In vivo studies could not confirm in vitro prophylactic synergism between Moringa essential oil and Lactobacillus reuteri (MT180537) / Estudos in vivo não puderam confirmar o sinergismo profilático in vitro entre o óleo essencial de Moringa e Lactobacillus reuteri (MT180537)

Aerobic vaginitis (AV) is a recently defined vaginal recurring infection, which is treated with antibiotics. However, excessive and prolonged use of antibiotics disrupts healthy vaginal microflora and leads to the emergence of antibiotic resistance among pathogens. This situation has directed researchers to explore alternative antimicrobials. The current study describes in vitro and in vivo antimicrobial efficacy and pharmaceutical interactions between plant essential oils (EOs) and five lactic acid bacteria (LABs), isolated from the healthy vagina, against E. faecalis, one of the major etiological agents of AV. In vitro experiments confirm good antimicrobial activity of both plant EOs and cell free supernatant (CFS) from LABs. Based on high antimicrobial efficacy, Moringa essential oil (MO) was selected to determine its nature of interaction with CFS of five LAB strains. Synergism was recorded between MO and CFS of L. reuteri (MT180537). To validate in vitro findings, prophylactic responses of individual and synergistic application of MO and L. reuteri (MT180537) were evaluated in an E. faecalis (MW051601) induced AV murine model. The prophylactic efficacy was evidenced by a reduction in intensity of clinical symptoms, E. faecalis (MW051601) count per vaginal tissue along with a reduction in AV associated changes in histological markers of infection in animals receiving Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) alone or in combination. However, significant synergism between Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) could not be observed. Our data confirms the importance of in vivo experiments in deducing pharmacological interactions.

Vaginite aeróbica (VA) é uma infecção vaginal recorrente definida recentemente, que é tratada com antibióticos. No entanto, o uso excessivo e prolongado de antibióticos perturba a microflora vaginal saudável e leva ao surgimento de resistência aos antibióticos entre os patógenos. Esta situação levou os pesquisadores a explorar antimicrobianos alternativos. O presente estudo descreve a eficácia antimicrobiana in vitro e in vivo e as interações farmacêuticas entre óleos essenciais vegetais (OE) e cinco bactérias lácticas (BAL), isoladas de vagina sã, contra E. faecalis, um dos principais agentes etiológicos da AV. Os experimentos in vitro confirmam a boa atividade antimicrobiana de ambos os EOs de plantas e sobrenadante livre de células (CFS) de LABs. Com base na alta eficácia antimicrobiana, o óleo essencial de Moringa (MO) foi selecionado para determinar sua natureza de interação com o sobrenadante livre de células (CFS) de cinco cepas de LAB. Sinergismo foi registrado entre MO e CFS de L. reuteri (MT180537). Para validar os resultados in vitro, as respostas profiláticas da aplicação individual e sinérgica de MO e L. reuteri (MT180537) foram avaliadas em um modelo murino AV induzido por E. faecalis (MW051601). A eficácia profilática foi evidenciada por uma redução na intensidade dos sintomas clínicos, contagem de E. faecalis (MW051601) por tecido vaginal, juntamente com uma redução nas alterações associadas a AV nos marcadores histológicos de infecção em animais que receberam óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537) sozinho ou em combinação. No entanto, não foi possível observar sinergismo significativo entre o óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537). Nossos dados confirmam a importância dos experimentos in vivo na dedução de interações farmacológicas.

In vivo studies could not confirm in vitro prophylactic synergism between Moringa essential oil and Lactobacillus reuteri (MT180537)

Abstract Aerobic vaginitis (AV) is a recently defined vaginal recurring infection, which is treated with antibiotics. However, excessive and prolonged use of antibiotics disrupts healthy vaginal microflora and leads to the emergence of antibiotic resistance among pathogens. This situation has directed researchers to explore alternative antimicrobials. The current study describes in vitro and in vivo antimicrobial efficacy and pharmaceutical interactions between plant essential oils (EOs) and five lactic acid bacteria (LABs), isolated from the healthy vagina, against E. faecalis, one of the major etiological agents of AV. In vitro experiments confirm good antimicrobial activity of both plant EOs and cell free supernatant (CFS) from LABs. Based on high antimicrobial efficacy, Moringa essential oil (MO) was selected to determine its nature of interaction with CFS of five LAB strains. Synergism was recorded between MO and CFS of L. reuteri (MT180537). To validate in vitro findings, prophylactic responses of individual and synergistic application of MO and L. reuteri (MT180537) were evaluated in an E. faecalis (MW051601) induced AV murine model. The prophylactic efficacy was evidenced by a reduction in intensity of clinical symptoms, E. faecalis (MW051601) count per vaginal tissue along with a reduction in AV associated changes in histological markers of infection in animals receiving Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) alone or in combination. However, significant synergism between Moringa essential oil and L. reuteri (MT180537) could not be observed. Our data confirms the importance of in vivo experiments in deducing pharmacological interactions.

Resumo Vaginite aeróbica (VA) é uma infecção vaginal recorrente definida recentemente, que é tratada com antibióticos. No entanto, o uso excessivo e prolongado de antibióticos perturba a microflora vaginal saudável e leva ao surgimento de resistência aos antibióticos entre os patógenos. Esta situação levou os pesquisadores a explorar antimicrobianos alternativos. O presente estudo descreve a eficácia antimicrobiana in vitro e in vivo e as interações farmacêuticas entre óleos essenciais vegetais (OE) e cinco bactérias lácticas (BAL), isoladas de vagina sã, contra E. faecalis, um dos principais agentes etiológicos da AV. Os experimentos in vitro confirmam a boa atividade antimicrobiana de ambos os EOs de plantas e sobrenadante livre de células (CFS) de LABs. Com base na alta eficácia antimicrobiana, o óleo essencial de Moringa (MO) foi selecionado para determinar sua natureza de interação com o sobrenadante livre de células (CFS) de cinco cepas de LAB. Sinergismo foi registrado entre MO e CFS de L. reuteri (MT180537). Para validar os resultados in vitro, as respostas profiláticas da aplicação individual e sinérgica de MO e L. reuteri (MT180537) foram avaliadas em um modelo murino AV induzido por E. faecalis (MW051601). A eficácia profilática foi evidenciada por uma redução na intensidade dos sintomas clínicos, contagem de E. faecalis (MW051601) por tecido vaginal, juntamente com uma redução nas alterações associadas a AV nos marcadores histológicos de infecção em animais que receberam óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537) sozinho ou em combinação. No entanto, não foi possível observar sinergismo significativo entre o óleo essencial de Moringa e L. reuteri (MT180537). Nossos dados confirmam a importância dos experimentos in vivo na dedução de interações farmacológicas.

Salmonella entérica serovar Enteritidis biofilm lifestyle induces lower pathogenicity and reduces inflammatory response in a murine model compared to planktonic bacteria / Salmonella entérica serovar Enteritidis en biopelícula induce una menor patogenicidad y respuesta inflamatoria en un modelo murino que su contraparte planctónica

Abstract Salmonella enterica serovar Enteritidis (S. Enteritidis) is the most frequent serovar involved in human salmonellosis. It has been demonstrated that about 80% of infections are related to biofilm formation. There is scant information about the pathogenicity of S. Enteritidis and its relationship to biofilm production. In this regard, this study aimed to investigate the differential host response induced by S. Enteritidis biofilm and planktonic lifestyle. To this purpose, biofilm and planktonic bacteria were inoculated to BALB/c mice and epithelial cell culture. Survival studies revealed that biofilm is less virulent than planktonic cells. Reduced signs of intestinal inflammation and lower bacterial translocation were observed in animals inoculated with Salmonella biofilm compared to the planktonic group. Results showed that Salmonella biofilm was impaired for invasion of non-phagocytic cells and induces a lower inflammatory response in vivo and in vitro compared to that of planktonic bacteria. Taken together, the outcome of Salmonella-host interaction varies depending on the bacterial lifestyle.

Resumen Salmonella entérica serovar Enteritidis (S. Enteritidis) es la serovariedad más frecuentemente aislada en la salmonelosis humana. Se ha demostrado que alrededor del 80% de las infecciones están relacionadas con la formación de biopelículas. Sin embargo, la información disponible acerca de la patogenicidad de S. Enteritidis y su relación con la producción de biopelículas es escasa. Este trabajo tuvo como objetivo investigar la respuesta diferencial del huésped frente a S. Enteritidis en sus 2 estilos de vida: biopelícula y planctónico. Para ello, se inocularon bacterias en estado de biopelícula o planctónico en ratones BALB/c y cultivo de células epiteliales. Los estudios de supervivencia revelaron que Salmonella en biopelícula fue menos virulenta que su contraparte planctónica. Los animales inoculados con biopelículas presentaron una mayor conservación estructural del intestino y una menor translocación bacteriana que el grupo planctónico. Asimismo, Salmonella en biopelícula mostró una capacidad deficiente para invadir células no fagocíticas e indujo una menor respuesta inflamatoria in vivo e in vitro que las bacterias planctónicas. Se concluye que el resultado de la interacción Salmonella-huésped depende del estilo de vida bacteriano.

Prevalence of rickettsias in ticks (Acari: Ixodidae) collected in domestic animals of the northern region of Caldas department, Colombia / Prevalencia de rickettsias en garrapatas (Acari: Ixodidae) colectadas en animales domésticos del norte del departamento de Caldas, Colombia

ABSTRACT The northern region of the Caldas department in Colombia is considered an endemic area for murine typhus. Recent studies in patients with acute febrile disease demonstrated infection with the spotted fever group's rickettsiae due to an increase in the IgG titer by indirect immunofluorescence in paired sera obtained from these patients. The objective of the current research was to identify the species of ticks present in domestic animals in the northern region of Caldas and establish the presence of rickettsial genomic material in the collected ticks. Ticks were obtained from bovines, horses, and dogs in seven municipalities in the north of Caldas. Ticks were stored in 90 % ethanol until processing and were identified using taxonomic keys, DNA was extracted using commercial techniques, and the gltA gene was amplified by conventional chain reaction polymerase (PCR). Seven hundred thirteen ticks were obtained from 593 domestic animals. The highest infestation occurred in cattle, followed by canines and horses. Ticks found corresponded to the species Riphicephalus microplus, Dermacentor nitens, Amblyomma sp., and Riphicephalus sanguineus s.l. In none of the tick samples, Rickettsia-specific gltA gene DNA was found. It can be inferred that the ticks obtained are not a source of rickettsial infection for people in this department region, despite finding different species associated with the transmission of this disease.

RESUMEN La región norte del departamento de Caldas, Colombia es considerada como una zona endémica de tifo murino. Estudios recientes realizados en pacientes con enfermedad febril aguda, demostraron la infección con rickettsias, del grupo de las fiebres manchadas, debido al aumento en el título de IgG, por inmunofluorescencia indirecta (IFI), en sueros pareados, obtenidos de dichos pacientes. El objetivo de la investigación fue el de identificar las especies de garrapatas presentes en animales domésticos, de la región norte de Caldas y establecer la presencia de material genómico de rickettsias, en las garrapatas recolectadas. En siete municipios, se recolectaron garrapatas de bovinos, de equinos y de caninos. Las garrapatas, se almacenaron en etanol al 90 %, hasta su identificación taxonómica. Se extrajo el ADN, utilizando técnicas comerciales y se amplificó por reacción de cadena de la polimerasa (PCR) convencional el gen gltA. Se obtuvieron 713 garrapatas de 593 animales domésticos. La más alta infestación se presentó en bovinos, seguido de los caninos y equinos. Las garrapatas encontradas correspondieron a las especies Riphicephalus microplus, Dermacentor nitens, Amblyomma sp. y Riphicephalus sanguineus s.l. En ninguna de las muestras, se comprobó la presencia de ADN del gen gltA específico de Rickettsia. Se puede inferir que las garrapatas obtenidas no serían una fuente de infección rickettsial para las personas, en esta región del departamento; sin embargo, su presencia es un factor de riesgo para la adquisición de rickettsiosis asociadas con las fiebres manchadas.

Sensitization with Eustrongylides sp. (Nematoda: Dioctophymatidae) antigens induce production of specific IgG and IgE in murine model / Sensibilização com antígenos de Eustrongylides sp. (Nematoda: Dioctophymatidae) induzindo a produção de IgG e IgE em modelo murino

Abstract Fish consumption plays an important role in human diet. Hoplias malabaricus, commonly known as traíra, is a freshwater fish widely appreciated in several Brazilian states and frequently infected by Eustrongylides sp. fourth-instar larvae (L4). The aim of the present study was to evaluate allergenic potential of Eustrongylides sp. L4 crude extract (CEE). BALB/c mice were immunized intraperitoneally (IP) by 10 μg CEE with 2 mg of aluminum hydroxide on days 0 and 35. Specific IgG and IgE antibody levels were determined after immunization and cellular immunity was evaluated by assessing intradermal reaction in ear pavilion. Epicutaneous sensitization was performed in dorsal region by antigen exposure using a Finn-type chamber containing 50 μg of CEE or saline solution, followed by evaluation of specific antibody levels. IP immunization resulted in a gradual increase in IgG antibody levels and transitory IgE production. Significant increase in ear thickness was observed in cellular hypersensitivity reaction. In case of antigen exposure by epicutaneous route, CEE was able to induce meaningfully increased levels of specific IgG and IgE antibodies as well as heightened cellular immunity. Both intraperitoneal immunization and epicutaneous contact with Eustrongylides sp. larval antigens were observed for first time to be capable of inducing immunological sensitization in mice.

Resumo Consumir peixe constitui papel importante na dieta humana. Hoplias malabaricus, comumente chamado de traíra, peixe de água doce largamente apreciado no Brasil, é frequentemente infectado com larvas de quarto estágio (L4) de Eustrongylides sp. O presente estudo objetivou avaliar o potencial alergênico do Extrato Bruto de L4 de Eustrongylides sp. (EBE). Camundongos BALB/c foram imunizados intraperitonealmente (IP) por 10 μg de EBE com 2 mg de hidróxido de alumínio nos dias 0 e 35. Após imunização, determinaram-se níveis específicos de anticorpos IgG e IgE e avaliou-se a imunidade celular pela reação intradérmica no pavilhão auricular. Realizou-se sensibilização epicutânea na região dorsal pela exposição ao antígeno, utilizando-se câmara tipo Finn, contendo 50 μg de CEE ou solução salina. Após exposições, foram avaliados níveis específicos de anticorpos. Na imunização via IP, houve aumento gradual nos níveis de anticorpos IgG e produção de IgE transitória. Foi observado aumento significativo na espessura do pavilhão auricular na reação de hipersensibilidade celular. Na exposição ao antígeno pela via epicutânea, o EBE induziu aumento significante nos níveis de anticorpos IgG e IgE específicos e induziu imunidade celular. Pela primeira vez, observou-se que a imunização intraperitoneal e contato epicutâneo com antígenos larvares de Eustrongylides sp. são capazes de induzir sensibilização imunológica em camundongos.

Avaliação da técnica de vitrificação de ovários de camundongos da linhagem B6D2F1, pertencentes ao Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos - ICTB/Fiocruz-RJ / Evaluation of ovary vitrification technique from B6D2F1 strain belonging to the Institute of Biomodels Science and Technology ICTB / Fiocruz-RJ

Objetivou-se testar a vitrificação de ovários de camundongos do ICTB/Fiocruz. Inicialmente, fez-se coleta e maturação in vitro dos oócitos de ovários a fresco e vitrificados, bem como avaliação de estruturas no cultivo embrionário, pós-fertilização in vitro. Fêmeas B6D2F1 foram eutanasiadas para remoção dos ovários (n=60) e divididas em três grupos: grupo 1 (n=30 animais) - oócito de ovários vitrificados, maturados e fertilizados in vitro (120 fragmentos); grupo 2 (n=15) (controle 1) - oócitos coletados a fresco, maturados e fertilizados in vitro; e grupo 3 (n=15) (controle 2) - oócitos maturados in vivo e fertilizados in vitro. A técnica foi verificada no desenvolvimento embrionário in vitro, que foi avaliado pelo teste de qui-quadrado (BioStat 5.0). Recuperaram-se 123, 224 e 328 oócitos nos G1, G2 e G3, respectivamente. Observaram-se diferenças significativas nas taxas de clivagem às 24 horas (embriões ≥ 2 células) entre G1 (8%) e G2 (32%) (P<0,1) e G1 e G3 (49%) (P<0,05), mas não entre G2 e G3 (P>0,05). Para blastocistos, às 96 horas, os grupos G1, G2 e G3 apresentaram, respectivamente, 6%, 11% e 46%, diferindo significativamente entre eles (P<0,05). A vitrificação de ovários, a maturação oocitária e a fertilização in vitro são alternativas para a produção de embriões de camundongos in vitro.(AU)

This work aimed test ovarian vitrification of hybrid mouse from ICTB/Fiocruz. Protocol collection and oocyte in vitro maturation from fresh and vitrified ovaries was established and embryos were evaluated after fertilization. B6D2F1 females were euthanized for ovarian removal (n= 60) and divided into 3 groups: G1 (n= 30) - ovaries fragmented (n= 120), vitrified, matured and fertilized; G2 (n= 15) - in vitro fertilization of oocytes matured in vitro from fresh ovaries; G3 (n= 15) - ampulla region oocytes in vitro fertilizated. Viability was verified by thawing, oocyte in vitro maturation and fertilization. In vitro embryo development of each group was evaluated by Chi-square test (BioStat 5.0). 123, 224 and 328 oocytes were recovered from G1, G2 and G3, respectively. Significant differences were observed in cleavage rates at 24 hours (embryos with 2 cells or more) between G1 (8%) and G2 (32%) (P< 0.1) and G1 and G3 (49%) (P< 0.05) but not between G2 and G3 (P> 0.05). Blastocysts at 96 hours presented 6%, 11% and 46%, respectively for G1, G2 and G3, differing significantly (P< 0.05). Ovary vitrification, oocyte in vitro maturation and in vitro fertilization were available for the production of in vitro mouse embryos.(AU)

Evaluación de formulaciones inmunoterapéuticas experimentales en el modelo hibrido murino de Reaccion del Injerto contra el Hospedador / Evaluation of experimental immunotherapeutic formulations in the hybrid murine model of Graft-versus-Host Reaction

Introducción: La Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador es la complicación más frecuente de los Trasplantes de Células Madre Hematopoyéticas y de todos los trasplantes que contengan células inmunocompetentes alogénicas, el 100 por ciento la padecen y cerca del 30 por ciento mueren por su causa; una proporción alta de casos son esteroide-refractarios, asimismo otras medidas inmunosupresoras modernas fracasan. En los campos de la Inmunoterapia y la Vaccinología también existe una escasez preocupante de inmunomoduladores de origen biológico potentes, efectivos, seguros y de amplio espectro. Existe un modelo híbrido murino de gran utilidad metodológica para estudios experimentales. Objetivo: Evaluar dos formulaciones novedosas de origen biotecnológico, una de ellas inmunopotenciadora y otra inmunosupresora, desarrolladas como cocleatos. Material y Métodos: Mediante Microscopia Electrónica y RT-PCR se caracterizaron las formulaciones como nanopartículas y su capacidad de regular la expresión del ARNm de linfoquinas definitorias de sus perfiles, respectivamente. Empleando el modelo de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en ratón híbrido F1 (CBAxC57BL), se evaluó su carácter inmunomodulador in vivo . Resultados: Partiendo de los proteoliposomas de Neisseria meningitidis, se obtuvieron dos formulaciones en forma de cocleatos, ambas con diámetros de partícula inferior a 100nm. La Formulación 1mostró un perfil proinflamatorio con potente capacidad de aumentar el IFNγ y el TNFα y potenció el Índice de Bazo hasta 2,05 en el modelo EICH con p=0,0002. La Formulación 2 mostró un perfil supresor-regulatorio con potente capacidad de aumentar la IL-10 y el TGFβ y además de suprimir la producción de TNFα. En el modelo usado, esta formulación, suprimió el Índice de Bazo de manera dosis dependiente y con alta significación estadística. Se corroboró el conocido perfil de seguridad y ausencia de reactogenicidad de ambas formulaciones. Conclusiones: Ambas formulaciones tienen potencial aplicación en los campos de la terapia de Enfermedad del Injerto Contra el Hospedador en otras patologías y en Vaccinología. Los resultados obtenidos en el presente trabajo fundamentan la conveniencia de continuar el desarrollo farmacéutico y completar la preclínica de ambas formulaciones(AU)

Introduction: Graft-versus-host disease is the most frequent complication of Hematopoietic Stem Cell Transplants and all transplants containing allogeneic immunocompetent cells; 100 percent of patients suffer from this complication and about 30 percent die for this particular cause. A high proportion of cases are steroid-refractory; likewise, other modern immunosuppressive measures fail. In the fields of Immunotherapy and Vaccinology, there is also a worrying shortage of powerful, effective, safe and broad spectrum immunomodulators of biological origin. There is a hybrid murine model of great methodological utility for experimental studies. Objective: To evaluate two novel formulations of biotechnological origin: an immunopotentiator formulation and an immunosuppressive one, which were developed as cochleates. Material and Methods: The formulations assayed by Electron Microscopy and RT-PCR were characterized as nanoparticles and for their capacity to regulate lymphokine mRNA expression profile, respectively. The immunomodulatory character was evaluated in vivo using Graft-versus-host disease in (CBAxC57BL) F1 hybrid mice. Results: Starting from the proteoliposomes derived from Neisseria meningitides, two cochleate formulations were obtained, both with particle diameters below 100 nm. Formulation 1 showed a proinflammatory profile with potent capacity to increase IFNγ and TNFα, and potentiated the Spleen Index up to 2.05 in the GVDH model with p = 0.0002. Formulation 2 showed a suppressor/regulatory profile with potent capacity to increase IL-10 and TGFβ and suppress the production of TNFα. In the model used, this formulation suppressed the Spleen Index in a dose-dependent manner with high statistical significance. The known safety profile and absence of reactogenicity of both formulations was corroborated. Conclusions: Both formulations have potential application in the fields of GVHD therapy and other pathologies as well as in Vaccinology. The results obtained in the present work suggest the usefulness to continue with the pharmaceutical development and complete the preclinical studies of both formulations(AU)

Avaliação dos efeitos da Suplementação do Ácido Graxo ômega 3 em modelo de tumor de mama murino e mucosite induzida por 5-Fluouracil / Evaluation of the effects of Omega 3 Fatty Acid Supplementation in a model of murine breast tumor and mucositis induced by 5-Fluouracil

O ômega 3 é um ácido graxo poliinsaturado utilizado como agente terapêutico no tratamento de diversas doenças. Evidências sugerem efeito anti-inflamatório com sua utilização. A escolha do tratamento eficiente que minimize os efeitos adversos do tratamento oncológico tem sido desafiadora para a prática clínica. Dessa forma, ele seria interessante na prevenção e / ou tratamento da mucosite, uma inflamação que acomete as mucosas da boca ao ânus, decorrente da utilização de quimioterápico e radioterápico. As consequências deste agravo vão desde a perda de peso, anorexia e odinofagia, ao aumento do risco de translocação bacteriana, em virtude do aumento da permeabilidade intestinal (PI). Tais complicações podem levar à interrupção do tratamento quimioterápico até que o paciente se restabeleça. Trabalhos anteriores do nosso grupos de pesquisa demonstraram que o ômega 3 foi capaz de atenuar a perda de peso e reduzir a PI pela regulação da apoptose de células intestinais. Entretanto, possíveis efeitos da suplementação do ômega 3 no tumor não foram investigados. O presente estudo avaliou o efeito deste composto na mucosite induzida por quimioterápico em modelo de tumor de mama murino. Para tanto, camundongos Balb/c foram divididos nos grupos controle (CTL), controle tumor (CTLTU), tumor ômega 3 (TUW3), tumor 5-fluouracil (TU5FU) e tumor 5-fluouracil ômega 3 (TU5FUW3). Nos animais dos grupos com tumor foi realizada a inoculação das células tumorais (dia 1) e, uma vez que os tumores já se encontravam palpáveis (dia10), os grupos TUW3 e TU5FUW3 iniciaram a suplementação com ômega 3 pela ração por 10 dias, enquanto os demais animais receberam ração controle. Ao final desse período, os animais dos grupos TU5FU e TU5FUW3 receberam injeção intraperitoneal de 5-FU (300mg/kg) para indução da mucosite, enquanto os demais animais receberam a injeção de solução salina. Após 72 horas, os animais foram eutanasiados para coleta de dados. A suplementação com ômega 3 não foi capaz de prevenir a perda de peso em decorrência da mucosite. Entretanto, os animais do grupo TU5FUW3 apresentaram redução da PI por meio da recuperação das junções firmes ZO-1 e ocludina, além da preservação da arquitetura dos vilos. Os animais do grupo CTLTU também apresentaram aumento da PI e redução da expressão das proteínas de junção, provavelmente pela liberação de citocinas TNF-α e IL-1ß, conforme dosagem destas no baço. Nos animais suplementados com ômega 3 foi observado redução do tamanho do tumor e do número de metástases tumorais, além de redução da proliferação de células tumorais e aumento da afinidade das células tumorais ao quimioterápico, levando à apoptose destas. Este processo de citotoxicidade seletiva foi observado pela redução da toxicidade hepática. Diante desses resultados, pode-se concluir que a suplementação de ômega 3, por período de dez dias, foi capaz de atenuar os efeitos da mucosite induzida por quimioterápico, sem causar prejuízo à sua atividade antitumoral.

Omega 3 is a polyunsaturated fatty acid used as a therapeutic agent in the treatment of various diseases. It is widely accepted that its use can exert an anti-inflammatory effect. Thus, it would be interesting in the prevention and treatment of mucositis, which is described as an inflammation that affects mucosal membranes from the mouth to the anus, due to the use of chemotherapy and radiotherapy. Patients who suffer from this outcome, usually presents weight loss, anorexia and odynophagia,also there is an increased risk of bacterial translocation, due to the increase of the intestinal permeability (IP). Such complications can lead to the interruption of chemotherapy treatment until the patient is recovered. Previous work has shown that omega 3 was able to reduce weight loss and reduce IP by reducing intestinal cell apoptosis. However, the effects of omega 3 supplementation from the diet on the tumor remains unknown. This study aimed to investigate the effect of this compound on chemotherapy-induced mucositis in the murine breast tumor model. For that, BALB/ c mice were divided into the control (CTL), tumor control (CTLTU), omega 3 tumor (TUW3), 5-fluouracil tumor (TU5FU) and 5-fluouracil omega 3 tumor (TU5FUW3) groups. Tumor cells were inoculated (day 1) and, since they were already palpable (day 10), groups TUW3 and TU5FUW3 started receiving the chow supplemented with omega 3 for 10 days, while the other animals received control chow. At the end of this period, animals from groups TU5FU and TU5FUW3 received an intraperitoneal injection of 5-FU (300mg / kg) to induce mucositis, while the other animals received an injection of saline. After 72 hours, all animals were euthanized for data collection. Omega 3 supplementation was not able to prevent weight loss due to mucositis. However, animals from TU5FUW3 group showed a reduction in IP by recovering the tight-junctions ZO-1 and occludin, and by preventing the mucosal damage. Animals from CTLTU group also showed increased PI and reduced expression of tight-junction proteins, probably due to the release of cytokines TNF-α and IL-1ß, according to their dosage in the spleen. In addition, our results have demonstrated that animals supplemented with omega 3, have shown a reduction in the size of the tumor and the number of metastasis in lungs. We have found that the reduction was mediated through a reduction in the proliferation of tumor cells and also by an increased affinity of tumor cells to the chemotherapeutic drug, leading to their apoptosis. This selective cytotoxicity process leads to the reduction of liver toxicity. Given these results, we can conclude that omega 3 supplementation, for ten days, was able to attenuate the effects of chemotherapy-induced mucositis, without causing damage to its antitumor activity.

Evaluación de la capacidad patogénica de Fusarium spp. en modelos vegetal y murino / Evaluation of Fusarium spp. pathogenicity in plant and murine models

El género Fusarium es ampliamente conocido por su capacidad fitopatógena, típicamente asociada al marchitamiento vascular. Sin embargo, se ha reportado como un patógeno oportunista en pacientes inmunocompetentes e inmunocomprometidos, por lo que puede ser considerado como un microorganismo de interés en estudios de patogenicidad en diferentes hospederos. Este trabajo evaluó la capacidad patogénica de aislamientos de Fusarium spp. de diferentes orígenes en hospederos vegetales y en un hospedero animal (modelo murino). Doce aislamientos de Fusarium spp. de origen vegetal, animal superficial, humano superficial y humano sistémico fueron inoculados en plantas de tomate, gulupa y clavel, y en ratones BALB/c, inmunocompetentes e inmunosuprimidos. Las pruebas de patogenicidad en plantas no mostraron todos los síntomas asociados al marchitamiento vascular en los tres modelos vegetales, pero la colonización y la necrosis de los haces vasculares observada en todos los casos, independientemente de la especie de Fusarium y el origen del aislamiento, demostró el potencial infeccioso de Fusarium spp. en las diferentes especies de plantas. Por otro lado, las pruebas de patogenicidad en el modelo murino evidenciaron alteraciones del comportamiento. Asimismo, se observó en el modelo murino que todos los aislamientos infectaron y colonizaron diferentes órganos, independientemente de su origen, de la especie o del estado inmunitario del hospedero, pero solamente cinco (de diferente origen y correspondientes a diferentes especies) generaron mortalidad. En contraste, la prueba de inoculación superficial no evidenció lesiones ni colonización. Los resultados observados indican el potencial papel patogénico de los aislamientos de Fusarium spp. en los diferentes tipos de hospederos. Sin embargo, es necesario profundizar en estudios de factores de patogenicidad que expliquen la capacidad de este género para colonizar múltiples hospederos.

The genus Fusarium is widely recognized for its phytopathogenic capacity. However, it has been reported as an opportunistic pathogen in immunocompetent and immunocompromised patients. Thus, it can be considered a microorganism of interest in pathogenicity studies on different hosts. Therefore, this work evaluated the pathogenicity of Fusarium spp. isolates from different origins in plants and animals (murine hosts). Twelve isolates of Fusarium spp. from plants, animal superficial mycoses, and human superficial and systemic mycoses were inoculated in tomato, passion fruit and carnation plants, and in immunocompetent and immunosuppressed BALB/c mice. Pathogenicity tests in plants did not show all the symptoms associated with vascular wilt in the three plant models; however, colonization and necrosis of the vascular bundles, regardless of the species and origin of the isolates, showed the infective potential of Fusarium spp. in different plant species. Moreover, the pathogenicity tests in the murine model revealed behavioral changes. It was noteworthy that only five isolates (different origin and species) caused mortality. Additionally, it was observed that all isolates infected and colonized different organs, regardless of the species and origin of the isolates or host immune status. In contrast, the superficial inoculation test showed no evidence of epidermal injury or colonization. The observed results in plant and murine models suggest the pathogenic potential of Fusarium spp. isolates in different types of hosts. However, further studies on pathogenicity are needed to confirm the multihost capacity of this genus.

Resposta imunológica a antígenos de Hysterothylacium deardorffoverstreetorum de peixes teleósteos / Imunne response against Hysterothylacium deardorffoverestreetorum from teleost fish

Anisaquidose é uma doença provocada por parasitos da família Anisakidae e se caracteriza por manifestações gastrointestinais e alérgicas. O Anisakis simplex é o parasito mais patogênico ao homem e altamente alergênico. Porém, outros anisaquídeos também são danosos aos humanos, mas é desconhecida a imunogenicidade dessas larvas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial imunogênico do parasito Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (HD) em modelo murino. Camundongos da linhagem BALB/c foram divididos em três grupos experimentais e receberam as preparações antigênicas obtidas de larvas de HD: extrato bruto de larvas (EBH), extrato secretado/ excretado de larvas (ESH) e extrato bruto de larvas após excreção/secreção (EEH). Amostras séricas foram obtidas em diferentes dias após imunização para determinação dos níveis de anticorpos específicos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstram aumento na produção de imunoglobulina (Ig) G após a segunda imunização, com aumento progressivo após a terceira imunização. Já em relação à IgE, a reatividade foi mais tardia, demonstrando aumento progressivo após a terceira imunização. Foi avaliada a imunidade celular por meio da intradermorreação, como resultado estatisticamente significativo em relação ao controle utilizado. Este experimento é a primeira descrição da potencialidade patogênica desse parasito em mamíferos e representa um avanço no diagnóstico da anisaquidose humana.(AU)

Anisaquidosis is a disease caused by parasites of Anisakidae family and is characterized by gastrointestinal and allergic reactions. The Anisakis simplex is a more pathogenic Anisakidae to humans and is highly allergenic. However, other species of this family also have characteristics that are harmful to humans, but little is known about the immunogenicity this parasites. The objective of this study was to experimentally assess the immunogenic potential of the parasite Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (H.D) in mice. Mice of inbred BALB/c strain were divided into three groups and received three immunizations of the following antigenic preparations obtained from L3 larvae H.D: Crude larval extract of H.D (CEH) Extract secreted / excreted larvae H.D. (ESH) and crude extract of larvae after excretion / secretion (EEH). Serum samples were obtained on different days after immunization to determine the levels of circulating specific antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results show increased production of immunoglobulin (Ig) G after the second immunization with a gradual increase after the third immunization. Regarding IgE reactivity, this occurred later, demonstrating a progressive increase only after the third immunization. Cellular immunity was evaluated by intradermal, and showed statistically significant result compared to the control used. This experiment is the first description of the pathogenic potential of this parasite in mammals and represents a breakthrough in the diagnosis of human Anisakidosis.(AU)

Efeito do estresse pré-natal na regulação da inflamação alérgica pulmonar no modelo murino de asma experimental

Devido ao seu rápido crescimento, o feto é particularmente vulnerável a insultos e modificações no millieu hormonal. Este fato sugere que situações adversas experimentadas pela mãe grávida podem alterar o desenvolvimento e a saúde da prole, explicado principalmente pela permeabilidade da barreira placentária a diversos hormônios e substâncias. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do estresse pré-natal na regulação da inflamação alérgica pulmonar, empregando o modelo murino de asma experimental. Para este propósito foram utilizadas camundongas virgens da linhagem Swiss, com 50 dias de idade. Foi empregado o modelo de choque nas patas para promover o estresse pré-natal e o modelo do "metrô de Nova Efeito do estresse pré-natal na regulação da inflamação alérgica pulmonar no modelo murino de asma experimental 65 Iorque" para o estresse pós-natal. As fêmeas foram distribuídas em 4 grupos experimentais: CC: fêmeas não estressadas; CE: fêmeas estressadas pós-natalmente aos 60 dias de idade (PND60), EC: fêmeas nascidas de mães estressadas entre o dia 15 (GD15) e 18 de gestação (GD18); EE: fêmeas nascidas de mães estressadas entre o GD15 e GD18 e estressadas pós-natalmente aos PND60. A indução da inflamação alérgica pulmonar foi realizada através da sensibilização dos animais com solução de ovalbumina (OVA) 0,1 mg.Kg-1 sc para avaliação do leucograma, lavado broncoalveolar (BAL), celularidade hematopoiética medular e neuroquímica. Os experimentos foram realizados 24h após a última sessão de nebulização. O número de células do BAL foi significantemente maior nos animais do grupo EE, em relação àqueles dos grupos CC (P0.05) para os linfócitos, neutrófilos, eosinófilos e monócitos; porém, observou-se diferenças significativas (P<0.05) entre o número de bastonetes dos grupos, sendo maior nos animais do grupo CC em relação àqueles do grupo EC. O número de células hematopoiéticas da medula óssea foi significantemente (P<0.05) menor nos animais do grupo EE, em relação àqueles do grupo CC. No córtex pré-frontal, há diferenças significantes na relação Ácido Homovanílico/ Dopamina (HVA/DA) (P<0.05), sendo maior nos animais do grupo EC, em relação àqueles do grupo CE. Em conclusão, o estresse pré-natal levou a modulação de células do sistema imune (SI) dos neonatos, evidenciado após a exposição a estresse agudo pós-natal, amplificando a resposta alérgica pulmonar. Sugere-se que a maior susceptibilidade dos animais do grupo EE seja consequência de alterações induzidas pelo estresse pré-natal no eixo hipotálamo-pituitária-adrenal (HPA).

Debido a su rápido crecimiento el feto es particularmente vulnerable a los cambios en el ambiente hormonal. Esto sugiere que situaciones adversas de la madre durante la gestación pueden alterar el desarrollo y la salud de la descendencia, principalmente debido a la permeabilidad de la barrera placentaria a diversas hormonas y sustancias. El objetivo del presente trabajo fue estudiar el efecto del estrés prenatal sobre la regulación de la inflamación alérgica pulmonar, empleando el modelo murino de asma experimental. Para este propósito fueron utilizadas ratonas vírgenes de linaje suizo de 50 d de edad. Fue empleado el modelo de descargas eléctricas en las patas (Footshock) para inducir el estrés prenatal y el modelo de estrés denominado "metro de Nueva York" para el estrés posnatal. Las hembras fueron divididas en 4 grupos experimentales: CC: hembras no estresadas; CE: hembras estresadas posnatalmente a los 60 d de edad (PND60); EC: hembras nacidas de madres estresadas entre el día 15 (GD15) y 18 de gestación (GD18); EE: hembras nacidas de madres estresadas entre el GD15 y GD18 y estresadas posnatalmente al PND60. La inducción de la inflamación alérgica pulmonar fue realizada a través de la sensibilización de los animales con solución de ovoalbúmina (OVA) 0,1 mg.Kg-1 sc. para posteriormente evaluar leucograma, lavado broncoalveolar (BAL), celularidad hematopoyética medular y neuroquímica. Los experimentos fueron realizados 24 horas después de la última sesión de nebulización. El número de células del BAL fue significativamente mayor en los animales del grupo EE, en comparación con los del grupo CC (P0.05) para los linfocitos, neutrófilos, eosinófilos y monocitos; sin embargo, se observaron diferencias significativas (P<0.05) entre los grupos en el número de bastonetes, siendo mayor en los animales del grupo CC en relación al grupo EC. El número de células hematopoyéticas de la médula ósea fue significativamente menor (P<0.05) en los animales del Grupo EE, en comparación con los del grupo de CC. En la corteza prefrontal, hubo diferencias significativas en la relación Ácido Homovanílico/ Dopamina (HVA/DA) (P<0.05), siendo mayor en los animales del grupo EC, en comparación con los del grupo CE. En conclusión, el estrés prenatal produjo modulación de las células del sistema inmune (SI) de los neonatos, evidenciado después de la exposición a un estrés agudo posnatal, por la amplificación de la respuesta alérgica pulmonar. Se sugiere que la mayor susceptibilidad de los animales del grupo EE sea resultado de los cambios inducidos por el estrés prenatal en el eje hipotálamo-pituitaria-adrenal (HPA).

Due to the rapid growth of the fetus it is particularly vulnerable to insults and changes in hormonal milieu. Therefore, is suggested that adverse situations experienced by the pregnant mother can alter the development and health of offspring, mainly due to the permeability of the placental barrier to various hormones and substances. The aim of the present investigation was to study the effects of prenatal stress in the regulation of pulmonary allergic inflammation, employing the murine model of experimental asthma. For this purpose, were used virgin female mice, Swiss lineage, of 50 days old. The models used were foot shock to induce prenatally stress, and "New York subway" stress to induce postnatally stress. Females were divided into 4 groups: CC group: not stressed females; CE group: postnatally stressed females (PND60); EC: females born from stressed mothers (GD15 to GD18); EE Group: females born from stressed mothers (GD15 to GD18) (footshock) and postnatally stressed (PND60). The induction of allergic pulmonary inflammation was done through sensitization of animals with 0,1 mg.Kg-1 sc of ovalbumin (OVA) solution, to further evaluate leukogram, bronchoalveolar lavage (BAL) hematopoietic marrow cellularity and neurochemistry. The experiments were performed 24 hours after the last session of nebulization. The number of BAL cells was significantly higher in EE group animals compared with the CC group (P0.05) for lymphocytes, neutrophils, eosinophils and monocytes; however, there were significant differences (P<0.05) observed in the number of rods cells between groups, being higher in animals the CC group compared to EC group. The number of hematopoietic cells of the bone marrow was significantly lower (P<0.05) in animals of Group EE, compared with CC group. In the prefrontal cortex, there were significant differences in homovanillic acid /dopamine (HVA/DA) (P<0.05) rate, being higher in the EC group, compared to EC group. In conclusion, prenatal stress modulated the immune system (SI) cells of neonates, evidenced after exposure to a post-natal acute stress by amplification of pulmonary allergic response. It is suggested that the increased susceptibility of animals EE group is a result of changes induced by prenatal stress on hypothalamus pituitary-adrenal (HPA) axis.

Avances en las inmunoterapias para alergias alimentarias / New insights in immunotherapies for food allergies / Novas perspectivas em imunoterapias para alergias alimentares

Las enfermedades alérgicas son las inmunopatologías que con mayor prevalencia se presentan en el mundo. Pueden o no estar mediadas por anticuerpos IgE, sin embargo estas últimas son las que más intensamente se han estudiado por el riesgo que presentan para la vida del paciente. Si bien el único tratamiento que logra revertir estos mecanismos es la no exposición al alergeno, esto no siempre es posible. Por esta razón, y a partir del mayor conocimiento alcanzado del sistema inmune de mucosas junto al desarrollo de modelos animales de alergia, existe un marcado interés en la especialidad para el desarrollo de inmunoterapias que controlen y reviertan el estado de alergia. A partir de los ensayos pre-clínicos en animales y la aplicación de protocolos terapéuticos en ensayos clínicos, se han desarrollado terapias mucosales que logran inducir mecanismos de tolerancia específicos del alergeno, los cuales son capaces de revertir la sensibilización alérgica. Dado que el principal escollo siguen siendo las reacciones adversas inducidas durante el tratamiento, se requiere profundizar los estudios para desarrollar protocolos terapéuticos más seguros. En este punto la medicina traslacional encuentra un campo próspero para fortalecer las interacciones entre la ciencia básica, la aplicada y la clínica.

Allergic diseases are the most prevalent immunopathologies worldwide. Although different mechanisms -IgE-independent or IgE-dependent- can be involved in the immunopathogenesis, the latter are the most studied reactions since they can be life-threatening. Nowadays, allergen avoidance is the unique effective treatment for allergic patients. However, this is rather difficult to implement. For this reason, and based on the new insights into the mucosal immune system and the development of animal models of allergy, there is an increasing interest in developing novel therapies to control or reverse allergic disorders. Pre-clinical studies and clinical trials have been successful to prove that immunotherapies may accomplish mucosal mechanisms of allergen-specific tolerance, which are able to revoke the allergic sensitization. Since the main obstacle in these therapies still has adverse reactions induced during treatment, further studies are required to explore safe and effective therapeutic protocols. At this point, translational medicine is a flourishing field in the areas of basic science, applied science, and clinical research.

As doenças alérgicas são as imunopatologias mais prevalentes em todo o mundo. Embora possam estar mediadas ou não por anticorpos IgE, estas últimas são as reacções mais intensamente estudadas, devido ao risco que apresentam para a vida do paciente. Ainda que o único tratamento eficaz para reverter este mecanismos seja a não exposição dos pacientes ao alergeno, isto nem sempre é possível. Por este motivo, e com base nas novas perspectivas sobre o sistema imune de mucosas, junto com o desenvolvimento de modelos e para o animais de alergia, existe um interesse crescente na especialidade para o desenvolvimento de imunoterapias que controlem e revertam o estado de alergia. A partir de estudos pré-clínicos em animais e a aplicação de protocolos terapêuticos em ensaios clínico, foram desenvolvidas terapias mucosas que conseguem induzir mecanismos de tolerância específicos do alergeno, que são capazes de reverter a sensibilização alérgica. Devido a que o principal obstáculo nestas terapias continuam sendo as reações adversas induzidas durante o tratamento, é necessário realizar mais estudos para desenvolver protocolos terapêuticos mais seguros. Neste ponto, medicina translacional é um campo próspero para fortalecer as interações entre a ciência básica, a aplicada e a clínica.

Las células TC-1 implantadas invaden a las fibras musculares esqueléticas adyacentes en un modelo murino de cáncer / Implanted TC-1 cells invade neighboring skeletal muscle fibers in a cancer murine model

La línea celular TC-1 se ha utilizado en la evaluación de la inmunoterapia antitumoral. No existen reportes sobre el efecto de las células TC-1 en tejidos adyacentes cuando se implantan en ratones C57BL/6. El objetivo de este trabajo fue evaluar la interacción entre las células TC-1 implantadas y las fibras musculares adyacentes. Se emplearon 8 ratones con células TC-1 implantadas y 3 ratones sin células. Se colectó el sitio del implante de las células tumorales a 10 días, las muestras se procesaron para microscopia de luz y electrónica de transmisión. Se realizaron tinciones con HyE y tricrómico de Masson, histoquímica con PAS, e inmunohistoquímica para identificar citoqueratinas, actina específica de músculo y metaloproteinasa de la matriz-9 (MMP-9). También se comparó el diámetro de las fibras musculares en ambos grupos de estudio. En el análisis histológico se observaron masas de células TC-1 que infiltran el tejido muscular y separan a las fibras entre sí. Las fibras musculares mostraron variaciones en la intensidad de la tinción y disminución de su diámetro. Se observaron masas de células tumorales TC-1 que invaden la fibra hacia el interior y logran atravesar la lámina externa y el sarcolema que las rodea. Se observó positividad a MMP-9 en el citoplasma de las células TC-1, y en el espacio entre las células tumorales y las fibras musculares. En el análisis ultraestructural se observó fragmentación y variaciones en el grosor de la lámina externa y vesículas subsarcolemales en el sitio en donde las células TC-1 invaden las fibras.Ahí, las células TC1 emiten proyecciones de membrana similares a pseudópodos....

TC-1 cells implanted in C57BL/6 mice are a model for evaluation of anti-tumor immunotherapy. To date there are no reports on the effect of implanted TC-1 cells upon neighboring striated muscle cells. The objective of this work was to evaluate the morphology of the interaction established among the implanted cells and the striated muscle cells. The study was carried out as follows: 8 adult C57BL/6 mice received 5x104 cells IP. As a control, 3 mice received no cells. 10 days after cells injection, no signs of tumor are present yet, and the site of cells injection was collected for morphological studies. Samples were processed for light and transmission electron microscopy. Histological sections were stained with H & E, Masson trichromic method, PAS histochemistry and immunohistochemistry for cytocheratins AE1/AE3, muscle specific actin and for matrix metalloproteinase-9. Cross section diameter of muscle sections was compared among experimental and control groups. The histological evaluation showed groups of tumor cells, infiltrating the spaces among muscle fibers. Muscle fibers showed variations in the cross section diameter as well as in the staining pattern. TC-1 cells were seen very close to muscle cells, invading the lamina externa and sarcolema to finally form groups of cells located within the sarcoplasm. This finding was demonstrated by the specific immunolabel for each kind of cell. Reactivity for metalloproteinase-9 was observed within the tumor cells and in the space mediating between the tumor cells and the muscle fiber. At the ultrastructural level, variations of the thickness of lamina externa were observed, as well as interruptions of this structure. Sarcolema also showed fragmentation, and close to these sites a number of subsarcolemmal vesicles were seen. In the vicinity of the muscle fiber, TC-1 cells formed membrane projections directed towards muscle membrane...

Heparina en quemaduras de segundo grado profundo en un modelo murino / Heparin in a deep second degree burn in a murine model

Objetivo: Demostrar los efectos de la heparina tópica e intraperitoneal en la recuperación de quemaduras de segundo grado en un modelo murino. Sede: Centro Médico Nacional ''20 de Noviembre'' del ISSSTE. Diseño: Estudio experimental. Análisis estadístico: t de Student. Material y métodos: Se estudiaron tres grupos de cinco ratas cada uno, a las que se les produjo una quemadura por escaldadura de segundo grado en el dorso, del 10% de la superficie corporal. Al grupo control se le aplicaron 5 ml de solución salina en la zona quemada al día durante 30 días. Al segundo grupo se le aplicó heparina en la zona quemada y un tercer grupo recibió heparina intraperitoneal y solución salina en la quemadura. Se obtuvieron biopsias de la zona quemada, se realizaron determinaciones de fosfatasa alcalina y se tomaron fotografías en los días 0, 15 y 30 posteriores a la quemadura. Se demostró, por biopsia, el grado de la zona quemada similar en los tres grupos. Resultados: Cuando las ratas recibieron heparina, tópica o en el peritoneo, tuvieron una curación más temprana (50% más rápida) y con menos cicatrices que el grupo control. Los niveles de fosfatasa alcalina mostraron una respuesta inflamatoria mayor en el grupo control. Todas las diferencias fueron significativas P < 0.05. Conclusiones: La heparina administrada en el peritoneo o de manera tópica en grupos similares de ratas con quemaduras de segundo grado indujo cicatrización en la mitad del tiempo con menos inflamación y mejor recuperación epitelial en comparación con ratas quemadas de modo similar tratadas con solución salina sin heparina.

Objective: To demonstrate the effects of heparin topically or intraperitoneally applied on the recovery from second degree burns in a murine model. Setting: Third level health care center Centro Médico Nacional ''20 de Noviembre'', ISSSTE. Design: Experimental study. Statistical analysis: t de Student. Material and methods: We studied three groups of five rats each in which a second-degree thermal burn was produced on their back, 10% of the body surface. The control group received 5 ml of saline solution on the burned area per day during 30 days; the second group received heparin and the third group received intraperitoneally applied heparin and saline solution applied topically on the burn. A biopsy of the burned area was obtained, alkaline phosphatase was determined, and photographs were taken at days 0, 15, and 30 after causing the burn. Biopsy demonstrated a similar dermal burn degree in the three groups. Results: When rats received heparin, either topically or peritoneally, they had a faster healing (50% faster) and with less scars than the control group. Level of alkaline phosphatase revealed a higher inflammatory response in the control group. All differences were significant at P < 0.05. Conclusions: Heparin, administered either in the peritoneum or topically in similar groups of rats with second degree burns, induced wound healing in half the time with less inflammation, and better epithelial recovery than treatment with saline solution without heparin.

Efecto de la concentración de crioprotectores sobre la viabilidad post vitrificación de embriones murinos (mus musculus) / Effect of cryoprotectant concentration on the post vitrification morphological viability of murine embryos (mus musculus)

Con la finalidad de determinar la mejor solución de vitrificación (SV), usando Etilenglicol (EG), Glicerol (G) y Sucrosa (SUC), se evaluó la apariencia morfológica post vitrificación de embriones murinos (Mus musculus). Ocho mezclas diferentes de crioprotectores fueron evaluadas, con las siguientes concentraciones: SV1: 0% de crioprotectores; SV2: 50% EG; SV3: 50% G; SV4: 50% SUC; SV5: 25% EG + 25% G; SV6: 50% EG + 0,3M SUC; SV7: 50% G + 0.3M SUC y SV8: 25% EG + 25% G + 0,3M SUC. El mayor número de embriones (94,7%) con apariencia morfológica normal, fueron los equilibrados con SV5. No hubo diferencia significativa entre la SV8 (88,9%) y la SV5. Mientras que los embriones criopreservados con las soluciones restantes, presentaron viabilidad morfológica más baja (p<0,05). Estos resultados sugieren que la SV5 provee mejor tolerancia al proceso de vitrificación, observándose en los embriones la más alta viabilidad y la más baja frecuencia de anormalidades morfológicas. Estos hallazgos contribuyen de manera importante, en la selección de los crioprotectores para la vitrificación.

In order to determine the best vitrification solution (VS), using ethylene glycol (EG), glycerol (G) and sucrose (SUC), the post vitrification morphology in murine embryos (Mus musculus) was evaluated. Eight different mixtures of these chemicals, with the following concentrations: VS1: 0%; VS2: 50% EG; VS3: 50% G; VS4: 50% SUC; VS5: 25% EG + 25% G; VS6: 50% EG + 0.3M SUC; VS7: 50% G + 0.3M SUC and SV8: 25% EG + 25% G + 0.3M SUC, were used. VS5 was the solution with the highest percentage (94,7%) of embryos with normal morphology. There were no significant differences between the VS8 (88.9%) and VS5. However, embryos cryopreserved with the other solutions had a lower morphological viability (p<0.05). These results suggest that VS5 provides embryos with better tolerance to the vitrification process, because a higher viability and lower frequency of morphological abnormalities were present. These findings provide details of great importance to the selection of cryoprotectants for vitrification.

Ultrastructural analyses of platelets and fibrin networks in BALB/c mice after inhalation of spherical and rod-shaped titanium nanoparticles / Análisis ultraestructural de plaquetas y redes de fibrina en ratones BALB/c después de la inhalación de nanopartículas de titanio con forma esférica y de barra

Engineered nanoparticles are designed to perform specific functions and therefore have specific properties that could potentially be harmful. Nanoparticles such as titanium dioxide have the potential to become transparent and are therefore widely used in cosmetic products and sunscreen. Research on the toxicity of nanoparticles is of utmost importance and numerous in vitro studies have shown that some of these particles could have adverse health effects. The current study aimed to investigate the in vivo effects of two different titanium nanoparticles at two different concentrations after inhalation by experimental BALB/c mice. This was done to determine whether these particles will cause an inflammatory reaction, visible as alterations in platelet and fibrin ultrastructure. Mice were divided into five experimental groups comprising of a control group, high and low concentration groups exposed to the spherical-shaped particles, as well as high and low concentration groups exposed to the rod-shaped particles. The ultrastructure of the fibrin networks and platelet aggregates of these experimental groups were investigated and compared to that of controls. Results indicated that the fibrin networks of the exposed animals have a net-like covering over the major fibres, typical to that found in animals with inflammation. It can therefore be concluded that the nanoparticles used in this study may have the potential to cause an inflammatory reaction, affecting the haemostatic physiology.

Las nanopartículas han sido diseñadas para realizar funciones específicas, y por lo tanto, tienen propiedades específicas que podrían ser perjudiciales. Las nanopartículas, como el dióxido de titanio tienen el potencial de llegar a ser transparentes, pudiendo ser ampliamente utilizadas en productos cosméticos y protectores solares. La investigación sobre la toxicidad de las nanopartículas es de suma importancia y numerosos estudios in vitro han demostrado que algunas de estas partículas, podrían tener efectos adversos para la salud. El presente estudio tuvo como objetivo investigar los efectos in vivo de dos nanopartículas de titanio diferentes en dos concentraciones después de la inhalación experimental de ratones BALB/c. Esto se realizó para determinar si las partículas provocan una reacción inflamatoria, visible como alteraciones en la ultraestructura de plaquetas y fibrina. Los ratones se dividieron en cinco grupos experimentales, que comprende un grupo control y grupos expuestos a nanopartículas de forma esférica de alta y baja concentración, así como grupos expuestos a nanopartículas en forma de barra de alta y baja concentración. Fueron investigadas la ultraestructura de las redes de fibrina y agregados plaquetarios de estos grupos experimentales y se comparó con la de los controles. Los resultados indicaron que en los animales expuestos se observó una red de fibrina que recubría las fibras más grandes, típicas de las que se encuentran en los animales con inflamación. Por lo tanto, puede concluirse que las nanopartículas utilizadas en este estudio pueden tener el potencial de causar una reacción inflamatoria, afectando a la fisiología hemostática.

Obtención y evaluación del líquido ascítico murino hemoclasificador anti-B en las líneas de ratones Ofbalb (F1) y Balb/c / Obtainment and evaluation of the murine ascitic liquid anti-B hemo-classificatory in Ofbalb (F1) and Balb/c mice strains

La línea de ratón Balb/c ha sido utilizada tradicionalmente para la producción de líquido ascítico murino; sin embargo, actualmente se están introduciendo líneas híbridas, como la Ofbalb (F1).En el presente trabajo, se evaluó el comportamiento del hibridoma C6G4 (anti-B) expandido en ratones de la línea Balb/c y en la línea híbrida Ofbalb (F1). De cada línea se conformaron cuatro grupos, a los que se les administró por vía intraperitoneal las concentraciones celulares del inóculo: 1; 2,5; 3 y 4 x 10(6) células/0,5 mL/ratón. Los parámetros analizados fueron, el por ciento de prendimiento, el volumen y el rendimiento del líquido ascítico murino por ratón. Se demostró que con la línea Balb/c se obtienen mejores resultados para este hibridoma, en particular. El inóculo más adecuado fue el correspondiente a 2,5 x 10(6) células. La línea híbrida Ofbalb (F1) con tratamientos similares no mostró diferencias estadísticamente significativas en los parámetros considerados

The Balb/c mouse strain has been traditionally used for the production of murine ascitic fluid; however, nowadays hybrid strains are introduced including the Ofbalb (F1). The aim of present paper was to assess the behavior of C6G4 (anti-B) hybridoma scattered in mice of Balb/c strain and in the Ofbalb (F1) hybrid strain. From each strain four groups were created which received by intraperitoneal route the cell concentrations of the inoculum: 1; 2,5; 3 and 4 x 10(6) cells/0,5 mL/mouse. The analyzed parameters were the seizure percentage, the volume and the performance of murine ascitic fluid by mouse. It was demonstrated that with the Balb/c strain better results are obtained for this hybridoma in particular. The more appropriate inoculum was that corresponding to 2,5 x 106 cells. The Ofbalb (F1) hybrid strain with similar treatments not showed statistically significant differences in the analyzed parameters

Survival of vitrifi ed mouse blastocysts loaded intoglass micro-capillaries / Sobrevivencia embrionaria de blastocistos murinos vitrificados en microcapilares de vidrio / Sobrevivência embrionária de blastocistos murinos vitrificados em micro capilares de vidro

The purpose of this study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouseblastocysts loaded into glass micro-capillaries (Brand® - 5 μL). Early morning on day 4 of pregnancy,blastocysts were collected from donors, morphologically evaluated, and then allocated in three groups:Group 1 (Control): embryos were transferred into 100 μL of KSOM medium drops and in vitro culturedduring 72 h; Groups 2 and 3: embryos initially exposed to the equilibration solution (PBSm + 10% EG+ 10% PROH and 0.5% PVA) for 1 min, and then to vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20%PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. After that, blastocysts were loaded into glass micropipettes (GMP) or glassmicrocapillaries (GMC) and plunged into super-cooled liquid nitrogen (-200 °C). Embryo warming andcryoprotectant dilution were carried out into 500 μL droplets of PBSm supplemented with 0.25 M sucrosemaintained at 37 °C. After 5 min embryos were transferred to 100 mL droplets of KSOM medium andcultured in vitro for 72 h. Blastocyst expansion rates after in vitro culture were 77% (138/177) and 74%(131/175), for blastocysts vitrified in GMP and GMC, respectively. Blastocyst hatching rate (control group)was 91% (134/146), which was higher than for embryos loaded in GMP 61% (108/177) and GMC 53%(93/175). ICM number in control group embryos contained 25.7 ± 2.5 cells and did not differ from themean cell number observed in vitrified embryos loaded in GMP (24.2±2.3) or GMC (22.5±2.59). Regardingthe trophoectoderm cell number, Group 1 embryos displayed 63.1±3.0 cells, and also not differ from the cellnumbers of the embryos loaded into GMP (58.0±1.8) or GMC (58.0±.3.7). In conclusion, manufacturedGMC (Brand®) tested in this study showed same efficiency as GMP for vitrification of mouse blastocysts.

El objetivo de este estudio fue determinar las tazas de expansión y eclosión in vitro de los blastocistosmurinos vitrificados en micro-capilares de vidrio (Brand® - 5 μL). En el día 4 de preñez, los blastocistoseran colectados de las donantes, evaluados morfológicamente y localizados en tres diferentes grupos:Grupo 1 (Control): compuesto por los embriones que eran transferidos a gotas de 100 μL de medio KSOMy cultivados in vitro por un periodo de 72 h; Grupos 2 y 3: compuesto por los embriones que eran expuestosinicialmente a la solución de equilibrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min,y posteriormente a la solución de vitrificación (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por unperiodo de 30 seg. Posteriormente, los blastocistos, eran almacenados dentro de micro-pipetas de vidrio(GMP) o micro-capilares de vidrio (GMC) y sumergidos en nitrógeno líquido (-200 °C). La dilución delos crioprotectores y desvitrificación de los embriones fue realizada al colocarlos en gotas de 500 μLde PBSm suplementado con 0.25 M de sacarosa a una temperatura de 37 °C. Después de 5 minutos losembriones fueron transferidos a gotas de 100 μL de medio KSOM y cultivados in vitro por 72 h. Las tazasde expansión de los blastocistos, posteriores al cultivo fueron de 77% (138/177) y 74% (131/175), para losblastocistos vitrificados en GMP y GMC, respectivamente. Las tazas de eclosión fueron de 91% (134/146)para el grupo control, siendo mayores que para los embriones vitrificados en GMP 61% (108/177) y GMC53% (93/175). El número del índice de masa celular interna (ICM) para los embriones del grupo controlfue de 25.7 ± 2.5 células, no teniendo diferencia significativa con el número de células observado en losembriones vitrificados en GMP (24.2±2.3) ó GMC (22.5±2.59).

O objectivo de este estudo foi determinar as taxas de expansão e eclosão in vitro dos blastocitos murinosvitrificados em micro capilares de vidro (Brand® - 5 μL). No quarto dia de prenhes, os blastocitos foramcolectados das doadoras, avaliados morfologicamente e localizados em três diferentes grupos: Grupo 1(Controle): composto por os embriões que foram transferidos a gotas de 100 μL de KSOM e cultivados invitro por um período de 72 h; Grupos 2 e 3: composto por os embriões que foram expostos inicialmente ásolução de equilíbrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH e 0.5% PVA) por 1 min, e posteriormente á soluçãode vitrificação (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por um período de 30 seg. Posteriormente,os blastocistos, foram armazenados dentro de micro pipetas de vidro (GMP) ou micro capilares de vidro(GMC) e submergidos em nitrogénio líquido super-resfriado (-200°C). A diluição dos crioprotetores edesvitrificação dos embriões foi realizada ao colocar-lhos em gotas de 500 μL de PBSm suplementadocom 0.25 M de sacarose a uma temperatura de 37 °C. Depois de 5 minutos, os embriões foram transferidosa gotas de 100 μL de KSOM e cultivados in vitro por 72 h. As taxas de expansão dos blastocistos, posterioresao cultivo foram de 77% (138/177) e 74% (131/175), para os blastocistos vitrificados em GMP e GMC,respectivamente. As taxas de eclosão foram de 91% (134/146) para o grupo controle, e foram maioresos embriões vitrificados em GMP 61% (108/177) e GMC 53% (93/175). O número do índice de massacelular interna (ICM) para os embriões do grupo controle foi de 25.7 ± 2.5 células, não havendo diferenciasignificativa com o número de células observado em embriões vitrificados em GMP (24.2±2.3) ou GMC(22.5±2.59). Alem do mais, as células do trofoectodermo, no grupo controle apresentaram 63.1±3.0células, no sendo diferente às células dos embriões vitrificados em GMP (58.0±1.8) ou GMC (58.0±.3.7).

Comportamento biológico de Leishmania (L. ) amazonensis isolada de um gato doméstico (Felis catus) de Mato Grosso do Sul, Brasil / Biological behavior of Leishmania (L. ) amazonensis isolated from a cat (Felis catus) from Mato Grosso do Sul State, Brazil

Embora os principais reservatórios mamíferos de Leishmania descritos nas Américas sejam roedores, gambás, endentados, equinos, caninos e primatas, tem-se discutido o papel do gato como hospedeiro de Leishmania em razão do encontro de felinos infectados nos últimos anos. Este trabalho teve como objetivo estudar o comportamento histopatológico das lesões características de leishmaniose cutânea em camundongos infectados, com uma amostra de Leishmania amazonensis isolada de um gato em Ribas do Rio Pardo, Mato Grosso do Sul, Brasil. A avaliação histopatológica foi realizada de acordo com a intensidade e a composição do infiltrado inflamatório e a quantidade de parasitos. O estudo mostrou um elevado grau de parasitismo cutâneo na pata 20 dias após a infecção dos camundongos, demonstrando a elevada e rápida infectividade da amostra. Associado à infecção, foi observado um infiltrado inflamatório linfo-histiocitário, eosinofílico intenso e difuso e necrose moderada e difusa. É importante salientar que, no gato de origem, não foram detectadas doenças com características imunossupressoras. Não se verificou a ocorrência de visceralização, uma vez que não foram observados parasitos no fígado e no baço. Apesar disso, constatou-se reação inflamatória focal e perivascular no fígado.

Even though the main mammalian reservoirs of Leishmania described in the Americas are rodents, opossums, horses, canines, and primates, the role of the cat as a host of Leishmania has also been discussed. This work was performed in order to study the histopathology of cutaneous lesions of mice infected with Leishmania(L.) amazonensis isolated from a cat in Ribas do Rio Pardo, Mato Grosso do Sul,Brazil. The histopathological analysis comprised an assessment of the intensity and composition of the inflammatory infiltrate, as well as parasite load. Mice exhibited a high degree of cutaneous parasitism in the paw, at 20 days post infection,demonstrating the high and rapid infectivity of the sample isolated from the cat. An intense and diffuse lymphohistiocytic, eosinophilic inflammatory infiltrate anda diffuse, moderate necrosis were observed at the site of infection. It is important to note that the original cat presented no sign of imunosuppressive disease. The occurrence of visceralization was not observed, since no parasites were found in the liver or spleen 60 days after infection. Nonetheless, the liver presented focal and perivascular inflammatory reactions.

Fetuin: a tool to study the block to polyspermy / Fetuina: um instrumento para estudar o bloqueio da polispermia

The effect of fetuin, an a1-glycoprotein that has protease inhibitor activity, on the biock to potyspermy was determined. Cumulus-oocyte complexes from eCG primed mice were matured in vitro in the presence of 0, 0.01, 0.1, l and 10mg/ml of fetuin in modifica TCM 199. Both in vivo and in vitro matured oocytes were fertilized in the presence of fetuin and incubated for 6 and 24h. Fetuin present in a concentration of 1 mg/ml in the ferlilization but not in the maturation medium was able to induce polyspermy in 52.4 percent of the eggs. There was a positive relationship between concentration of fetuin in the fertilization medium and the proportion of polyspermic eggs (p<0.05). A significant interaclion between 0.1 and l mg/ml of fetuin during maturation and fertilization was observed (p<0.05). The results of these experiments demonstrate the inhibition of the block to polyspermy using a protease inhibitor during the fertilization.

No presente experimento, foi determinado o efeito da fetuina, uma a1-glicoproteina com capacidade de inibir protease, no bloqueio da polispermia. Complexos cumulus-oócitos de murideos superovulados com eCG foram maturados in vitro na presença de 0, 0,01. 0,1, lê Idmg/ml de fetuina em TCM 199 modificado. Oócitos maturados in vivo e in vitro foram fecundados na presença de fetuina e incubados por 6 e 24 horas. Fetuina presente em uma concentração de 1 mg/ml durante a fecundação. mas não no meio de maturação, foi capaz de induzir polispermia em 52,5 por cento dos óvulos. Houve uma relação positiva entre u concentração de fetuina no meio de fecundação e a percentagem de óvulos polispérmicos (p<0.05). Uma interação significativa entre 0,1 e l,0mg/ml de fetuina durante a maturação e fecundação foi observada (p<0.05). Os resultados destes experimentos demonstram a inibição do bloqueio da polispermia utilizando um inibidor de protease durante a fecundação.