Molecular analysis and dimorphism of azole-susceptible and resistant Candida albicans isolates / Análise molecular e dimorfismo de isolados de Candida albicans suscetíveis e resistentes aos azólicos

INTRODUCTION: Candida albicans is responsible for superficial or systemic infections known as candidiasis, which may be found in infected tissue as unicellular budding yeasts, hyphae, or pseudohyphae. In this study, the effects of both fluconazole and itraconazole antifungal agents on the hyphal formation and genotypic characterization of C. albicans isolates classified as either susceptible or resistant were investigated. METHODS: The hyphal production of five C. albicans isolates under the action of antifungal agents was investigated by culturing yeast on growth medium and on hyphal induction medium. The genotypic characterization was carried out for 13 isolates of C. albicans using the random amplified polymorphic DNA-polymerase chain reaction (RAPD-PCR) method. RESULTS: The dimorphism analysis showed that the hyphal formation was higher in resistant than in the susceptible isolates to both azoles. The RAPD-PCR method identified the formation of two different groups. In group A, four resistant and two susceptible isolates were clustered, and in group B, one resistant and six susceptible isolates were clustered. CONCLUSIONS: Considering that hyphal formation was higher in resistant isolates in the presence of azole drugs, we confirmed that the hyphal production is closely related to susceptibility to azoles. These drugs may affect the morphogenesis of C. albicans depending on their susceptibility to these drugs. In relation to RAPD-PCR, most resistant isolates classified in group A and susceptible isolates in group B demonstrated that this method presented a similar standard between the two groups, suggesting that by this technique, a strong correlation between genotypes and fluconazole-resistant samples may be found.

INTRODUÇÃO: Candida albicans é responsável por infecções superficiais ou sistêmicas conhecidas como candidíase, encontrada em tecidos infectados na forma de leveduras brotantes unicelulares, hifas ou pseudohifas. Neste estudo, os efeitos de agentes antifúngicos como o fluconazol e o itraconazol sobre a formação de hifas e caracterização genotípica de isolados de C. albicans suscetíveis ou resistentes foram investigados. MÉTODOS: A produção de hifas de cinco isolados de C. albicans, sob a ação de antifúngicos foi investigada pelo cultivo da levedura em meios de crescimento e de indução de hifas. A caracterização genotípica foi realizada para 13 isolados de C. albicans pelo método de RAPD-PCR. RESULTADOS: A análise do dimorfismo mostrou que a formação de hifas foi maior nos isolados resistentes do que nos suscetíveis aos antifúngicos. O método de RAPD-PCR identificou a formação de dois diferentes grupos. No grupo A, foram agrupados quatro isolados resistentes e dois suscetíveis e no grupo B um resistente e seis suscetíveis. CONCLUSÕES: Considerando que a formação hifal foi maior em isolados resistentes na presença de azólicos, concluimos que a produção hifal está muito relacionada a suscetibilidade a estes fámacos. Estes antifúngicos podem alterar a morfologia de C. albicans em dependência da sua suscetibilidade. No método de RAPD-PCR, o encontro da maioria dos isolados resistentes classificados como pertencentes ao grupo A e suscetíveis ao grupo B demonstrou que este método apresentou um padrão semelhante entre os dois grupos, sugerindo que por este método pode ser detectado uma estreita correlação entre genótipos e amostras resistentes ao fluconazol.

Candidose na medicina veterinária: um enfoque micológico, clínico e terapêutico / Candidosis on veterinary medicine: a mycological, clinical and therapeutic approuch

O gênero Candida é composto por leveduras que vivem como comensais na microbiota de homens e animais. Em geral, não causam nenhum dano aos seus hospedeiros, entretanto, em virtude de desequilíbrios nas defesas química, física e imunológica, esses microrganismos podem se tornar patogênicos. Infecções por Candida spp. são pouco frequentes na Medicina Veterinária no entanto, nos últimos anos, tem sido observado aumento considerável de relatos de enfermidades causadas por essas leveduras, acometendo diferentes animais. Várias espécies do gênero são implicadas em quadros infecciosos, sendo a C. albicans a principal delas, seguida por C. tropicalis e C. parapsilosis. Considerando-se o potencial patogênico do gênero Candida, aliado ao surgimento de cepas resistentes a derivados azólicos, in vitro, o presente trabalho se propôs a realizar detalhada revisão de literatura, abordando os aspectos clínico-laboratoriais, etiológicos e terapêuticos da candidose na Medicina Veterinária.

The Candida genus is composed by yeasts that live as commmensal on human and animals' microbiota. In general, they do not cause any damage to their hosts. However, due instability on chemical, physical and immunological defenses, these microorganisms can become pathogens. Candida spp. infections are rare on Veterinary Medicine. However, on the last years, a considerable raise of illness caused by these yeasts has been related on varied animal species. Several species of this genus has been mentioned as responsible for infectious diseases in animals, being C. albicans the main of them, followed by C. tropicalis and C. parapsilosis. Considering the pathogenic role of the genus Candida, allied to the emerging of resistant strains to the azole derivatives, in vitro, the present research proposed to perform a detailed review, approaching clinic-laboratorial, etiologic and therapeutic aspects of the candidosis on Veterinary medicine.

Candidemia em um hospital terciário brasileiro: incidência, freqüência das diferentes espécies, fatores de risco e suscetibilidade aos antifúngicos / Candidemia in a Brazilian tertiary care hospital: incidence, frequency of different species, risk factors and antifungal susceptibility

São apresentados os resultados de estudo transversal e observacional sobre candidemia realizado no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná. No período de janeiro de 2001 a dezembro de 2004, foram analisados 100 episódios de candidemia. A incidência foi de 1,27 por 1.000 internações, sendo Candida spp o oitavo agente mais isolado nas infecções da corrente sanguínea. A idade variou de 5 dias a 89 anos com uma média de 32 anos, 60 por cento dos casos ocorreram em adultos (66 por cento > 50 anos) e 40 por cento em crianças (52 por cento < 1 ano). Cinqüenta e nove pacientes estavam internados em enfermarias e 41 em unidade de terapia intensiva. Candida albicans foi a espécie mais (59 por cento) freqüente, seguida por Candida tropicalis (15 por cento), Candida parapsilosis (9 por cento). As condições associadas mais (97 por cento) freqüentes foram uso de antibióticos, cateter venoso central (77 por cento), bloqueador H2 (57 por cento), nutrição parenteral total (49 por cento) internamento em unidade de terapia intensiva (41 por cento). Dos 51 isolados testados, 3 de Candida glabrata apresentaram suscetibilidade dose-dependente ao fluconazol e eram resistentes ao itraconazol. Uma amostra de Candida krusei apresentou suscetibilidade dose-dependente ao fluconazol, e uma de Candida pelliculosa suscetibilidade dose-dependente ao itraconazol. Na população de estudo, 68 por cento receberam tratamento antifúngico, no entanto a mortalidade foi de 56 por cento.

Results from a cross-sectional observational study on candidemia conducted at Hospital de Clínicas, Federal University of Paraná, are presented. From January 2001 to December 2004, one hundred candidemia cases were evaluated. The incidence was 1.27 episodes per 1,000 hospitalizations and Candida was the eighth most frequently isolated agent from bloodstream infections. The patients’ ages ranged from five days to 89 years, with a mean of 32 years. Sixty percent of the cases occurred in adults (66 percent > 50 years old) and 40 percent in children (52 percent < one year old). Fifty-nine percent had been admitted to medical wards and 41 percent to the intensive care unit. Candida albicans was the most (59 percent) frequent species followed by Candida tropicalis (15 percent) and Candida parapsilosis (9 percent). The most (97 percent) prevalent coexisting conditions were the use of antibacterial drugs, central venous catheter (77 percent), H2 blockers (57 percent), total parenteral nutrition (49 percent) and admission to the intensive care unit (41 percent). Out of the 51 isolates tested, three of Candida glabrata presented dose-dependent susceptibility to fluconazole and resistance to itraconazole. One sample of Candida krusei presented dose-dependent susceptibility to fluconazole and one of Candida pelliculosa presented dose-dependent susceptibility to itraconazole. Among the study population, 68 percent received antifungal therapy, but the mortality was 56 percent.

La resistencia a los antifúngicos: un problema emergente en México / Antifungal resistance: an emerging problem in Mexico

Antecedentes: Mundialmente se ha observado incremento en los casos de micosis asociada a falla terapéutica. Ante el desconocimiento real de este fenómeno en México, se decidió estudiar la resistencia a antifúngicos. Material y métodos: Se evaluaron 76 aislamientos de pacientes del Hospital de Especialidades, Centro Médico Nacional Siglo XXI, Instituto Mexicano del Seguro Social: 36 con dermatofitosis y 40 con candidiasis. Para dermatófitos se utilizó el método E-test® y para Candida spp. el método de microdilución en caldo. Los antimicóticos fueron itraconazol, ketoconazol y fluconazol para dermatófitos; además, voriconazol y anfotericina B para levaduras. Resultados: De los 36 dermatófitos, siete (19.4%) fueron resistentes a uno o más antifúngicos: tres Trichophyton rubrum, tres T. mentagrophytes y un T. tonsurans. Un T. rubrum mostró resistencia a los tres azoles; los seis aislamientos restantes fueron resistentes sólo a fluconazol. De los 40 aislamientos de Candida, 11 (27.5 %) mostraron resistencia: siete a ketoconazol e itraconazol; tres sólo a itraconazol y uno a ketoconazol. Un aislamiento de C. glabrata fue resistente a los cuatro azoles. Ninguna de las levaduras mostró resistencia a anfotericina B. Conclusiones: La falla terapéutica podría deberse a fenómenos de resistencia. En este trabajo se encontró una resistencia a antifúngicos de 20 y 27.5% en dermatófitos y levaduras, respectivamente.

BACKGROUND: An increase in mycosis associated with therapeutic failure has been observed worldwide. The dearth of data in Mexico led us to study antifungal resistance. MATERIAL AND METHODS: Seventy six isolates of patients from the Hospital de Especialidades, Centro Médico Nacional Siglo XXI, Instituto Mexicano del Seguro Social were included: 36 with dermatophytoses and 40 with candidiasis. Dermatophytes were assesed using the E-test method and Candida spp. using the broth microdilution method. Antifungal drugs included itraconazole, ketoconazole and fluconazole for dermatophytes; in addition, voriconazole and amphotericin B were used to treat yeasts. RESULTS: From the 36 dermatophytes, seven isolates (19.4%) showed resistance to one or more antifungal drugs: three to Trichophyton rubrum, three to T. mentagrophytes and one to T. tonsurans. One T. rubrum isolate was resistant to the three azoles; the other six isolates were resistant to fluconazole only. From the 40 Candida isolates, 11 (27.5%) showed resistance: seven to ketoconazole and itraconazole; three only to itraconazole and one to ketoconazole. One C. glabrata isolate showed resistance to the four azoles. None of the yeasts showed resistance to amphotericin B. CONCLUSION: Therapeutic failure could be caused by drug resistance. In our study we found an antifungal resistance of 20% and 27.5% in dermatophytes and in yeasts respectively.