducir citocinas características del patrón Th-1, tales como el interferón gamma. Por ello, nuestro grupo logró la obtención de Rv2626c por la tecnología del ADN recombinante usando como cepa hospedera Streptomyces lividans TK24. Con el objetivo de aumentar el nivel de expresión de la proteína recombinante, rRv2626c en este trabajo se ensayaron diferentes medios de cultivo, evaluando el crecimiento de la cepa transformada en condiciones de zaranda. Se determinó la cinética de crecimiento en el medio definido, formulado industrialmente en el Centro Nacional de Biopreparados: caldo Triptona Soya (TSB-BioCen) y en medio de cultivo equivalente preparado en el laboratorio. Para establecer la cinética de crecimiento, se utilizó el cálculo del peso seco y la determinación de la concentración de proteínas totales por la técnica de ácido bicinconinico (BCA) a diferentes tiempos del cultivo. Posteriormente, se identificó la proteína clonada mediante SDS-PAGE y Western Blotting, así como los niveles de expresión mediante análisis densitométrico. Los resultados indican que se alcanzaron los máximos niveles de densidad celular a las 36 h de cultivo y los más altos niveles de expresión proteica total y específica entre las 42 y 54 h. Con el medio químicamente definido TSB-Biocen preformulado en lugar del preparado en el laboratorio partiendo de los componentes, se logró reducir el tiempo óptimo para la expresión-secreción de la proteína rv2626c de 96 a 54 h. Los mejores resultados en la promoción de la expresión de la proteína recombinante se lograron con el medio definido TSB-BioCen, a las 48 h con 8,5% de rendimiento específico, superando en más de 10 veces los niveles de crecimiento celular obtenidos con el medio elaborado en el laboratorio y más de dos veces los niveles de secreción de la proteína recombinante(AU)

The use of Streptomyces as a bacterial cell factory for the secretory production of bio-active Mycobacterium tuberculosis proteins have gained a lot of attention in recent years, as a convenient alternative to the traditionally used Escherichia coli. The protein Rv2626c protein, also known as Hypoxic Response Protein 1 (HRP1), is encoded by the gene rv2626c (hrp1) of M. tuberculosis which belongs to the Dormancy Safety Regulator (DosR) regulon. This protein is over-expressed during the latency phase of tuberculosis under stress related conditions such as hypoxia and low, non-toxic, levels of nitric oxide and, the immunogenicity and ability to induce cytokines characteristic of the Th-1 pattern of this protein, such as gamma interferon, have been demonstrated. On this basis, our working group, succeeded in obtaining rRv2626c via recombinant DNA technology using Streptomyces lividans TK24 as the host cell. To improve the expression level of the protein, different culture media were used to evaluate the growth of the transformed strain in shaken flask conditions. Growth kinetic for the recombinant strain was evaluated in defined media of preformulated tryptic soya broth (TSB-Biocen), through the determination of dry weight as well as total protein concentration by Bicinconinic acid assay (BCA). Protein identification was done by SDS-PAGE, Western Blot and its expression level by densitometric analysis. Our results indicated a maximal cell density at 36 h of culture, with higher concentration of total and specific protein at 42-54 h in comparison with previous media used. With the chemically defined media a preformulated TSB-Biocen rather than individual components, culture time for expression/secretion of rRv2626c was reduced from 96 h to 54 h. The best results in expression-secretion levels of rv2626c protein were obtained with the TSB-Biocen defined media at 48 h of culture with 8.5% of specific yield. More than 10 fold increase in cellular growth and more than 2 fold increase in specific yield(AU)

Comparación cualitativa de diferentes medios de cultivo y condiciones de siembra para el aislamiento primario de Helicobacter pylori a partir de biopsia gástrica obtenidas de pacientes dispépticos / Qualitative comparison between different cultures media and conditions for primary isolation of Helicobacter pylori obtain of gastric biopsies of dyspeptic patients

El cultivo de Helicobacter pylori es indispensable para estudiar la sensibilidad de las cepas a distintos agentes antimicrobianos, realizar pruebas diagnósticas y evaluar su toxicidad y virulencia, además, preservar los aislamientos con fines inve stigati vos futuros. Bajo condiciones óptimas, el cultivo posee una sensibilidad cercana al 90% y una especificad de 100%, pero las tasas de aislamiento de los individuos infectados pueden variar entre 23,5% a 97%, dependiendo de un número de factores como los componentes del medio de cultivo, el transporte de las biopsias, automedicación con inhibidores de bomba de protones/antibióticos y los métodos de toma de la biopsia. Por esta razón, el objetivo del estudio de la investigación fue comparar diferentes medios de cultivo y las condiciones de transporte, manejo y procesamiento de las biopsias para el aislamiento de Helicobacter pylori. Se analizaron 27 biopsias gástricas de antro y cuerpo del estómago obtenidas de pacientes dispépticos; fueron sembradas por duplicado en tres medios de cultivo diferentes designados como A, B y C y bajo dos condiciones de siembra de la biopsia por Impresión (Touch) y por maceración, el transporte de las biopsias se realizó en medio de transporte con y sin suplementos y antibióticos. Los resultados de la tasa de recuperación en el medio de cultivo A fue 59,2%, en el B fue 37% y en el C fue de 18,5%. Tanto el medio A como en el B se evidenció un crecimiento vigoroso de H. pylori, caso contrario en el medio de cultivo C, en donde las colonias no se observaron tan brillantes y evidentes. La siembra por maceración en laboratorio y el medio de cultivo A proporcionaron las mejores condiciones para la recuperación de H. pylori.

Helicobacter pylori cultivation is essential to study the sensitivity of isolates to various antimicrobial agents, diagnostic testing and evaluating toxicity and virulence also preserve isolates with future research purposes. Under optimum conditions, cultivation has a sensitivity approaching 90% and a specificity of 100%, but the rates of isolation of infected individuals may vary between 23.5% to 97%, depending on a number of factors such as components culture medium, transporting biopsies, self-medication with proton-pump inhibitor / antibiotics and methods of making the biopsy. For this reason, the aim of the research study was to compare different culture media and conditions of transport, handling and processing of biopsies for the isolation of Helicobacter pylori. 27 antrum's gastric biopsies and body 's gastric biopsies obtained from dyspeptic patients were analyzed; were seeded for duplicate on three different culture's mediums designated as A, B and C and under two culture's conditions. The biosies were seeded for Printing (Touch) in the endoscopy unit and maceration in the microbiology's laboratory. The biopsies were transported in transport medium with and without supplements and antibiotics. The results of the recovery rate in the culture medium A was 59.2%, in the B was 37% and in the C was 18.5%. In the culture médium A and B were observed a vigorous growth of H. pylori, otherwise in the culture medium C, the colonies were not observed as bright. Seeding by maceration in laboratory culture medium and A provided the best conditions for recovery of H. pylori.

Fecal culture and two fecal-PCR methods for the diagnosis of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in a seropositive herd / Cultivo fecal y dos métodos de PCR en materia fecal para el diagnóstico de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis en un hato seropositivo / Cultivo fecal e dois métodos de PCR em matéria fecal para o diagnóstico de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis em um rebanho soropositivo

Abstract Background: paratuberculosis is a slow-developing infectious disease, characterized by chronic granulomatous enterocolitis. This disease has a variable incubation period from 6 months to over 15 years, and is caused by Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Its detection by direct and indirect diagnostic techniques has been of special interest. Objective: to report the diagnosis and detection of MAP using several diagnostic tests in a herd of the Northern region of Antioquia, Colombia. Methods: serum samples from the study herd were analyzed, using a commercial ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) kit. Fecal samples were cultured by duplicate using Herrold´s egg yolk medium (HEYM), and analyzed by an end- point IS900-specific nested PCR protocol, and a commercial F57-real-time PCR kit. Results: eight out of 27 serum samples in the study herd resulted ELISA-positive. None of fecal samples resulted positive to HEYM culture by duplicate and none were found to be positive by F57-real-time PCR. Seven of the 27 fecal samples were found to be positive by end-point IS900-specific nested PCR. Agreement was found between ELISA and end-point IS900-specific nested PCR in one of the animals. Conclusion: the present study gives information about the agreement between direct and indirect MAP-detection techniques, using different matrixes from animals under the same husbandry conditions.

Resumen Antecedentes: la paratuberculosis es una enfermedad infecciosa de desarrollo lento, caracterizada por una enterocolitis granulomatosa crónica. Esta enfermedad tiene un periodo de incubación que varía entre los 6 meses hasta por más de 15 años, y es causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Su detección por técnicas diagnósticas directas e indirectas ha sido de interés especial. Objetivo: reportar el diagnóstico y detección de MAP utilizando varias técnicas diagnósticas en un hato de la región norte de Antioquia, Colombia. Métodos: se analizaron las muestras de suero del hato de estudio utilizando un kit comercial de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Las muestras de materia fecal fueron cultivadas por duplicado en Herrold´s egg yolk medium (HEYM), y analizadas mediante un protocolo de PCR anidado específico de IS900 y un kit comercial de PCR en tiempo real para F57. Resultados: ocho de las 27 muestras de suero resultaron positivas por ELISA. Ninguna de las muestras de materia fecal resultó positiva al cultivo en HEYM por duplicado ni por PCR en tiempo real para F57. Siete de las 27 muestras de materia fecal resultaron positivas a PCR anidado específico de IS900. Se encontró concordancia entre el resultado de ELISA y de PCR anidado específico de IS900 en uno de los animales. Conclusión: el presente estudio brinda información acerca de la concordancia entre técnicas directas e indirectas de detección de MAP, utilizando diferentes matrices a partir de animales bajo las mismas condiciones de manejo.

Resumo Antecedentes: a paratuberculosis é uma doença infecciosa de evolução lenta, caracterizada por uma enterocolite granulomatosa crônica. Esta doença tem um período de incubação que varia de 6 meses a 15 anos e é causada pelo Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP). Sua detecção por técnicas de diagnóstico diretos e indiretos tem sido de especial interesse. Objetivo: reportar o diagnóstico e a detecção de MAP utilizando várias técnicas de diagnóstico em um rebanho na região norte de Antióquia, Colômbia. Métodos: foram analisadas amostras de soro do rebanho utilizando um kit comercial de ELISA (enzyme- linked immunosorbent assay). As amostras de fezes foram cultivadas em duplicado em Herrold´s egg yolk medium (HEYM) e analisadas utilizando um protocolo de PCR aninhada específico de IS900 e um kit de PCR em tempo real comercial para F57. Resultados: oito das 27 amostras de soro foram positivas para ELISA. Nenhuma das amostras testadas na cultura de fezes HEYM duplicado foram positivas ou na PCR em tempo real para F57. Sete das 27 amostras de fezes foram positivas na PCR aninhada específica para IS900. Foi encontrada concordância entre o resultado de ELISA e PCR aninhada específica para IS900 em um animal. Conclusão: este estudo fornece informações sobre a correlação entre técnicas de detecção direta e indireta do MAP, utilizando diferentes matrizes de animais sob as mesmas condições de condução.

Balamuthia mandrillaris en el Perú, lesiones cutáneas, meningoencefalitis y métodos de cultivo / Balamuthia mandrillaris in Perú, skin lesions, meningoencephalitis and cultivation methods

Las amebas de vida libre son microorganismos abundantes en el suelo y agua en todo el planeta. Algunas especies de estas amebas son capaces de causar muerte en el ser humano y animales, asi como Naegleria fowleri (N. fowleri), Acanthamoeba sp. T4 principalmente y Balamuthia mandrillaris (B. mandrillaris). El 98% de los casos reportados en el mundo han fallecido. En Peru alrededor de 8 casos de meningoencefalitis por Acanthamoeba sp. se han reportado y mas de 55 casos por B. mandrillaris . Ningun caso por N. fowleri ha sido documentado oficialmente en el Peru. B. mandrillaris es de dificil diagnostico y aislamiento en medios de cultivo. En esta revision pretendo documentar la historia de casos reportados de los ultimos 40 años y describir los medios de cultivo utiles para su crecimiento. La identificacion morfologica y molecular de Balamuthia es critica en el diagnostico de meningoencefalitis amebiana.

Free-living amoebae are abundant microorganisms in soil and water worldwide. Some species of these amoebae are capable of causing death in humans and animals, such as Naegleria fowleri (N. fowleri) , Acanthamoeba sp . T4 , and Balamuthia mandrillaris (B. mandrillaris) . Some 98% of cases reported in the world have resulted in death. In Peru, 8 cases of meningoencephalitis due to Acanthamoeba sp. have been reported and more than 55 cases per B. mandrillaris . No case of N. fowleri has been officially documented in Peru. B. mandrillaris is difficult to diagnose and isolate in culture media. In this review we document the history of reported cases of the last 40 years and describe useful methods for their growth. Morphological and molecular identification of Balamuthia is critical to the diagnosis of amoebic meningoencephalitis.

Multiplicación in vitro de Psidium guajava L. en sistemas de inmersión temporal / In vitro multiplication of Psidium guajava L. in temporary immersion systems

La introducción de nuevos cultivares de guayabo (Psidium guajava L.) amerita su propagación masiva, lo cual solo puede ser satisfecho mediante la micropropagación. Sin embargo la micropropagación convencional dejó de ser económicamente eficiente, debido al uso de agentes gelificantes y el elevado número de operaciones manuales, por esta razón se planteó en esta investigación, generar una metodología que permita disminuir los costos de producción por la exclusión del gelificante en los medios de cultivo, evaluando los sistemas de inmersión temporal (SIT) en la multiplicación in vitro de guayabo. Para lo cual, se evaluó el efecto del cultivo en SIT, se comparó los SIT tipo BIT® y RITA® y se evaluó el tiempo (1 y 2 min) y frecuencia (3 y 4 veces/día) de inmersión. Luego de seis semanas de cultivo se evaluó: número de brotes (NB), numero de nudos (NN), longitud de brote (LB) y coeficiente de multiplicación (CM). Con el empleo de SIT se logró valores superiores para NB (2,17), NN (3,5), LB (10,7 mm) y CM (2,8). En la comparación entre SIT tipo RITA y BIT, valores superiores se obtuvieron con el RITA® para NB (3,8), NN (3,8), LB (16,6 mm) y CM (10,4). Se determinó que con 2 min de inmersión se logró los mayores valores de NB (3,7), NN (13,4), LB (15,3 mm) y con 2 min de inmersión 3-4 veces/día el mayor CM (9,4 y 10,4). Se concluye que el cultivo en RITA® en la multiplicación favoreció crecimiento y la proliferación de brotes de guayabo.

The introduction of new cultivars of guava (Psidium guajava L.) deserves its mass propagation, which can only be satisfied by micropropagation. However conventional micropropagation stopped being economically efficient due to the use of gelling agents and the high number of manual operations. For this reason was considered in this research, generate a methodology to reduce production costs by exclusion of gelling in culture media, assessing temporary immersion systems (TIS) in the in vitro multiplication of guava. For which, the effect of the culture way was evaluated in TIS, type TIB® and RITA® compared the TIS and was evaluated the time (1 and 2 min) and frequency (3 and 4 times / day) of immersions. After six weeks of culture were evaluated: shoots number (NS), nodes number (NN), shoot length (SL) and multiplication rate (MR). With the use of TIS higher values for NS (2.17), NN (3.5), SL (10.7 mm) and MC (2.8) was achieved. When comparing RITA® and TIB, higher values were obtained with the RITA® for NS (3.8), NN (3.8), SL (16.6 mm) and MC (10.4). It was determined that 2 min of immersion with the highest values of NS (3.7), NN (13.4), SL (15.3 mm) and 2 min immersion 3-4 times/day achieved the highest MC (9.4 and 10.4). We conclude that the RITA® culture favored the multiplication in growth and proliferation of shoots of guava.

Efecto de las condiciones de crecimiento y composición del medio de cultivo sobre la producción de bacteriocina de Enterococcus mundtii Tw56 / Effect of growth conditions and culture medium composition on bacteriocin production by Enterococcus mundtii Tw56

Enterococcus mundtii Tw56 es una cepa productora de bacteriocina que fue aislada del contenido intestinal de pejerrey (Odontesthes sp.). El objetivo del presente trabajo fue determinar los factores fisicoquímicos y la composición del medio de cultivo para lograr un mayor rendimiento de células viables y producción de bacteriocina. No se observaron cambios en la producción del antimicrobiano cuando la glucosa fue sustituida por fructosa o maltosa en la formulación del medio MRS. Por el contrario, la mayor actividad de las bacteriocinas se obtuvo cuando se utilizó el extracto de carne como fuente única de nitrógeno. Mientras que la máxima biomasa se alcanzó a 35 °C, las temperaturas óptimas para la producción de bacteriocina se observaron a 25 y 30 °C. El pH inicial óptimo para el crecimiento celular y bioactividad fue 6,5, ambos parámetros disminuyeron cuando la experiencia comenzó a pH 6,0 o 5,5. La formación de biomasa y la producción de bacteriocina disminuyeron en presencia de cloruro de sodio. La cepa comenzó a producir bacteriocina en la fase exponencial tardía. La actividad aumentó en función de la masa celular y alcanzó el máximo al final de la fase exponencial (12 h). Una disminución de la actividad antimicrobiana se observó en la fase estacionaria (16 h), posiblemente debido a la degradación por enzimas proteolíticas.

Enterococcus mundtii Tw56 is a bacteriocin-producing strain that was isolated from intestinal content of silverside (Odontesthes sp.). The aim of the present work was to determine physicochemical factors and culture medium composition for higher yield of viable cells and bacteriocin production. No changes were observed in the antimicrobial production when glucose was replaced by fructose or maltose in the MRS medium formulation. On the other hand, highest bacteriocin activity was obtained when meat extract was used as a sole nitrogen source. While the maximun biomass was achieved at 35 ºC, the optimal temperatures for bacteriocin production were observed at 25 and 30 ºC. The optimal initial pH for cell growth and bioactivity was 6.5, both parameters dropped when the experience started at pH 6.0 or 5.5. Biomass formation and bacteriocin production decreased in the presence of sodium chloride. The strain started producing the bacteriocin at the late exponential phase. The activity increased as a function of the cell mass and reached the maximun at the end of exponential phase (12 h). A decrease of antimicrobial activity was observed in the stationary phase (16 h), possibly due to degradation by proteolitic enzimes.

Effects of photoperiod, plant growth regulators and culture media on in vitro growth of seedlings of Cyrtochilum loxense (Lindl.) Kraenzl. an endemic and endangered orchid from Ecuador

Cyrtochilum loxense (Lindl.) Kraenzl. is an endemic and seriously endangered orchid species endemic in the Loja Province (Southern Ecuador). The main goals of this research were to analyze how culture media, plant growth regulators and photoperiod affect the growth of C. loxense. Eight month old plants (approximate 1 - 1.5 cm in height) obtained by in vitro germination, were cultivated on MS media or Knudson C; MS with three levels of naphthalene acetic acid (NAA) and 6-benzylaminopurine (BAP) (2/0.5; 1/0.5 y 0.5/ 0.5 mg-1L); and three photoperiodic regimes (24/0, 16/8, 8/16 h) on MS with and without plant growth regulators. No significant differences of shoot induction were observed on media with or without plant growth regulators, and all tested photoperiods. The highest growth (1.2 cm) was observed in plantlets cultivated on growth regulator-free media with a 16/8 photoperiod. Also the shoot and root formation was better in this species in absence of plant growth regulators. Probably this response is due to the endogenous hormone levels in the tissues or due to the kind and concentrations of PGRs used were too low to induce positive morphogenetic responses.

Cyrtochilum loxense (Lindl.) Kraenzl. es una orquídea endémica y críticamente amenazada, distribuida en la provincia de Loja (Sur del Ecuador). Los objetivos principales de esta investigación fueron analizar la influencia del medio de cultivo, reguladores de crecimiento vegetal y fotoperíodo en el crecimiento de C. loxense. Plantas de ocho meses (altura aproximada de 1 - 1.5 cm.) obtenidas por germinación in vitro, fueron cultivadas en medio MS y Knudson C; medio MS con tres niveles de ácido naftalen acético (ANA) y 6-bencil amino purina (BAP) (2/0.5; 1/0.5 y 0.5/ 0.5 mg-1L); y tres fotoperíodos (24/0, 16/8, 8/16 h) en MS con o sin reguladores de crecimiento vegetal (RCV). No se observaron diferencias significativas en la inducción de brotes en medio con o sin RCV, entre todos los fotoperíodos testados. El tamaño más grande (1.2 cm) se registró en plántulas cultivadas en medio libre de reguladores de crecimiento vegetal, incubadas en un fotoperíodo de 16/8. Además, la mayor brotación y enraizamiento se observó para esta especie en medio libre de reguladores de crecimiento vegetal. Probablemente esta respuesta es debida a los niveles endógenos de hormonas vegetales en el tejido o el nivel de RCV usado fue muy bajo para inducir alguna respuesta morfogénica.

Diseño de un medio de cultivo a base de peptonas vegetales para el cultivo de Clostridium chauvoei / Design of a medium based on vegetable peptones for the culture of Clostridium chauvoei

Objetivo: se diseñó un medio de cultivo a base de peptonas vegetales para la producción de biomasa de Clostridium chauvoei. Métodos: se seleccionaron nueve peptonas vegetales y dos caldos con peptona vegetal para sustituir la peptona de origen animal en el medio Clostridium modificado. Se desarrolló una fermentación relacionada con la producción de masa celular, verificando la absorbancia y el porcentaje de transmitancia (%T), la segunda etapa involucró los ensayos de patogenicidad, determinando el titulo de DL50. Resultados: las peptonas vegetales 1-B, 8-M, 10-M, 11-M fueron seleccionadas por presentar un % T cercano al del medio Clostridium modificado. Luego se realizó una prueba de letalidad (DL50) en cobayos. Los cultivos con estas peptonas vegetales presentaron DL50 entre diluciones 10-8 y 10-9, en contraste con los cultivos realizados con el medio control que fue de 106.5 Conclusiones: las peptonas vegetales 1-B, 8-M, 10-M y 11-M favorecieron la producción de biomasa de Clostridium chauvoei a pH 8,2. Las peptonas vegetales probadas mostraron una letalidad mayor comparada con la del medio base.

Objective: a culture medium based on vegetable peptones was designed for the production of Clostridium chauvoei biomass.Methods: nine vegetable peptones and two vegetable peptone broths were selected to substitute animal peptone in the modified Clostridium medium. A fermentation process was developed which was related to the production of cell mass, and absorbance and transmittance percentage (%T) were verified. The second stage included pathogenicity assays to determine LD50 titers. Results: vegetable peptones 1-B, 8-M, 10-M, 11-M were selected, for their % T was close to that of the modified Clostridium medium. A lethality test (LD50) was then performed on guinea pigs. Cultures with these vegetable peptones presented LD50 between 10-8 and 10-9 dilutions, in contrast to the 106.5 obtained in cultures with the control medium. Conclusions: vegetable peptones 1-B, 8-M, 10-M and 11-M stimulated the production of Clostridium chauvoei biomass at pH 8.2. The vegetable peptones tested showed greater lethality than the base medium.

Comparación del cultivo "in vitro" de Toxoplasma gondii cepa RH en las líneas celulares Hep-2 y Vero / Comparison of "in vitro" culture of Toxoplasma gondii RH strain in Hep-2 and Vero cell lines

Introducción: La toxoplasmosis es una zoonosis causada por Toxoplasma gondii, parásito intracelular obligado capaz de replicarse en todas las células nucleadas, permitiendo su aislamiento y mantenimiento en cultivo celular. Objetivo: Comparar el cultivo de Toxoplasma gondii (RH), en células Hep-2 y Vero empleadas para propagación parasitaria. Métodos: Se optimizaron las condiciones para cultivo de Toxoplasma gondii (RH), en células Vero y Hep-2; se sembraron 500.000 y 1.000.000cel./mm3 y se infectaron 1.000.000 y 2.000.000taq/mm3 respectivamente, se hizo seguimiento hasta las 120 horas para determinar invasión celular, porcentaje de rosetas, de viabilidad y rendimiento de taquizoitos. Resultados: A las 48 horas de incubación se evidenció el 90% de invasión parasitaria en las dos líneas celulares así como el mayor recuento de rosetas; a las 120 horas se obtuvieron los mayores recuentos de taquizoitos extracelulares y un mayor índice de rendimiento de 185,9 en las células Hep-2, en la concentración de 500.000cel./mm3 y 1.000.000taq/mm3. Se obtuvo una viabilidad parasitaria promedio superior al 80% para las dos líneas celulares. Conclusiones: Se obtuvo un mayor rendimiento parasitario viable en las células Hep-2 por lo que esta línea celular puede considerarse como el mejor modelo para la propagación y mantenimiento parasitario de T. gondii (RH).

Introduction: Toxoplasmosis is a zoonosis caused by Toxoplasma gondii, which is an obligate intracellular parasite capable of replicate itself in all nucleated cells, allowing their isolation and maintenance in cell culture. Objective: To compare cultivation Toxoplasma gondii (RH) in Hep-2 cells and Vero employed to spread parasitic. Methods: The conditions were optimized for cultivation of Toxoplasma gondii (RH) in Vero and Hep-2 cells lines, 500.000 and 1.000.000cel./mm³ were seeded and 1.000.000 and 2.000.000taq/mm³ were infected respectively, a track to determine cell invasion, percentage of rosettes and viability and efficiency of tachyzoites was made until the 120 hours. Results: After 48 hours of incubation, 90% of parasite invasion was evident in both cell lines as well as the largest count rosettes. At 120 hours higher counts of extracellular tachyzoites and a higher rate of performance of 185.9 in Hep-2 cells at concentration of 1.000.000taq/mm³ and 500.000cel./mm³ were obtained. Average parasite viability over 80 % was obtained for both cell lines. Conclusions: Higher parasitic performance was obtained viable in Hep-2 cells, so that this cell line can be considered as the preferred model for the propagation and maintenance of T. gondii (RH).

Multiplicación del clon de banano ‘FHIA-18’ (AAAB) en Sistema de Inmersión Temporal / Multiplication of banana clone 'FHIA-18' (AAAB) in Temporary Immersion System

Con el propósito de desarrollar un protocolo para la multiplicación del clon de banano ´FHIA-18´ (AAAB) en sistema de inmersión temporal, se definieron como objetivos del trabajo determinar el efecto del tiempo (5, 10 y 15 minutos) y la frecuencia de inmersión (3, 6 y 8 horas por día), así como la influencia de diferentes combinaciones de reguladores del crecimiento (2,0; 3,0 y 4,0 mg.L-1 de 6-BAP y 2,0; 2,5; 3,0; 3,5 y 4,0 mg.L-1 de 6 AIA), el efecto del volumen de medio de cultivo por planta (20, 30, 40 y 50 ml/explante) y la densidad de explantes por frasco de cultivo (30, 50, 70 y 90 explantes/frasco) para incrementar el coeficiente de multiplicación. Con el empleo de un tiempo de 10 minutos y una frecuencia de inmersión cada tres horas, se alcanzaron los mejores resultados en cuanto al número de explantes obtenidos. Con este tiempo y frecuencia de inmersión los explantes presentaron el mayor diámetro del pseudotallo. Para cada frasco de 10,0 L se inocularon 70 explantes y la renovación con 2800 ml de medio de cultivo (40 ml/explante) con un tiempo de cultivo de 21 días permitió alcanzar la mayor productividad del material en fase de multiplicación. Además al utilizar las sales MS suplementadas con 3,0 mg.L-1 de 6-BAP; 2,0 mg.L-1 de AIA; 10,0 mg.L-1 de ácido ascórbico, se logró disminuir el crecimiento innecesario de los tallos y hojas de los brotes en la fase de multiplicación y por lo tanto un mayor número de explantes.

In order to develop a protocol for multiplication of Banana clone 'FHIA-18' (AAAB) in temporary immersion systems, the following working objectives were defined: to determine the effect of immersion time (5, 10 and 15 minutes) and frequency (3, 6 and 8 hours per day), as well as, the influence of different combinations of growth regulators (2,0; 3,0 and 4,0 mg.L-1 de 6-BAP and 2,0; 2,5; 3,0; 3,5 and 4,0 mg.L-1 de 6 AIA), the volume effect of culture medium plants (20, 30, 40 and 50 ml/explant) and explants density per culture flask (30, 50, 70 y 90 explants/flask) to increase the multiplication coefficient. With 10 minutes immersion time and an immersion frequency every three hours, the best results were achieved in relation to the number of explants obtained. With this immersion time and frequency, explants showed the highest pseudostem diameter. Seventy explants were inoculated in each 10,0 L culture flask. The highest productivity at the multiplication phase was achieved with a culture medium renewal of 2800 ml (40 ml/explants), and a 21 day culture time. In addition to using MS salts supplemented with 3.5 mg.L-1 of 6-BAP, 1.30 mg.L-1 of IAA, 10.0 mg.L-1 ascorbic acid, the unnecessary growth of stems and leaves of shoots in the multiplication phase was reduced and; therefore, a greater number per explant.

Evaluación del crecimiento micelial de cepas nativas de Agrocybe cylindracea (DC. Fr) Maire, en diferentes medios de cultivo y pH / Mycelial body growt evaluation of Agrocybe cylindracea native strains (DC. Fr) Maire in different culture media and pH

Agrocybe cylandracea es un hongo que se consume en el municipio de Técpan Guatemala, Chimaltennago, San Juan Ostuncalco, Quetzaltenango y las aldeas Escuachil y Vista Hermosa de San Antonio Sacatepéquez, San Marcos. En la presente investigación se utilizaron cinco cepas guatemaltecas de A. cylindracea determinándose la morfología colonial y el crecimiento micelial en diferentes medios de cultivo y pH, para obtener la mejor condición en su cultivo a nivel de laboratorio como paso previo a la obtención de biomasa fúngica, producción de inóculo y cuerpos fructíferos. Se determinó que todas las colonias de las cepas evaluadas mostraron las características morfológicas reportadas en la literatura para A. cylandracea (con excepción de la cantidad de micelio aéreo el cual fue abundante) en todos los medios y pH estudiados...

Multiplicación en sistema de inmersión temporal del clon de Malanga Viequera -Xanthosoma spp / Multiplication in temporary immersion system cocoyam clone Viequera - Xanthosoma spp

El Sistema de inmersión temporal (SIT) constituye una alternativa en la micropropagación de plantas. El presente trabajo se realizó con el objetivo de establecer un protocolo para la multiplicación en SIT del clon de malanga “Viequera”. Se evaluó el efecto de tres tiempos de inmersión (7, 14 y 21 minutos), tres frecuencias de inmersión (2, 4 y 6 horas por día), cuatro volúmenes de medio de cultivo (5, 10, 15 y 20 ml por brote inicial) y cuatro tiempos de cultivo (15, 18, 21 y 25 días) en la multiplicación de los brotes de yemas axilares. Con tiempo de inmersión de 14 minutos cada 4 horas, un volumen de 15 ml de medio de cultivo por brote inicial y 18 días de cultivo, se logró el mejor comportamiento en la multiplicación de los brotes de yemas axilares, con un coeficiente de multiplicación de 10,50. El protocolo propuesto aumenta la productividad del material propagado en comparación con los desarrollados en medios de cultivo semisólidos, lo que representa una reducción en los costos de producción al introducir la multiplicación del cultivo en laboratorios comerciales de propagación.

Temporary Immersion System (TIS) is a alternative in the micropropagation of plants. This work was carried out to establish a protocol for the multiplication of clone TIS cocoyam “Viequera”. The effect of three immersion times (7, 14 and 21 minutes), three immersion frequencies (2, 4 and 6 hours per day), four volumes of culture medium (5, 10, 15 and 20 mL per shoot initial) and four times of cultivation (15, 18, 21 and 25 days) in the multiplication of shoots from axillary buds. With immersion time of 14 minutes every 4 hours, a volume of 15 ml of culture medium for initial outbreak and 18 days of culture, achieved the best performance in the multiplication of shoots from axillary buds, with a coefficient of multiplication 10.50. The proposed protocol increases the productivity of propagated material compared to those developed in semisolid culture media, representing a reduction in production costs by introducing the increase in cultivation in commercial laboratories.

Factores que influyen en la embriogénesis somática in vitro de palmas (Arecaceae) / Factors affecting in vitro somatic embryogenesis of palms (Arecaceae)

La embriogénesis somática (ES) es una vía de desarrollo in vitro que presenta una serie de ventajas sobre otras técnicas utilizadas para la regeneración de palmas. Esta técnica tiene gran potencial para superar las limitaciones observadas al tratar de propagar clonalmente estas plantas utilizando yemas basales. A pesar de la conocida recalcitrancia que presentan las palmas al cultivo in vitro, si se utilizan los reguladores de crecimiento apropiados, el tipo y el estado de desarrollo del explante adecuados, así como genotipos con buena respuesta, es muy probable que se obtengan buenos resultados. Esto ha sido demostrado parcialmente en Phoenix dactylifera (palma dátil), Elaeis guineensis (palma aceitera), Bactris gasipaes (pejibaye) y Cocos nucifera (coco). También se ha logrado generar protocolos eficientes en otras palmas menos estudiadas, como Geonoma gamiova (una palma ornamental), Euterpe edulis (palmito dulce) y Areca catechu (palma de betel). La inducción de ES se ha conseguido principalmente con el uso de auxinas. De ellas, la que se ha utilizado con más frecuencia es el ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D), aunque en algunos casos (como en pejibaye y palma aceitera) se ha usado picloram y dicamba, también con buenos resultados. Los explantes más utilizados han sido inflorescencias, ápices y segmentos basales de hojas, todos con un estado de desarrollo incipiente. También se ha visto que el tamaño del explante y el medio de cultivo juegan un papel importante en la respuesta. En este trabajo se presenta una recopilación de los trabajos más importantes sobre ES en esta familia de plantas y del efecto de varios factores sobre su establecimiento y desarrollo.

Somatic embryogenesis (SE) is an in vitro developmental pathway that exhibits a number of advantages over other techniques for regeneration of palms. This technique has great potential to overcome the limitations observed when trying to propagate these plants clonally using basal buds. Despite the known recalcitrance of palms for in vitro culture, good results can be obtained by using the appropriate growth regulators, explant type and developmental stage, as well as responsive genotypes. This has been partially observed in Phoenix dactylifera (date palm), Elaeis guineensis (African oil palm), Bactris gasipaes (peach palm) and Cocos nucifera (coconut). Efficient protocols have been also generated in less-studied palms, such as Geonoma gamiova (an ornamental palm), Euterpe edulis (Assai palm) and Areca catechu (areca palm). Induction of SE has been achieved mainly through the use of auxins. Of these, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) has been used most frequently, although in some cases (such as in peach palm and African oil palm) picloram and dicamba have been employed also with good results. The most commonly used explants are young inflorescences, apical buds and leaf-basal segments. Explant size and culture medium also play an important role in obtaining good results. This review presents a compilation of the most important publications on SE in this plant family and the effect of various factors on induction and development of this pathway.