Identificación de una triparedoxina peroxidasa citoplasmática en Leishmania braziliensis / Identification of a cytoplasmic tryparedoxin peroxidase from Leishmania braziliensis / Identificação de uma triparedoxina peroxidase citoplasmica de Leishmania braziliensis

Resumen Los sistemas de defensa anti-oxidante utilizados por el parásito intracelular Leishmania braziliensis durante el proceso de infección permiten eliminar especies reactivas de oxígeno y nitrógeno a expensas de equivalentes reductores derivados de la tripanotiona, evitando daños celulares del patógeno. Con el objetivo de identificar potenciales blancos moleculares para el desarrollo de fármacos contra este parásito, se realizó la detección de la enzima triparedoxina peroxidasa citoplasmática de L. braziliensis (LbTXNPxII), la cual es esencial para disminuir concentraciones tóxicas de peróxido de hidrógeno en el contexto de infección. Para esto se generaron anticuerpos policlonales en modelo aviar, partiendo de la clonación, expresión y purificación de la proteína recombinante 6xHis-SUMO-LbTXNPxII (37kDa) en el sistema heterólogo Escherichia coli. La proteína purificada se utilizó como antígeno para la producción de anticuerpos IgY, cuya implementación en estudios in situ permitió detectar y localizar la enzima LbTXNPxII endógena (22kDa) en el citoplasma de promastigotes fijados y verificar su interacción molecular con la nicotinamida/ nicotinato mononucleótido adenilil transferasa, enzima involucrada en la síntesis del NAD. De este modo, se reporta el desarrollo de una herramienta bioquímica para la identificación y estudio de la enzima LbTXNPxII y su participación en vías del metabolismo energético y de defensa anti-oxidante.

Abstract The antioxidant defense systems used by the intracellular parasite Leishmania braziliensis during the infection process make it possible to eliminate reactive oxygen and nitrogen species at the expense of reducing equivalents derived from trypanothione, avoiding cellular damage of the pathogen. In order to identify potential molecular targets for the development of drugs against this parasite, the cytoplasmic tryparedoxin peroxidase of L. braziliensis (LbTXNPxII), which is essential to reduce toxic concentrations of hydrogen peroxide in the context of infection, was carried out. In this regard, polyclonal antibodies were generated in an avian model, starting from the cloning, expression, and purification of the recombinant protein 6xHis-SUMO-LbTXNPxII (37kDa) in the heterologous system of Escherichia coli. The purified protein was used as an antigen for the production of IgY antibodies, whose implementation in in situ experiments allowed the detection and localization of the endogenous LbTXNPxII enzyme (22kDa) in the cytoplasm of fixed promastigotes, as well as the verification of its molecular interaction with nicotinamide/nicotinate mononucleotide adenylyltransferase, an enzyme involved in the synthesis of NAD. Thus, the development of a biochemical tool for the identification and study of the LbTXNPxII enzyme and its participation in energy metabolism and antioxidant defense pathways is reported.

Resumo Os sistemas de defesa antioxidante utilizados pelo parasita intracelular Leishmania braziliensis durante o processo de infecção, permitem a eliminação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio em detrimento de equivalentes redutores derivados de tripanotiona, evitando o dano celular do patógeno. Com o objetivo de identificar potenciais alvos moleculares para o desenvolvimento de drogas contra esse parasita, foi detectada a enzima citoplasmática triparedoxina peroxidase de L. braziliensis (LbTXNPxII), essencial para reduzir as concentrações tóxicas de peróxido de hidrogênio no contexto de infecção. Para isso, anticorpos policlonais foram gerados em modelo aviário, a partir da clonagem, expressão e purificação da proteína recombinante 6xHis-SUMO-LbTXNPxII (37kDa) no sistema heterólogo de Escherichia coli. A proteína purificada foi utilizada como antígeno para a produção de anticorpos IgY, cuja implementação em experimentos in situ permitiu a detecção e localização da enzima LbTXNPxII endógena (22kDa) no citoplasma de promastigotas fixos e verificar sua interação molecular com nicotinamida/nicotinato mononucleotídeo adenililtransferase, enzima envolvida na síntese de NAD. Assim, é relatado o desenvolvimento de uma ferramenta bioquímica para a identificação e estudo da enzima LbTXNPxII e sua participação no metabolismo energético e nas vias de defesa antioxidante.

Hacia el esclarecimiento del rol del anión cloruro en la hipertensión arterial: / Towards the Elucidation of the Role of the Chloride Anion in Arterial Hypertension:

RESUMEN Introducción: Se desconoce el papel del anión cloruro en los efectos deletéreos del consumo excesivo de sal (NaCl) y si sus efectos son independientes de la presencia del sodio. Objetivo: Demostrar que tanto una sobrecarga de cloruro como una sobrecarga de sodio en la dieta producen efectos deletéreos, en forma independiente, sobre la presión arterial sistólica (PAS), la función renal y los marcadores de estrés oxidativo en el riñón. Materiales y métodos: Ratas Wistar macho fueron divididas en cuatro grupos (n = 8/grupo) y fueron alimentadas con diferentes dietas durante tres semanas: C: control (dieta estándar), NaCl: hipersódica-hiperclórica, Na: hipersódica sin cloruro, Cl: hiperclórica sin sodio. Se determinaron la presión arterial sistólica (PAS) y la función renal y en la corteza renal, se evaluó la producción de especies reactivas del ácido tiobarbitúrico (en inglés: TBARS) y la actividad y la expresión de las enzimas superóxido dismutasa (SOD), catalasa (CAT) y glutatión peroxidasa (GPx). Resultados: Al cabo de tres semanas, la PAS aumentó (*) en los dos grupos alimentados con cloruro. La excreción fraccional de sodio y de cloruro aumentó (*) en los grupos NaCl y Na. La diuresis y los TBARS en la corteza renal aumentaron (*) con las tres dietas, sin cambios en la actividad y en la expresión de SOD y CAT. La actividad de la GPx aumentó (*) en los dos grupos que recibieron cloruro; (*p < 0,05 vs C). Conclusión: Tanto la sobrecarga de sodio como la de cloruro se asocian a mayor estado oxidativo caracterizado por un incremento en la peroxidación lipídica en la corteza renal. Sin embargo, solo el exceso de cloruro se asocia a mayor actividad de la GPx y de la hipertensión, sin cambios en la excreción urinaria de cloruros, sugiriendo un mayor estado prooxidante renal en comparación con el grupo Na.

ABSTRACT Introduction: The role of the chloride anion on the deleterious effects of excessive consumption of salt (NaCl) and whether its effects are independent each other of the presence of sodium remains to date, unknown and unclear. Objective: To demonstrate that both a chloride overload and a sodium overload in the diet produce deleterious effects, by different mechanisms, on systolic blood pressure (SBP), renal function and markers of oxidative stress in the kidney. Materials and Methods: Male Wistar rats were divided into four groups (n = 8 / group) and fed with different diets for three weeks: C: control (standard diet), and diets: NaCl: hypersodic-hyperchloric; Na: hypersodic without chloride and Cl: hyperchloric without sodium. Systolic blood pressure (SBP) and renal function were determined, and the production of thiobarbituric acid reactive species (TBARS) and the activity and expression of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT) and glutathione peroxidase (GPx) enzymes were evaluated in renal cortex tissue. Results: SBP increased (*) in the two groups fed with chloride. The fractional excretion of sodium and chloride increased (*) in the NaCl and Na groups. increased (*) in the renal cortex with the three diets. No changes were observed in the activity and expression of SOD and CAT. GPx activity increased (*) in the two groups that received chloride; (* p <0.05 vs C). Conclusion: Both sodium and chloride overload are associated with a higher oxidative state characterized by an increase in lipid peroxidation in the renal cortex. However, compared with Na group, only chloride overload is associated with higher GPx activity and hypertension without any changes in urinary chloride excretion, suggesting a higher renal pro-oxidant state in this experimental group.

Response of ligninolytic macrofungi to the herbicide atrazine: dose-response bioassays / Respuesta de macrohongos ligninolíticos al herbicida atrazina: bioensayos dosis-respuesta

The effect of atrazine concentrations on mycelial growth and ligninolytic enzyme activities of eight native ligninolytic macrofungi isolated in Veracruz, México, were evaluated in a semi-solid culture medium. Inhibition of mycelial growth and growth rates were significantly affected (p = 0.05) by atrazine concentrations (468, 937, 1875, and 3750 mg/l). In accordance with the median effective concentration (EC50), Pleurotus sp. strain 1 proved to be the most tolerant isolate to atrazine (EC50 = 2281.0 mg/l), although its enzyme activity was not the highest. Pycnoporus sanguineus strain 2, Daedalea elegans and Trametes maxima showed high laccase activity (62.7, 31.9, 29.3 U mg/protein, respectively) without atrazine (control); however, this activity significantly increased (p < 0.05) (to 191.1, 83.5 and 120.6 U mg/protein, respectively) owing to the effect of atrazine (937 mg/l) in the culture medium. Pleurotus sp. strain 2 and Cymatoderma elegans significantly increased (p < 0.05) their manganese peroxidase (MnP) activities under atrazine stress at 468 mg/l. The isolates with high EC50 (Pleurotus sp. strain 1) and high enzymatic activity (P. sanguineus strain 2 and T. maxima) could be considered for future studies on atrazine mycodegradation. Furthermore, this study confirms that atrazine can increase laccase and MnP activities in ligninolytic macrofungi.

Se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de atrazina sobre el crecimiento micelial y la actividad enzimática de ocho macrohongos ligninolíticos aislados en Veracruz, México. La inhibición del crecimiento micelial y la tasa de crecimiento diaria fueron significativamente (p < 0,05) afectadas por todas las dosis de atrazina (468, 937, 1875 y 3750 mg/l) adicionadas al medio de cultivo. De acuerdo con la concentración efectiva media (CE50), Pleurotus sp. cepa 1 fue el aislamiento más tolerante a la atrazina (CE50 = 2281 mg/l), aunque sus actividades enzimáticas no fueron altas. Pycnoporus sanguineus cepa 2, Daedalea elegans y Trametes maxima mostraron actividades altas de lacasa (62,7, 31,9 y 29,3 U mg/proteína, respectivamente) en ausencia de atrazina (control); estas actividades se incrementaron (p < 0,05) significativamente (191,1, 83,5 y 120,6 U mg/proteína, respectivamente) en presencia de atrazina (937 mg/l) en el medio de cultivo. Pleurotus sp. cepa 2 y Cymatoderma elegans incrementaron significativamente (p < 0,05) sus actividades de manganeso peroxidasa (MnP) bajo la concentración de 468 mg/l de atrazina. Los aislamientos con alta CE50 (Pleurotus sp. cepa 1) y alta actividad enzimática (P. sanguineus cepa 2 y T. maxima) podrían ser considerados para futuros estudios en la micodegradación de atrazina. Además, el presente estudio confirma que la atrazina puede incrementar las actividades lacasa y MnP en macrohongos ligninolíticos.

The brainstem localization of gastric preganglionic parasympathetic neurons in the Agouti (Dasyprocta leporina) / Localización del tronco encefálico de las neuronas parasimpáticas preganglionares gástricas en el agutí (Dasyprocta leporina)

This study was designed to determine qualitatively, the source of gastric vagal nerve fibres in the Agouti. A total of 18 male and female adult agoutis were used for the present investigation. Following anaesthesia, laparotomy was performed and the stomach exteriorized. Multiple intramuscular injections of wheat germ agglutinin-horseradish peroxidase (WGA-HRP) were then made into different areas of the stomach in the experimental animals. The control animals were divided into four groups of two animals each. The first group had intraperitoneal injection of the tracer, the second had intramuscular injection of normal saline, the third group had injection of tracer into the hepatic portal vein and the last group had injection of the tracer into the gastric walls followed immediately by bilateral vagotomy. Following a survival period offive to seven days, the animals were sacrificed by transcardial perfusion, first with normal saline followed by fixative and finally with 20% buffered sucrose. Following perfusion, the brainstem was extracted from the brain, immersed in 20% buffered sucrose and kept refrigerated overnight for cryoprotection. The brainstems were subsequently sectioned serially, processed for WGA-HRP neurohistochemistry and then analysed under light and dark-field illuminations. The analysis of the sections taken from the experimental animals revealed bilateral presence of WGA-HRP labelled neurons in the dorsal motor nucleus of the vagus nerve (DMNV) and the nucleus ambiguus (nA) of the medulla oblongata. No labelled neurons were seen in any of the sections taken from the control animals. The implications of the findings are discussed.

Este estudio fue diseñado para determinar cualitativamente el origen de las fibras gástricas del nervio vago en el agutí. Un total de 18 agutíes adultos masculinos y femeninos fueron utilizados para la presente investigación. Después de la anestesia, se realizó una laparotomía y se sacó el estómago al exterior. Luego se hicieron múltiples inyecciones intramusculares de aglutinina de germen de trigo con peroxidasa de rábano (WGA-HRP) en diferentes áreas del estómago de los animales experimentales. Los animales del control fueron divididos en cuatro grupos de dos animales cada uno. Al primer grupo se le puso una inyección intraperitoneal del marcador; al segundo se le administró una inyección intramuscular de solución salina normal; al tercer grupo se le inyectó el marcador en la vena porta hepática; y al último grupo se le puso la inyección del marcador en las paredes gástricas, seguida inmediatamente por una vagotomía bilateral. Tras un periodo de supervivencia de cinco a siete días, los animales fueron sacrificados por perfusión transcardíaca, primero con solución salina normal, seguida de fijador, y finalmente con sacarosa tamponada al 20%. Después de la perfusión, el tronco encefálico fue extraído del cerebro, inmerso en sacarosa tamponada al 20%, y mantenido en refrigeración durante la noche para su crioprotección. Los tronos encefálicos fueron luego seccionados en serie, procesados para para el análisis neuro-histoquímico mediante aglutinina de germen de trigo con peroxidasa de rábano, y analizados entonces bajo iluminaciones de campo de luz y campo oscuro. El análisis de las secciones tomadas de animales experimentales reveló la presencia bilateral de neuronas etiquetadas WGA-HRP en el núcleo motor dorsal del nervio vago (DMNV) y en el núcleo ambiguo (nA) de la médula oblonga. No se observaron neuronas etiquetadas en ninguna de las secciones tomadas de los animales de control. Se discuten las implicaciones de los hallazgos.

Efecto de la peroxidasa sobre la resistencia de unión de una resina compuesta al esmalte dental posblanqueamiento / Effect of peroxidase on composite resin adhesion to dental enamel after whitening

Introducción: se ha reportado que el oxígeno residual liberado por los agentes blanqueadores interfieren en la adhesión de las resinas compuestas a la estructura dental, razón por la cual se tiene como objetivo comparar la resistencia de unión al corte (RUC) de una resina compuesta al esmalte dental posblanqueamiento con peróxido de hidrógeno al 38%, antes y después de tratar la superficie con la enzima peroxidasa previo a la adhesión. Métodos: se seleccionaron 45 premolares humanos sanos, divididos entres grupos de 15 dientes cada uno. Grupo 1: control (solo adhesión); grupo 2: blanqueamiento y adhesión; grupo 3: blanqueamiento, aplicación de peroxidasa y adhesión. Posterior al tratamiento se midió la RUC en la máquina de ensayos Shimadzu, para determinar diferencia estadísticamente significativa entre los tres grupos con nivel de confianza de 95% y con valor de p < 0,05. Resultados: el grupo control obtuvo la RUC de 12,8 Mpa (± 3,2), el grupo con blanqueamiento tuvo el promedio de 3,5 Mpa (± 1,43) y el grupo con blanqueamiento y aplicación de peroxidasa presentó promedio de 12,2 Mpa (± 3,12). Conclusiones: los valores de RUC disminuyeronsignificativamente con la aplicación de peróxido de hidrógeno al 38%, sin embargo, se logró el aumento significativo al aplicar la peroxidasa previa a la adhesión.

Introduction: some reports suggest that residual oxygen released by whitening agents interfere with composite resinadhesion to dental structure. The objective of this study is therefore to compare composite resins’ shear bond strength to dental enamel after whitening using 38% hydrogen peroxide pre- and post- treatment with peroxidase enzyme before adhesion. Methods: a total of 45 healthy human premolars were selected and divided into three groups of 15 teeth each. Group 1: control group (only adhesion); group 2: whitening and adhesion; group 3: whitening, application of peroxidase, and adhesion. After treatment, shear bond strength was measured with a Shimadzu testing machine in order to determine significant statistical differences among the three groups, with a confidence level of 95% and p < 0.05. Results: the control group obtained a shear bond strength of 12.8Mpa (± 3.2), the whitening group showed an average 3.5 Mpa (± 1.43), and the group treated with whitening and peroxidase presented an average 12.2 Mpa (± 3.12). Conclusions: shear bond strength values significantly decreased with application of 38% hydrogen peroxide; however, a significant increase was also obtained byapplying peroxidase before adhesion.

Actividad antiinflamatoria y antioxidante de Bauhinia kalbreyeri Harms en un modelo de inflamación intestinal agudo en ratas / Anti-inflammatory and antioxidant action of Bauhinia kalbreyeri Harms in an acute intestinal inflammation model used in rats

Objetivo: evaluar la actividad antiinflamatoria y antioxidante de extractos acuosos de hojas y corteza de Bauhinia kalbreyeri Harms mediante un modelo de inflamación intestinal en ratas. Métodos: se utilizaron ratas Wistar, a las cuales se les indujo inflamación intestinal aguda mediante el uso de indometacina (15 mg/kg). Los extractos se administraron por gavage (40 mg/kg) durante 7 d. Se midieron los niveles enzimáticos de glutatión peroxidasa (GPX/L de sangre), se determinó el índice de actividad de la enfermedad y se realizó una caracterización macroscópica y microscópica de las lesiones. Resultados: se determinó que la administración oral de los extractos tiene un efecto moderado sobre el modelo agudo de enteritis inducida por indometacina, con la disminución concomitante de los parámetros clínicos, patológicos e inflamatorios. Tanto el análisis histológico como el macroscópico de las muestras de animales tratados con extractos, confirmaron el efecto beneficioso ejercido por estos en el modelo de enteritis aguda inducida por indometacina, el cual se atribuye a los metabolitos secundarios presentes en la planta ya que se evidenció recuperación de la citoarquitectura, disminución en el grado de lesión y del índice de actividad de la enfermedad; así como la estabilización de los niveles de glutatión peroxidasa, que aumenta la viabilidad de las fibras de colágeno, evita el daño celular y promueve la síntesis de ADN, para iniciar la recuperación de la lesión. Conclusión: este estudio se muestra como uno de los pioneros en dilucidar la actividad antiinflamatoria y antioxidante de Bauhinia kalbreyeri en un modelo in vivo.

Objective: to evaluate the anti-inflammatory and antioxidant activity of aqueous extracts of leaves and bark from Bauhinia kalbreyeri Harms in an intestinal inflammation model applied to Wistar rats. Methods: the Wistar rats were induced acute intestinal inflammation by using indomethacin (15 mg/kg). The extracts were administered by gavage (40 mg/kg) for 7 days. The enzyme levels of glutathione peroxidase (GPX/L of blood) were measured, the rate of disease activity was estimated, and finally the lesions were macroscopically and microscopically characterized. Results: it was found that oral administration of the extracts has a modest effect on acute enteritis model induced by indomethacin, with concomitant decrease in the clinical parameters and inflammatory disease. Both the macroscopic and histological analysis of samples from the animals treated with extracts confirmed their beneficial effect on the indomethacin-induced acute enteritis model. This effect is attributed to the secondary metabolites in the plant since the experiment evidenced recovery of cytoarchitecture, lower degree of injury, reduced rate of disease activity, as well as stabilization of glutathione peroxidase levels that cause more viability of the collagen fibers, prevent cell damage and encourage DNA synthesis to start recovery from injury. Conclusions: this study seems to be one of the pioneers in elucidating the anti-inflammatory and antioxidant properties of Bauhinia kalbreyeri in an in vivo model.

Ingestión de lípidos oxidados: efecto sobre actividad enzimática antioxidativa en trucha arcoiris Oncorhynchus mykiss (Walbaum) / Oxidized lipids intake: effect on antioxidative enzimatic activity in rainbow trout Oncorhynchus mykiss (Walbaum)

Objetivo. Evaluar el efecto de la ingestión de lípidos durante períodos cortos (20 días) y largos (90 días) sobre la actividad hepática y en tracto gastrointestinal (TGI) de las enzimas catalasa (CAT), superóxido dismutasa (SOD) y glutatión peroxidasa (GPx). Materiales y métodos. Se utilizó el Índice peróxidos (VP) y el índice anisidina (VA) para detectar la presencia de productos de la oxidación en las raciones. Se realizó un análisis de varianza bajo un modelo de parcelas divididas en el tiempo. Cuando se encontraron diferencias (p<0.05) las medias fueron comparadas mediante la prueba de Tukey (5%). Resultados. Las raciones presentaron altos niveles de oxidación durante todo el experimento y hubo diferencias significativas entre tratamientos. La actividad SOD presentó niveles decrecientes a nivel hepático durante los dos períodos de exposición, sin embargo, en TGI se generó un incremento significativo de actividad SOD (175%) en individuos sometidos a todos los tratamientos. La actividad CAT presentó un alto nivel de correlación con la actividad SOD en todos los períodos de exposición y órganos. La actividad GPx presentó diferencias significativas para los dos períodos de exposición en hígado y al día 90 en TGI, indicando alta sensibilidad de la enzima ante la ingestión de peróxidos. Conclusiones. La actividad GPx en TGI mostró coeficientes de correlación superiores a 0.95, sugiriendo que es buen indicador del estado oxidativo de las raciones.

Prevalencia de hipotiroidismo y relación con niveles elevados de anticuerpos antiperoxidasa y yoduria en población de 35 y más años en Armenia. 2009-2010 / Hypothyroidism prevalence and its relationship to high levels of thyroid peroxidase antibodies and urinary iodine in a population aged 35 and over from Armenia, 2009-2010

Objetivos Determinar la frecuencia de hipotiroidismo y su relación con anticuerpos antiperoxidasa y yoduria elevada, con la finalidad de realizar recomendaciones a las autoridades sanitarias sobre el consumo de sal yodada y detección temprana de enfermedad tiroidea. Métodos Participaron 437 personas de la población general de Armenia (Quindío). Se realizaron pruebas ELISA para Tiroxina-L, hormona estimulante de la tiroides, anticuerpos antiperoxidasa y análisis fotocolorimétrico para yoduria. Resultados La prevalencia de hipotiroidismo fue de 18,5 %. Los anticuerpos antiperoxidasa fueron positivos en el 28,9 %, con prevalencia significativamente más alta entre aquellos con hormona estimulante de la tiroides mayor a 10 uUI/ml comparados con valores de 5,1 a 10 uUI/ml (O.R 3,2) y en fumadores (O.R 3,4). La Tiroxina-L fue normal en el 98,2 % de participantes con hormona estimulante de la tiroides mayor a 5 uUI/ml y en el 92 % de aquellos con valores mayores a 10 uUI/ml. El promedio de yoduria fue de 565,1; niveles por encima de 300 µg/l se obtuvieron en un 81,8 % de los participantes. Conclusiones El aumento en la prevalencia de anticuerpos antiperoxidasa positivo a medida que aumentan los valores de hormona estimulante de la tiroides podría evidenciar una elevado riesgo en Armenia de desarrollo de hipotiroidismo de origen autoinmune; a pesar de los elevados niveles de yoduria, no se logró establecer relación con los niveles de anticuerpos antiperoxidasa ni de hormona estimulante de la tiroides.

Objectives Determining the prevalence of hypothyroidism and its interrelationship with peroxidase antibodies and high urinary iodine levels as a means for devising a set of recommendations for health authorities regarding the consumption of iodised salt and the early detection of thyroid disease. Methods 437 people in the municipality of Armenia (Quindío) participated in the study. ELISA tests were performed for free thyroxine, thyroid-stimulating hormone and thyroid peroxidase antibodies; a photocolorimetric analysis was carried out to determine urinary iodine levels. Results Hypothyroidism prevalence was 18.5%. Thyroid peroxidase antibodies were positive in 28.9% of the study population, with significantly higher prevalence amongst those with levels > 10 mIU/mL thyroid-stimulating hormone compared to 5.1 to 10 mIU/mL in those without it (OR 3.2) and smokers (O.R 3,4). Free thyroxine was normal in 98.2% of participants (> 5 mIU/mL thyroid-stimulating hormone levels) and 92% in those in whom > 10 mIU/mL thyroid-stimulating hormone levels were found. The average iodine level was 565.1; levels above 300µg/L were obtained in 81.8% of the participants. Conclusions Increased positive thyroid peroxidase antibody prevalence with increasing thyroid-stimulating hormone values could demonstrate a high risk of developing autoimmune hypothyroidism in Armenia; despite high iodine levels, a relationship with thyroid peroxidase antibodies or thyroid-stimulating hormone levels could not be established.

Immunolocalization of HB-EGF in human skin by streptavidin-peroxidase (HRP) conjugate method / Inmunolocalización de HB-EGF en piel humana por el método de conjugado estreptavidina-peroxidasa (HRP)

EGF family growth factors consists of growth factors, such as transforming growth factor (TGF)-a, heparin-binding EGF-like growth factor (HB-EGF), amphiregulin (AR) and epiregulin, autocrine growth factors in normal human keratinocytes. HB-EGF is mitogen for epithelial cells and like other members of the EGF family, HB-EGF exerts its biological effects via interaction with the EGF receptor (EGFR). HB-EGF is an autocrine growth factor for human keratinocytes, and has a possible role as a paracrine growth factor for fibroblast. Our report concerning immunohistochemical localization of HB-EGF in normal skin by using the streptavidin-peroxidase (HRP) conjugate method, confirms previous data, revealing specific patterns of HB-EGF localization. Identification of HB-EGF in cells of epithelial origin suggests its autocrine and/or paracrine roles in epithelial cell maintenance. Our report especially wants to give a technical contribution, easy to manage and with evident results. A simple technique that does not require use of sophisticated equipment.

La familia factores de crecimiento EGF se compone de representantes como el factor de crecimiento transformante (TGF)-a, factor epidérmico vinculante a la heparina (HB-EGF), anfiregulina (AR) y epirregulina, factores autocrinos de crecimiento en queratinocitos humanos normales. HB-EGF es mitógeno para células epiteliales y al igual que otros miembros de la familia EGF, HB-EGF ejerce sus efectos biológicos a través de la interacción con el receptor de EGF (EGFR). HB-EGF es un factor de crecimiento autocrino de queratinocitos humanos, y tiene un posible papel como factor de crecimiento paracrino de los fibroblastos. Nuestro reporte sobre la localización inmunohistoquímica de HB-EGF en la piel normal mediante el método de conjugado estreptavidina-peroxidasa (HRP), confirma datos anteriores, revelando patrones de localización específicos para HB-EGF. La identificación de HB-EGF en las células de origen epitelial sugiere su papel autocrino y/o paracrinos en el mantenimiento de las células epiteliales. Nuestro informe quiere dar una contribución técnica, fácil de manejar y con resultados evidentes. Una técnica simple que no requiera el uso de equipo sofisticado.

Comparación entre Testsimplets® y Diff-Quik para la evaluación de la morfología espermática / Comparison between Testsimplets® and Diff-Quik to assess sperm morphology

Comparar la evaluación de morfología espermática mediante dos tinciones: Testsimplets® y Diff-Quik y la eficiencia de Testsimplets® y el test de peroxidasa para evaluar leucocitos en semen. Comparamos la morfología espermática de las muestras seminales de 30 pacientes infértiles, evaluada a través de las tinciones Testsimplets® y Diff-Quik. Adicionalmente, en pacientes que presentaron más de 106 de células redondas por mL de semen (n=7), comparamos la evaluación de leucocitos por Testsimplets® y el test de peroxidasa. En el Centro de fertilidad UNIFERTES, en Caracas, Venezuela. No existen diferencias significativas en el porcentaje de espermatozoides morfológicamente normales, siguiendo el criterio estricto de Kruger, entre ambas tinciones. Encontramos diferencias significativas en los porcentajes de los siguientes defectos morfológicos espermáticos, entre tinción: cabeza piriforme, pieza media doblada, irregular o con gota citoplasmática. No se encontraron diferencias significativas en la evaluación de leucocitos en semen mediante Testsimplets® y el test de peroxidasa. Testsimplets® es práctico para ahorrar tiempo y, consecuentemente, mejorar la eficiencia en el tiempo de entrega de resultados. Sin embargo, es considerablemente más costoso que Diff-Quik

To compare sperm morphology by Testsimplets® and Diff-Quik staining. To compare the efficiency of Staining cellular peroxidase and Testsimplets® to assess leukocytes in semen. We compared sperm morphology of 30 infertile patients evaluated by Testsimplets® and Diff-Quik staining. Additionally, in patients with more than 106 round cells per ml semen (n=7), we compared the assessment of leukocytes by Staining cellular peroxidase and Testsimplets®. Fertility clinic UNIFERTES, in Caracas, Venezuela. There was no significant difference in the percentage of morphologically normal sperm, according to Kruger’s strict criteria, between both stains. We found significant differences in the percentages of the following sperm morphological defects between staining: pyriform head, folded middle piece, irregular and presence of cytoplasmic droplets. There was no significant difference in the assessment of leukocytes in semen by Staining cellular peroxidase and Testsimplets®. Testsimplets® is practical for saving time and consequently, improving the efficiency in the delivery time of results. Nonetheless, it is considerably more expensive than Diff-Quik

Selenio: nutriente objetivo para mejorar la composición nutricional del pescado cultivado: [revisión] / Selenium: target nutrient to improve nutritional composition of cultured fish: [review]

El selenio (Se) es un micromineral que se encuentra en forma de compuestos inorgánicos como selenito y seleniato, o compuestos orgánicos en forma de seleno-aminoácidos tales como seleno-cisteína y seleno-metionina. El creciente mercado de los alimentos funcionales incluye al selenio (componente funcional) en el grupo de alimentos con efectos positivos para el ser humano. Este mineral genera beneficios para la salud ya que forma parte importante del glutatión peroxidasa (GSH-Px), enzima encargada de proteger el organismo contra agentes oxidantes. Adicionalmente, se reconoce que el selenio tiene efectos positivos en la función inmune, la actividad de la tiroides y la fertilidad. El selenio podría ser incorporado a los filetes de pescado mediante suplementaciónen la dieta. Este documento presenta una breve revisión sobre la temática de alimentos funcionales, las principales características del selenio y su utilización en sistemas de alimentación para modificar la composición final de productos de origen animal como el pescado.

Selenium is a trace mineral that forms both inorganic compounds like selenite and selenate and organic compounds associated with aminoacids like selenomethionine and selenocysteine. The growing functional foods market includes selenium (functional component) in the group of foods with positive effects for human being. This mineral produces benefits for health since it is an important component of Glutathione Peroxidase (GSH-Px), enzyme which protects the organism against oxidation agents. Furthermore, it is recognized that selenium has positive effects in the immune function, activity of the thyroid and fertility. Selenium could be incorporated into fish fillets by nutritional supplementation in the diet. This document presents a short review ofthe functional foods concept, the main characteristics of selenium and its use in feeding systems to modify the final composition of animal products like fish.

INDUCCIÓN DIFERENCIAL DE LA ENZIMA PEROXIDASA Y SU RELACIÓN CON LIGNIFICACIÓN EN LOS MECANISMOS DE DEFENSA DEL CLAVEL (Dianthus caryophyllus L.) DURANTE SU INTERACCIÓN CON Fusarium oxysporum f. sp. Dianthi / DIFFERENTIAL INDUCTION OF PEROXIDASE ENZYME AND ITS RELATIONSHIP WITH LIGNIFICATION IN CARNATION DEFENSE (Dianthus caryophyllus L.) MECHANISM AGAINST Fusarium oxysporum f. sp. Dianthi / INDUCAO DIFERENCIAL DA ENZIMA PEROXIDASEEASUARELACAO COM A LENHIFICACAO NOS MECANISMOS DE DEFESA DE CRAVO (Dianthus caryophyllus L.) DURANTE A SUAINTERACCAO COM Fusarium oxysporum f. sp. Dianthi

Se evaluó la actividad enzimática peroxidasa (POD) y el contenido de lignina en tallos de esquejes de clavel (Dianthus cayophyllus L.) inoculados con el hongo Fusarium oxysporum f.sp. dianthi (Fod) raza 2, con el fin de determinar su posible participación en la respuesta de defensa y en la resistencia de la planta al marchitamiento vascular. Inicialmente se seleccionaron las condiciones para la extracción y determinación de la actividad enzimática. Se encontró que el tratamiento con buffer citrato 100 mM pH 5,0 con 3% de PVPP presentó los mejores resultados de actividad peroxidasa para la extracción de la enzima a partir de tallos de clavel. Se determinaron las mejores condiciones para la medida de actividad enzimática POD a través de la reacción de oxidación de o-dianisidina con H2O2 seguida a 460 nm. Una mezcla de reacción con una concentración 0,6 mM de o-dianisidina y 2,0 mM de H2O2 en buffer citrato 100 mM a pH 5,5 y 45°C, presentó los mejores resultados para la cuantificación de la enzima. Una vez establecidas las condiciones, esquejes de clavel de una variedad tolerante y una susceptible al marchitamiento vascular fueron inoculados con el patógeno y se evaluaron los niveles de actividad de POD y de acumulación de lignina a diferentes tiempos pos-inoculación. La variedad tolerante (Bárbara), presentó inducción de dicha enzima a las 8 y 48 h pos-inoculación y aumento en el contenido de lignina a 48 y 72 h. A su vez, en la variedad susceptible (Delphi) no se encontraron cambios significativos en los niveles de POD ni en el contenido de lignina. Se estableció, por tanto, que la inducción de la actividad POD está asociada a la lignificación, que a nivel del tallo, hace parte de los mecanismos asociados a defensa en el modelo clavel-Fusarium oxysporum f. sp. dianthi.

Peroxidase (POD) enzymatic activity and lignin content in carnation stems (Diant-hus cayophyllus L.) infected with the fungus Fusarium oxysporum f.sp. dianthi race 2 were evaluated with the purpose of determining the possible enzyme participation in the plant defense response and in the resistance to the vascular wilting. Initially, the conditions for extraction and determination of enzymatic activity were selected. It was found that when citrate buffer 100 mM pH 5.0 with 3% PVPP was employed, the results of POD activity in enzyme extract obtained from carnation stems were higher. Best conditions were set for POD activity measure through oxidation reaction of o-dianisidine and H2O2 at 460 nm. A reaction mixture with a concentration of o-dianisidine 0,6mM and H2O2 2.0 mM in citrate buffer 100 mM pH 5.5 at 45 ºC displayed the best results for enzyme quantification. Once conditions were established, tolerant and susceptible vascular wilting carnation cuttings were inoculated with the pathogen. In each treatment at stem level, different postinoculation times were evaluated for enzyme activity levels and lignin accumulation. Tolerant variety (Barbara) showed a POD induction at 8 and 48 h pos-inoculation and an increase in lignin content at 48 and 72 h. At the same time, in susceptible variety (Delphi) there were no significant changes in POD levels or lignin contents. Therefore, it was established that POD activity induction is associated to lignification which, at stem level, is part of the mechanisms associated to defense in carnation (Dianthus caryophyllus L.) against Fusarium oxysporum f. sp. dianthi.

Foram avaliadas a actividade enzimática peroxidasa (POD) e o conteúdo de lignina em talos de estacas de cravo (Dianthus cayophyllus L.) inoculados com o fungo Fusarium oxysporum f.sp. dianthi raça 2, com o propósito de determinar a sua possível participação na resposta de defensa e à resistência da planta ao murchamento vascular. Inicialmente foram seleccionadas as condiciones para a extracção e determinação da actividade enzimática. Foi encontrado que o tratamento com buffer citrato 100 mM pH 5,0 com 3% de PVPP, apresentou os melhores resultados de actividade peroxidasa na extracção da enzima a partir de talos de cravo. Foram determinadas as melhores condições para medir a actividade enzimática POD a través da reacção de oxidação de o-dianisidi na com H2O2 e com seguimento a 460 nm. Uma mistura de reacção com uma concentração 0,6 mM de o-dianisidina e 2,0 mM de H2O2 em buffer citrato 100 mM a pH 5,5 e 45 °C, apresentou os melhores resultados para a quantificação da enzima. Uma vez estabelecidas as condições, estacas de cravo de uma variedade tolerante e uma susceptível ao murchamento vascular foram inoculadas com o fungo patogénico, e se avaliaram a diferentes tempos pos-inoculação os níveis de actividade desta enzima e de acumulação de lignina. A variedade tolerante (Bárbara), apresentou uma indução de POD às 8 e 48 h pos-inoculação e um aumento no conteúdo de lignina às 48 y 72 h. Por outro lado, na variedade susceptível (Delphi) não se encontraram mudanças significativas nos níveis de POD nem no conteúdo de lignina. Se estabeleceu, por tanto, que a indução da actividade POD está associada à lignificação que a nível de talo faz parte dos mecanismos associados à defesa no modelo cravo-Fusarium oxysporum f. sp. dianthi raça 2.

Resultados preliminares del perfeccionamiento del DAVIH-AgP24 con el empleo del sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa / Preliminary results of DAVIH-AgP24 with the biotin-tiramyne/streptavidine-peroxidase amplification system

Se modificó el ELISA DAVIH-Ag P24 con la introducción de la disociación por calor de las muestras de plasma y el empleo de un sistema de amplificación biotina-tiramina/estreptavidina-peroxidasa, para incrementar su sensibilidad. Se determinó la repetibilidad interensayo en el DAVIH-Ag P24 amplificado. Se evaluaron 32 muestras de plasma de individuos infectados por el VIH-1 en 3 categorías clínicas (caso SIDA, asintomßticos y con infecciones oportunistas menores). En la determinación de la repetibilidad interensayo se obtuvo un coeficiente de variación entre 4 y 10,3 por ciento. Con el DAVIH-Ag P24 amplificado se incrementó el nivel de detección de P 24 hasta 0,5 pg/mL. El DAVIH-Ag P24 amplificado alcanzó 66 por ciento de sensibilidad, mientras que el DAVIH-Ag P24 obtuvo 31 por ciento. Este estudio preliminar permitió demostrar que la incorporación de las nuevas modificaciones al sistema DAVIH-Ag P24 amplificado logró aumentar los niveles de detección de P24 y ganar en sensibilidad.

ELISA DAVIH-Ag p24 was modified by introducing heat dissociation of plasma samples and a tyramine/streptavidine-peroxidase amplification system, with the objective of increasing sensitivity. Between-assay repeatability was determined in amplified DAVIH-Ag p24. Thirty two plasma samples from HIV-1-infected individuals classified in three clinical categories (AIDS case, asymptomatic and minor opportunistic infections) were evaluated. The variation coefficient ranged 4-10.3 percent in between-assay repeatability. With the amplified DAVIH-p24 Ag, the p24 antigen detection level increased to 0.5 pg/mL. Amplified DAVIH-p24 Ag reached 66 percent sensitivity whereas standard DAVIH-p24 Ag sensitivity rate was 31 percent. This preliminary study proved that the introduction of new modifications in amplified DAVIH-p24 Ag managed to increase the p24 antigen detection levels and to gain sensitivity.

INDUCCIÓN DE ACTIVIDAD PEROXIDASA Y DE FENOLES TOTALES COMO RESPUESTA DEL FRUTO DE LULO (Solatium quitoense L.) AL PATÓGENO CAUSAL DE LA ANTRACNOSIS / INDUCTION OF PEROXIDASE AND TOTAL PHENOLS AS A RESPONSE OF LULO (Solanum quitoense L.) FRUIT TO PATHOGEN CAUSING ANTHRACNOSE / INDUÇÃO DA ACTMDADE PEROXIDASA E FENÓIS TOTAIS COMO RESPOSTA DO FRUTO DE LULO (Solanum quitoense L.) AO PATÓGENO QUE CAUSA ANTRACNOSE

Se evaluó la inducción de peroxidasa en frutos de lulo con el fin de determinar su participación en las respuestas bioquímicas hacia el patógeno Colletotrichum acutatum, causante de la antracnosis. Se establecieron como mejores condiciones para su extracción y para determinación de la actividad: buffer fosfatos 100 mM pH 7, 1% SDS y 1 % PVPP; sustrato guayacol 15 mM, peróxido de hidrógeno 10 mM, pH 6,5, 55 °C y 30 µL de extracto. Se realizó un ensayo in vivo usando frutos verdes, pintones y maduros, inoculados con el hongo o con agua estéril. Se determinó la actividad peroxidasa a diferentes horas a partir de la inoculación, encontrándose una respuesta diferencial con el tiempo por efecto de la presencia del patógeno, y según el estado de madurez de los frutos. En lulos verdes inoculados con el hongo se observó aumento en la actividad al cabo de 6 y 144 horas. En lulos pintones no se observó efecto notable, mientras que en maduros el aumento en actividad fue prácticamente a todos los tiempos. Los resultados del contenido de fenoles totales mostraron que hubo acumulación a 96 y 144 horas por efecto del patógeno, para lulos en estado verde y maduro, mientras que para pintones, en los que se presentaron más rápido y con mayor severidad los síntomas de la antracnosis, no se observó aumento a ninguno de los tiempos. En los frutos más enfermos, el cambio en actividad peroxidasa y en contenido total de fenoles fue menos evidente, por lo que se sugiere una relación inversa de estos con el desarrollo de la antracnosis.

The induction of peroxidase in lulo fruits was evaluated in order to determine its participation in the biochemical responses towards the pathogen Colletotrichum acutatum, which causes the antrachnosis disease. For extraction and activity determination, these conditions were established as the best: buffer phosphates 100 mM pH 7, 1% SDS y 1 % PVPP; substrate guaiacol 15 mM, hydrogen peroxide 10 mM, pH 6,5, 55 °C and 30 µL of the extract. An in vivo test was developed using unripe, semi-ripe and ripe fruits, inoculated with the fungus or sterile water. The peroxidase activity was measured at different hours starting from the inoculation, finding a time differential response caused by the pathogen presence and according to the maturity state of fruits; in unripe lulo fruits inoculated with the fungus, an increase of the activity was observed after 6 and 144 hours. In semi-ripe fruits no considerable effect was seen, while in ripe fruits the increase of the activity was found practically at all times. The results of the measured total phenol content, showed accumulation at 96 and 144 hours as a result of the pathogen presence in unripe and ripe fruits, while for semi-ripe fruits, in which the antrachnosis symptoms were noticed faster and more severely, no phenol increase was found at any time. The less evident changes seen in peroxidase and phenol content, using severely affected fruits by the disease, suggest an inverse relationship between these parameters and the development of the antrachnosis.

A indução da peroxidasa foi avaliada na casca de frutos de lulo com a finalidade de determinar a sua possível participação em reacções de defesa contra o patógeno Colletotrichum acutatum, causador da doença antracnose. Foram estabelecidas as melhores condições para a sua extracção e para medir a actividade da enzima extraída, encontrando-se que com tampão fosfato 100 mM pH 7, 1% SDS y 1% PVPP, substrato guaicol 15 mM, peróxido de hidrogeno 10 mM, pH 6,5, 55 °C y 30 µL de extracto enzimático se conseguiram as actividades enzimáticas mais elevadas. Foi realizado um ensaio in vivo usando frutos verdes, em processo de maduração e maduros, inoculados com o fungo ou com água estéril. A actividade peroxidasa foi determinada a diferentes horas a partir da inoculação encontrando-se uma resposta diferencial com o tempo pelo efeito da presença ao patógeno e de acordo ao estado de madurez dos frutos. Em lulos verdes observou-se um aumento da actividade nos frutos inoculados com o fungo ao fim de 6 e 144 horas. Em lulos em processo de maduração, o patógeno não teve maior efeito, enquanto que em lulos maduros o aumento na actividade da enzima, como resposta à presença do patógeno, foi praticamente a todos os tempos avaliados. Os resultados do conteúdo de fenóis totais mostraram que ouve uma acumulação significativa a 96 e 144 horas por efeito da inoculação com o patógeno para lulos em estado verde e maduro, enquanto que para os lulos em processo de maduração, nos quais se apresentaram mais rápido e com maior severidade os sintomas de antracnose, não se observou aumento em nenhum dos tempo avaliados. Nos frutos mais afectados pelos sintomas, a mudança na actividade POD e no conteúdo total de fenóis foi menos evidente, motivo pelo qual se sugere uma relação inversa de estes com o desenvolvimento de antracnose.

Actividad de glutatión peroxidasa y superóxido dismutasa en sangre, plasma sanguíneo y plasma seminal en toros Normando / Atividade de superóxido dismutase e glutationa peroxidase no sangue, plasma e plasma seminal em touros normando / Activity of glutathione peroxydase and superoxide dismutase in whole blood, blood plasma and seminal plasma in normande bulls

Con el objeto de evaluar la actividad de las enzimas antioxidantes glutatión peroxidasa (GPx; EC 1.11.1.9), y superóxido dismutasa (SOD; EC 1.15.1.1) en sangre, plasma y plasma seminal y su relación con las características seminales: volumen, movilidad individual y en masa, concentración, relación vivos y muertos y prueba hiposmótica (PH), se tomaron muestras de sangre y semen en 20 toros Normando en la cordillera central del Departamento de Caldas (Colombia). De cada toro se tomó una muestra de semen mediante electroeyaculador y una muestra de sangre de la vena coccígea media. Los datos fueron analizados mediante un modelo lineal. La actividad sanguínea de GPx fue 80 ± 48 U/g Hb, 0.09 ± 0.1 U/ml y 0.9 ± 0.7 U/ml en sangre, en plasma sanguíneo y plasma seminal, respectivamente, sin tener correlación con las características seminales ni con la PH (p>0.05). La actividad de SOD fue 940 ± 374 U/g Hb, 120 ± 73 U/ml, y 5.1 ± 2.6 U/ml, en sangre, plasma sanguíneo y en plasma seminal, respectivamente. Una tendencia a una correlación negativa entre SOD en plasma seminal y la PH (p = 0.06) fue hallada, sin tener correlación con las características seminales (p>0.05). La actividad de ambas enzimas en sangre sugiere un subconsumo de Se, Cu y Zn. La actividad enzimática en sangre y plasma no se vio reflejada en la capacidad de defensa enzimática antioxidante del plasma seminal, lo que sugiere la presencia de isoenzimas no determinadas o compartimientos independientes entre los plasmas sanguíneo y seminal.

The aim of the study was to evaluate the activity of the antioxidant enzymes glutathione peroxidase (GPx; EC 1.11.1.9), and superoxide dismutase (SOD; EC 1.15.1.1) in blood, blood plasma and seminal plasma, and to correlate them with seminal characteristics (i.e. volume, individual and total motility, concentration, ratio of live and death cells, and hyposmotic test) in Normande bulls. Semen and blood samples were collected from each bull (n = 20) from farms located in the high Andes mountains in Caldas State (Colombia). Data were analyzed by a linear regression model. The blood activity of GPx was 80 ± 48 U/g Hb, 0.09 ± 0.1 U/ml, and 0.9 ± 0.7 U/ml, in blood, blood plasma and seminal plasma, respectively. There was no relationship to either seminal characteristics or hyposmotic test (p>0.05). The activity of SOD was 940 ± 374 U/g Hb, 120 ± 73 U/ml, and 5.1 ± 2.6 U/ml, in blood, blood plasma, and seminal plasma, respectively. There was a negative trend (p = 0.06) in the relationship of SOD activity in seminal plasma to hyposmotic test; however, there was no association to other seminal characteristics (p>0.05). The blood activity of both enzymes suggested a suboptimal intake of Se, Cu, and Zn, and it was not translated into an adequate antioxidant defense of the seminal plasma. It suggested the activity of undetermined isoenzymes or and independency between blood and testicle compartments.

Com o objetivo de avaliar a atividade de enzimas antioxidantes glutationa peroxidase (GPx; EC 1.11.1.9), e superóxido dismutase (SOD; EC 1.15.1.1) sangue e plasma seminal plasma, e sua relação com as seguintes características seminais: volume, massa e de mobilidade individual, a concentração, relação vivos e mortos ela prova hiposmótica (PH), amostras de sangue e de sêmen de 20 touros Normando na cordilheira central do Estado de Caldas (Colombia) foram tomadas. Em cada touro teve uma amostra de sêmen através electroeyaculador e uma amostra de sangue da veia coccígea média. Os dados foram analisados usando um modelo linear. A atividade de GPx foi 80 ± 48 U/g Hb, 0.09 ± 0.1 U/ml e 0.9 ± 0.7 U/ml, na sangue, no plasma sanguíneo e plasma seminal, respectivamente, sem qualquer correlação com as características seminais ou com a pH (p>0.05). A atividade da SOD foi 940 ± 374 U/g Hb, 120 ± 73 U/ml, y 5.1 ± 2.6 U/ml, no sangue, no plasma sanguíneo e plasma seminal, respectivamente. Uma tendência para uma correlação negativa entre SOD no plasma seminal e PH (p = 0.06) foi encontrada, sem correlação com as características seminais (p>0.05). A atividade de duas enzimas no sangue sugere-se de um subconsumo, Cu e Zn. A atividade da enzima no plasma sangüíneo não foi reflectiu na capacidade de defesa enzimática antioxidante do plasma seminal, o que sugere a presença de isoenzimas não determinadas ou compartimentos separados entre o plasma sanguíneo e plasma seminal.

Asociación entre la concentración sérica de testosterona y la actividad de la enzima glutatión peroxidasa en testículos de ratones de diferentes edades / Association between seric testorene concentration and the glutathione peroxidase activity in testicles of mice of different ages

Existen evidencias que durante la síntesis de testosrenoa hay producción de radicales libres, lo que podría incrementar la respuesta antioxidante testicular para evitar el daño oxidativo celular. El objetivo de esta investigación fue determinar si existe asociación entre la concentración sérica de testosterona libre (TI) y la actividad testícular de la enzima glutatión peroxidasa (GPx) en ratones de diferentes edades. Se seleccionaron 40 ratones machos de la cepa NMRI procedentes del Bioterio Central de la Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado, y se dividieron en 5 grupos de 8 animales, de acuerdo a la edad en días (d). Grupo (1): 21 d, (2): 28 d, (3): 35 d, (4): 42 d y (5): 49 d. Bajo ligera eterización se sacrificaron, se recolectó la sangre y en el suero se determinó la concentración de TI por electroquimioluminisencia. Los testículos se disecaron, pesaron y se colocaron a 4°C en una solución buffer 50 mM TrisHCI y 5 mM EDTA a pH7,6 para obtener un homogenizado en el cual se determinó la actividad de la GPx y la concentración de proteínas. A los resultados expresados en mU/ml y mU/mg proteínas, se les aplicó una prueba de comparaciones múltiples (DMS) y correlación de Pearson. La concentración sérica de TI como la actividad catalítica y específica de la GPx se incrementaron con la edad de los ratones (P<0,01). El aumento de ambas variables se correlacionó en forma positiva (r=0,47) y esta asociación fue estadísticamente significativa (P<0,05) a los 21 días (etapa prepúber) y 49 días (etapa pospúber).

Evidences exist that during the testosterone synthesis there is production of free radicals, which could increase the testicular antioxidant answer to avoid the cellular oxidative damage. The aim of this investigation was to determine if exists association between the seric concentration of free testosterone (Tl) and the testicular activity of the enzyme glutatión peroxidasa (GPx) in mice of different ages. 40 male mice of stock NMRI coming from the Central Bioterio of the Universidad Centroccidental “Lisandro Alvarado” selected themselves, and they were divided in 5 groups of 8 animals, according to the age in days (d). Group (1): 21d, (2): 28d, (3): 35d, (4): 42d and (5): 49d. Under light eterización they were sacrificed, the blood was collected and in the serum the concentration of Tl by electrochemiluminescence was determined. The testicles were dissected, weighed and they were placed to 4°C in in a solution buffer 50 mm Tris-HCl and 5 mm EDTA to pH 7.6 to obtain homogenate in which one the activity of the GPx and the protein concentration was determined. To the results expressed in mU/ml and mU/mg proteins, were applied to a test of multiple comparisons (DMS) and Pearson‘s correlation. The concentration of Tl as the catalytic activity and specific of the GPx they were increased with the age (P<0.01). The increase of both variables was correlated in positive form (r=0.47) and this association was statistically significant (P<0.05) to the 21 days (prepuber stage) and 49 days (postpuber stage).

INHIBICIÓN DE LESIONES POR FRÍO DE PITAYA AMARILLA (Acanthocereus pitajaya) A TRAVÉS DEL CHOQUE TÉRMICO: CATALASA, PEROXIDASA Y POLIFENOLOXIDASA / Inhibition of Chillyng Injury in Pitaya Amarilla (Acanthocereus pitajaya) Fruit by Heat Shock: Catalese, Peroxidase and Polyphenoloxidase

En los ensayos de almacenamiento de pitaya a temperatura ambiente de Bogotá (18 ºC) se encontró que esta fruta tiene un comportamiento climatérico con un máximo en la respiración luego de tres días de iniciado el almacenamiento. En el máximo climatérico la actividad de catalasa fue máxima, en tanto que en la etapa de senescencia las actividades de peroxidasa y polifenoloxidasa exhibieron valores máximos. El choque térmico inhibió las lesiones por frío, vistas en los frutos refrigerados a 2 °C, este choque incrementó la actividad de catalasa y peroxidasa y disminuyó la actividad de polifenoloxidasa, respecto a los frutos refrigerados sin tratamiento de choque térmico. Los resultados muestran que la catalasa está en relación directa con la vida útil del fruto, mientras que polifenoloxidasa guarda estrecha relación con el deterioro. La peroxidasa manifiesta su acción antioxidante con la generación de pardeamiento, en frutos almacenados a temperatura ambiente, si bien en los tratados con choque térmico, su acción antioxidante no va de la mano con el incremento en el pardeamiento, por lo que en este caso, su expresión fue favorable. Los resultados encontrados se constituyen en un aporte en la búsqueda de técnicas que permitan mayores tiempos de vida en anaquel de los frutos.

In the storage of yellow pitaya fruit at room temperature in Bogotá (18 ºC), it was found that this fruit has a climacteric behavior with a maximum in the respiration after 3 days of its storage. In the climacteric the activity of catalase was higher, while in the senescence stage the activities of peroxidase and polyphenoloxidase exhibited maximum values. The heat shock inhibited the chilling injury, shows in the fruits refrigerated at 2 °C, this heat shock increased the activity of catalase and peroxidase and it delayed the activity of polyphenoloxidase, regarding the fruits refrigerated without treatment of heat shock. The results show that catalase is in direct relationship with the useful life of the fruit, while polyphenoloxidase keeps it narrows relationship with the deterioration. In fruits stored at room temperature, peroxidase exhibited its antioxidant action with browning generation, although in the treaties with heat shock, their antioxidant action doesn’t go of the hand with increment in the browning, for that in this case, its expression was favorable. The opposing results are constituted in a contribution in the search of techniques that allow bigger times of life in shelf of the fruits.

Changes in antioxidant enzyme activities in Eichhornia crassipes (Pontederiaceae) and Pistia stratiotes (Araceae) under heavy metal stress

Whole plants of Eichhornia crassipes and Pistia stratiotes were exposed to various concentrations (0, 0.1, 0.3, 0.5, 1.0, 3.0 and 5.0 mM) of 8 heavy metals (Ag, Cd, Cr, Cu, Hg, Ni, Pb and Zn) hydroponically for 21 days. Spectrometric assays for the total activity of catalase, peroxidase, and superoxide dismutase in the leaves were studied. At the end of the experimental period, data referred to metal treated plants were compared to data of untreated ones (control). Heavy metals increased the activity of catalase, peroxidase and superoxide dismutase in both species and there was differential inducement among metals. Overall, Zn had the least inducement of antioxidant enzymes in both species while Hg had the highest inducement. The increase in antioxidant enzymes in relation to the control plants was more in E. crassipes than P. stratiotes. The results showed that E. crassipes tolerated higher metal concentrations in a greater number of metals than P. stratiotes. Rev. Biol. Trop. 55 (3-4): 815-823. Epub 2007 December, 28.

Plantas completas de Eichhornia crassipes y Pistia stratiotes fueron expuestas a varias concentraciones (0, 0.1, 0.3, 0.5, 1.0, 3.0 and 5.0 mM) de metales pesados (Ag, Cd, Cr, Cu, Hg, Ni, Pb and Zn) utilizando hidroponía, por 21 días. Se realizaron análisis espectrométricos en las hojas para determinar la actividad total de la catalasa, peroxidasa y dismutasa superóxida. Al final del periodo experimental, se comparó con plantas no tratadas (control). Los metales pesados incrementan la actividad de la catalasa, peroxidasa y la dismutasa superóxida para ambas especies y hay diferencias entre los metales. El Zn produce el menor estímulo para enzimas antioxidantes en ambas especies; Hg produce el mayor estímulo. El incremento de las enzimas antioxidantes en relación con las plantas control fue mayor en E. crassipes que P. stratiotes. E. crassipes tolera altas concentraciones de metal en un gran número de ellos, mientras que la tolerancia en P. stratiotes es menor.

Cambios en el sistema de defensa antioxidante inducido por Ciclosporina A / Changes in the antioxidant defence system induced by Cyclosporin A

La Ciclosporina A (CyA) es un inmunosupresor que presenta efectos adversos como la hepatotoxicidad. Se estudió el efecto de CyA sobre el sistema de defensa antioxidante (SDA), su relación con la lipoperoxidación y la función hepática. Ratas machos wistar de 200-260 g de peso fueron tratadas durante 7 días (agudo) y 120 días (crónico) con dosis orales de CyA de 5 y 20 mg/kg/ día. Se estudió el SDA midiendo el contenido hepático total de glutatión (GSH), glutatión peroxidasa (GPx) y catalasa (CAT); el perfil de funcionamiento hepático (PFH) se realizó determinando aspartato aminotransferasa (AST), alanín aminotransferasa (ALT) y bilirrubina total (Bt) y para la lipoperoxidación se midieron las sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico (SRAT). Los resultados fueron confirmados con estudios histológicos. El tratamiento agudo con 20 mg/kg/día de CyA mostró aumento significativo de SRAT (30,51±1,97 nmol/g), pérdida de GSH (2,47±0,06 µmol/g), incremento significativo de GPx (663,25±1,88 mU/mg) y CAT (290,65±3,31 mU/mg). El tratamiento crónico con 5 mg/kg/día de CyA mostró disminución tiempo-dependiente del SDA con disminución de GSH (3,19±0,05 µmol/g), GPx (569,6±2,67 mU/mg) y CAT (223,3±2,78 mU/mg), sin cambios en SRAT. Los resultados del tratamiento crónico y agudo con 20 mg/kg/día de CyA son coincidentes y sólo en esta dosis se observaron alteraciones de la histo-arquitectura del parénquima hepático. Se concluye que dosis de 20 mg/kg/día de CyA en tratamiento agudo y crónico provocan lipoperoxidación con compromiso del SDA y alteración del hepatocito; dosis de 5 mg/kg/día de CyA en tratamiento crónico producen deterioro reversible del SDA sin lipoperoxidación. La inmunosupresión aplicada en clínica con dosis de 3 a 8 mg/kg/día produciría disminución del SDA sin cambios en la histo-arquitectura del parénquima hepático.

Cyclosporin A (CyA), an immunosuppressive agent, exerts adverse effects such as hepatotoxicity. The effect of CyA on the Antioxidant Defence System(ADS), its relation to lipoperoxidation, and liver function were studied. Assays were performed on male wistar rats weighing 200-260 g during acute (7 days) and chronic (120 days) treatment with oral doses of CyA of 5 and 20 mg/kg/day. ADS was studied in rat liver homogenate by measuring the liver content of total glutathion (GSH), glutathion peroxidase(GPx) and catalase (CAT); the Liver Profile Test (LPT) was measured by determining aspartate amino transferase (AST), alanin amino transferase (ALT) and total bilirubin (TB), and lipoperoxidation by determining thiobarbituric acid reactive substances (TRAS). The results were confirmed by histological studies. In the acute treatment, 20 mg/kg/day with CyA, a significant increase in TRAS (30.51±1.97 nmol/g), a loss of GSH (2.47±0.06 µmol/g) and a significant increase in GPx (663.25±1.88 mU/mg) and CAT (290.65±3.31 mU/mg) were observed. In the chronic treatment, 5 mg/kg/day with CyA, a time-dependent decrease in the ADS with a diminution in GSH (3.19±0.05 µmol/g), GPx (569.6±2.67 mU/mg) and CAT (223.3±2.78 mU/mg) were observed, with no changes in TRAS. The results for the chronic and acute treatment with 20 mg/kg/day of CyA are coincident, only this dose causing alterations in liver parenchyma histoarchitecture. CyA doses of 20 mg/kg/day during acute and chronic treatment cause lipoperoxidation with ADS involvement and hepatocyte alteration. CyA doses of 5 mg/kg/day during chronic treatment cause deterioration in the ADS with no lipoperoxidation, hepatotoxicity being reversible. Immunosuppression in human patients with 3 to 8 mg/kg/day doses, would cause a decrease in the ADS with no structural or functional changes in the hepatocyte.

CATALASA, PEROXIDASA Y POLIFENOLOXIDASA DE PITAHAYA AMARILLA (Acanthocereus pitajaya) / CATALASE, PEROXIDASE AND POLYPHENOLOXIDASE FROM PITAHAYA AMARILLA FRUITS (Acanthocereus pitajaya)

Las enzimas catalasa (CAT), peroxidasa (POD) y polifenoloxidasa (PFO) fueron extraídas de la corteza de frutos de pitaya amarilla (Acanthocereus pitajaya) y caracterizadas parcialmente. Para CAT se halló que su actividad fue máxima a pH entre 6,8 y 7,5 y temperatura entre 30 a 50 °C y un K M de 442 mM con H2O2 como sustrato. Para POD se encontró un pH de máxima actividad entre 5,0 a 5,5, temperatura de máxima actividad entre 20 a 25 °C y valores de K M de 10,6 mM para guayacol y 5,1 mM para H2O2. Para PFO las actividades máximas se obtuvieron a pH 7,0 y a temperaturas entre 30 a 40 °C; para esta enzima se obtuvo un K M de 5,5 mM con L-DOPA como sustrato. Las características encontradas para POD y PFO indican que estas enzimas pueden jugar un papel importante en el pardeamiento de la corteza de pitaya amarilla. Además, se evidenció el papel complementario que tienen CAT y POD ante diversas concentraciones celulares de H2O2.

Catalase (CAT), peroxidase (POD) and polyphenoloxidase (PPO) were extracted from the peel of pitaya amarilla (Acanthocereus pitajaya) and were partially characterized. CAT had maximum activities at pH between 6.8 and 7.5 and at temperatures in the range 30 to 50 °C, its K M value is 442 mM for H2O2.The pH for maximum activity of POD was from 5.0 to 5.5 and its temperatures between 20 and 25 °C; POD had a K M values of 10.6 mM and 5.1 for guaiacol and H2O2, respectively. PPO exhibited its maximum activity at pH 7.0 and at temperatures between 30 and 40 °C; PPO had a K M value of 5.5 mM for L-DOPA. Our results indicate that both POD and PPO play an important role in the browning of the pitaya amarilla peel; on the other hand, it was observed that CAT and POD must have a complementary role in the H2O2 degradation in the cells.