Fluconazole levels in serum and cerebrospinal fluid according to daily dosage in patients with cryptococcosis and other fungal infections

ABSTRACT Fluconazole is extensively used for the treatment of candidiasis and cryptococcosis. Among other factors, successful treatment is related to appropriate fluconazole levels in blood and cerebrospinal fluid. In the present study, fluconazole levels were determined in 15 patients, 14 of whom had AIDS and 13 had neurocryptococcosis. The only selection criterion was treatment with fluconazole, which was performed with a generic or similar form of the drug. Fluconazole level was determined by high performance liquid chromatography and the susceptibility profile of Cryptococcus spp. isolated from the patients was assessed by broth microdilution. Blood and cerebrospinal fluid fluconazole levels were found to be related to the fluconazole daily dose, and exceeded the minimum inhibitory concentration of this antifungal for the Cryptococcus spp. isolates. A good correlation was observed between serum and cerebrospinal fluid drug concentration. In conclusion, treatment with non-original fluconazole under usual medical practice conditions results in appropriate blood and cerebrospinal fluid levels of the drug for inhibiting Cryptococcus spp. susceptible to this antifungal drug. The relatively common failures of neurocryptococcosis treatment appear not to be due to insufficient fluconazole levels in the cerebrospinal fluid, especially with the use of daily doses of 400-800 mg.

Diagnóstico de Cryptococcus neoformans mediante la PCR- RFLP en el líquido cefalorraquídeo (LCR) en pacientes hospitalizados en el sur de Brasil / Cryptococcus neoformans diagnosis using PCR-RFLP on cerebrospinal fluid (CSF) of hospitalized patients in southern Brazil

Introducción: Cryptococcus neoformans es un hongo levaduriforme encapsulado, de distribución mundial, principalmente en regiones tropicales, causando infecciones en individuos inmunocomprometidos, sobre todo en los infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV). La capacidad de infección de este hongo es variable, pudiendo citar la facultativa patogenicidad, cápsula con actividad fagocitaria y producción de melanina como antioxidante. El objetivo de este trabajo fue evaluar el uso de la PCR/ RFLP para la detección e identificación de C. neoformans directamente del líquido cefalorraquídeo (LCR) de pacientes ingresados en un hospital público de la ciudad de Lages, Estado de Santa Catarina, sur de Brasil, comparando el resultado con la tinción específica para el hongo y el crecimiento en medio de cultivo. Métodos: Las muestras fueran directamente teñidas con tinta china para observar la cápsula, bien como después sembladas en medio de cultivo (agar dextrosa Sabouraud y agar de Níger) para crecimiento fúngico; también se hizo la extracción del ADN con fenol-cloroformo. La técnica fue utilizada para amplificación del gen URA5 mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y después con las enzimas de restricción HhaI y Sau96I para genotipaje mediante la PCR-RFLP. Resultados: En dos muestras fueran aislados C. neoformans con la tinción china y amplificados en la PCR, en las cuales fueran identificados como var. grubii. Conclusión: El serotipo A var. grubii es lo más aislado en la criptococosis humana, principalmente en pacientes HIV, pero se desconoce la preferencia de este serotipo por este grupo de enfermos. (AU)

Introduction: Cryptococcus neoformans is an encapsulated yeast with worldwide circulation, predominantly in tropical regions, causing infections in immunocompromised individuals, particularly those infected with human immunodeficiency virus (HIV). The virulence of this fungus is variable, and it should be mentioned the facultative pathogenicity, capsule with anti-phagocytic activity, and antioxidant melanin production. The aim of this study was to evaluate the use of polymerase chain reaction (PCR)/ restriction fragment length polymorphism (RFLP) for detection and identification of C. neoformans directly from the cerebrospinal fluid (CSF) of patients admitted to a public hospital with suspected meningitis and/or meningoencephalitis in the city of Lages, Santa Catarina, southern Brazil. Results were compared using Chinese ink and growth media. Methods: The samples were submitted to direct examination with Chinese ink for capsule observation, then to growth on culture media (Sabouraud Agar and Niger), with subsequent DNA extraction with phenol-chloroform. PCR was the technique used for amplification of URA5 gene, and then restriction enzymes HhaI and Sau96I were used for genotyping by PCR-RFLP. Results: In two samples, C. neoformans were isolated by Chinese ink and amplified by PCR. They were identified as serotype var. grubii. Conclusion: C. neoformans var. grubii is the most commonly isolated in human cryptococcosis, mainly in HIV patients. However, the preference of this serotype for this group of patients is unknown. (AU)

Líquido cefalorraquídeo en pacientes con criptococosis asociada al SIDA / CSF in patients with AIDS associated cryptococcosis

Se analizaron retrospectivamente los líquidos céfalorraquídeos (LCR) de 44 pacientes con criptococosis asociada al SIDA, internados en la Sala XI del Hospital Muñiz, entre enero de 2000 y diciembre de 2004. Se tuvieron en cuenta en cada caso las características físico-químicas, citológicas y micológicas de los LCR obtenidos por punción lumbar al momento de la admisión. La microscopia con tinta china fue positiva en 38 (90.5%) de 42 pacientes con ese dato disponible. Los 6 pacientes restantes se diagnosticaron por cultivos y/o determinación de antígeno de Cryptococcus neoformans. En el examen físico, 29 (69%) de 42 muestras disponibles, presentaron aspecto límpido y las 13 restantes fueron hemorrágicas (n=3), opalescentes (n=6), xantocrómicas (n=3) o turbias (n=1). Del análisis químico, se obtuvo para la proteinorraquia una mediana de 0,7 g/L (rango 0,1-3,5), de 38 mg/dL (rango 12-75) para la glucorraquia y de 127 meq/L (rango 130-143) para la clorurorraquia. La determinación del antígeno capsular, disponible para 7 muestras de LCR y sangre, mostró una mediana de 1/1.000, con valores más elevados en sangre. Las características del LCR de los pacientes examinados con criptococosis asociada al SIDA no revelaron, al menos en los parámetros evaluados, alteraciones diferentes a las mencionadas en la literatura.

Cerebrospinal fluids (CSF) of 44 patients with cryptococcosis associated with Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS), treated in the Ward XI of the Muñiz Hospital from January 2000 to December 2004, were retrospectively analyzed. The physical, chemical, cytological and mycological characteristics of CSF obtained by lumbar puncture at the moment of admission were taken into account in each case. India ink microscopy was positive in 38 (90.5%) out of 42 patients and the remainning 6 patients were diagnos- ed by cultures and/or determination of capsular antigen of Cryptococcus neoformans. At physical examination, 29 (69%) out of 42 samples showed a limpid aspect and the remaining 13 were hemorrhagic (n=3), opalescent (n=6), xanthochromic (n=3) or turbid (n=1). Chemically, the median of proteinorraquia was 0.7 g/L (range 0.1-3.5 g/L), 38 g/L (range 12-75 g/L) for glycorrhachia and 127 meq/L (range 130-143 mEq/L) for clorurorrachia. The capsular antigen of Cryptococcus neoformans, available for 7 CSF and blood samples, showed a median of 1/1.000 in both, with higher values in blood than in CSF. The CSF of patients with AIDS associated cryptococcosis evaluated in the present study did not reveal important differences, at least in the evaluated parameters, with respect to those cited in the literature.

Cerebrospinal fluid profiles in acquired immunodeficiency syndrome with and without neurocryptococcosis

A criptococose e uma das infeccoes fungicas mais comuns do sistema nervoso central (SNC) em pacientes com Sindrome da Imunodeficiencia Adquirida (SIDA), sendo meningoencefalite ou meningite manifestacoes frequentemente observadas. Apesar disso, poucos sao os estudos sistematicos sobre a composicao do liquido cefalo-raquidiano (LCR) de pacientes com SIDA e neurocriptococose. No presente estudo, foram analisadas amostras de LCR de 114 pacientes soropositivos para HIV, com queixa clinica sugestiva de envolvimento do SNC, sendo 32 com neurocriptococose (Grupo 1) e 82 sem doenca neurologica identificada (Grupo 2). Considerando os resultados citologicos e bioquimicos, dois perfis liquoricos foram observados...

Estudo comparativo do LCR de pacientes com neurocriptococose sem AIDS e com AIDS

Ate a decada de 80, antes do surgimento da AIDS, a criptococose era relativamente rara. Verificou-se que esta doenca afeta muito frequentemente os pacientes com AIDS e pode ser a primeira manifestacao desta sindrome. O objetivo deste trabalho e o de comparar o resultado dos exames das amostras de LCR inicial na meningencefalite por criptococo entre pacientes com e sem AIDS. Este trabalho e baseado no estudo de 41 pacientes com neurocriptococose sem AIDS e de 23 pacientes com neurocriptococose e AIDS. Este estudo permitiu verificar que a reacao inflamatoria, no sistema nervoso, quando presente, foi de menor intensidade nos pacientes com AIDS; a reacao inflamatoria esteve presente em todos os pacientes sem AIDS e ausente em 21,7 por cento dos pacientes com AIDS...

Neurocriptococose por Cryptococcus neoformans näo capsulado / Neurocryptococcosis due to non capsulated Cryptococcus neoformans

Os autores registram um caso de neurocriptococose em paciente HIV-positivo, por Cryptococcus neofarmans acapsulado ou deficiente em cápsula. O quadro neurológico era de meningoencefalite subaguda, compatível ao diagnóstico de neurotuberculose, pelo exame do líquido cefalorraqueano (LCR). Estruturas leveduriformes foram encontradas no interior de macrófagos, ao exame citomorfológico do LCR. Cultivo do sedimento do LCR revelou a presença de Cryptococcus neoformans näo capsulado (identificaçäo bioquímica). A inoculaçäo da amostra em camundongo, por via intraperitoneal, permitiu a produçäo de cápsula que desaparecia em cultivos. Foi estudada a micromorfologia do fungo à microscopia eletrônica de varredura. A evoluçäo foi favorável com o emprego da anfotericina B associada a 5-fluoreocitosina. Näo foi caracterizada a variedade de Criptococcus neoformans agente do processo

Criptococosis del sistema nerviosos central. Estudio de 32 casos 1975-1991

Este es el segundo estudio sobre criptococosis del sistema nervioso central (SNC) realizado en el Centro Hospitalario San Juan de Dios de Bogotá; corresponde al período 1975 -1991 y comprende 32 casos. LLama la atención en este período el aumento de la referencia de esta enfermedad en esta institución en los últimos tres años y su asociación con el SIDA (cinco casos). Los principales síntomas y signos observados fueron : cefale (26/32), alteraciones de conciencia (23/32), náuseas y vómito (19/32), signos meníngeos (18/32), fiebre (14/32) y papiledema (15/32). E diagnóstico se confirmó por uno a varios de los siguientes estudios : examen directo del LCR (tinta china) positivo en 75 por ciento, cultivo positivo del LCR en 96 por ciento, aglutinación de látex positiva en LCR en 90 por ciento, aglutinación de látex positiva en suero en 72 por ciento y hallazgos histopatológicos demostrativos de la criptococosis a nivel del SNC en nueve casos de autopsia. Se analizan la alta mortalidad (21/32 casos) y las dificultades del tratamiento.

CSF in 85 patients with AIDS and CNS cryptococcosis

Foi estudado o LCR de 85 pacientes com AIDS e criptococose do SNC. O diagnóstico clínico e imunológico de AIDS foi previamente estabelecido em todos os casos. Os resultados foram comparado aos de grupo de 50 pacientes com neurocriptococose porém sem AIDS (grupo näo-AIDS). Neste grupo 22 pacientes eram imunossuprimidos após transplante renal. Nos pacientes do grupo AIDS predominavam no LCR: detecçäo da levedura no exame direto (câmara de Fuchs-Rosenthal de contagem de células), culturas de levedura positivas e aumento do teor de globulinas gama. No grupo näo-AIDS predominavam: pleocitose, presença de polinucleares neutrófilos e aumento da concentraçäo protética total. As diferenças encontrdas entre os dois grupos säo discutidas, salientando-se as modificaçöes imunes induzidas no SNC/LCR pelo HIV. Conclui-se que na neurocriptococose em pacientes com AIDS o LCR evidenciou mais a infecçäo pelo fungo que a resposta inflamatória à infecçäo. Esta última predominou no LCR de pacientes do grupo neurocriptococose näo-AIDS

Deteccion de antigeno del polisacarido capsular de Cryptococcus neoformans en pacientes con SIDA y neurocriptococosis en Sao Paulo, Brasil / Detection of capsular polysaccharide antigen of Cryptococcus neoformans in patients with AIDS and neurocryptococcosis in Sao Paulo, Brazil

Antigeno del polisacarido capsular (AgPC) de Cryptococcus neoformans fue detectado por la tecnica de aglutinacion de latex (AL) en LCR y suero de pacientes con Sindrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA) y primer episodio de neurocriptococosis, usando como patron el examen micologico (examen directo y cultivo) de LCR. Se obtuvo una sensibilidad de 100 por ciento de AL para detectar AgPC de C. neoformans, el cual por su rapidez permite tratamiento especifico precoz. Titulos iniciales de AgPC de la levadura en esos pacientes pueden ser>1.000.000, pareciendo que cuando esos titulos estan presentes en suero, se relacionan con mortalidad durante el tratamiento. En los pacientes que sobrevivieron se observo que el examen micologico directo y AgPC de C. neoformans, en LCR y suero, permanecen positivos aun despues de tratamiento y mejoria clinica del paciente.

Criptococosis humana producida por una variante puntiforme de cryptococcus neoformans / Cryptococcosis human produced for an variant punctiform of cryptococcus neoformans

Se estudiaron la patogenicidad y la susceptibilidad antifúngica "in vitro" e "in vivo" de una cepa puntiforme de Cryptococcus neoformans var. neoformans, aislada del LCR de un paciente parkinsoniano.Sembrado el material en los medios habituales, se observó desarrollo, tras 20 días de incubación, de colonias pequeñas, de menos de 1mm de diámetro. No se comprobaron diferencias significativas en la patogenicidad de esta cepa con respecto a otra utilizada como control. Si bien la CIM para la anfotericina B fue elevada, esta resistencia no fue evidenciada en el modelo experimental del ratón

Método fluorescente (diacetato de fluoresceina e brometo de etidio) para o estudo da viabilidade de Cryptococcus neoformans em líquor / Fluorescent method (fluorescein diacetate and ethidium bromide) to study the viability of Criptococcus neoformans in liquor

Padronizou-se método de fluorescência (soluçäo de diacetato de fluoresccína DF e brometo de etídio BE) para análise de viabilidade de células fúngicas, em 40 amostras de líquor, provenientes de casos comprovados de neurocriptococose. A utilizaçäo de soluçäo aquosa de saponina a 0,3% eliminou fluorescências interferentes emitidas por hemácias e leucócitos. Após o processamento dos materiais biológicos, foram retiradas alíquotas de 0,1ml das supensöes obtidas e misturadas a volumes iguais da soluçäo DF-BE preparada pouco antes do uso. O tempo de coloraçäo ideal foi de 30 minutos, resultando perfeita direnciaçäo entre microrganismos viáveis (fluorescência verde) e näo viáveis (fluorescência vermelha)

Criptococosis del sistema nervioso central en el Instituto Nacional de Pediatría / Cryptococcosis of the central nervous system at the Instituto Nacional de Pediatria

Se revisaron los expedientes clínicos de 12 niños con cultivo de LCR positivo a Criptococcus neoformans. Los signos y síntomas principales fueron cefalea, vómito e irritabilidad. Las alteraciones de la personalidad estuvieron presentes en niños de más de 7 años. Ni los valores de examen citoquímico del LCR ni la biometría hemática mostraron características alguna diferencial de infección bacteriana o viral. En 7 de los 12 niños hubo alteraciones inmunológicas compatibles con la respuesta al tratamiento que estaban recibiendo; los otros 5 no tuvieron la respuesta inmune alterada. Se sugiere que en niños mayores de 7 años con trastornos de la personalidad acompañados de irritabilidad, vómitos y cefalea se investigue la posibilidad de infección por criptococo, diferenciando la variedad ya que se relacionan a la capacidad de producir infección

Criptococosis: diagnostico por el laboratorio / Cryptococosis: laboratory diagnosis

Se informan 29 casos de criptococosis diagnosticados en el laboratorio de Micologia del Instituto Nacional de Salud, durante un periodo de 6 anos (1981-1986), lo que corresponde a 4.8 casos por ano. La entidad fue mas frecuente en hombre y en edades comprendidas entre 20 y 40 anos. En 12 pacientes se disponia de historia clinica y en todos ellos se demostro la presencia de una enfermedad o condicion de base. El cryptococcus neoformans fue observado en el examen directo en el 79% de los casos y en el 93% de los cultivos. En 14 apcientes en los cuales se practico la prueba de aglutinacion de latex, ella fue positiva en todos los liquidos cefalorraquideos, asi como en 60% de los sueros y en el 50% de las orinas. La clasificacion por serotipos de 16 aislamientos fue lograda empleando el medio CGB y ella dio como resultado 14 cepas de C. neoformansvar. neoformans y 2 cepas de C. neoformans var, gattii.

Sinalizaçäo do líquido cefalorraqueano em doenças inflamatórias crônicas do sistema nervoso central / Cerebrospinal fluid signalization in chronic inflammatory diseases of the central nervous system

Foi estudado o comportamento do dual citoproteico do LCR em processos inflamatórios do sistema nervoso central (SNC). Do ponto de vista neuroimunológico e levando em conta a sinalizaçäo observada mediante o estudo do líquido cefalorraqueano (LCR) podem ser considerados três grupos de modelos: o agudo, o crônico e o intermediário. Cada um deles pode apresentar subtipos. Foram avaliadas as características de comportamento do dual em dois modelos do tipo intermediário (criptococose do SNC e esquistossomose do SNC) e em 4 crônicos: dois de tipo contínuo (neurossífilis e panencefalite esclerosante subaguda) e dois de tipo repetitivo (neurocisticercose e esclerose múltipla). Os dados analisados permitem visäo quanto ao comportamento do dual citoproteico do LCR (número de células, perfil citomorfológico, subpopulaçöes linfocitárias, estudo proteico, fraçöes proteicas e suas relaçöes) nos modelos inflamatórios considerados. As diferenças observadas entre os modelos intermediários e os crônicos, tanto o contínuo como o repetitivo, säo evidentes independentemente do agente etiológico considerado

Criptococúria: relato de caso / Criptococcosis: report of a case

Um caso de criptococose disseminada, com urocultivo positivo, é relatado. Revisäo da literatura indica que o envolvimento renal é comum. A importância do exame de urina e cultivo para o Cryptococus neoformans é enfatizado

O líquido cefalorraquiano inicial nas meningencefalites por Cryptococcus neoformans / Initial cerebrospinal fluid in meningoencephalitis due to Cryptococcus neoformans

A criptococose, conhecida desde 1905, é doença grave, causada pelo Cryptococcus neoformans. Nesta entidade o estudo do líquido cefalorraquino é muito importante visto que o sistema nervoso está envolvido em 81% dos casos5.O propósito do presente trabalho é o evidenciar as alteraçöes do líquido cefalorraquiano inicial nas meningencefalites criptocócicas e demonstrar a importância de exame minucioso do líquido cefalorraquiano para o diagnóstico precoce desta doença. O material é constituido por 46 observaçöes de pacientes com diagnóstico de meningencefalite criptocócia. O quadro inflamatório crônico, caracterizado por pleocitose predominantemente linfocitária, hiperproteinorraquia e glicose diminuida foi observado em 54% das amostras de líquido cefalorraquiano. Em 69% dos casos o líquido cefalorraquiano mostrava hipertensäo. A glicose estava diminuida em 61% dos pacientes e a taxa de cloretos em 16%. Eosinófilos em baixa percentagem foram observados em 48% dos casos. O criptococo foi identificado no líquido cefalorraquiano de 98% dos pacientes; é salientada a importância da pesquisa a fresco do fungo pelo método da tinta da China, sempre que uma amostra de líquido cefalorraquiano revelar pleocitose. Esta é uma conduta básica para o diagnóstico precoce da criptococose do sistema nervoso