New strategy to improve quality control of Montenegro skin test at the production level

Abstract INTRODUCTION: The production of the Montenegro antigen for skin test poses difficulties regarding quality control. Here, we propose that certain animal models reproducing a similar immune response to humans may be used in the quality control of Montenegro antigen production. METHODS: Fifteen Cavia porcellus (guinea pigs) were immunized with Leishmania amazonensis or Leishmania braziliensis , and, after 30 days, they were skin tested with standard Montenegro antigen. To validate C. porcellus as an animal model for skin tests, eighteen Mesocricetus auratus (hamsters) were infected with L. amazonensis or L. braziliensis , and, after 45 days, they were skin tested with standard Montenegro antigen. RESULTS: Cavia porcellus immunized with L. amazonensis or L. braziliensis , and hamsters infected with the same species presented induration reactions when skin tested with standard Montenegro antigen 48-72h after the test. CONCLUSIONS: The comparison between immunization methods and immune response from the two animal species validated C. porcellus as a good model for Montenegro skin test, and the model showed strong potential as an in vivo model in the quality control of the production of Montenegro antigen.

Evaluation of the reference value for the Montenegro skin test

The Montenegro skin test (MST) has good clinical applicability and low cost for the diagnosis of American tegumentary leishmaniasis (ATL). However, no studies have validated the reference value (5mm) typically used to discriminate positive and negative results. We investigated MST results and evaluated its performance using different cut-off points.

Estudo clínico, epidemiológico e imunológico para leishmaniose tegumentar americana em centro de referência em dermatologia / Clinical, epidemiological and immunological study to american tegumentary leishmaniasis in a dermatology reference center

Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecciosa, causada por protozoários do gênero Leishmania. É uma das doenças infectoparasitárias mais incidentes no mundo. No presente trabalho realizou-se um estudo transversal retrospectivo das características clínicas, epidemiológicas e imunológicas de portadores de Leishmaniose Tegumentar Americana.Foram utilizados prontuários de 34 pacientes com diagnóstico de LTA. A análise estatística foi realizada pelo Teste de Spearman. O sexo masculino foi acometido em 68% e o feminino 32%. A idade variou de 1 a 92 anos. A forma cutânea localizada ocorreu em 79,5%,sendo as úlceras a forma clínica mais comum (56%).Principal área acometida foi face (44%). O tempo para o diagnóstico foi menor que 10 meses em 68% dos indivíduos.Intradermorreação de Montenegro (IDRM) foi realizada em 29 pacientes, com positividade em 89,6% e a imunofluorescência indireta (IFI) em apenas 16 pacientes, sendo positiva em 13. A idade e o tempode evolução da doença apresentaram associação significativa com IDRM. Entretanto não foi observada associação da IFI com a idade do paciente e o tempo de doença, pelo teste de Spearman. O tratamento foi realizado na maioria dos casos com glucantime (71%),seguido de pentamidina (17%). Os resultados evidenciam que os exames sorológicos constituem uma ferramenta auxiliar e a correlação com achados clínicos e histopatológicos são imprescindíveis.

Introduction: American cutaneous leishmaniasis (ACL) is an infectious disease caused by protozoa of the genus Leishmania. World  leishmaniasis  is an important endemic disease and public health problem in developing countries. Methods: We conducted a retrospective, descriptive and analytical cross-sectional study of 34 patients diagnosed with ACL. Statistical analysis was performed using the nonparametric Spearman’s test. Results: The gender involved was male (68%) and female(32%); the age range of 1 to 92 years old. The most common clinical manifestations were localized cutaneous form (79.5%) and the ulcers (56%).The face was main affected area (44%) and the minor time from onset of symptoms to consultation was 10 months (68%) of patients. Montenegro skin test (MST) was performed in 29 patients, being positive in (89.6%) and the indirect immunofluorescence (IIF) in only 16 patients, being positive in 13. The age and the duration of the disease were significantly associated with MST. Conclusions: It was not observed the IFI association with the patient’s age and disease duration. The treatment was in most cases, meglumine antimoniate (71%), followed Pentamidine (17%). The results demonstrated thatthe serological tests constitute an auxiliary tool andthe correlations with clinical and histopathological findings are essential.

Aspectos clínico-imunológicos da Leishmania recidiva cútis (LRC) causada por Leishmania Viannia Braziliensis / Clinical and immunological aspects of Leishmania relapse skin (LRC) caused by Leishmania Viannia Braziliensis

Introdução: As leishmanioses representam um grande problema de saúde pública sendo consideradas como doença emergente e sem controle - doença de categoria 1 - e que o foco das pesquisas deve ser a aquisição de novos conhecimentos e medidas eficazes de controle. Sob o ponto de vista clínico, a leishmaniose tegumentar (LT) nas Américas apresenta as seguintes modalidades: infecção inaparente, ganglionar, cutânea localizada (LCL), cutânea disseminada (LD), cutânea difusa (LCD), recidiva cútis (LRC) e mucosa. A primeira descrição sobre LRC ocorreu na leishmaniose no Oriente com o nome “chronic lúpus-like”, definidas como lesões de aparecimento tardio e refratariedade aos tratamentos ou como uma reação peculiar do sistema imune do hospedeiro ao parasito. A LRC é uma variante da LT convencional, uma forma de cicatrização, sendo importante entender aspectos relacionados à resposta imune do hospedeiro. Objetivo: Avaliar aspectos clínico-imunológicos e terapêuticos da LRC em pacientes da região do Vale de Jiquiriçá, Bahia, Brasil. Metodologia: O estudo foi realizado no Município de Jiquiriçá, pertencente à região Sudoeste da Bahia. Os pacientes foram atendidos no ambulatório de Doenças infecciosas e Parasitárias do Centro de Referência em Doenças Endêmicas do Vale do Jiquiriçá (CERDEJJC)...

Introduction: Leishmaniasis represent a major public health problem being considered as emerging and uncontrolled disease - disease of category 1 - and the focus of research should be new knowledge and effective control measures. In relation clinical modalities, cutaneous leishmaniasis (CL) in the Americas presents the following forms: inapparent infection, lymphnode and localized cutaneous leishmaniasis (LCL), disseminated cutaneous leishmaniasis (DL), diffuse cutaneous leishmaniasis (DCL), cutis recidivans leishmaniasis (CRL) and mucosal form. The first description of CRL occurred in Orient leishmaniasis called "chronic lupus-like lesions” defined as a late compromise and refractory to treatment or as a peculiar reaction of the immune response of the host to the parasite. The CRL is a variant of the conventional TL, a form of wound healing. Objective: To evaluate clinical, immunological and therapeutic aspects of the CRL in patients of the Jiquiriçá Valley region, Bahia, Brazil. Methodology: The study was conducted in Jiquiriçá municipality, belonging to southwest Bahia state. The patients were enrolled at the outpatient Infectious and Parasitic Diseases of the Reference Center for Endemic Diseases Jiquiriçá Valley (CERDEJJC)...

Risk factors for Leishmania chagasi infection in an endemic area in Raposa, State of Maranhão, Brazil / Fatores associados à infecção por Leishmania chagasi em uma área endêmica em Raposa, Estado do Maranhão, Brasil

INTRODUCTION: Infection with Leishmania chagasi is the most common clinical presentation for visceral leishmaniaisis in endemic areas. The municipality of Raposa is an endemic area in State of Maranhão, Brazil, and have had registration cases of visceral leishmaniasis disease. For this reason, a cross- sectional study was conducted to evaluate the risk factors for infection with L. chagasi detected by Montenegro skin test. METHODS: The sample comprised 96 percent of the inhabitants of the villages of Maresia, Pantoja, and Marisol located in the municipality of Raposa, corresponding to 1,359 subjects. Data were collected using a questionnaire. Univariate and multivariate logistic regression models were applied to evaluate the association between the variables studied and infection of L. chagasi. RESULTS: The variables associated with infection upon nonadjusted analysis were a straw roof, mud walls, floors of beaten earth, presence of sand flies inside or outside of the dwelling, and bathing outdoors. Adjusted analysis showed that the presence of sand flies inside/outside the dwelling was a risk factor, and age younger than 10 years was a protective factor against asymptomatic infection. CONCLUSIONS: The results highlight the extent to which precarious living conditions of the population strengthen the epidemiological chain of visceral leishmaniasis.

INTRODUÇÃO: A infecção por Leishmania chagasi é a apresentação clínica mais comum de laishmaniose visceral em áreas endêmicas. O município de Raposa é área endêmica no Estado do Maranhão, tendo registrado casos da doença. Por isso, realizou-se um estudo transversal, com o objetivo de estudar os fatores de risco para infecção por L. chagasi detectada pelo teste intradérmico de Montenegro. MÉTODOS: O estudo envolveu 96 por cento dos moradores das localidades de Maresia, Pantoja e Marisol do município da Raposa, totalizando 1.359 indivíduos. O levantamento dos dados foi realizado utilizando um questionário. Para verificar a associação entre as variáveis estudadas e a infecção por L. chagasi, foram utilizados os modelos de regressão logística uni e multivariada. RESULTADOS: Na análise não ajustada, as variáveis associadas à infecção foram: cobertura da casa de palha, paredes de taipa, piso de chão batido, a presença de flebotomíneos dentro ou fora do domicílio e o local do banho fora de casa. Na análise ajustada, a presença de flebotomíneos dentro ou fora do domicílio foi considerada fator de risco e a idade menor que 10 anos revelou-se como fator de proteção para a infecção assintomática. CONCLUSÕES: Evidenciou-se também, o quanto a precariedade das condições de vida da população contribui para o fortalecimento da cadeia epidemiológica da doença.

Clinical, epidemiological and laboratory aspects of patients with American cutaneous leishmaniasis in the State of Pernambuco / Aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais de pacientes com leishmaniose cutânea americana no Estado de Pernambuco

The diagnosis for American cutaneous leishmaniasis is based on an association of clinical, epidemiological and laboratory characteristics. The present study identified the circulating species of Leishmania in the State of Pernambuco, described its clinical-epidemiological characteristics and diagnosed the disease. Nineteen patients presenting active lesions who had been diagnosed through clinical evaluation and laboratory tests were selected. The tests included direct investigation, in vitro culturing, Montenegro skin test, indirect immunofluorescence and polymerase chain reaction. The Montenegro Skin Test showed positive results in 89 percent of the patients; indirect immunofluorescence, in 79 percent; direct investigation, in 58 percent; and polymerase chain reaction in 75 percent. Seven Leishmania (Viannia) braziliensis samples were isolated from these patients and were characterized by means of specific monoclonal antibodies. These data confirm that a combination of different diagnosis techniques is needed in order to obtain efficient results and that, so far, Leishmania (Viannia) braziliensis is the only species responsible for American cutaneous leishmaniasis infection in Pernambuco. Thus, it is essential to identify the parasite species involved in cases of human disease in an endemic area in order to determine the clinical and epidemiological characteristics, especially with regard to diagnosis, therapy development and disease prognosis.

O diagnóstico da leishmaniose cutânea americana é baseado na associação dos aspectos clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. O presente estudo identificou a espécie de Leishmania circulante no Estado de Pernambuco, descreveu os aspectos clínico-epidemiológicos e diagnosticou a doença. Foram selecionados 19 pacientes apresentando lesão ativa e diagnosticados através de avaliação clínica e pelos exames laboratoriais que incluíram a pesquisa direta, cultivo in vitro, intradermorreação de Montenegro, imunofluorescência indireta e reação em cadeia de polymerase. A intradermorreação de Montenegro apresentou resultado positivo em 89 por cento dos pacientes. A imunofluorescência indireta apresentou 79 por cento de positividade, a pesquisa direta apresentou 58 por cento e a reação em cadeia de polymerase 75 por cento de positividade. Sete amostras de Leishmania (Viannia) braziliensis foram isoladas desses pacientes e caracterizadas através de anticorpos monoclonais específicos. Esses dados confirmam que é necessário a combinação de diferentes técnicas diagnósticas para se obter resultados eficientes e que, até o momento, a Leishmania (Viannia) braziliensis é a única espécie responsável pela infecção da leishmaniose cutânea americana em Pernambuco. Portanto, a identificação da espécie do parasito envolvido nos casos da doença no homem em uma área endêmica é essencial para o conhecimento dos aspectos clínicos e epidemiológicos, sobretudo para o diagnóstico e para o desenvolvimento da terapia e prognóstico da doença.

Intradermorreação de Montenegro em cães (Mammalia: Canidae) experimentalmente inoculados por Leishmaniaguyanensis e Leishmania braziliensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae), principais agentes causadores de Leishmaniose Tegumentar na Amazônia / Montenegro's skin test in dogs (Mammalia: Canidae) experimentally inoculated with Leishmaniaguyanensis and Leishmania braziliensis (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) the main agents of Amazônia Tegumentary Leishmaniasis

O teste de intradermorreação de Montenegro é utilizado para detectar infecção por Leishmania em humanos. A técnica se baseia numa reação de hipersensibilidade tardia. Os antígenos de Montenegro utilizados no experimento são soluções de antígenos homólogos brutos de Leishmania (Viannia) braziliensis e L.(V)guyanensis. Este experimento demonstrou que os animais inoculados com as espécies de Leishmania inoculadas desenvolveram enduração no local do teste mais acentuada que os animais controle. Os resultados sugerem que o teste cutâneo pode vir a ser indicado como método auxiliar de diagnóstico em cães infectados por Leishmania sp.

Positive Montenegro's skin test is a delayed type hypersensitivity reaction widely used as indicative of infection with Leishmania. Montenegro's antigen consisted of a crude Leishmania homologous antigen solution that was used as a skin test in five dogs experimentally inoculated with Leishmania (Viannia) spp. In this work it is shown that all animals infected presented an induration at the site of injection in contrast of the dogs non infected used as a control group. This demonstrated that the skin tests in dogs could be used to make an diagnosis of the Leishmania infection.

First encounter of subclinical human Leishmania (Viannia) infection in State of Rio Grande do Sul, Brazil

The objective of the present study was to evaluate the specificity of the Montenegro skin test (MST) in an area in Brazil, state of Grande do Sul State (RS), which was considered to be non-endemic for leishmaniasis. Sixty subjects presented a positive MST and were reevaluated by clinical examination, serology and polymerase chain reaction (PCR) of peripheral blood for the detection of subclinical Leishmania infection. None of the subjects presented clinical signs or symptoms of current leishmaniasis or a history of the disease.Leishmania (Viannia) DNA was detected in blood by PCR and hybridization in one subject. The PCR skin test-positive individual remained asymptomatic throughout the study. Clinical examination showed no scars suggestive of past cutaneous leishmaniasis. Human subclinical infection with Leishmania (Viannia) in RS was confirmed by PCR. This is the first report of subclinical infection with this parasite in the human population of this area.

Leishmaniose tegumentar americana em centro de treinamento militar localizado na zona da mata de pernambuco, Brasil / American cutaneous leishmaniasis in a military training center located in Zona da Mata, Pernambuco, Brazil

An outbreak of American cutaneous leishmaniasis has been occurred in military training unit localized in 'Zona da Mata' of Pernambuco State, Brazil, where were registered 26 human cases. An epidemiological survey was carried out by entomological investigation and Montenegro skin test (MST). Lutzomyia choti presents predominance (89.9%) in sandflies identified. Out of 545 men who realized training activities were 24.12% positive to MST.

Um surto de leishmaniose tegumentar americana ocorreu em 1996 em unidade de treinamento militar situada na Zona da Mata de Pernambuco, com o registro de 26 casos humanos. Um inquérito epidemiológico foi realizado através da realização de levantamento entomológico e da aplicação do Teste de Montenegro. Lutzomyia choti apresentou predominância de 89,9% dos flebótomos identificados. De 545 homens que participaram de treinamentos no período, 24,1% (incluindo os casos clínicos) foram positivo para o Teste de Montenegro.