Las biopelículas y su interrelación con la patología crónica del oído medio / Biofilms and their relationship with chronic middle ear pathology

El concepto de biopelículas ha surgido de forma paulatina durante un largo período; se presentan como estructuras tridimensionales compuestas por células sésiles de microorganismos que crecen y se adhieren irreversiblemente a superficies, tanto vivas como inertes. Su capacidad de desarrollarse, tanto en superficies bióticas como abióticas, es una característica que los relaciona directamente con la salud humana. Distintas infecciones óticas se han inculpado a la presencia de biopelículas en las mucosas como en la otitis media con efusión, de igual forma se manifiestan en la aparición y persistencia de la otitis media crónica. Las biopelículas afines con otitis media, generalmente, contienen uno o múltiples especies de bacterias otopatógenas primarias. La comprensión de la biopelicula auxiliará el progreso de nuevas terapias y estrategias de control, al evitar enfermedades infecciosas ya que las bacterias formadoras de biopelículas son una seria amenaza para la salud pública debido a su alta resistencia a los antimicrobianos.

The concept of biofilms has emerged gradually over a long period; they appear as three-dimensional structures composed of sessile cells of microorganisms that grow and adhere irreversibly to surfaces, both living and inert. Their ability to develop, both on biotic and abiotic surfaces, is a characteristic that directly relates them to human health. Different ear infections have been blamed on the presence of biofilms on the mucous membranes, such as otitis media with effusion, in the same way they manifest themselves in the appearance and persistence of chronic otitis media. Otitis media-related biofilms generally contain one or multiple species of primary otopathogenic bacteria. The understanding of the biofilm will help us refine new therapies and control strategies, by avoiding infectious diseases since biofilm-forming bacteria are a serious threat to public health due to their high resistance to antimicrobials.

Enterotoxigenic profiles and submerged and interface biofilms in Bacillus cereus group isolates from foods / Perfiles enterotoxigénicos y biopelículas de superficie y sumergidas en aislados del grupo Bacillus cereus de alimentos

Abstract Biofilm formation by Bacillus cereus strains is now recognized as a systematic contaminaron mechanism in foods; the aim of this study was to evaluate the production of submerged and interface biofilms in strains of B. cereus group in different materials, the effect of dex-trose, motility, the presence of genes related to biofilms and the enterotoxigenic profile of the strains. We determine biofilm production by safranin assay, motility on semi-solid medium, toxin gene profiling and genes related to biofilm production by PCR in B. cereus group iso-lated from food. In this study, we observe strains used a higher production of biofilms in PVC; in the BHI broth, no submerged biofilms were found compared to phenol red broth and phenol red broth supplemented with dextrose; no strains with the ces gene were found, the enterotoxin profile was the most common the profile that includes genes for the three enterotoxins. We observed a different distribution of tasA and sipW with the origin of isolation of the strain, being more frequent in the strains isolated from eggshell. The production and type of biofilms are differential according to the type of material and culture medium used.

Resumen La formación de biopelículas por cepas de Bacillus cereus es reconocida como un mecanismo de contaminación sistemática en alimentos; el objetivo del estudio fue evaluar la producción de biopelículas sumergidas y de superficie en cepas del grupo de Bacillus cereus en diferentes materiales, el efecto de la dextrosa, la motilidad, la presencia de genes relacionados a biopelículas y el perfil enterotoxigénico de las cepas. Determinamos la producción de biopelículas por el ensayo de safranina, motilidad en medio sólido, perfil enterotoxigénico y genes relacionados a producción de biopelículas por PCR en aislados del grupo de Bacillus cereus de alimentos. En este estudio, observamos en las cepas utilizadas una alta producción de biopelículas en PVC; en caldo BHI, no se encontraron biopelículas sumergidas en comparación con el caldo rojo de fenol y caldo rojo de fenol suplementando con dextrosa; no se encontraron cepas con el gen ces, el perfil de enterotoxinas más común fue el perfil que incluía los genes de las tres enterotoxinas, también observamos una distribución diferente de tasA y sipW con relación al origen de la cepa, siendo más frecuente estos genes en las cepas aisladas de huevos. La producción y el tipo de biopelículas es diferente de acuerdo con el tipo de material y el medio de cultivo utilizado.

Influencia de la higiene bucal en el estado de salud de los tejidos periimplantarios / Influence of oral hygiene on peri-implant tissue health status

Introducción: el estado de salud de los tejidos periimplantarios es de vital importancia en el éxito de la rehabilitación implantosoportada, por esta razón, es necesario observar todos aquellos factores que contribuyen a mantener este estado y dentro de ellos, principalmente: la higiene bucal. Objetivo: determinar la influencia de la higiene bucal en el estado de salud de los tejidos periimplantarios. Métodos: se realizó un estudio descriptivo, observacional y transversal en el servicio de Prótesis de la Facultad de Estomatología de Villa Clara, en el período comprendido entre los años 2017 y 2019. El universo de estudio estuvo constituido por 45 pacientes portadores de rehabilitaciones implantosoportadas; las unidades de análisis fueron los implantes y los tejidos que rodean a las 85 prótesis fijas realizadas a dichos pacientes que cumplieron con los criterios de inclusión. Se emplearon la observación clínica y radiográfica, y se elaboró un formulario como instrumento. Se evaluó la higiene bucal y el estado de los tejidos periimplantarios como principales variables. La información obtenida se recopiló en una base de datos, se procesó y se sometió a pruebas de independencia (el estadígrafo Ji cuadrado y su posibilidad asociada) para mostrar la relación entre las variables. Resultados: las variables analizadas evidenciaron una relación significativa de la higiene bucal con el estado de salud de los tejidos periimplantarios a favor de la buena higiene y los tejidos sanos. Conclusiones: la buena higiene bucal evidenciada contribuyó a que los tejidos periimplantarios se mantuvieran sanos.

Introduction: peri-implant tissue health state is of vital importance in the success of implant-supported rehabilitation; for this reason, it is necessary to observe all those factors that contribute to maintaining this state, mainly oral hygiene. Objective: to determine the influence of oral hygiene on peri-implant tissue health status. Methods: a descriptive, observational and cross-sectional study was carried out in the Prosthesis service at the Dental Faculty of Villa Clara between 2017 and 2019. The universe of study consisted of 45 patients with implant-supported rehabilitations; the units of analysis were the implants and the tissues surrounding the 85 fixed prostheses performed on those patients who met the inclusion criteria. Clinical and radiographic observations were used, and a form was developed as an instrument. Oral hygiene and peri-implant tissue state were evaluated as the main variables. The information obtained was compiled in a database as well as processed and subjected to independence tests (the Chi-square statistic and its associated possibility) to show the relationship among the variables. Results: the analyzed variables showed a significant relationship between oral hygiene and the peri-implant tissue health status in favour of good hygiene and healthy tissues. Conclusions: the evidenced good oral hygiene contributed to the maintenance of healthy peri-implant tissues.

Tipificación bioquímica y evaluación de la patogenicidad de aislamientos vulvovaginales del complejo Candida albicans

Introducción. Candida albicans, C. dubliniensis y C. africana forman el complejo Candida albicans. Objetivo. Identificar las características fenotípicas y patogénicas de aislamientos del complejo C. albicans conservados en una colección. Materiales y métodos. Se evaluaron 300 aislamientos identificados presuntivamente como del complejo C. albicans, utilizando CHROMagarTM Candida. Se determinó la producción del tubo germinal mediante tres métodos, se evaluó la producción de clamidosporas, se caracterizaron las colonias en agares artesanales (Rosmarinus officinalis y Nicotiana tabacum) y se utilizó MALDI-TOF como prueba de referencia para la identificación. Para detectar factores de patogenicidad, se evaluó la actividad hemolítica de los aislamientos independientes y en cocultivo con Staphylococcus aureus, la producción de enzima coagulasa y la formación de biopelículas. Resultados. El 43,7 % de los aislamientos produjo tubo germinal en caldo de medio infusión de cerebro-corazón y el 47 % generó clamidosporas. En los medios artesanales, en el 6 % de los aislamientos se obtuvieron colonias de color café en agar romero y, en el 5 %, en agar tabaco. Ninguna de las cepas hemolizó el agar sangre comercial (ni en presencia o ausencia de S. aureus), mientras que el 50 % hemolizó el agar papa dextrosa suplementado con sangre. Todos los aislamientos produjeron enzima coagulasa y la producción de biopelículas fue variable. Para la producción de tubo germinal, el método de suero humano mostró igual positividad que el de caldo de leche. Todos los aislamientos fueron identificados como C. albicans por MALDITOF. Conclusiones. Se requieren herramientas de proteómica y pruebas moleculares, o la combinación de métodos, para poder discriminar entre especies.

Introduction. Candida albicans, C. dubliniensis, and C. africana form the Candida albicans complex. Objective. To identify the phenotypic and pathogenic characteristics of isolates of the C. albicans complex preserved in a collection. Materials and methods. Three hundred presumptive strains of the C. albicans complex were evaluated using CHROMagarTM Candida. Germ tube production was determined by three methods, chlamydospores formation was assessed and colonies were characterized in artisanal agars (Rosmarinus officinalis and Nicotiana tabacum). MALDI-TOF was used as the gold standard identification test. To detect pathogenicity factors, we evaluated the hemolytic activity of each isolate and cocultured with Staphylococcus aureus, coagulase enzyme production, and biofilm formation. Results. Out of the 300 isolates, 43.7% produced germ tube in the heart-brain infusion broth and 47% of the isolates produced chlamydospores. In the artisan media, 6% of the isolates produced brown colonies on rosemary agar and 5% did so on tobacco agar. None of the strains hemolyzed the blood agar alone or cocultured with S. aureus. However, 50% of the isolates hemolyzed the potato dextrose agar supplemented with blood. All strains were coagulase producers, and biofilm production was variable. For germ tube production, the human serum method showed the same positivity as the milk broth method. All isolates were identified as C. albicans by MALDI-TOF. Conclusions. The use of proteomics, molecular tests or a combination of methods is required for species identification.

Evaluación de la formación de biopelículas en aislamientos bacterianos y fúngicos por el método semicuantitativo de microtitulación con cristal violeta y el cualitativo de agar con rojo Congo / Assessment of biofilms formation of bacterial and fungal isolates using qualitative Congo red agar and semiquantitative crystal violet microtiter methods

Introducción. El 65 % de las infecciones humanas son producidas por bacterias o levaduras, cuya capacidad de formar biopelículas las hace más resistentes a los antimicrobianos y antifúngicos. Objetivo. Determinar la capacidad de formación de biopelículas en aislamientos bacterianos y fúngicos por medio de los métodos cuantitativo de microtitulación con cristal violeta y cualitativo de cultivo en agar con rojo Congo. Materiales y métodos. Con el método cuantitativo, se utilizaron los medios de cultivo infusión cerebro-corazón, tripticasa de soya y Müeller-Hinton para aislamientos bacterianos; para levaduras, se usaron caldo infusión cerebro-corazón y Sabouraud dextrosa. Para el método cualitativo de cultivo en agar, se utilizaron los mismos medios de cultivo más una solución con 3 % de rojo Congo y 10 % de dextrosa. Cómo método de referencia, se utilizó la propuesta de Stepanovic et al. Resultados. Se evaluaron 103 aislamientos bacterianos y 108 de levaduras. No es recomendable sustituir el caldo infusión cerebro-corazón por los caldos tripticasa de soya y Müeller-Hinton en el método cuantitativo, para evaluar la formación de biopelículas en los aislamientos bacterianos. El medio Sabouraud dextrosa, en caldo y agar, puede sustituir al de infusión de cerebro-corazón para evaluar la formación de biopelículas en levaduras, tanto por el método cuantitativo como por el cualitativo. Conclusión. El estudio de las biopelículas en el laboratorio de microbiología, a partir del método cualitativo de cultivo en agar con rojo Congo, es un procedimiento sencillo, rápido y de bajo costo, que proporciona información útil para el diagnóstico y la terapéutica de infecciones persistentes causadas por bacterias y levaduras.

Introduction. Sixty-five percent of human infections are caused by bacteria or yeasts able to form biofilms. This feature makes them more resistant to antimicrobials and antifungals. Objective. To determine biofilm formation capacity of bacterial and fungal isolates by quantitative crystal violet microtiter and qualitative Congo red agar methods. Materials and methods. Brain-heart infusion, trypticase soy broth and Müeller-Hinton culture media were used in bacterial isolates for the quantitative method; brain-heart infusion broth and Sabouraud dextrose were used for yeasts. The same culture media plus 3% Congo red and 10% dextrose were used to apply the qualitative method in agar. The proposal by Stepanovic, et al. was used as a reference method. Results. We evaluated 103 bacterial isolates and 108 yeasts isolates. We did not recommend substitute brain-heart infusion broth for trypticase soy and Müeller-Hinton broths for biofilm formation assessment in bacterial isolates using the quantitative method. Sabouraud dextrose medium, both broth and agar, can replace brain-heart infusion to assess biofilm formation in yeasts, quantitatively and qualitatively. Conclusion. The study of biofilms in the microbiology laboratory, using Congo red agar qualitative method, is a simple, fast, and inexpensive procedure that provides precise information for the diagnosis and treatment of persistent infections caused by bacteria and yeasts.

Biofilme em parafusos ortopédicos prontos para uso adquiridos por meio de sistema de consiganação/comodato / Biopelícula en tornillos ortopédicos listos para uso adquiridos por medio del sistema de consignación/comodato / Biofilm on patient-ready orthopaedic screws acquired through the loaner system

Resumo Objetivo Avaliar a integridade da superfície e as condições microbiológicas de parafusos prontos para uso em bandejas ortopédicas após múltiplos processamentos. Métodos Após o processamento completo, as bandejas utilizadas em cirurgias de pequenos fragmentos, fornecidas por meio de sistema de consignação/comodato em um hospital brasileiro, foram selecionadas aleatoriamente durante quatro meses. Os parafusos mais utilizados (números 14, 16 e 18 - Grupo 1) e menos utilizados (números 10 e 38 - Grupo 2), portanto, os mais e menos expostos a agentes biológicos, químicos e físicos, foram aleatoriamente removidos e submetidos a inspeção visual (n=126), seguido de cultura bacteriana (n=6 parafusos/bandeja, 9 bandejas), teste de proteínas (n=6 parafusos/bandeja, 9 bandejas) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) (n=2 parafusos/bandeja, 9 bandejas). As culturas positivas foram submetidas a métodos automatizados de identificação bacteriana e suscetibilidade antimicrobiana. Resultados Foram detectadas ranhuras em 8,7% dos parafusos, predominantemente no Grupo 2 (8/11). Proteína residual foi detectada em 96,3%, e não houve diferença estatisticamente significativa na quantidade de proteína entre os grupos (P=0,07). Crescimento bacteriano foi identificado em 3/54 parafusos. Danos na superfície e presença de sujidade foram visualizados em todos os parafusos submetidos a MEV. Formação de biofilmes extensos foi detectada em oito parafusos, três do Grupo 1 e cinco do Grupo 2. Conclusão Recuperação de bactérias viáveis, acúmulo de biofilme e danos na superfície foram detectados nos parafusos prontos para uso. Os parafusos costumam permanecer nas bandejas cirúrgicas e serem submetidos a múltiplos processamento, sendo expostos a contaminação e danos repetidas vezes. Esses achados apontam para a necessidade de discutir e repensar a forma como esses implantes de uso único são atualmente disponibilizados para cirurgias.

Resumen Objetivo Evaluar la integridad de la superficie y las condiciones microbiológicas de tornillos listos para uso en bandejas ortopédicas después de múltiples procesamientos. Métodos Después del procesamiento completo, fueron seleccionadas aleatoriamente durante cuatro meses las bandejas utilizadas en cirugías de pequeños fragmentos, proporcionadas mediante el sistema de consignación/comodato en un hospital brasileño. Los tornillos más utilizados (números 14, 16 y 18 - Grupo 1) y menos utilizados (números 10 y 38 - Grupo 2), por lo tanto, los más y menos expuestos a agentes biológicos, químicos y físicos, fueron quitados aleatoriamente y sometidos a inspección visual (n=126), seguido de cultivo bacteriano (n=6 tornillos/bandeja, 9 bandejas), prueba de proteínas (n=6 tornillos/bandeja, 9 bandejas) y microscopía electrónica de barrido (MEB) (n=2 tornillos/bandeja, 9 bandejas). Los cultivos positivos fueron sometidos a métodos automatizados de identificación bacteriana y susceptibilidad antimicrobiana. Resultados Se detectaron ranuras en el 8,7 % de los tornillos, predominantemente en el Grupo 2 (8/11). Se detectó proteína residual en el 96,3 % y no se encontró diferencia estadísticamente significativa en la cantidad de proteína entre los grupos (P=0,07). En 3/54 tornillos se identificó crecimiento bacteriano. Se visualizaron daños en la superficie y presencia de suciedad en todos los tornillos sometidos a MEB. En ocho tornillos se detectó la formación de biopelículas, tres del Grupo 1 y cinco del Grupo 2. Conclusión Se detectó recuperación de bacterias viables, acumulación de biopelícula y daños en la superficie en los tornillos listos para uso. Los tornillos suelen permanecer en las bandejas quirúrgicas y son sometidos a múltiples procesamientos, donde están expuestos a contaminación y daños repetidas veces. Estos descubrimientos señalan la necesidad de discutir y repensar la forma como estos implantes de uso único se ponen a disposición para cirugía actualmente.

Abstract Objective Assess the surface integrity and microbiological conditions of patient-ready screws in orthopaedic trays that had been multiply reprocessed. Methods After full reprocessing, clinical trays used for small fragment surgery provided through a loaner system to a Brazilian hospital were randomly selected during four months. The most (numbers 14, 16 and 18 - Group 1) and least (numbers 10 and 38 - Group 2) frequently implanted screws, therefore, the ones estimated to be the most and least exposed to biological, chemical and physical agents, were randomly removed and subjected to visual inspection (n=126), followed by bacterial culture (n=6 screws/tray, 9 trays), protein test (n=6 screws/tray, 9 trays) and Scanning Electron Microscopy (SEM) (n=2 screws/tray, 9 trays). Positive cultures were subjected to automated bacterial identification and antimicrobial susceptibility tests. Results Grooves were detected on 8.7% screws, predominantly in Group 2 (8/11). Residual protein was detected on 96,3%, and there was no statistically significant difference in the amount of protein between the groups (P=0.07). Bacterial growth was identified in 3/54 screws. Surface damage and soil were visualized on all screws subjected to SEM. Extensive biofilms were detected on eight screws, three from Group 1 and five from Group 2. Conclusion Recovery of bacteria, biofilm accumulation and surface damage were detected on patient-ready screws. Screws frequently remain in surgical trays for multiple reprocessing; thus they are repeatedly exposed to contamination and damage. These findings point to the need to discuss and review the way these single-use implants are currently made available for surgeries.

Estandarización de un ensayo de adhesión de Escherichia coli para el cribado de agentes antibiopelículas / Standardization of an Escherichia coli adhesion assay for anti-biofilm agents screening

Introducción: Las biopelículas constituyen un factor clave en el desarrollo de enfermedades infecciosas y la resistencia a fármacos para su control. Nuevas estrategias terapéuticas incluyen productos naturales como agentes antibiopelículas. Sin embargo, la comparación de los resultados suele ser difícil debido a la falta de homogeneidad y estandarización en los métodos empleados para estudiar la formación de biopelículas in vitro. Objetivo: Estandarizar un ensayo de adhesión en microplaca de Escherichia coli para su uso en el cribado de potenciales agentes antibiopelículas. Métodos: Se utilizó el método de adherencia en microplaca y la tinción con violeta cristal. Se evaluó la influencia de condiciones experimentales como la concentración bacteriana, el medio de cultivo y el tiempo de incubación. Resultados: Se identificaron como condiciones óptimas para la formación de biopelículas: el medio Luria Bertani (LB), la concentración bacteriana a 105 UFC/mL y un tiempo de incubación de 24 h. Conclusiones: Los resultados mostraron que las condiciones de cultivo influyen en la formación de biopelículas. Se determinaron las condiciones de cultivo óptimas para la formación de biopelículas de E. coli, que podrían emplearse en futuros estudios acerca del efecto de productos naturales sobre la inhibición o destrucción de biopelículas.

Introduction: Biofilms are a key factor in the development of infectious diseases and drug resistance for their control. New therapeutic strategies include natural products as anti-biofilm agents. However, comparing results is often difficult due to the lack of homogeneity and standardization of the methods used to study biofilm formation in vitro. Objective: To standardize an Escherichia coli microplate adhesion assay for potential anti-biofilm agents screening. Methods: The microplate adhesion method and crystal violet staining were used. The influence of experimental conditions such as bacterial concentration, culture medium, and incubation time were evaluated. Results: Optimal conditions for biofilm formation included: Luria Bertani (LB) medium, bacterial concentration at 105 CFU/mL, and an incubation time of 24 hours. Conclusions: The results showed that culture conditions influence biofilm formation. Optimal culture conditions for the formation of E. coli biofilms were determined, which could be used in further studies on the effect of natural products on the inhibition or destruction of biofilms.

Antibacterial potential of essential oils against planktonic and sessile cells of Escherichia coli isolated from diarrhea cases in swine / Potencial antibacteriano de aceites esenciales contra células de Escherichia coli planctónicas y sésiles aisladas de diarrea porcina

Escherichia coli is a pathogen associated with infections in piglets in the post-weaning phase, its pathogenicity is related to the animal's susceptibility to bacterial enterotoxins. The objective of the present study was to determine the EOs activity against E. colistrain, in the form planktonic and sessile. Although the Disc-Diffusion tests to determine the Minimum Inhibitory Concentration, do not fully corroborate with the other analyzes of this study, it was noticed bacteria inhibition. The EOs were prepared at 0.4%, 0.8% and 1.0% for tests. The tested EOs were effective against E. coliplanktonic cells (p<0.05). As for the sessile cells, the most significant result was inhibition and 100% sessile cells at the concentration of 1.0% of Cymbopogon citratusEO. Although there was resistance in some treatments, the tested EOs demonstrated inhibition capacity, constituting promising alternatives for the control of E. coli, especially of planktonic cells.

Escherichia coli es un patógeno asociado con infecciones en lechones en la fase posterior al destete, su patogenicidad está relacionada con la susceptibilidad del animal a las enterotoxinas bacterianas. El objetivo del presente estudio fue determinar la actividad de contra E. coli, en la forma planctónico y sésil. Aunque las pruebas de difusión de disco para determinar la concentración inhibitoria mínima, no corroboran completamente con los otros análisis de este estudio, se observó inhibición de la bacteria. Las soluciones basadas en AE se prepararon al 0.4%, 0.8% y 1.0% para pruebas. Los AEs probados fueron efectivos contra las células planctónicas (p<0.05). En cuanto a las células sésiles, el resultado más significativo fue la inhibición y el 100% de las células sésiles a la concentración de 1,0% de Cymbopogon citratus. Aunque hubo resistencia en algunos tratamientos, los AEs probados demostraron capacidad de inhibición, constituyendo alternativas prometedoras para el control de E. coli, especialmente de células planctónicas.

Capacidad de Lactiplantibacillus plantarum LP5 para inhibir biopelículas de Campylobacter coli / Ability of Lactiplantibacillus plantarum LP5 to inhibit biofilms of Campylobacter coli

Resumen El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad inhibitoria de Lactiplantibacillus plantarum LP5 frente a Campylobacter coli en ensayos de formación de biopelículas in vitro y exclusión competitiva. La formación de biopelículas por C. coli NCTC11366, C. coli DSPV458, C. coli DSPV541 y C. coli DSPV570 fue evaluada mediante medición de DO. La capacidad inhibitoria de L. plantarum LP5 frente a C. coli fue evaluada sobre discos de vidrio, nailon y aluminio. Sobre una biopelícula de L. plantarum se adicionó C. coli para cuantificar el efecto inhibidor de L. plantarum LP5 sobre el patógeno. Las cuatro cepas de C. coli fueron clasificadas como moderadas formadoras de biopelículas. El ensayo de exclusión competitiva mostró que la formación de biopelículas de las cepas de C. coli en todos los materiales fue significativamente mayor que la formación de biopelículas de cada patógeno en presencia de biopelículas de L. plantarum LP5. Si bien es necesario realizar más pruebas para confirmar la capacidad de supervivencia de C. coli en ambientes hostiles hasta llegar al huésped, este estudio permitiría avanzar en el esclarecimiento de su comportamiento mediante la formación de biopelículas.

Abstract The objective of this study was to evaluate the inhibitory capacity of Lactiplantibacillus plantarum LP5 against Campylobacter coli in in vitro biofilm formation and competitive exclusion assays. Biofilm formation by C. coli NCTC11366, C. coli DSPV458, C. coli DSPV541 and C. coli DSPV570 was evaluated by OD measurement. The inhibitory capacity of L. plantarum LP5 against C. coli was evaluated on glass, nylon and aluminium discs, added with L. plantarum and incubated at 37°C for 72 h. C. coli was added to each washed well. The plates were incubated at 42°C for 72 h in microaerophilic conditions and the biofilms were detached for quantification. The four strains of C. coli were classified as moderate biofilm former. The competitive exclusion test showed that the biofilm formation of the C. coli strains in all materials was significantly higher than the biofilm formation of each pathogen in the presence of L. plantarum LP5 biofilms. Although it is necessary to carry out more tests to confirm the ability of C. coli to survive in hostile environments until reaching the host, this study would allow progress in the elucidation of its behaviour through the formation of biofilms.

Coumarin (2H-1-Benzopyran-2-one) act against planktonic and biofilm forms of Staphylococcus aureus, Klebsiellapneumoniae and Pseudomonas aeruginosa

SUMMARY Introduction: biofilm-related infections caused by Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa are difficult to treat and few effective pharmacological options are currently available for this purpose. In this context, coumarin (2H-1-Benzopyran-2-one) has been reported to have antibacterial and antibiofilm activity, but this potential remains poorly understood. Aim: to investigate the action of coumarin on planktonic and biofilm forms of S. aureus, K. pneumoniae and P. aeruginosa. Results: a minimum inhibitory concentration (MIC) of coumarin ranging from 256 to 1024 fig/mL was observed, with a remarkable ability to inhibit the formation of biofilms and to act on mature biofilms in concentrations close to MIC. Conclusion: coumarin has strong activity against planktonic and biofilm forms on the three species of great relevance in the clinical scenario. These results are interesting to enable a pharmacological alternative for the treatment of these infections.

Introducción: las infecciones relacionadas con la biopelícula causadas por Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae y Pseudomonas aeruginosa son difíciles de tratar y actualmente existen pocas opciones farmacológicas eficaces para este propósito. En este contexto, se ha informado que la cumarina (2H-1-Benzopiran-2-ona) tiene actividad antibacteriana y antibiofilm, pero este potencial sigue siendo poco conocido. Objetivo: investigar la acción de la cumarina sobre formas planctónicas y de biopelículas de S. aureus, K. pneumoniae y P. aeruginosa. Resultados: se observó una concentración inhibitoria mínima (CMI) de cumarina en el rango de 256 a 1024 µg/mL, con una notable capacidad para inhibir la formación de biofilms y actuar sobre biofilms maduros en concentraciones cercanas a la CMI. Conclusión: la cumarina tiene una fuerte actividad contra las formas planctónicas y biofilm sobre las tres especies de gran relevancia en el escenario clínico. Estos resultados son interesantes para habilitar una alternativa farmacológica para el tratamiento de estas infecciones.

Introdução: as infecções relacionadas ao biofilme causadas por Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa são difíceis de tratar e poucas opções farmacológicas eficazes estão disponíveis atualmente para esse propósito. Nesse contexto, foi relatado que a cumarina (2H-1-benzopirano-2-ona) tem atividade antibacteriana e antibiofilme, mas esse potencial permanece pouco conhecido. Objetivo: investigar a ação da cumarina sobre as formas planctónicas e de biofilme de S. aureus, K. pneumoniae e P. aeruginosa. Resultados: observou-se uma concentração inibitória mínima (CIM) de cumarina variando de 256 a 1024 µg/mL, com notável capacidade de inibir a formação de biofilmes e de atuar sobre biofilmes maduros em concentrações próximas à CIM. Conclusão: a cumarina possui forte atividade contra as formas planctónicas e de biofilme sobre as três espécies de grande relevância no cenário clínico. Esses resultados são interessantes para possibilitar uma alternativa farmacológica para o tratamento dessas infecções.

Efecto fotodinámico de Azul de metileno y Azul de toluidina, sobre biofilm de Streptococcus mutans y Candida albicans / Photodynamic effect of methylene blue and toluidine blue on Streptococcus mutans and Candida albicans biofilm

Objetivo: Determinar el efecto fotodinámico de azul de metileno (MB) y azul de toluidina (TBO) activadas con láser terapéutico sobre biofilms de Streptococcus mutans y Candida albicans. Material y métodos: Se analizaron 61 muestras de biopelículas, en medios de cultivo cerebro corazón (BHI) por 6 días, las muestras se dividieron en 4 grupos y se sumergieron en: grupo experimental en MB al 0,01% y TBO al 0,05%, grupo control positivo en gluconato de clorhexidina (CHX) al 0,12% y grupo control negativo en cloruro de sodio (NaCl) al 0,9%. Las muestras de MB y TBO fueron irradiadas con láser terapéutico con una longitud de onda de 660 nm, y 9 J/cm2 de potencia, cada bloque de esmalte estuvo en cultivo post irradiación. las muestras pasaron a cultivo, para la cepa S. mutans y C. albicans por separado, El método empleado fue el de diluciones seriadas para la cuantificación de UFC luego de 5 días de cultivo. Para el análisis se usó T de student y Anova de un factor. Resultados: encontrando diferencias estadísticas entre los cuatro grupos de experimentación en el crecimiento microbiano (ANOVA p<0,05), al análisis con el grupo control positivo, no hubo diferencias significativas entre MB frente al S. mutans y C. albicans, en contraste con el TBO que mostro diferencias significativas (p<0,05). Conclusión: el MB y TBO muestran en laboratorio, una disminución en el crecimiento de las cepas del biofilm, el TBO mostró mejor efecto a la reducción de crecimiento del S. mutans y C. albicans.

Objetive: To determine the photodynamic effect of methylene blue (MB) and toluidine blue (TBO) activated with therapeutic laser on Streptococcus mutans and Candida albicans biofilms. Material and methods: Sixty-one biofilm samples were analyzed in brain heart culture media (BHI) for 6 days, the samples were divided into 4 groups and immersed in: experimental group in 0.01% MB and 0.05% TBO, positive control group in 0.12% chlorhexidine gluconate (CHX) and negative control group in 0.9% sodium chloride (NaCl). The MB and TBO samples were irradiated with 2 therapeutic laser with a wavelength of 660 nm, and 9 J/cmof power, each enamel block was in post-irradiation culture. The samples were cultured separately for the S. mutansand C. albicans strains, the method used was that of serial dilutions for the quantification of CFU after 5 days of culture. For the analysis, Student's Tand Anova of one factor were used. Results: finding statistical differences between the four experimental groups in microbial growth (ANOVAp<0.05), in the analysis with the positive control group, there were no significant differences between MB versus S. mutansand C. albicans, in contrast to the TBO that showed significant differences (p<0.05). Conclusion: MB and TBO show in laboratory, a decrease in the growth of biofilm strains, TBO showed better effect in reducing the growth of S. mutansand C. albicans.

Nuevas perspectivas para el tratamiento de la infección por Helicobacter pylori / New perspectives in the treatment of Helicobacter pylori infection

La infección por Helicobacter pylori es altamente prevalente en el mundo. En Chile, esta bacteria está presente entre un 40-70% de la población y su presencia está asociada a serias complicaciones que van desde la gastritis y el desarrollo de úlceras hasta el cáncer gástrico. Este último, es uno de los carcinomas más frecuentes en nuestro país, con una tasa de mortalidad de 20 por cada 100000 habitantes. Actualmente, el principal tratamiento de erradicación de esta bacteria se basa en triterapias, que consisten en un inhibidor de la bom-ba de protones (IBP) asociado a dos antibióticos en altas dosis. Sin embargo, existe una gran resistencia de H. pylori a los antibióticos, que ha sido reportada por la literatura científica y reconocida por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Esta revisión se enfoca en identificar nuevas estrategias de tratamiento para la erradicación de H. pylori con especial interés en aquellos tratamientos que han sido evaluados contra el crecimiento de este patógeno en forma de biopelículas. Este tipo de crecimiento le confiere a H. pylori una mayor resistencia a los antibióticos. Se analizaron diferentes agentes y formulaciones que han sido reportados. Se destacan el uso de nanopartículas y compuestos naturales, así como formulaciones bioadhesivas que han mostrado disminuir la infección por H. pylori. Sin embargo, se sigue necesitando avanzar en estudios clínicos para comprobar la eficacia de nuevas formulaciones con miras a una exitosa erradicación de H. pylori.

Helicobacter pylori infection is highly prevalent worldwide. In Chile, about 40 to 70% of the population is infected with this pathogen. H. pylori infection is linked with severe complications ranging from gastritis and ulcer development to gastric carcinoma. The latter is one of the most frequent cancers in our country, with a mortality of 20 per 100000 people. The primary eradication treatment for this infection is a tritherapy comprised of a proton pump inhibitor combined with two antibiotics at high doses. However, there is a great resistance of H. pylori to antibiotics, reported by the literature and recognised by the World Health Organization (WHO). This review fo-cuses on identifying novel strategies for eradicating H. pylori with a particular interest in those treatments that have been tested against H. pylori growing in the form of biofilms. This type of microbial growth provides high resistance to antibiotics. We analysed different agents and formulations reported in the literature. Nanoparticles and natural compounds, as well bioadhesive formulations, are among the treatments showing promising results in reducing the infection. However, more clinical studies are needed to validate the efficacy of these novel treatments to successfully eradicate H. pylori.

Identification and characterization of bacterial biofilm production in clinical isolates of Staphylococcus spp. against antimicrobials / Identificação e caracterização da produção de biofilme bacteriano em isolados clínicos de Staphylococcus spp. frente aos antimicrobianos / Identificación y caracterización de la producción de biopelículas bacterianas en aislamientos clínicos de Staphylococcus spp. contra los antimicrobianos

Justification and Objectives: Circulating blood is sterile and the presence of microorganisms can be of clinical interest, especially in the hospital environment, being able to cause infectious processes and substantially increase morbidity and mortality. The objective of this work was to characterize the isolates of the genus Staphylococcus spp. from bloodstream infections as to the production of bacterial biofilm and resistance to the main antimicrobials used in clinical practice. Methods: Blood cultures were collected with an indication of positivity for bacterial growth from multiple sectors of the study hospital, which were subsequently processed to identify the bacterial genus through the use of phenotypic tests for Gram positive bacteria. The verification of the resistance profile was performed following the Kirby-Bauer disk diffusion. The identification of the production and quantification of the bacterial biofilm occurred following the protocol described by O'toole (2010). Results: The most frequent clinical isolate was Coagulase negative Staphylococci 38 (54.29%), followed by Staphylococcus aureus 32 (45.71%). Resistance to erythromycin, norfloxacin, levofloxacin and azithromycin was observed in most isolates (70%). Regarding methicillin, more MRSA (59.38%) than MR-CONS (47.37%) were isolated. The ICU was the place where the formation of the biofilm showed indicative data of greater adherence, which was associated with MRSA strains. Conclusion: The bacterial isolates associated with bloodstream infections showed high resistance to antimicrobials. The presence of MRSA and MR-CONS with strong and/or moderate biofilm production capacity represents a greater risk to the health of patients affected by infections caused by these agents.(AU)

Justificativa e Objetivos: O sangue circulante é estéril e a presença de microrganismos pode ter interesse clínico, especialmente no ambiente hospitalar, sendo capaz de causar processos infecciosos e aumentar substancialmente a morbimortalidade. O objetivo deste trabalho foi caracterizar os isolados do gênero Staphylococcus spp. oriundos de infecções de corrente sanguínea quanto à produção de biofilme bacteriano e resistência aos principais antimicrobianos utilizados na prática clínica. Métodos: Foram coletadas hemoculturas com indicação de positividade para o crescimento bacteriano de múltiplos setores do hospital de estudo, as quais posteriormente foram processadas para identificação do gênero bacteriano através da utilização de testes fenotípicos para bactérias Gram positivas. A verificação do perfil de resistência foi realizada seguindo a metodologia de disco difusão de Kirby-Bauer. A identificação da produção e quantificação do biofilme bacteriano ocorreu seguindo o protocolo descrito por O'toole (2010). Resultados: O isolado clínico mais frequente foi o Staphylococcus coagulase negativo 38 (54,29%), seguido pelo Staphylococcus aureus 32 (45,71%). A resistência à eritromicina, norfloxacina, levofloxacina e azitromicina foi observada na maioria dos isolados (70%). Em relação à meticilina, foram isolados mais Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) (59,38%) que Staphylococcus coagulase negativa resistente à meticilina (MR-CONS) (47,37%). A UTI foi o local onde a formação do biofilme apresentou dados indicativos de maior aderência, sendo essa associada às cepas MRSA. Conclusão: Os isolados bacterianos associados às infecções da corrente sanguínea apresentaram elevada resistência aos antimicrobianos. A presença de MRSA e MR-CONS com forte e/ou moderada capacidade de produção de biofilme representa maior risco à saúde dos pacientes acometidos por infecções causadas por estes agentes.(AU)

Justificación y objetivos: la sangre circulante es estéril y la presencia de microorganismos puede ser de interés clínico, especialmente en el entorno hospitalario, ya que puede causar procesos infecciosos y aumentar sustancialmente la morbilidad y la mortalidad. El objetivo de este trabajo fue caracterizar los aislamientos del género Staphylococcus spp. de infecciones del torrente sanguíneo en cuanto a la producción de biopelículas bacterianas y la resistencia a los principales antimicrobianos utilizados en la práctica clínica. Métodos: Se recogieron hemocultivos con una indicación de positividad para el crecimiento bacteriano de múltiples sectores del hospital de estudio, que posteriormente se procesaron para identificar el género bacteriano mediante el uso de pruebas fenotípicas para bacterias Gram positivas. La verificación del perfil de resistencia se realizó siguiendo la metodología de difusión de disco de Kirby-Bauer. La identificación de la producción y cuantificación de la biopelícula bacteriana se produjo siguiendo el protocolo descrito por O'toole (2010). Resultados: El aislado clínico más frecuente fue Staphylococcus coagulasa negativo 38 (54.29%), seguido de Staphylococcus aureus 32 (45.71%). Se observó resistencia a la eritromicina, norfloxacina, levofloxacina y azitromicina en la mayoría de los aislamientos (70%). Con respecto a la meticilina, se aislaron más MRSA (59,38%) que MR-CONS (47,37%). La UCI fue el lugar donde la formación de la biopelícula mostró datos indicativos de una mayor adherencia, que se asoció con las cepas de MRSA. Conclusión: los aislamientos bacterianos asociados con infecciones del torrente sanguíneo mostraron una alta resistencia a los antimicrobianos. La presencia de MRSA y MR-CONS con una capacidad de producción de biopelículas fuerte y / o moderada representa un mayor riesgo para la salud de los pacientes afectados por infecciones causadas por estos agentes.(AU)

Systematization of oral hygiene in a pediatric patient: case report / Sistematización de la higiene oral en un paciente pediátrico: reporte de caso

Oral hygiene is an important step in the control of the biofilm, a factor related to diseases such as gingivitis and tooth decay. The systematization of oral hygiene in children is a set of measures that seeks to achieve sequential learning, thus guaranteeing a better elimination of the biofilm. Objetive: To show a sequence of systematized steps in oral hygiene in a pediatric patient with a definitely positive behavior. Case Report: Six year old female patient, without relevant medical history. On clinical intraoral examination presented biofilm accumulation and swollen gums. The presumptive diagnosis was marginal gingivitis associated with biofilm, the treatment included a preventive phase with motivation and education. The control of the disease evolution was carried out with a card of Systematization Technique of Oral Hygiene, the methodology included the recording of the educational sessions using videos and photographs. Results: the adequate use of the amount of toothpaste was achieved, the integrity was improved to 100%, the brushing time increased from 24 to 120 seconds and it was possible to add tongue brushing and not rinsing after brushing within the oral hygiene routine. Conclusion: The patient was able to clean all dental surfaces, using homogeneous times for each surface, following an orderly sequence in toothbrushing, as well as to acquire knowledge regarding the amount of toothpaste to use, tongue brushing and not rinsing after toothbrushing. The systematization of oral hygiene allowed us to achieve these achievements in six sessions.

La higiene oral es un paso importante para el control de la biopelícula, la cual es un factor relacionado con enfermedades como gingivitis y caries dental. La sistematización de la higiene oral en niños es un conjunto de medidas que buscan lograr un aprendizaje secuencial, garantizando así una mejor eliminación del biofilm. Objetivo: Mostrar una secuencia de pasos sistematizados en la higiene oral en un paciente pediátrico con comportamiento definitivamente positivo. Reporte de un Caso: Paciente femenino de 6 años, sin antecedentes médicos relevantes. Al examen clínico intraoral presentó acumulación de biofilm y encías inflamadas. El diagnóstico presuntivo fue gingivitis marginal asociada a biofilm, el tratamiento incluyó una fase preventiva con motivación y educación. El control de la evolución se realizó con una ficha sobre la Técnica de Sistematización de Higiene oral, la metodología incluye el registro de las sesiones educativas usando vídeos y fotografías. Resultados: se logró el uso adecuado de la cantidad de dentífrico, se mejoró la integridad al 100%, el tiempo de cepillado pasó de 24 a 120 segundos y se consiguió integrar el cepillado de la lengua y el no enjuague post cepillado dentro de su higiene oral. Conclusión: La paciente consiguió realizar la limpieza de todas las superficies dentales, tiempos homogéneos para cada superficie, una secuencia ordenada en su cepillado dental, así como adquirir conocimientos en la cantidad de dentífrico utilizado, el cepillado de la lengua y el no enjuagarse después del cepillado dental. La sistematización de la higiene oral permitió conseguir estos logros en 6 sesiones.

Acinetobacter Baumannii Multiresistente y su Relación con la Producción de Biopelículas

Resumen Introducción: Acinetobacter baumannii es la bacteria Gram negativa asociada a infecciones intrahospitalarias por su gran facilidad de supervivencia en condiciones adversas y el desarrollo de multirresistencia a diversos antimicrobianos. Durante años se han registrado brotes hospitalarios en diferentes países asociados a esta bacteria, lo que aumentó el interés de estudio de las biopelículas y los genes involucrados en su producción, debido a que se demostró una asociación a la resistencia antibiótica. Objetivos: Establecer relacion entre la multirresistencis a los diferentes antibioticos y la formacion de biopeliculas en aislamientos de Acinetobacter baumannii. Métodos: Se estudió cepas de Acinetobacter baumannii utilizando reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real para la detección de genes bap, csuE, ompA, oxa-51 de 191 muestras, de igual manera se realizó la cuantificación de la biopelícula formada siguiendo la técnica descrita por Badmasti y Azizi. Resultados: Se realizó este estudio sobre 191 cepas de Acinetobacter baumannii provenientes de dos centros hospitalarios para la identificación de genes asociados a las biopelículas y posterior cuantificación de acuerdo a la técnica descrita por Badmasti y Azizi. Demostrando una asociación entre las biopelículas y la resistencia bacteriana de Acinetobacter baumannii. Conclusiones: Los resultados demostraron una asociación positiva entre la cantidad de biopelícula formada y la resistencia antibiótica, bacterias formadoras fuertes de biopelículas presentan mayor resistencia a los carbapenems. En cuanto a los genes, el gen ompA demostró una asociación con la cantidad de biofilm producido, bap y csuE son genes involucrados en el primer paso de formación de biofilm, pero no se asocian con la cantidad formada por la bacteria.

Abstract Introduction: Acinetobacter baumannii is the Gram-negative bacterium associated with hospital infections due to its great ease of survival in adverse conditions and the development of multi-resistance to various antimicrobials. For years, hospital outbreaks have been registered in different countries associated with this bacterium, which increased the interest in studying biofilms and the genes involved in their production, since an association with antibiotic resistance was demonstrated. Objectives: To establish a relationship between multiresistance to different antibiotics and biofilm formation in Acinetobacter baumannii isolates. Methods: acinetobacter baumannii strains were studied using real-time polymerase chain reaction (PCR) for the detection of bap, csuE, ompA, oxa-51 genes from 191 samples, in addition to the quantification of the biofilm formed following the technique described by Badmasti and Azizi. Results: this study was carried out on 191 Acinetobacter baumannii strains from two hospital centers for the identification of genes associated with biofilms and subsequent quantification according to the technique described by Badmasti and Azizi. Demonstrating an association between biofilms and Acinetobacter baumannii bacterial resistance. Conclusions: the results demonstrated a positive association between the amount of biofilm formed and antibiotic resistance. Strong biofilm-forming bacteria show greater resistance to carbapenems. Regarding the genes, the ompA gene showed an association with the amount of biofilm produced, bap and csuE are genes involved in the first step of biofilm formation, but they are not associated with the amount formed by the bacteria

Influence of EDTA and its Association with Benzalkonium Chloride on Enterococcus faecalis Adhesion to Dentin / Influencia del EDTA y su Asociación con Cloruro de Benzalconio en la Adhesión de Enterococcus faecalis a la Dentina

ABSTRACT: The aim of this in vitro study was to investigate the influence of ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) associated with the benzalkonium chloride (BAK) on the adhesion and formation of Enterococcus faecalis biofilms attached to coated dentin. Discs standard bovine dentin blocks were treated with the coating materials evaluated: Saline solution (control), 17 % EDTA, 17 % EDTA associated with 1 % BAK for 5 minutes and subsequently washed with saline solution. Afterwards, biofilms of E. faecalis (ATCC 29212) were grown on the surface of coated dentin blocks for time intervals of 1 hour and 7 days (n = 20) and were subsequently washed with phosphate-buffered saline (PBS). Bacterial viability and total biovolume were analyzed by confocal laser scanning microscopy (CLSM) using the Live/Dead technique. Nonparametric Kruskal-Wallis followed by Dunn tests were used to determine statistical differences (a = 5 %). The 17 % EDTA + 1 % BAK group showed significantly lower biovolume and bacterial viability values at the end of 1 hour (p < 0.05). After 7 days of contamination, the 17 % EDTA and 17 % EDTA + 1 % BAK groups showed similar results that differed statistically from those of the control group (p < 0.05). The saline solution group showed higher values. The use of BAK associated with EDTA on dentin blocks surfaces before exposure to contamination was able to interfere in the adhesion of E. faecalis to dentin. Also, dentin treatment by BAK associated with a chelating agent influences the secondary biofilm formation, which could have important effects on the long-term success of root canal treatment.

RESUMEN: El objetivo del estudio consistió en investigar in vitro, la influencia del ácido etilendiamino-tetraacético (EDTA) con cloruro de benzalconio (BAK) en la adhesión y formación de biopelículas de Enterococcus faecalis a la dentina. Discos de dentina bovina fueron tratadas con solución salina (control), 17 % de EDTA, 17% de EDTA asociado con 1 % de BAK durante 5 minutos y lavadas con solución salina. Las biopelículas de E. faecalis (ATCC 29212) se cultivaron sobre los discos de dentina durante intervalos de tiempo de 1 hora y 7 días (n = 20), lavados con solución salina tamponada con fosfato (PBS). La viabilidad bacteriana y el biovolumen total se analizaron mediante microscopía de barrido por láser (CLSM) utilizando la técnica Live / Dead. Se realizó prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis, seguida por Dunn con una diferencia estadística (a = 5 %). El grupo de 17 % EDTA + 1 % BAK mostró valores significativamente menores de biovolumen y viabilidad bacteriana al final de 1 hora (p < 0,05). Después de 7 días de contaminación, los grupos de 17 % EDTA y 17 % EDTA + 1 % BAK mostraron resultados similares que diferían estadísticamente del grupo control (p < 0,05). La solución salina mostró valores más altos. La asociación de BAK con EDTA antes de la contaminación interfirió en la adhesión de E. faecalis. Además, el tratamiento de la dentina por BAK asociado con EDTA influye en la formación de biopelículas secundarias, lo que podría tener efectos importantes sobre el éxito a largo plazo del tratamiento del conducto radicular.

Formación de biopelículas por Candida parapsilosis sensu stricto y su perfil de susceptibilidad en Venezuela / Biofilm-forming of Candida parapsilosis sensu stricto and its susceptibility profile in Venezuela

Una de las principales consecuencias del desarrollo de biopelículas es la resistencia a los antifúngicos. Se determinó la formación de biopelículas por Candida parapsilosis sensu stricto aisladas de sangre y su perfil de susceptibilidad. Se evaluaron 30 cepas de C. parapsilosis sensu stricto de la Red de Candidemias del Dpto. de Micología del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel-Venezuela, por el método cuantitativo en microplaca con tinción de cristal violeta y el método cualitativo en agar Sabouraud dextrosa suplementado con rojo Congo. Se utilizó el método de microdilución según el documento M-27 del Clinical and Laboratory Standards Institute. La formación de biopelículas de C. parapsilosis sensu stricto por el método cuantitativo fue de 63% y por el método cualitativo de 50%. El método cualitativo presentó valores de sensibilidad, especificidad, valores predictivos positivo y negativo de 61,1%, 23%, 78,6%, 43,8% respectivamente frente al método cuantitativo. Los aislados en forma planctónica fueron 100% sensibles a anfotericina B y caspofungina, con susceptibilidad variable a los azoles. El método cuantitativo es una técnica confiable para determinar la formación de biopelículas. El método cualitativo puede usarse como método pantalla inicial. No se encontró relación entre la susceptibilidad de las formas planctónicas y la capacidad de producción de biopelículas

One of the main consequences of biofilm development is resistance to antifungals. Biofilmforming by Candida parapsilosis sensu stricto isolated from blood and its susceptibility profile was determined. Thirty strains of C. parapsilosis sensu stricto belonging to the Candidemia Network of the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel-Venezuela, were evaluated by microplate quantitative method with violet crystal staining, and Sabouraud dextrose agar supplemented with Congo red qualitative method. The microdilution method was used to determine the susceptibility, according to the Clinical and Laboratory Standards Institute M-27 document. Biofilm formation of C. parapsilosis sensu stricto by both quantitative and qualitative method was 63% and 50%, respectively. Sensitivity, specificity, and positive and negative predictive values of the qualitative method were 61.1%, 23%, 78.6%, and 43.8% respectively, when compared with quantitative method. Planktonic isolates were 100% sensitive to amphotericin B and caspofungin, with variable susceptibility to azoles. Quantitative method is a reliable assay to determine biofilm formation, while qualitative method can be used as an initial screening assay. No relationship was found between susceptibility of planktonic isolates and the ability to biofilm-forming

Persistencia bacteriana: un fenotipo celular de importancia clínica en infecciones crónicas y recurrentes / Bacterial persistence: a cellular phenotype of clinical significance in chronic and recurrent infections

RESUMEN Los persistentes bacterianos son variantes transitorias de una población genéticamente homogénea, generada por exposición al estrés, como el que ocurre durante el tratamiento antibiótico. Es un fenómeno epigenético o un fenotipo no heredado, que puede ser llamado primera línea de defensa antes de que se adquiera la resistencia antimicrobiana. A pesar de su descubrimiento hace más de 70 años, su definición, mecanismos de formación, clasificación y morfologías adoptadas de implicancia clínica son temas de investigación actual. En el presente estudio se describe la relación de persistentes con infecciones crónicas y formación de biopelículas como factores importantes en la recaída, recidivas y mayor virulencia en las infecciones. Así mismo, se hace una revisión breve de los diversos mecanismos implicados en la persistencia bacteriana y su eliminación ineficaz por tolerancia antibiótica para terminar con la presentación de posibles estrategias de tratamiento. En conjunto, se cree que la persistencia impone una carga significativa de atención en salud pública, que se estima, provocará hasta 10 millones de víctimas al año para el 2050. Una mejor comprensión de este fenotipo es fundamental en la lucha contra las bacterias patógenas con la finalidad de obtener una mejor perspectiva en las terapias futuras.

ABSTRACT Persistent bacteria are the transient variants of a genetically homogeneous population generated by exposure to stress as in antibiotic treatment. They are an epigenetic phenomenon or a non-inherited phenotype, which may be considered as the first line of defense before developing antimicrobial resistance. Despite their discovery more than 70 years ago, their definition, mechanisms of formation, classification and morphologies of clinical implication are still current research topics. In the present research, we describe the relationship between chronic persistent infections and the formation of biofilms as important factors in recurrences, relapses and greater virulence in infections. Likewise, a brief review of the various mechanisms involved in bacterial persistence, their ineffective elimination due to antibiotic tolerance and possible treatment strategies is provided. Overall, it is believed that persistence poses a significant burden of public health care. It is estimated that up to 10 million people will be yearly affected by 2050. Thus, a better comprehension of this bacterial phenotype is essential to fight against pathogenic bacteria and improve therapeutic results in the future.

A simple and accurate method for specific quantification of biomass in mixed cultures of filamentous fungi by quantitative PCR / Un método simple y preciso para la cuantificación específica de biomasa en cultivos mixtos de hongos filamentosos por PCR cuantitativa

Abstract Production of lignocellulolytic enzymes by filamentous fungi have a great potential at industrial level due to their widespread applications. Mixed fungal cultures and particularly mixed fungal biofilms constitute a promising fermentation system for an enhanced enzyme production. However, it has not been addressed how much of this enhancement depends on the mixed biomass proportion. In this sense, the aim of this study was to develop a method to specifically and accurately quantify mixed fungal biomass. For this purpose, mixed biofilm cultures composed of Aspergillus niger and Trichoderma reesei, two filamentous fungi used industrially for cellulase production, were collected from 48 to 120 h of growth; mycelia were pulverized, and DNA was extracted for qPCR assays with specific primers for each fungus. Primers were designed from non-conserved regions of sequences of actin and β-tubulin genes of both A. niger and T. reesei. Specificity of these primers was tested in silico and experimentally. A statistically significant correlation was obtained between qPCR-calculated biomass and dry weight biomass data. By this method, it was possible to detect changes on mycelia proportions in biofilms over time, suggesting a competitive interaction between these two fungi. In conclusion, this method allows a specific and accurate quantification of mixed fungal biomass and could be also applied to different mixed culture systems for studying microbial interactions.

Resumen La producción de enzimas lignocelulolíticas por hongos filamentosos tiene un gran potencial a nivel industrial debido a sus diversas aplicaciones. Los cultivos fúngicos mixtos y particularmente las biopelículas fúngicas mixtas constituyen un sistema de fermentación prometedor para una mayor producción enzimática. Sin embargo, no se ha abordado cuánto de esta mejora depende de la proporción de biomasa mixta. En este sentido, el objetivo de este estudio fue desarrollar un método para cuantificar de forma específica y precisa la biomasa fúngica mixta. Para este propósito, se recolectaron cultivos mixtos de biopelículas de 48 a 120 h de crecimiento compuestos por Aspergillus niger y Trichoderma reesei, dos hongos filamentosos utilizados industrialmente para la producción de celulasas; el micelio se pulverizó y el ADN se extrajo para ensayos de qPCR con cebadores específicos para cada hongo. Los cebadores se diseñaron a partir de regiones no conservadas de las secuencias de los genes de actina y β-tubulina de A. niger y T. reesei. La especificidad de estos cebadores se probó in silico y experimentalmente. Se obtuvo una correlación estadísticamente significativa entre la biomasa calculada mediante qPCR y los datos de biomasa en peso seco. Mediante este método, fue posible detectar cambios en las proporciones de los micelios en las biopelículas a lo largo del tiempo, lo que sugiere una interacción competitiva entre estos dos hongos. En conclusión, este método permite una cuantificación específica y precisa de la biomasa fúngica mixta y también podría aplicarse a diferentes sistemas de cultivo mixto para estudiar interacciones microbianas.

Microbiological Water Evaluation from Biofilm Adhered to Dental Unit Waterlines / Evaluación Microbiológica del Agua de Biofilm Adherido a Líneas de Agua de la Unidad Dental

ABSTRACT: The contamination of the dental units' waterlines is a reality, which can develop individual and collective disorders. The aim of this study was to evaluate the prevalence and resistance profile of bacteria on the internal surfaces of waterlines in a dental clinic from a Dentistry school of a Brazilian university. The design was an exploratory, descriptive study with quantitative and qualitative approach. Samples (n=4) were collected for analysis at different points: the portion closest to the water reservoir of the chair, and the portion closest to the triple syringe. After collection the samples were cultured in BHI medium in an oven for 24-48 h at 37 °C. For the quantitative analysis 1 ml of each sample was used for serial dilution up to the dilution value seven. The colonies were counted after pour plate and the results expressed in UFC/cm2. The qualitative analysis was initiated with the cultivation of Agar Blood, EMB-Levine and Cetrimide Agar for 24 h, and the identification of bacteria was performed by microscopic analyses. The resistance profile was verified by classical antibiogram. The internal surfaces of unit waterlines units exhibited a mean of 2.44 x 109 CFU / cm2. Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa were identified. The resistance profile of Pseudomonas aeruginosa indicated sensitivity to all tested antibiotics. A large number of microorganisms was quantified from biofilm accumulated in the dental units' waterlines. However, they were not resistant to classic antibiogram. Better management and application of decontamination protocols for waterlines need to be applied since opportunistic infections may be associated with Pseudomonas aeruginosa.

RESUMEN: La contaminación de líneas de agua en las unidades dentarias es una realidad, generando enfermedades individuales y colectivas. El objetivo de este estudio fue evaluar la prevalencia y resistencia de las bacterias en las zonas internas de las líneas de agua de la Facultad de Odontología de una universidad brasileña. El diseño del estudio fue exploratorio, descriptivo con enfoques cuantitativos y cualitativos. Las muestras para análisis (n=4) fueron selecionadas de distintos lugares: el punto más cercano al sistema de agua del sillón odontológico y el punto más cercano a la jeringa tríplice. Las muestras obtenidas fueron cultivadas en un médio BHI por 24-48 h, en un horno a 37 ºC. Para el análisis cuantitativo, se utilizó 1 ml de cada muestra para dilución hasta el valor siete. Las colonias fueran contadas y los resultados fueron expresados en UFC/cm2. El análisis cualitativo fue iniciado con el cultivo de Agar Sangre, EBM-Levine y Agar Cetrimide por 24 h y la identificación de la bacteria fue realizada por análisis microscópicos. El perfil de resistencia fue verificado por el antibiograma clásico. Las zonas internas de las unidades de líneas de agua mostraron un promédio de 2,44 x 109 UFC/cm2. Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa fueron encontrados. El perfil de resistencia de Pseudomonas aeruginosa indicó sensibilidad a todos los antibióticos testados. Un gran número de microorganismos fue cuantificado desde la biopelícula acumulada en las líneas de agua de unidades dentales. Sin embargo, no resistieron al antibiograma clásico. Se requiere una mejor gestión y aplicación de protocolos de decontaminación en las líneas de agua debido a que las infecciones oportunistas puedan estar asociadas a Pseudomonas aeruginosa.