Padronização de um teste ELISA indireto para diagnóstico da cinomose canina / Standardization of an indirect ELISA test for canine diagnosis diagnosis

A cinomose é uma enfermidade causada pelo vírus Canine Distemper Virus (CDV). Essa doença afeta principalmente cães, mas também acomete outras espécies domésticas e selvagens. A imunidade do animal está relacionada ao grau que a esse patógeno vai atingir o organismo do indivíduo. Ela afeta a respiração do animal, pode causar vômito, diarreia, convulsões, podendo levar o animal à óbito. O objetivo do presente trabalho foi padronizar um teste ELISA indireto com antígeno de superfície para o diagnostico cinomose utilizando amostras de soro canino. Para padronização da técnica, fez-se necessário o estudo da diluição do antígeno para identificar a melhor concentração para sensibilização da placa. O teste foi aplicado primeiramente com diferentes diluições do antígeno para detecção do melhor desempenho do antígeno. Feito isso, foi testado em um banco de soro de 45 animais comprovadamente positivos no teste ELISA comercial e em soro de 45 animais comprovadamente negativos no teste ELISA comercial, posteriormente foi calculado o ponto de corte, especificidade e sensibilidade do teste. O teste ELISA indireto se mostrou com excelência como um teste de diagnóstico para a cinomose canina, obtendo-se ponto de corte de densidade óptica de 0,229, sensibilidade de 95,5% e especificidade de 84,4%.

Distemper is a disease or the disease by the CDV virus, Distemper Virus. This disease mainly affects dogs, but also affects other domestic and wild species. The animal's immunity is related to the degree to which it will reach the individual's organism. It affects the animal's breathing, can cause vomiting, diarrhea, convulsions, and can lead to death. The aim of the present work test was to standardize an indirect ELISA for distemper diagnosis in experiments using a surface antigen. For the study of technical identification, it was necessary to specify the antigen for the best concentration of plaque sensitization. The test was initially applied with different dilutions of the antigen to detect the best performance of the antigen. This was tested in a serum bank of 45 animals proven positive in the commercial ELISA test and in the serum of 45 animals proven negative in the commercial ELISA test, later it was tested on the cut-off point, specificity and sensitivity of the test. The indirect ELISA test proved to be excellent as a diagnostic test for canine distemper, with an optical density cut-off of 0.229, sensitivity of 95.5% and specificity of 84.4% being obtained.

Aspectos clínicos, laboratoriais e tratamento da leucemia mieloide crônica em cão: relato de caso / Clinical aspects, hematological changes and treatments of chronic myeloid leukemia in dog: case report

O objetivo deste relato é apresentar o caso clínico de uma cadela, sem raça definida, com cinco anos de idade, diagnosticada com leucemia mieloide crônica (LMC). As leucemias são neoplasias malignas que se originam de células precursoras da medula óssea e as consequências podem ser trombocitopenia, anemia, leucocitose persistente e presença de células neoplásicas no sangue. O tratamento de escolha envolve o uso de inibidores de tirosina quinase, porém este não pode ser usado neste caso. Dessa forma a cadela recebeu diferentes protocolos quimioterápicos que incluíram inicialmente hidroxiureia, citarabina, doxorrubicina e prednisona. Devido a remissão parcial dos sinais clínicos e a resposta terapêutica pouco duradoura a essas medicações o protocolo foi alterado para quimioterapia metronômica com clorambucil. O uso desses quimioterápicos não foram eficazes em reduzir a leucocitose e controlar a anemia e trombocitopenia da paciente, devido a ocorrência do surgimento de células imaturas no sangue e resistência aos quimioterápicos. Na ausência da crise e da possibilidade do uso dos inibidores de tirosina quinase, a hidroxiureia permanece sendo o quimioterápico de eleição. O animal apresentou sobrevida de 210 dias, devido a leucocitose e anemia severas pouco responsivas ao protocolo terapêutico utilizado e o surgimento no hemograma de precursores neutrofilicos que ocorreu 46 dias após ao início do tratamento com hidroxiureia.

The aim of this report is to present the clinical case of a five-year-old mixed breed female dog diagnosed with chronic myeloid leukemia (CML). Leukemias are malignant neoplasms that originate from bone marrow precursor cells and the consequences can be thrombocytopenia, anemia, persistent leukocytosis and the presence of neoplastic cells in the blood. The treatment of choice involves the use of tyrosine kinase inhibitors, but it cannot be used in this case. Thus, the dog received different chemotherapy protocols that initially included hydroxyurea, cytarabine, doxorubicin and prednisone. Due to the partial remission of clinical signs and the short-term therapeutic response to these medications, the protocol was changed to metronomic chemotherapy with chlorambucil. The use of these chemotherapeutic agents was not effective in reducing leukocytosis and controlling the patient's anemia and thrombocytopenia, due to the occurrence of immature cells in the blood and resistance to chemotherapeutic agents. In the absence of the crisis and the possibility of using tyrosine kinase inhibitors, hydroxyurea remains the chemotherapy of choice. The animal had a 210-day survival, due to severe leukocytosis and anemia, which were not responsive to the therapeutic protocol used and the appearance in the blood count of neutrophilic precursors that occurred 46 days after the beginning of hydroxyurea treatment.

Soropositividade para Leptospira sp. e sorogrupos predominantes em cães do Pantanal Brasileiro / Seropositivity for Leptospira sp. and predominant serogroups in dogs from the Brazilian Pantanal

Em face à grande importância que a leptospirose possui no contexto sanitário mundial, tanto no aspecto humano como animal, este estudo teve por objetivo realizar a pesquisa de anticorpos anti-Leptospira sp. pela técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM) em 429 amostras de soros de cães provenientes de quatro municípios (Poconé/MT, Santo Antônio de Leverger/MT, Barão de Melgaço/MT e Corumbá/MS) localizados na região do Pantanal Brasileiro, bem como foram verificadas possíveis associações entre os resultados dos exames sorológicos e respostas aos questionários epidemiológicos aplicados aos proprietários. Do total de cães avaliados pela SAM (título ≥100), verificou-se que 34 (7,93%; IC 95%: 5,63%-11,00%) cães tinham anticorpos anti-Leptospira sp. Os títulos encontrados variaram entre 100 e 1600 e todos os municípios analisados tinham cães sororreagentes ao agente pesquisado. O sorogrupo reator mais frequente foi o Icterohaemorrhagiae, seguido pelo Australis. Por outro lado, foram observadas menores proporções de cães reagentes aos sorogrupos Tarassovi, Hebdomadis, Autumnalis e Grippotyphosa. As variáveis associadas com a ocorrência de leptospirose foram habitat rural (P<0,01) e área alagável (P=0,01). Estes resultados demonstram que os cães da região pantaneira tiveram contato com agentes do gênero Leptospira, o que representa uma informação relevante para a saúde pública local devido à importância zoonótica da doença.

Given the great importance that leptospirosis has the global health context, both in human and animal aspect, this study aimed to search for antibodies anti-Leptospira sp. by the technique of microscopic agglutination test (MAT) in 429 samples of sera from dogs from four municipalities (Poconé/MT, Santo Antônio de Leverger/MT, Barão de Melgaço/MT and Corumbá/MS) located in the Brazilian Pantanal region, in order for determine associations between the results of the serological tests and answers to epidemiological questionnaires applied to owners. Of the total dogs evaluated by MAT (titer ≥100), it was verified that 34 (7.93%, 95% CI: 5.63% -11.00%) dogs had antibodies against Leptospira sp. The titers found ranged from 100 to 1600 and all municipalities analyzed had seroreactive dogs for the investigated agent. The most frequent serogroup reactor was Icterohaemorrhagiae, followed by Australis. On the other hand, smaller proportions of reactive dogs were observed for serogroups Tarassovi, Hebdomadis, Autumnalis and Grippotyphosa. The variables associated with the occurrence of leptospirosis were rural habitat (P<0.01) and flooded area (P=0.01). These results demonstrate that dogs from the Pantanal region had contact with agents of the genus Leptospira, which represents information relevant to local public health due to the zoonotic importance of the disease.

Anemia hemolítica imunomediada primária em cães - Revisão de literatura / Primary immune-mediated hemolytic anemia in dogs - Literature review / Anemia hemolítica inmunomediada primaria en perros ­ Revisión de literatura

A anemia hemolítica imunomediada (AHIM) é o distúrbio imunológico de maior prevalência em cães. Caracteriza-se como uma hipersensibilidade do tipo II, que leva a destruição prematura de hemácias. Dentre as principais complicações, o estado de hipercoagulabilidade predispondo a coagulação intravascular disseminada e tromboembolismo pulmonar é a mais importante, sendo a causa de óbito em mais de 80% dos casos. O diagnóstico é realizado a partir da exclusão de outras causas para anemia e por meio da constatação de um ou mais desses sinais: anemia moderada a grave (hematócrito <25-35%), evidências de hemólise (hemoglobinemia, hemoglobinúria ou hiperbilirrubinemia) e presença de anticorpos na hemácia (caracterizado a partir da auto-aglutinação, esferocitose, teste de Coombs positivo ou citometria de fluxo). O tratamento é direcionado à supressão da resposta imune, sendo os corticosteroides e os imunossupressores, os fármacos de predileção.(AU)

Immune-mediated hemolytic anemia (IMHA) is the most prevalent immune disorder among dogs. It is characterized as type II hypersensitivity, leading to premature destruction of red blood cells. Among the main complications, hypercoagulability predisposing to disseminated intravascular coagulation and pulmonary thromboembolism is the most important, being the cause of death in more than 80% of the cases. The diagnosis is made by excluding other causes for anemia and the presence of one or more of these signs: moderate to severe anemia (hematocrit <25-35%), evidence of hemolysis (hemoglobinemia, hemoglobinuria or hyperbilirubinemia) and presence of antibodies in the erythrocyte (characterized by self-agglutination, spherocytosis, positive Coombs test, or flow cytometry). Treatment is directed to suppression of the immune response, with corticosteroids and immunosuppressants the drugs of predilection.(AU)

La anemia hemolítica inmunomediada (AHIM) es el disturbio inmunológico con mayor prevalencia en perros. Es definido como una hipersensibilidad tipo II, que lleva a destrucción prematura de hematíes. Dentro de las principales complicaciones, el estado de hipercoagulabilidad que predispone a coagulación intravascular diseminada y tromboembolismo pulmonar es el más importante, siendo la causa de muerte en más de 80% de los casos. El diagnóstico se realiza excluyendo otras causas de anemia y confirmando una o más de las siguientes alteraciones: anemia moderada a grave (hematocrito <25-35%), evidencias de hemolisis (hemoglobinemia, hemoglobinuria o hiperbilirrubinemia) y presencia de anticuerpos en hematíes (caracterizado a partir de autoaglutinación, esferocitosis, test de Coombs positivo o citometría de flujo). El tratamiento se basa en la supresión de la respuesta inmune, siendo los cortico esteroides y los inmunosupresores los fármacos de elección.(AU)

Prevalence of Neospora caninum and Toxoplasma gondii antibodies in dogs in the municipality of Poconé, state of Mato Grosso, Brazil / Prevalência de anticorpos contra Neospora caninum e Toxoplasma gondii no município de Poconé, estado de Mato Grosso, Brasil

This study evaluated the presence of Neospora caninum and Toxoplasma gondii antibodies in 320 domestic dogs living in urban and rural areas of the municipality of Poconé, located in the Pantanal wetlands of the state of Mato Grosso, Brazil. Anti- N. caninum (cut-off point 50) and anti- T. gondii (cut-off point 16) antibodies were detected by means of immunofluorescence assays (IFA), using NC-Bahia and RH strains as antigens, respectively. Anti- N. caninum antibodies were detected in 69 (21.56%; 95% CI: 17.27%-26.56%) dogs, 31 (44.93%) of which lived in urban areas and 38 (55.07%) in rural areas, and endpoint titers ranged from 50 to 3200. Anti- T. gondii antibodies were found in 132 (41.25%; 95% CI: 35.84%-46.87%) dogs, 58 (43.94%) from urban areas and 74 (56.06%) from rural areas, and endpoint titers ranged from 16 to 8192. A total of 33 dogs (10.3%) (12 urban and 21 rural animals) reacted to both agents (P <0.05). This study showed a higher prevalence of anti- T. gondii compared to anti- N. caninum antibodies in the dogs living in the Pantanal region, suggesting that both protozoans circulate in the studied region. This information is relevant, in view of its implications for animal and public health.

Este estudo avaliou a presença de anticorpos contra N. caninum e T. gondii em 320 cães domésticos das áreas urbana e rural do município de Poconé, no estado do Mato Grosso, região pantaneira do Pantanal. A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) foi utilizada para detectar anticorpos anti- N. caninum (ponto de corte igual a 50) e anticorpos anti- T. gondii (ponto de corte igual a 16) utilizando as cepas NC-Bahia e RH como antígenos, respectivamente. Anticorpos anti- N. caninum foram detectados em 69 (21,56%; IC 95%: 17,27%-26,56%) cães, dos quais 31 (44,93%) eram da área urbana e 38 (55,07%) eram da área rural e os títulos variaram entre 50 a 3200. Em relação aos anticorpos contra T. gondii 132 (41,25%; IC 95%: 35,84%-46,87%) cães foram sororeagentes sendo que 58 (43,94%) eram da área urbana e 74 (56,06%) da área rural e os títulos variaram entre 16 a 8192. Um total de 33 (10,31%) (12 cães urbanos e 21 cães rurais) cães reagiram para ambos os agentes testados pela RIFI (P <0,05). Este estudo mostrou uma maior ocorrência de anticorpos contra T. gondii em relação a N. caninum nos cães avaliados, mostrando que na região do Pantanal há circulação desses importantes protozoários. Essa informação é relevante dada sua importância para a saúde animal e pública

Low level of the immune response against rabies virus in dogs and cats, a cross-sectional study in sheltered animals, Santander, Colombia / Baixo nível de resposta imune contra o vírus da raiva em cães e gatos, um estudo transversal em animais abrigados, Santander, Colombia

Rabies is an incurable and fatal progressive viral encephalomyelitis that causes approximately 61,000 deaths a year globally mainly by dog bites, which show the importance of anti-rabies vaccination in dogs to achieve elimination of the disease. In Colombia, multiple cases of human rabies transmitted by dogs and cats have been reported since 1999, showing an increased significance of cats in the transmission of rabies, mainly in rabies of wild origin. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the development of neutralizing antibodies in dogs and cats during the mass vaccination campaign of the second half of 2015 in the city of Bucaramanga. For this purpose, a descriptive cross-sectional study with convenience sampling was conducted in 382 dogs and cats (295 dogs, 87 cats), and an evaluation of the humoral immune response of the animals was performed by quantitative ELISA. The prevalence of optimal neutralizing antibodies (>0.5 IU/ml) was only 32.76% (95% CI=28.05-37.46%) in the entire population studied and most of the animals did not have an adequate response to the vaccination, or seroconversion was not detected on them (65.45-95% confidence interval, CI=60.68-70.21%). Significant difference was found between the neutralizing antibody titers in cats and dogs, with a higher neutralizing response in cats. In conclusion, although mass vaccination campaigns for dogs and cats are the most important measure to interrupt virus circulation among the animals, achievement of a good neutralizing immune response in the animals is useful to demonstrate that vaccination has been successful, allowing the maintenance of the required minimum levels of population immunity. These results will allow the implementation of corrective measures in Bucaramanga to achieve better seroconversion rates. Other cities are expected to implement similar seroconversion assessments to verify the quality of effective anti-rabies vaccination in animal populations.(AU)

A raiva é uma encefalomielite viral progressiva incurável e fatal que causa aproximadamente 61.000 mortes por ano no mundo, principalmente por mordidas de cães, que mostram a importância da vacinação anti-rábica em cães para conseguir a eliminação da doença. Na Colômbia, vários casos de raiva humana transmitida por cães e gatos foram relatados desde 1999, mostrando um aumento na importância de gatos na transmissão da raiva, principalmente em raiva de origem selvagem. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar o desenvolvimento de anticorpos neutralizantes em cães e gatos durante a campanha de vacinação em massa do segundo semestre de 2015 na cidade de Bucaramanga. Para este propósito, um estudo descritivo transversal com amostragem de conveniência foi realizado em 382 cães e gatos (295 cães, 87 gatos), e uma avaliação da resposta imune humoral dos animais foi realizada por ELISA quantitativo. A prevalência de anticorpos neutralizantes ótimos (>0,5 UI/ml) foi de apenas 32,76% (IC 95% = 28,05-37,46%) em toda a população estudada e a maioria dos animais não teve resposta adequada à vacinação, ou a soroconversão foi não detectado neles (65,45-95% intervalo de confiança IC = 60,68-70,21%). Diferença significativa foi encontrada entre os títulos de anticorpos neutralizantes em gatos e cães, com uma maior resposta neutralizante em gatos. Em conclusão, embora as campanhas de vacinação em massa para cães e gatos sejam a medida mais importante para interromper a circulação do vírus entre os animais, a obtenção de uma boa resposta imunológica neutralizante nos animais é útil para demonstrar que a vacinação foi bem sucedida, permitindo a manutenção necessária dos níveis mínimos de imunidade da população. Esses resultados permitirão que a implementação de medidas corretivas em Bucaramanga alcance melhores taxas de soroconversão. Outras cidades devem implementar avaliações similares de soroconversão para verificar a qualidade da vacinação anti-rábica efetiva em populações animais.(AU)

Prevalence and risk factors to Leptospira sp. infection in dogs attended at veterinary clinics in João Pessoa, Paraíba State, Northeastern Brazil / Prevalência e fatores de risco da infecção por Leptospira sp. em cães atendidos em clínicas veterinárias em João Pessoa, Paraíba, Nordeste do Brasil

This study investigated the prevalence and risk factors associated with Leptospira sp. in dogs attended at veterinary clinics in the city of João Pessoa, State of Paraíba, Northeast Brazil. A total of 384 blood samples from dogs from 34 veterinary clinics were used from April 2015 to May 2016. The serological Leptospira sp diagnosis was carried out through Microscopic Agglutination Test (MAT), using a collection of 20 pathogenic antigens and adopting a 1:100 dilution as cutoff point. An epidemiological questionnaire was applied to the animal's owners to obtain the information used in risk factors analysis. The prevalence of seropositive animals was 11.7% (45/384), with reactions for serogroups Icterohaemorrhagiae (62.3%), Grippotyphosa (22.2%), Canicola (13.3%), Djasiman 2%) and Pomona (2.2%). The following risk factors were identified: age from 49 to 72 months (odds ratio = 2.74); Age > 72 months (odds ratio = 3.22); and monthly cleaning of the environment where the animals were kept (odds ratio = 10.70). We concluded that dogs attended at veterinary clinics in João Pessoa are exposed to Leptospira sp infection, with predominance of serogroups kept by wild or synanthropic animals, and suggest a monthly periodic environment cleaning where the animals are kept.(AU)

O presente trabalho investigou a prevalência e os fatores de risco associados à infecção por Leptospira sp. em cães atendidos em clínicas veterinárias da cidade de João Pessoa, Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil. Foram utilizadas 384 amostras sanguíneas de cães provenientes de 34 clínicas veterinárias no período de abril de 2015 a maio de 2016. O diagnóstico da infecção por Leptospira sp. foi realizado com o emprego reação de Soroaglutinação Microscópica (SAM), utilizando uma coleção com 20 antígenos patogênicos e adotando como ponto de corte a diluição 1:100. Foi aplicado um questionário epidemiológico aos proprietários dos animais para obtenção de dados a serem utilizados na análise de fatores de risco. A prevalência de animais soropositivos foi de 11,7% (45/384), com reações para os sorogrupos Icterohaemorrhagiae (62,3%), Grippotyphosa (22,2%), Canicola (13,3%), Djasiman (2,2%) e Pomona (2,2%). Foram identificados os seguintes fatores de risco: idade entre 49 e 72 meses (odds ratio = 2,74), idade maior que 72 meses (odds ratio = 3,22), e limpeza mensal do ambiente onde os animais permanecem (odds ratio = 10,70). Conclui-se que cães atendidos em clínicas veterinárias de João Pessoa estão expostos à infecção por Leptospira sp., com predominância de sorogrupos mantidos por animais selvagens, e foi sugerida a realização da limpeza periódica do ambiente ocupado pelos animais.(AU)

Achados patológicos e imuno-histoquímicos de neoplasmas pulmonares primários em caninos na região metropolitana de Porto Alegre, Rio Grande do Sul / Pathological and immunohistochemical findings of primary pulmonary neoplams in dogs in the metropolitan region of Porto Alegre, Rio Grande do Sul

Neoplasmas pulmonares primários são pouco frequentes na medicina veterinária, mas a principal espécie afetada é a canina. Acredita-se que o número de neoplasmas pulmonares primários vem aumentando em animais de companhia, em decorrência do aumento da expectativa de vida, da melhora nas técnicas de diagnóstico e pelo maior contato com poluentes atmosféricos. Este estudo foi realizado para identificar, analisar a frequência, e caracterizar achados patológicos e imuno-histoquímicos dos neoplasmas pulmonares primários em cães na região metropolitana de Porto Alegre, Rio Grande do Sul. No período de janeiro de 2003 a junho de 2016 foram submetidos à necropsia 6.307 caninos. Destes, 36 cães tinham diagnóstico de neoplasma pulmonar primário. O neoplasma mais frequente neste estudo foi o adenocarcinoma papilar (30,5%), seguido do carcinoma lepídico (22,2%). A idade dos cães variou de quatro a 16 anos, com média de 11 anos. Observou-se que a frequência de cães machos (63,9%) prevaleceu sobre as fêmeas (36,1%). Na avaliação imuno-histoquímica, todos os neoplasmas epiteliais foram positivos para pancitoqueratina, 70,6% foram positivos para fator de transcrição de tireoide-1 e 23,5% tiveram coexpressão de pancitoqueratina e vimentina. Dois tumores mesenquimais tiveram imunomarcação para vimentina e S-100, foram negativos para a imuno-histoquímica de actina de músculo liso e melan-A e para a técnica histoquímica de tricrômico de Masson e foram diagnosticados como tumor da bainha de nervo periférico maligno, raramente encontrado como tumor primário de pulmão em animais. Quando é difícil estabelecer um diagnóstico apenas com o exame histológico de rotina, é necessário ressaltar a importância da técnica de imuno-histoquímica para o diagnóstico de neoplasmas pulmonares primários em cães.(AU)

Primary pulmonary neoplasms are uncommon in veterinary medicine; but most frequently affected are dogs. It appears that the number of primary pulmonary neoplasms is increasing in companion animals, due to the increase in life expectancy, improvement of diagnostic techniques and greater contact with air pollutants. This study was realized to identify, analyze the frequency, and to characterize pathological and immunohistochemical findings of primary pulmonary neoplasms in dogs of the metropolitan region of Porto Alegre, Rio Grande do Sul. From January 2003 to June 2016, 6,037 necropsies were performed and in 36 of them primary pulmonary neoplasm was found. The most frequent neoplasm in this study was papillary adenocarcinoma (30.5%) followed by lepidic adenocarcinoma (22.2%). The age of affected dogs ranged from 4 to 16 years, with a mean of 11 years. The frequency of male dogs (63.9%) prevailed over females (36.1%). Through immunohistochemical evaluation all epithelial neoplasms were positive for pancytokeratin, 70.6% were positive for thyroid-1 transcription factor and 23.5% had co-expression of pancytokeratin and vimentin. Two mesenchymal tumors showed immunostaining for vimentin and S-100, were negative for smooth-muscle actin and melan-A immunohistochemistry and Masson's trichrome histochemical technique and were diagnosed as malignant peripheral nerve sheath tumors, rarely found as primary lung tumor in animals. If one has difficulty to establish a diagnosis only through routine histological examination, it is necessary to emphasize the importance of the immunohistochemical technique for the diagnosis of primary pulmonary neoplasms in dogs.(AU)

Imunohematologia veterinária: antígenos eritrocitários caninos / Veterinary immunohematology: canine erythrocyte antigen / Inmunohematología veterinaria: antígenos eritrocitarios caninos

A imunohematologia veterinária vem ganhando interesse nos últimos anos devido a maior acessibilidade a tecnologias de detecção de antígenos e anticorpos, interesse dos donos e médicos veterinários em buscar uma melhor qualidade de vida para os animais e as necessidades de transfusões com o menor índice possível de reações indesejadas. Os cães possuem antígenos presentes na membrana de suas células vermelhas, podendo causar reações durante e após transfusões. Diferentemente de humanos e felinos, cães não possuem anticorpos naturais para os principais antígenos, a priori podendo ser transfundidos com qualquer tipo sanguíneo sem consequências posteriores, porém, se submetidos a uma segunda transfusão, sendo essa de um tipo sanguíneo incompatível e previamente sensibilizados, as chances de ocorrer reações transfusionais graves aumentam drasticamente, ocasionando danos ao animal, podendo levá-lo à morte. Por conta desses riscos se faz necessário uma maior atenção aos tipos sanguíneos desses animais onde 8 sistemas são reconhecidos internacionalmente classificados como sistema DEA, sendo eles DEA 1 e seus subtipos (DEA 1.1; DEA1.2; DEA 1.3); DEA 3; DEA 4; DEA 5; DEA 6; DEA 7 e DEA 8, e recentemente um novo sistema denominado Dal. Não há disponível ainda soros para os sistemas DEA 6 e DEA 8, tornando a pesquisa sobre esses antígenos dificultosa.(AU)

Veterinary immunohematology is gaining interest in recent years due to greater accessibility to antigen and antibody detection technologies, the interests of pet owners and veterinarians in seeking a better quality of life for animals, and requirement of transfusions with the lowest possible rate of collateral reactions. Dogs have antigens present in the membrane of their red blood cells that can cause reactions during and after transfusions. Unlike humans and cats, dogs do not have natural antibodies to the key antigens, and a priori they can be transfused with any type of blood without any further consequences. However, if they are ever subjected to a second transfusion, if using incompatible blood types and being previously sensitized, the likelihood of having serious transfusion reactions drastically increase, causing damage to the animal, which may even lead it to death. Due to those risks, greater attention is required to the blood type of those animals, which present 8 systems, internationally recognized and classified as the DEA system, namely DEA 1 and its subtypes (DEA 1.1; DEA 1.2; DEA 1.3); DEA 3; DEA 4; DEA 5; DEA 6; DEA 7 and DEA 8, and recently a new system referred to as Dal. No serum is yet available for DEA 6 and DEA 8 systems, hindering the research on those antigens.(AU)

La inmunohematología veterinaria ha ganado atención en los últimos años debido mayor accesibilidad a tecnologías de detección de antígenos y anticuerpos, interés de dueños y médicos veterinarios en buscar mejor calidad de vida para los animales y las necesidades de transfusiones con menor índice posible de reacciones indeseadas. Los perros poseen antígenos presentes en la membrana de sus células rojas, pudiendo causar reacciones durante y después de transfusiones. Diferentemente de humanos y felinos, perros no tienen anticuerpos naturales para los principales antígenos, a priori, pudiendo ser transfundidos con cualquier tipo de sangre sin consecuencias posteriores, todavía, si sometidos a una segunda transfusión, siendo esa de un tipo sanguíneo incompatible y previamente sensibilizados, la posibilidad de ocurrir reacciones transfusional grave aumenta drásticamente, ocasionando daños al animal, pudiendo llevarlo a la muerte. Por esos riesgos se hace necesario más atención a los tipos sanguíneos de esos animales, donde 8 sistemas son reconocidos internacionalmente y clasificados como sistema DEA, siendo ellos DEA 1 y sus subtipos (DEA 1.1; DEA 1.2; DEA 1.3); DEA 3; DEA 4; DEA 5; DEA 6; DEA 7 y DEA 8, y recién un nuevo sistema denominado Dal. No hay aún disponible sueros para los sistemas DEA 6 y DEA 8, haciendo dificultosa la investigación sobre esos antígenos.(AU)

Influence of apoptosis on liver and spleen resistance in dogs with visceral leishmaniosis / Influência da apoptose na resistência hepática e esplênica de cães com leishmaniose visceral

Abstract The aim of this study was to evaluate apoptosis and parasite load in the liver and spleen of dogs with visceral leishmaniosis (VL), using immunohistochemistry. Liver and spleen samples from 71 dogs with VL were used. The parasite load in the spleen and liver showed significant difference between organs in infected group (P=0.0219). The density of the parasite load in the spleen (median=2.4) was higher than liver (median=0.8). Immunodetection of apoptotic cells was predominant in lymphocytes and differ between the infected and control group in spleen (P=0.0307) and liver (P=0.0346). There was a significant correlation between apoptosis and parasite load (P = 0.0084; r=0.3104) only in the spleen of the infected group, where it was observed that, when increasing the number of apoptotic cells increases the parasitic load. It was concluded that the liver and spleen of infected dogs presented greater numbers of cells undergoing apoptosis (lymphocytes) than the control group, thus suggesting that this process may be contributing towards the survival of Leishmania in these organs, because lymphocyte in apoptosis did not have the ability to present and recognize the antigen, allowing the survival of the parasite.

Resumo O objetivo deste estudo foi avaliar a apoptose e a carga parasitária no fígado e baço de cães com leishmaniose visceral (LV), pela técnica de imuno-histoquímica. Foram utilizadas amostras de fígado e baço de 71 cães com LV. A carga parasitária no baço e fígado mostrou diferença significativa entre os órgãos no grupo infectado (P=0,0219). A densidade da carga de parasita no baço (média=2,4) foi maior do que no fígado (média=0,8). A imunodetecção de células em apoptose foi predominante nos linfócitos, com diferenças entre o grupo infectado e controle no baço (P=0,0307) e fígado (P=0,0346). Houve uma correlação positiva fraca entre apoptose e carga parasitária (P=0,0084; r=0,3104) apenas no baço do grupo infectado, onde observou-se que quando aumentava o número de células em apoptose aumentava a carga parasitária. Concluiu-se que o fígado e o baço de cães infectados apresentam um maior número de células que sofrem apoptose (linfócitos) do que o grupo controle, sugerindo que este processo possa contribuir para a sobrevivência de Leishmania nestes órgãos, pois os linfócitos em apoptose não tiveram a capacidade de apresentar e reconhecer o antígeno, permitindo a sobrevivência do parasita.

Produção de IL-7 canina no sistema baculovírus-células de inseto / Canine IL-7 production in insect baculovirus-cell system

INTRODUÇÃO. A interleucina 7 (IL-7) é uma citocina pleiotrópica produzida principalmente por células estromais da medula óssea, células epiteliais tímicas e intestinais. IL-7 e que promove o desenvolvimento de linfócitos T e B e diferenciação de células T memória, especialmente CD4+. Por isso, diversos autores têm estudado a capacidade de IL-7 promover a restauração da população de linfócitos em situações de linfopenia e resposta imune de memória. Cães que desenvolvem leishmaniose visceral e recebem tratamento especfico apresentam cura clínica. No entanto, após a interrupção do tratamento, a maioria dos animais exibe recaída da doença, mesmo na ausência de reinfecção. É possível que esse fenômeno esteja associado a uma dificuldade de estabelecimento de linfócitos T de memória específicos para Leishmania em cães. Em nosso laboratório, tentativas prévias foram realizadas para produzir a IL-7 canina em Escherichia coli, no entanto, o rendimento da proteína biologicamente ativa foi pequeno. OBJETIVO. Por isso, resolveu-e avaliar a viabilidade de produzir IL-7 do sistema baculovírus-células de inseto. MATERIAL E MÉTODOS. No presente trabalho, uma construção de DNA foi concebida contendo uma sequência de nucleotídeos que codificam o peptídeo sinal da proteína GP64 do baculovírus da Autographa californica (AcMNPV), a IL-7 canina (proteína madura) com códons otimizados para a tradução em Trichoplusia ni, um espaçador com 23 aminoácidos e uma cauda de seis histidinas. A construção de DNA elaborada foi sintetizada quimicamente, inserida em um plasmídeo de clonagem (pUC57-GP64caIL-7), subclonada em um plasmídeo carreador (pFastBac1-GP64caIL-7), adequado para o sistema baculovirus-célula de inseto, e transferida para o cromossoma artificial do baculovírus recombinante (bacmídeo). RESULTADOS. A produção de IL-7 recombinante canina (rcaIL-7) em células de inseto infectadas com baculovírus recombinante foi otimizada. Em seguida, a rcaIL-7 foi produzida em células High-five cultivadas em suspensão utilizando multiplicidade de infecção (MOI) de 5 e tempo de infecção (TOI) de 48 h. A proteína recombinantes foi purificada por cromatografia de afinidade em Sepharose-níquel,obtendo-se um rendimento médio de 5,5 mg por litro de cultivo. CONCLUSÃO. RcaIL-7 purificada, avaliada a 40 ng/mL,mostrou-se capaz de promover a proliferação de células mononucleares de sangue periférico de cães sadios, sem estímulo prévio ou concomitante, indicando que a proteína foi produzida biologicamente ativa. Futuros estudos serão realizados para avaliar a capacidade imunomoduladora da rcaIL-7 em cães e determinar a utilidade dessa citocinas no tratamento de enfermidades caninas, como por exemplo, na leishmaniose visceral canina.

INTRODUCTION. The interleukin 7 is a pleiotropic cytokine produced mainly by bone marrow stromal cells, thymus and intestinal epithelial cells. IL-7 promotes the development of T and B limphocytes and differentiation T cells to memory cells, especially T CD4+ cells. For these reasons, several authors have studied the ability of IL7 to promote restoration of the lymphocyte population in cases of lymphopenia and memory imune responses. Dogs which develop visceral leishmaniasis and are treated with specific drugs develop only transient clinical cure. After treatment withdrawal, most animals show disease relapse, even in the absence of reinfection. One possible explanation for the lack of control of the infection after treatment in dogs is a difficulty to develop/maintain specific memory T cells. Therefore, it is possible that effective treatments for canine visceral leishmaniasis be developed by manipulating the immune system. Previously, in our laboratory, it was attemped to produce recombinant canine IL7 (rcaIL-7) in Escherichia coli, however there was a low yield of biologically active protein. OBJECTIVE. In the current project, the baculovírus-insect cell system was evaluated to produce rcaIL-7. MATERIAL AND METHODS. In this study, a construction of DNA was designed to encode nucleotides of Autographa californica GP64 signal peptide, canine IL-7 (mature protein) with optimized codons for Trichoplusia ni, a 23-amino acid spacer and a six histidine tail. The DNA construct was chemically synthesized, inserted into a cloning plasmid (pUC57-GP64caIL-7), subcloned into a carrier plasmid (pFastBac1-GP64caIL-7), suited to the baculovirus-insect cell expression system, and transfered to an artificial chromosome of the recombinant baculovirus (bacmid)...

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Leishmania spp. serology and Leishmania spp. PCR in dogs from Pirassununga, SP / Sorologia para Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp. e PCR para Leishmania spp. em cães de Pirassununga, SP

Abstract We examined the presence of antibodies against the parasites Toxoplasma gondii, Neospora caninum, and Leishmania spp., as well the presence of DNA from Leishmania spp., in dogs from Pirassununga - SP. The seropositivity rate was compared with the animals’ originating location. Three hundred seventy-three blood samples from the county’s kennel and local veterinary clinics were collected and analyzed. A total of 300 samples were tested for T. gondii and N. caninum using an indirect immunofluorescence antibody test (IFAT); 45% (135/300) were positive for T. gondii and 24.3% (73/300) were positive for N. caninum. Three hundred seventy-three samples were tested for Leishmania spp. using the IFAT. Of these, 4.6% (17/373) were positive. Additionally, 145 samples were tested using a polymerase chain reaction (PCR); of these samples, 0.7% (1/145) was positive. Considering the results, we conclude that these parasites are present in the city of Pirassununga - SP and that the animals have contact with the protozoan. It is therefore necessary to create methods for disease prevention to maintain both animal and human health in regard to leishmaniasis and toxoplasmosis.

Resumo Avaliou-se a presença de anticorpos contra Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Leishmania spp.; assim como a presença de DNA de Leishmania spp. em cães de Pirassununga-SP, e associou-se sua soropositividade ao local de origem dos animais. Foram coletadas 373 amostras de sangue do canil municipal e de clínicas veterinárias locais, que foram analisadas pelo teste de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Do total, 300 amostras foram testadas para T. gondii e N. caninum, das quais 45% (135/300) foram positivas para T. gondii e 24,3% (73/300) para N. caninum. Para Leishmania spp. foram avaliadas 373 amostras pela RIFI, sendo 4,6% (17/373) positivas. Adicionalmente, 145 amostras foram testadas utilizando-se a PCR e, dessas amostras, 0,7% (1/145) foi positiva. Considerando-se os resultados, pode-se concluir que esses parasitos estão presentes na cidade de Pirassununga - SP e que os animais tiveram contato com os protozoários. Faz-se, dessa forma, necessária a divulgação de meios de prevenção às doenças, com o intuito de manter o controle sobre as mesmas, tanto na saúde animal quanto na saúde humana, em relação à leishmaniose e à toxoplasmose.

Occurrence of antibodies anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum in dogs from Natal, RN, Brazil / Ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães de Natal, RN, Brasil

The occurrence of anti-Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from the municipality of Natal, RN, Brazil, was determined. Information about the presence of these coccidia in this species was not known. Blood samples were collected from 29 domiciled dogs which inhabit areas that surround two important protected areas of Atlantic Forest (Parque da Cidade and Parque das Dunas) and another 73 dogs that were sacrificed due to Leishmania spp. infection, in Center for Control of Zoonosis (CCZ) for the municipality of Natal. It was only possible to obtain information about the gender of dogs that live in the parks area. The presence of antibodies against each parasite was determined by indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT), with a cutoff of 16 for T. gondii and 50 for N. caninum. Of the 102 dogs examined, 13 (12.7%, 95% CI 7.0-20.8%) were T. gondii positive and three (2.9%, CI 0.6-8.4%) for N. caninum. Association between: localities of obtaining samples (parks x CCZ) and sex of animals, with the occurrence of antibodies against each of the parasites, was determined by the Fisher exact test. For T. gondii association was found with males (p = 0.027) and dogs living close to parks (p = 0.008) had higher rates of infection. Associations were not observed in relation to N. caninum.

A ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora caninum foi determinada em cães do município de Natal, RN, onde informações sobre a presença destes coccídios nessa espécie não era conhecida. Para tanto, foram utilizados 29 cães domiciliados, que habitam áreas que circundam duas importantes Unidades de Conservação de Mata Atlântica presentes no município (Parque da Cidade e Parque das Dunas), e outros 73 cães que foram sacrificados no Centro de Controle de Zoonoses de Natal por serem positivos a Leishmania spp. Somente em relação aos cães que vivem próximos aos parques foi possível a obtenção de informações sobre o sexo dos animais. A presença de anticorpos contra cada um dos coccídios foi determinada com a Reação de Imunofluorescência Indireta com ponto de corte de 16 para T. gondii e 50 para N. caninum. Dos 102 cães examinados, 13 (12,7%, IC 95% 7,0-20,8) foram positivos para T. gondii e 3 (2,9%, IC 0,6-8,4%) para N. caninum. Associação entre: localidades de obtenção das amostras (parques x CCZ) e sexo dos animais com a ocorrência de anticorpos contra cada um dos parasitos, determinada através do teste exato de Fisher, foram positivas para T. gondii, com os machos (p = 0,027) e cães que habitam próximos aos parques (p = 0,008) apresentando maiores taxas de infecção. Associações não foram observadas em relação a N. caninum.

Aspectos epidemiológicos, clínicos e anatomopatológicos da intoxicação por aceturato de diminazeno em cães / Epidemiological, clinical, and pathological aspects of diminazene aceturate toxicosis in dogs

Os aspectos epidemiológicos, clínicos e anatomopatológicos da intoxicação espontânea por aceturato de diminazeno foram estudados em 10 cães. Em todos os casos, os cães afetados demonstraram sinais de síndrome tálamo-cortical, principalmente alteração do nível de consciência, tetraparesia, rigidez extensora e crise convulsiva. Em alguns casos, os cães acometidos apresentaram sinais de síndrome cerebelar, como tremores musculares generalizados de alta frequência e baixa amplitude, e/ou de síndrome vestibular, como ataxia, inclinação de cabeça e quedas. Esses sinais ocorreram entre 24 e 48 horas após o uso do fármaco injetável por via intramuscular e se mantiveram até a morte ou eutanásia dos cães (entre 1 e 7 dias). Tais sinais clínicos refletiam encefalomalacia hemorrágica focal simétrica, que afetava a medula oblonga, a ponte, a medular do cerebelo, o tálamo, o mesencéfalo, os pedúnculos cerebelares e os núcleos da base. Esse artigo: 1) descreve e discute essa forma de intoxicação medicamentosa tão pouco citada na literatura internacional e desconhecida da maior parte dos clínicos e patologistas veterinários brasileiros, 2) estabelece critérios clínicos e anatomopatológicos para o seu diagnóstico e, principalmente, 3) atenta para os riscos da utilização desse princípio ativo na terapêutica canina.

The epidemiological, clinical, and pathological aspects of diminazene aceturate (DA) spontaneous toxicosis were evaluated in 10 dogs. All affected dogs developed signs of thalamic-cortical syndrome, characterized mainly by neurological changes in the conscience levels, tetraparesis, extensor stiffness, and seizures. In some cases there was also evidence of cerebellar syndrome, characterized by generalized muscle tremors (high-frequency and low-amplitude) and/or vestibular syndrome, characterized by or ataxia, head tilt, and falling. These clinical signs occurred between 24 and 48 hours following intramuscular administration of DA and persisted until spontaneous death or euthanasia occurred between 1 and 7 days after the onset of clinical signs. The mentioned clinical signs reflected lesions that consisted of focal symmetrical hemorrhagic encephalomalacia affecting medulla oblongata, pons, cerebellar medulla, thalamus, midbrain, cerebellar peduncles, and basal nuclei. This article (1) describes and discusses DA toxicosis in dogs, a poorly-described clinical entity that is unknown by most clinicians and pathologists in Brazil; (2) establishes the clinical and pathological criteria for the diagnosis of DA toxicosis in dogs; and (3) calls up the attention for the risks of using DA in dogs in clinical settings.

Implante de condrócitos homólogos em defeitos osteocondrais de cães: padronização da técnica e avaliação histopatológica / Homologous articular chondrocytes implantation in osteochondral defects of dogs: technique and histopathological evaluation standardization

Padronizou-se a metodologia para cultura de condrócitos em cães e avaliou-se seu implante em lesões osteocondrais, utilizando-se a membrana biossintética de celulose (MBC) como revestimento. Dez cães, adultos e clinicamente sadios, foram submetidos à artrotomia das articulações fêmoro-tíbio-patelares. Defeitos de 4mm de diâmetro e profundidade foram induzidos no sulco troclear de ambos os membros. MBC foi aplicada na base e na superfície das lesões. Os defeitos do membro direito foram preenchidos com condrócitos homólogos cultivados formando o grupo-tratado (GT); os do membro esquerdo, sem implante celular, foram designados grupo-controle (GC). A evolução pós-operatória foi analisada com especial interesse nos processos de reparação da lesão, por meio de histomorfometria e imuno-histoquímica para colágeno tipo II e sulfato de condroitina. A cultura de condrócitos homólogos apresentou alta densidade e taxa de viabilidade. Observou-se integridade do tecido neoformado com a cartilagem adjacente na avaliação histológica, em ambos os grupos. Na imuno-histoquímica, verificou-se predomínio de colágeno tipo II no GT. Morfometricamente, não houve diferença significativa entre o tecido fibroso e o fibrocartilaginoso entre os grupos. A cultura de condrócitos homólogos de cães foi exequível. O tecido neoformado apresentou qualidade discretamente superior associado ao implante homólogo de condrócitos, contudo não promoveu reparação por cartilagem hialina.

The aim of the study is to standardize the methodology to achieve canine chondrocytes culture, and evaluate its implant on osteochondral defects made in the femoral trochlear sulcus of dogs, using the cellulose biosynthetic membrane (CBM) as coating. Ten healthy adult dogs without locomotor disorders were used. All animals were submitted to arthrotomy of stifle joints and defects of four millimeters in diameter x four millimeters deep were done in the femoral trochlear sulcus of both limbs. CBM were applied in the lesion base and surface of all limbs. In the treated group (TG), defects of the right limb were filled with cultivated homologous chondrocytes, and in control group (CG), defects of the left limb were left without cellular implant. Postoperative follow up was done by histomorphometry and Collagen type II and anti-chondroitin sulfate immunohistochemistry. The homologous chondrocytes culture showed high density and viability rate. Upon immunohistochemistry the predominance of type II collagen in extracellular matrix of TG was verified. However, no significant statistical difference was observed between the groups upon histomorphometry analysis of fibrous and fibrocartilaginous tissues. Canine homologous chondrocytes culture was practicable. Neoformed tissue showed slightly higher quality in TG, but without promoting repair by the hyaline cartilage.

Serological identification of house dust mite allergens in dogs with atopic dermatitis / Identificação sorológica de alérgenos de ácaros da poeira domiciliar em cães com dermatite atópica

House dust mite antigens have been used for decades to diagnose allergic diseases in humans and animals. The objective of this study was to identify allergens in commercial Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis extracts by immunoblotting using sera from allergic dogs and anti-dog IgE conjugate. The analysis of antigens present in the D. farinae extract (FDA Allergenic) using sera from 10 dogs allergic to D. farinae showed that eight sera recognized a band of approximately 102 kDa, eight recognized two bands of 52 to 76 kDa, five recognized one band of approximately 76 kDa, four recognized one band of 31 to 38 kDa, and two recognized one band of 12 to 17 kDa. Immunoblot assays of the B. tropicalis extract (FDA Allergenic) using sera from 10 animals allergic to B. tropicalis showed that five sera recognized two bands of 52 to 76 kDa. These results demonstrate the importance of the two house dust mite species for the pathogenesis of canine atopic dermatitis in Brazil. In addition, the results indicate which allergens should be present in allergenic extracts used for diagnosis and allergen-specific immunotherapy.

Antígenos de ácaros da poeira domiciliar são utilizados por décadas para diagnóstico de doenças alérgicas em seres humanos e animais. O objetivo do presente trabalho foi identificar proteínas alergênicas presentes em extratos de Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis através de "immunoblotting" utilizando-se soros de animais alérgicos e conjugado anti-IgE canina. A análise por "immunoblotting" dos antígenos presentes no extrato de D. farinae (FDA Allergenic), utilizando soros de dez animais alérgicos, mostrou que oito soros reconhecem uma banda com peso molecular de aproximadamente 102 kDa; oito soros duas bandas entre 52 e 76 kDa; cinco soros uma banda com aproximadamente 76 kDa; quatro soros uma banda entre 31 e 38 kDa; e dois soros uma banda entre 12 e 17 kDa. A análise por "immunoblotting" dos antígenos do extrato de B. tropicalis (FDA Allergenic) mostrou que cinco soros reconhecem duas bandas com pesos moleculares entre 52 e 76 kDa. Esses resultados demonstram a importância dessas duas espécies de ácaros da poeira domiciliar na patogênese da dermatite atópica canina no Brasil, assim como indicam alérgenos que devem estar presentes nos extratos alergênicos utilizados para diagnóstico e imunoterapia alérgeno-específica.

Anticorpos anti-rickettsias do grupo da febre maculosa em equídeos e caninos no norte do estado do Paraná, Brasil / Anti rickettsia-antibody for spotted fever group in horses and dogs in the north of Paraná stated, Brazil

The Brazilian Spotted Fever (BSF) is a zoonosis that can be fatal if not trteated. As there are few studies of the BSF in the Paraná State, the occurrence of BSF was serologically investigated in dogs and horses by indirect immunofluorescence assay (IFA), in the North of that State, in animals that are regarded as sentinels for BSF. A total of 241 samples of sera of equine, four of asinine, and 29 of dogs were collected in nine farms of three municipalities in the North of Paraná: Arapongas, Douradina, and Umuarama. From fifteen samples of equine serum with positive titres for RIFI, eight (53.3 percent) had titre of 64 against R. rickettsii, two (13.3 percent) 128 against R. rickettsii, and five (33.3 percent) were reactants for R. parkeri and R. rickettsii, with titres ranging from 64 to 2048, and 128 to 1024, respectively. The results showed that domestic animals, sentinels for BSF, are under low exposition to ticks infected with spotted fever group Rickettsia, indicating low risk of human infection by these agents in the studied area.

Prevalencia de anticuerpos contra Leptospira en población urbana humana y canina del Departamento del Tolima / The prevalence of antibodies against Leptospira in urban human and canine populations from the Tolima Department

Objetivo Determinar la seroprevalencia de anticuerpos contra Leptospira sp. y los serovares dominantes, en población urbana humana y canina de tres municipios del departamento del Tolima, Colombia. Materiales y Métodos Se realizó un estudio epidemiológico trasversal con selección de sujetos por conveniencia en 62 barrios. Se obtuvieron muestras de 850 personas.y 850 caninos durante los meses de junio, julio y agosto de 2007, las cuales fueron procesadas utilizando la prueba de microaglutinación (MAT). En la prueba se incluyeron 5 serovares: Hardjo, Pomona, Grippotyphosa, Canicola, Icterohaemorrhagiae y Bratislava. La prueba se interpretó como positiva por la presencia de una aglutinación >50 por ciento de las leptospiras con uno o más serovares, en una dilución del suero >100 para las dos especies. Resultados Se encontró evidencia de infección en el 6 por ciento de la población humana y en el 21,4 por ciento de los caninos, con al menos uno de los serovares. La mayor reactividad fue para los serovares Pomona y Grippotyphosa para humanos y caninos. Se presentaron coaglutinaciones en el 13,7 por ciento de los sueros humanos y en el 4,4 por ciento de los caninos. Fue evidente la disminución de la frecuencia de aglutinación de los serovares Canicola e Icterohaemorrhagiae en los perros. Conclusiones Se observa un cambio en el patrón de presentación de la leptospirosis en poblaciones urbanas, siendo necesario fortalecer la vigilancia epidemiológica activa y pasiva, la implementación de pruebas rutinarias de diagnóstico y medidas de prevención específica en los reservorios animales.

Objective Determining Leptospira sp. antibody seroprevalence and prevalent serovars in human and canine populations from three municipalities in the Tolima department of Colombia. Materials and Methods This was a cross-sectional study (subjects being selected by convenience sampling in 62 districts). Samples were collected from 850 dogs and 850 people during June, July and August 2007; these were processed using a microscopic agglutination test (MAT) and five serovars: Hardjo, Pomona, Grippotyphosa, Canicola, Icterohaemorrhagiae and Bratislava. MAT was considered positive when 50 percent or more leptospira were agglutinated with one or more serovars in a 1:100 serum dilution in both species. Results At least one serovar showed evidence of infection in 6 percent of the people and 21.4 percent of canines. The most prevalent serovars were Pomona and Grippotyphosa in two populations. Co-agglutinations were present in 49 percent of human sera and 19.2 percent of canine samples. Decreased Canicola and Icterohaemorrhagiae serovar agglutination frequency was evident in dogs. Conclusions There was a change in leptospirosis pattern in urban populations. Active and passive surveillance must be strengthened, routine diagnostic tests implemented and preventative measures taken in specific animal reservoirs.

Envolvimento de citocinas, quimiocinas e fatores de trancrição na imunopatologia da pele de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi, portadores de diferentes formas clínicas e densidades parasitárias cutâneas / Involvement of cytokines, chemokines and transcription factors in the immunopathology of the skin of dogs naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi, having different clinical forms and densities parasitic skin

A resposta imune na pele de cães infectados por Leishmania chagasi e sua associação com parasitismo tecidual e progressão clínica da leishmaniose visceral canina (LVC) é pouco compreendido e há poucos estudos disponíveis Nesse trabalho, uma análise detalhada do perfil de citocinas (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 e TGF-β1), fatores de transcrição (T-bet, GATA-3 e FOXP3) e quimiocinas (CCL2, CCL4, CCL5, CCL13, CCL17, CCL21, CCL24 e CXCL8), assim como, as células inflamatórias (neutrófilos, eosinófilos, macrófagos, basófilos e linfócitos), foram realizados na pele de 35 cães naturalmente infectados usando PCR em tempo real juntamente com as determinações da densidade parasitária da pele e do estado clínico do LVC. Diante da complexa rede de interação citocinas/quimiocinas, de um modo geral, foi observado que vários biomarcadores evidenciados com o desenvolvimento do presente trabalho envolvidos na resistência apresentavam-se relacionados à forma assintomática e com baixo parasitismo, enquanto outros associados com suscetibilidade foram detectados simultaneamente em cães sintomáticos e com alto parasitismo cutâneo. Um perfil misto de citocina com altos níveis de expressão de IFN-g, TNF-α, IL-5 e IL-13 foi determinado em cães assintomáticos Adicionalmente, a manutenção da forma assintomática está intimamente envolvida com aumento da razão IFN-γ/IL-4 e com o controle do parasitismo dérmico que é caracterizado pelo aumento da razão IFN-γ/IL-10 e IL-12/IL-10, indicando que IFN-γ e IL-12 exercem um papel fundamental no equilíbrio da relação parasito/hospedeiro. Além disso, altos níveis de IL-10 e TGF-β1, concomitante com a baixa expressão de IL-12, pode representar uma condição fundamental que permite a persistência da replicação do parasito na derme Adicionalmente, os níveis dos fatores de transcrição GATA-3 e FOXP3 foram correlacionados com a doença assintomática.

De forma interessante, cães oligossintomáticos parecem manifestar uma doença intermediária com determinadas tendências de padrão de reposta imune. Durante a passagem por essa forma clínica, ocorre um predomínio de citocinas moduladoras (IL-10 e TGF-β1) na derme que explica o aumento progressivo da densidade parasitária observada nesses animais. Além disso, durante a passagem por esta forma oligosssintomática os níveis de IL-13 decaem e em cães com médio parasitismo e passa a ocorrer uma migração preferencial de eosinófilos que estão intimamente relacionados ao aumento de CCL24. Com o avançar do parasitismo, forma-se um moderado infiltrado inflamatório decorrente da migração diferencial de macrófagos e linfócitos que é orquestrado por citocinas do Tipo I (IL-12, TNF-α e IFN-γ) e fator de transcrição T-bet, presença marcante nesse microambiente. A forma grave da LVC é caracterizada pelo aparecimento de inúmeros sinais clínicos e por uma debilidade em controlar o parasitismo levando muitas vezes os cães ao óbito. Nesse contexto, a forma sintomática é marcada por uma queda de TNF-α e IL-13 associado a uma queda de expressão de GATA-3 e FOXP3 podendo explicar a inabilidade de macrófagos em controlar a infecção devido à perda da ação de TNF-α e IFN-γ, praticamente ausentes na pele. O intenso infiltrado inflamatório na derme é explicado por um perfil de citocinas Tipo I (TNF-α e IFN-γ) expressas concomitante com citocinas reguladoras. (IL-10 e TGF-β) presentes nesse microambiente, reforçado por baixa expressão de IL-12 e IL-13. A visceralização do parasito leva a uma hipertrofia e hiperplasia de órgãos linfóides que pode estar sendo ocasionada pelo aumento dos níveis de CCL21 em animais com alto parasitismo cutâneo.

Essa quimiocina é responsável pelo recrutamento de APCs presentes na pele e sua condução para os linfonodos no intuito de promover aumento da apresentação de antígenos parasitários aos linfócitos T, o que parece não ocorrer devido ao perfil de citocinas (Tipo II) e/ou reguladoras expressas por esses cães. Além do mais, as quimiocinas CCL2, CCL4 e CCL5 são responsáveis pelo orquestramento do fluxo celular de monócitos e plamócitos para compor o intenso infiltrado inflamatório dérmico. Um avanço no conhecimento dos mecanismos que determinam a resposta imune protetora da infecção por L. chagasi nos cães permitirá o estabelecimento de uma estratégia racional para o desenvolvimento de vacinas e terapias imunológicas contra LVC.

Envolvimento de citocinas, quimiocinas e fatores de trancrição na imunopatologia da pele de cães naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi, portadores de diferentes formas clínicas e densidades parasitárias cutâneas

A resposta imune na pele de cães infectados por Leishmania chagasi e sua associação com parasitismo tecidual e progressão clínica da leishmaniose visceral canina (LVC) é pouco compreendido e há poucos estudos disponíveis Nesse trabalho, uma análise detalhada do perfil de citocinas (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-5, IL-13, IL-10 e TGF-β1), fatores de transcrição (T-bet, GATA-3 e FOXP3) e quimiocinas (CCL2, CCL4, CCL5, CCL13, CCL17, CCL21, CCL24 e CXCL8), assim como, as células inflamatórias (neutrófilos, eosinófilos, macrófagos, basófilos e linfócitos), foram realizados na pele de 35 cães naturalmente infectados usando PCR em tempo real juntamente com as determinações da densidade parasitária da pele e do estado clínico do LVC. Diante da complexa rede de interação citocinas/quimiocinas, de um modo geral, foi observado que vários biomarcadores evidenciados com o desenvolvimento do presente trabalho envolvidos na resistência apresentavam-se relacionados à forma assintomática e com baixo parasitismo, enquanto outros associados com suscetibilidade foram detectados simultaneamente em cães sintomáticos e com alto parasitismo cutâneo. Um perfil misto de citocina com altos níveis de expressão de IFN-g, TNF-α, IL-5 e IL-13 foi determinado em cães assintomáticos Adicionalmente, a manutenção da forma assintomática está intimamente envolvida com aumento da razão IFN-γ/IL-4 e com o controle do parasitismo dérmico que é caracterizado pelo aumento da razão IFN-γ/IL-10 e IL-12/IL-10, indicando que IFN-γ e IL-12 exercem um papel fundamental no equilíbrio da relação parasito/hospedeiro. Além disso, altos níveis de IL-10 e TGF-β1, concomitante com a baixa expressão de IL-12, pode representar uma condição fundamental que permite a persistência da replicação do parasito na derme Adicionalmente, os níveis dos fatores de transcrição GATA-3 e FOXP3 foram correlacionados com a doença assintomática.

De forma interessante, cães oligossintomáticos parecem manifestar uma doença intermediária com determinadas tendências de padrão de reposta imune. Durante a passagem por essa forma clínica, ocorre um predomínio de citocinas moduladoras (IL-10 e TGF-β1) na derme que explica o aumento progressivo da densidade parasitária observada nesses animais. Além disso, durante a passagem por esta forma oligosssintomática os níveis de IL-13 decaem e em cães com médio parasitismo e passa a ocorrer uma migração preferencial de eosinófilos que estão intimamente relacionados ao aumento de CCL24. Com o avançar do parasitismo, forma-se um moderado infiltrado inflamatório decorrente da migração diferencial de macrófagos e linfócitos que é orquestrado por citocinas do Tipo I (IL-12, TNF-α e IFN-γ) e fator de transcrição T-bet, presença marcante nesse microambiente. A forma grave da LVC é caracterizada pelo aparecimento de inúmeros sinais clínicos e por uma debilidade em controlar o parasitismo levando muitas vezes os cães ao óbito. Nesse contexto, a forma sintomática é marcada por uma queda de TNF-α e IL-13 associado a uma queda de expressão de GATA-3 e FOXP3 podendo explicar a inabilidade de macrófagos em controlar a infecção devido à perda da ação de TNF-α e IFN-γ, praticamente ausentes na pele. O intenso infiltrado inflamatório na derme é explicado por um perfil de citocinas Tipo I (TNF-α e IFN-γ) expressas concomitante com citocinas reguladoras. (IL-10 e TGF-β) presentes nesse microambiente, reforçado por baixa expressão de IL-12 e IL-13. A visceralização do parasito leva a uma hipertrofia e hiperplasia de órgãos linfóides que pode estar sendo ocasionada pelo aumento dos níveis de CCL21 em animais com alto parasitismo cutâneo.

Essa quimiocina é responsável pelo recrutamento de APCs presentes na pele e sua condução para os linfonodos no intuito de promover aumento da apresentação de antígenos parasitários aos linfócitos T, o que parece não ocorrer devido ao perfil de citocinas (Tipo II) e/ou reguladoras expressas por esses cães. Além do mais, as quimiocinas CCL2, CCL4 e CCL5 são responsáveis pelo orquestramento do fluxo celular de monócitos e plamócitos para compor o intenso infiltrado inflamatório dérmico. Um avanço no conhecimento dos mecanismos que determinam a resposta imune protetora da infecção por L. chagasi nos cães permitirá o estabelecimento de uma estratégia racional para o desenvolvimento de vacinas e terapias imunológicas contra LVC.